五年（2021-2025）高考真題分類(lèi)匯編PAGEPAGE1專(zhuān)題11基因工程考點(diǎn)五年考情（2021-2025）命題趨勢(shì)考點(diǎn)1基因工程的基本操作程序（5年6考）2021江蘇卷、2022江蘇卷、2023江蘇卷、2024江蘇卷、2025江蘇卷：基因工程的綜合應(yīng)用1、基因工程的基本操作程序是考察中的重點(diǎn)內(nèi)容，主要考察基因工程的基本操作程序包括目的基因的篩選和獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定，要對(duì)這部分內(nèi)容進(jìn)行分析和理解，結(jié)合情境進(jìn)行分析判斷，主要以非選擇題形式考察。2、基因工程的應(yīng)用部分主要考察基因工程在農(nóng)牧業(yè)、制藥及環(huán)境等方面的應(yīng)用、基因診斷和基因治療、基因芯片相關(guān)內(nèi)容，主要考察對(duì)基因工程的理解以及在生活中的應(yīng)用。考點(diǎn)2基因工程的應(yīng)用（5年1考）2021江蘇卷：基因工程在農(nóng)牧業(yè)、制藥及環(huán)境等方面的應(yīng)用考點(diǎn)01基因工程的基本操作程序1．（2025·江蘇·高考真題）（多選）圖示人體正?；駻突變?yōu)橹虏』騛及HindⅢ切割位點(diǎn)。AluⅠ限制酶識(shí)別序列及切割位點(diǎn)為，下列相關(guān)敘述正確的有（

）A．基因A突變?yōu)閍是一種堿基增添的突變B．用兩種限制酶分別酶切A基因后，形成的末端類(lèi)型不同C．用兩種限制酶分別酶切a基因后，產(chǎn)生的片段大小一致D．產(chǎn)前診斷時(shí)，該致病基因可選用HindⅢ限制酶開(kāi)展酶切鑒定【答案】BD【詳析】A、對(duì)比A基因和a基因的序列，A基因中“AAGCTT”變?yōu)閍基因中“AAGCTG”，是堿基替換（T→G），并非堿基增添，A錯(cuò)誤；B、HindⅢ切割產(chǎn)生黏性末端，AluⅠ切割后產(chǎn)生的是平末端，二者末端類(lèi)型不相同，B正確；C、a基因中有2個(gè)HindⅢ切割位點(diǎn)，切割后產(chǎn)生3個(gè)片段，有3個(gè)AluⅠ切割位點(diǎn)，切割后產(chǎn)生4個(gè)片段，用兩種限制酶分別酶切a基因后，產(chǎn)生的片段大小不一致，C錯(cuò)誤；D、因?yàn)檎；駻和致病基因a的HindⅢ切割位點(diǎn)數(shù)量不同，所以產(chǎn)前診斷時(shí)，該致病基因可選用HindⅢ限制酶開(kāi)展酶切鑒定，D正確。故選BD。2．（2025·江蘇·高考真題）川金絲猴是我國(guó)特有的珍稀瀕危物種，為了更好地保護(hù)這一物種，研究者開(kāi)展了以下研究。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)川金絲猴警戒行為具有監(jiān)測(cè)捕食者和同種個(gè)體的功能，這說(shuō)明生物之間的關(guān)系有。川金絲猴的警戒行為依賴(lài)于環(huán)境中獲取的信息，信息類(lèi)型有。川金絲猴根據(jù)這些信息及時(shí)作出反應(yīng)，一方面可以降低被捕食風(fēng)險(xiǎn)，另一方面為爭(zhēng)奪獲得更多機(jī)會(huì)。(2)川金絲猴以植食為主，消化道中部分微生物直接參與高纖維食物的消化，這些微生物與川金絲猴構(gòu)成關(guān)系。(3)研究者為了進(jìn)一步研究川金絲猴的食性，采集其糞便樣本，進(jìn)行DNA提取、擴(kuò)增，部分實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下。請(qǐng)完成下表：實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮?jiǎn)要操作步驟釋放DNA在去雜后的樣本中加入裂解液析出DNA離心后?、?，加入乙醇②在沉淀物中加入純水?dāng)U增DNA將③、引物、樣本DNA、含有Mg2?緩沖液、超純水等加入PCR管中，進(jìn)行PCR(4)為分析川金絲猴攝食的植物種類(lèi)，研究者設(shè)計(jì)一對(duì)引物F和R，能同時(shí)擴(kuò)增出不同種植物葉綠體中的rbeL基因片段，是因?yàn)橐颋和R的堿基能與rbcL基因的保守序列的堿基。用引物F和R對(duì)4種植物樣本甲~丁的葉綠體基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序，結(jié)果如圖所示。若對(duì)4個(gè)樣本的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA電泳條帶分析，能檢出的樣本是。研究者用引物F和R對(duì)川金絲猴糞便DNA進(jìn)行擴(kuò)增并測(cè)序，得到的序列有圖中的3種序列，據(jù)此可確定川金絲猴攝食的植物有。若要更準(zhǔn)確鑒定出川金絲猴攝食的植物，參照葉綠體基因庫(kù)，還需選用的保守序列設(shè)計(jì)引物，對(duì)川金絲猴糞便DNA進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序分析。注：“·”表示與植物甲對(duì)應(yīng)位置上相同的堿基：“……”表示省略200個(gè)堿基(5)依據(jù)上述研究，保護(hù)川金絲猴可采取的措施有（填字母）。a．建立川金絲猴生態(tài)廊道，促進(jìn)種群間基因交流

b．保護(hù)川金絲猴棲息地的植被和它喜食的植物c．需用標(biāo)記重捕法定期重捕，以精確監(jiān)測(cè)種群數(shù)量

d．主要依賴(lài)遷地保護(hù)，擴(kuò)大川金絲猴種群數(shù)量【答案】(1)捕食和種內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)物理信息、化學(xué)信息、行為信息食物和空間、配偶等(2)互利共生(3)上清液溶解DNA4種脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶(4)互補(bǔ)配對(duì)丁丙丁葉綠體基因組其他DNA片段(5)ab【詳析】（1）捕食者與川金絲猴是捕食關(guān)系，川金絲猴和同種個(gè)體之間是種內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。生態(tài)系統(tǒng)中信息的種類(lèi)有物理信息、化學(xué)信息和行為信息。川金絲猴根據(jù)這些信息及時(shí)作出反應(yīng)，一方面可以降低被捕食風(fēng)險(xiǎn)，另一方面為爭(zhēng)奪食物和空間等資源獲得更多機(jī)會(huì)。（2）川金絲猴以植食為主，消化道中部分微生物直接參與高纖維食物的消化，這些微生物從川金絲猴胃內(nèi)獲取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，又能為川金絲猴分解纖維素，兩者構(gòu)成互利共生關(guān)系。（3）研究者為了進(jìn)一步研究川金絲猴的食性，采集其糞便樣本，進(jìn)行DNA提取、擴(kuò)增，部分實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：釋放DNA：在去雜后的樣本中加入裂解液，細(xì)胞裂解，內(nèi)容物釋放，→析出DNA：DNA呈溶解狀態(tài)，離心后?、偕锨逡?，再加入乙醇，DNA不溶于酒精→故在沉淀物中加入純水，②再次溶解DNA→擴(kuò)增DNA：PCR擴(kuò)增DNA，需要將③4種脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶、引物、樣本DNA、含有Mg2?緩沖液、超純水等加入PCR管中，進(jìn)行PCR。（4）為分析川金絲猴攝食的植物種類(lèi)，研究者設(shè)計(jì)一對(duì)引物F和R，能同時(shí)擴(kuò)增出不同種植物葉綠體中的rbeL基因片段，是因?yàn)橐颋和R的堿基能與rbeL基因的保守序列的堿基互補(bǔ)配對(duì)，從而在耐高溫的DNA聚合酶的作用下延伸子鏈。用引物F和R對(duì)4種植物樣本甲~丁的葉綠體基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序，結(jié)果如圖所示，可知植物甲乙丙的條帶一樣長(zhǎng)，植物丁的短，對(duì)4個(gè)樣本的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA電泳條帶分析，只能區(qū)分不同長(zhǎng)度的DNA片段，故能檢出的樣本是丁。研究者用引物F和R對(duì)川金絲猴糞便DNA進(jìn)行擴(kuò)增并測(cè)序，得到的序列有圖中的3種序列，說(shuō)明攝食的植物有三種，甲和乙的序列相同，不能確定，故據(jù)此可確定川金絲猴攝食的植物有丙和丁。選用葉綠體的其他基因的保守序列設(shè)計(jì)引物，對(duì)川金絲猴糞便DNA進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序分析，能更準(zhǔn)確鑒定出川金絲猴攝食的植物。（5）a、建立川金絲猴生態(tài)廊道，促進(jìn)種群間基因交流，能夠保護(hù)川金絲猴遺傳多樣性和物種多樣性，a正確；b、保護(hù)川金絲猴棲息地的植被和它喜食的植物，能夠保護(hù)川金絲猴，b正確；c、川金絲猴是我國(guó)特有的珍稀瀕危物種，不能用標(biāo)記重捕法定期重捕，c錯(cuò)誤；d、保護(hù)川金絲猴主要依賴(lài)就地保護(hù)，d錯(cuò)誤。故選ab。3．（2024·江蘇·高考真題）為了高效純化超氧化物歧化酶（SOD），科研人員將ELP50片段插入pET-SOD構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-SOD-ELP50，以融合表達(dá)SOD-ELP50蛋白，過(guò)程如圖1。其中，ELP50是由人工合成的DNA片段，序列為：限制酶a識(shí)別序列-（GTTCCTGGTGTTGGC）50-限制酶b識(shí)別序列，50為重復(fù)次數(shù)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)步驟①雙酶切時(shí)，需使用的限制酶a和限制酶b分別是。(2)步驟②轉(zhuǎn)化時(shí)，科研人員常用處理大腸桿菌，使細(xì)胞處于感受態(tài)；轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌采用含有的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。用PCR技術(shù)篩選成功導(dǎo)入pET-SOD-ELP50的大腸桿菌，應(yīng)選用的一對(duì)引物是。(3)步驟③大腸桿菌中RNA聚合酶與結(jié)合，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄，翻譯SOD-ELP50蛋白。已知蛋白質(zhì)中氨基酸殘基的平均相對(duì)分子質(zhì)量約為0.11kDa，將表達(dá)的蛋白先進(jìn)行凝膠電泳，然后用SOD抗體進(jìn)行雜交，顯示的條帶應(yīng)是（從圖2的“A~D”中選填）。

(4)步驟④為探尋高效純化SOD-ELP50蛋白的方法，科研人員研究了溫度、NaCl對(duì)SOD-ELP50蛋白純化效果的影響，部分結(jié)果如圖3。

（?。?0℃時(shí)，加入NaCl后實(shí)驗(yàn)結(jié)果是。（ⅱ）100℃時(shí)，導(dǎo)致各組中所有蛋白都沉淀的原因是。（ⅲ）據(jù)圖分析，融合表達(dá)SOD-ELP50蛋白的優(yōu)點(diǎn)有?！敬鸢浮?1)EcoRI、HindⅢ(2)CaCl2卡那霉素S-F和P-R(3)啟動(dòng)子C(4)SOD-ELP50組純化蛋白數(shù)量更多高溫使蛋白變性低溫下添加NaCl有利于SOD蛋白純化，雜蛋白較少，有利于酶活性的保持【詳析】（1）目的基因應(yīng)插入啟動(dòng)子和終止子之間，結(jié)合題意可知，ELP50應(yīng)插入pET-SOD之后，由圖可知，限制酶a和限制酶b分別是EcoRI、HindⅢ。（2）將目的基因?qū)爰?xì)菌時(shí)常用CaCl2處理細(xì)菌，使其處于容易吸收外來(lái)DNA分子的狀態(tài)。由圖可知，重組DNA含有標(biāo)記基因卡那霉素抗性基因，所以轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌采用含有卡那霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。成功導(dǎo)入pET-SOD-ELP50同時(shí)含有pET-SOD和ELP50，結(jié)合圖示可知，引物S-F和P-R對(duì)應(yīng)序列包含SOD和ELP50的相應(yīng)序列，可特異性對(duì)pET-SOD-ELP50進(jìn)行擴(kuò)增。由于ELP50中含有重復(fù)序列，使用S-F和E-R對(duì)導(dǎo)入普通質(zhì)粒和重組質(zhì)粒的大腸桿菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到的產(chǎn)物可能無(wú)法區(qū)分。（3）RNA聚合酶與啟動(dòng)子結(jié)合后，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。由圖可知，決定SOD-ELP50融合蛋白的基因長(zhǎng)度為462+750=1212bp，編碼1212÷3=404個(gè)氨基酸，已知蛋白質(zhì)中氨基酸殘基的平均相對(duì)分子質(zhì)量約為0.11kDa，融合蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量約為404×0.11kDa=44.44kDa，電泳后應(yīng)該為條帶C。（4）（?。┯蓤D可知，20℃時(shí)，較不加NaCl，加入NaCl后純化蛋白數(shù)量更多。（ⅱ）100℃時(shí)，溫度過(guò)高，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性而沉淀。（ⅲ）20℃，加入NaCl時(shí)，較SOD，SOD-ELP50組沉淀中蛋白質(zhì)相對(duì)含量較高，說(shuō)明低溫下添加NaCl有利于SOD蛋白純化，雜蛋白較少，有利于酶活性的保持。4．（2023·江蘇·高考真題）為了將某納米抗體和綠色熒光蛋白基因融合表達(dá)，運(yùn)用重組酶技術(shù)構(gòu)建質(zhì)粒，如圖1所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增片段F1與片段F2時(shí)，配制的兩個(gè)反應(yīng)體系中不同的有，擴(kuò)增程序中最主要的不同是。(2)有關(guān)基因序列如圖2，引物F2-F、F1-R應(yīng)在下列選項(xiàng)中選用______。

A．ATGGTGCAACCAB．TGGTTGCACCATC．GACGAGCTGCAGD．CTGCAGCTCGTC(3)將PCR產(chǎn)物片段與線(xiàn)性質(zhì)粒載體混合后，在重組酶作用下可形成環(huán)化質(zhì)粒，直接用于轉(zhuǎn)化細(xì)菌。這一過(guò)程與傳統(tǒng)重組質(zhì)粒構(gòu)建過(guò)程相比，無(wú)需使用的酶主要有。(4)轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選，下列敘述錯(cuò)誤的有_______。A．稀釋涂布平板需控制每個(gè)平板30~300個(gè)菌落B．抗性平板上未長(zhǎng)出菌落的原因一般是培養(yǎng)基溫度太高C．抗性平板上常常會(huì)出現(xiàn)大量雜菌形成的菌落D．抗性平板上長(zhǎng)出的單菌落無(wú)需進(jìn)一步劃線(xiàn)純化(5)為了驗(yàn)證平板上菌落中的質(zhì)粒是否符合設(shè)計(jì)，用不同菌落的質(zhì)粒為模板，用引物F1-F和F2-R進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，質(zhì)粒P1~P4的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖3．根據(jù)圖中結(jié)果判斷，可以舍棄的質(zhì)粒有。

(6)對(duì)于PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果符合預(yù)期的質(zhì)粒，通常需進(jìn)一步通過(guò)基因測(cè)序確認(rèn)，原因是?！敬鸢浮?1)模板（片段F1、片段F2）、引物退火溫度(2)CD(3)限制性?xún)?nèi)切核酸酶（限制酶）和DNA連接酶(4)ABC(5)P3、P4(6)瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)僅能用于分析待檢測(cè)DNA分子的大小，無(wú)法確定待檢測(cè)DNA分子的堿基序列【詳析】（1）PCR反應(yīng)進(jìn)行的條件：引物、酶、dNTP、模板和緩沖液（其中需要Mg2+）。分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增片段F1與片段F2時(shí)，配制的兩個(gè)反應(yīng)體系中不同的有模板（片段F1、片段F2）、引物。PCR過(guò)程需要兩種引物，能分別與目的基因兩條鏈的3'端通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合。不同的PCR反應(yīng)體系中，模板和引物是不同的：擴(kuò)增程序中依據(jù)不同引物設(shè)置不同的退火溫度是最重要的環(huán)節(jié)，恰當(dāng)?shù)剡x擇退火溫度，盡量避免引物與模板的非特異性結(jié)合，以保證目的產(chǎn)物的有效擴(kuò)增。而對(duì)于延伸時(shí)間而言，以常用的TaqDNA聚133合酶為例，催化DNA延伸的速度為1000~2000bp/min，通常在實(shí)驗(yàn)室中可根據(jù)目的片段大小在30s~2min的時(shí)長(zhǎng)內(nèi)大致設(shè)置廷伸時(shí)間，一般不雪要精確控制。（2）由圖1可知，引物F2-F用于擴(kuò)增F2片段，引物F1-R用于擴(kuò)增F1片段，C選項(xiàng)中5'-GACGAG-3'能與AnBI中左側(cè)部分堿基進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)，因此引物F2-F選用C。D選項(xiàng)中5'-CTGCAG-3'能與EGFP中的右側(cè)部分序列進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)，因此引物F1-R選用D。（3）傳統(tǒng)重組質(zhì)粒構(gòu)建需要使用限制性?xún)?nèi)切核酸酶（限制酶）切割質(zhì)粒使其具有與目的基因相同的黏性末端，之后再用DNA連接酶將目的基因和質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒。將PCR產(chǎn)物片段與線(xiàn)性質(zhì)粒載體混合后，由于PCR產(chǎn)物片段和線(xiàn)性質(zhì)粒載體具有同源序列，可通過(guò)重組酶形成環(huán)化質(zhì)粒。不需要使用限制性?xún)?nèi)切核酸酶（限制酶）和DNA連接酶。（4）A、轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選，用稀釋涂布平板法篩選時(shí)，菌落數(shù)可能低于30，A錯(cuò)誤；B、培養(yǎng)基冷卻后才能接種，抗性平板上未長(zhǎng)出菌落，一般不是培養(yǎng)基溫度太高所致，B錯(cuò)誤；C、轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選，一般含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌才能發(fā)展為菌落，故不會(huì)出現(xiàn)大量雜菌形成的菌落，C錯(cuò)誤；D、稀釋涂布平板和平板劃線(xiàn)法均為分離純化細(xì)菌的方法，用稀釋涂布平板法在抗性平板上長(zhǎng)出的單菌落無(wú)需進(jìn)一步劃線(xiàn)純化，D正確。故選ABC。（5）EGFP為720bp，AnBI為390bp，二者的總大小為720bp+390bp=1110bp，用引物F1-F和F2-R進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，其大小接近于P1、P2，根據(jù)圖中結(jié)果判斷，可以舍棄的質(zhì)粒有P3、P4。（6）瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)僅能用于分析待檢測(cè)DNA分子的大小，無(wú)法確定待檢測(cè)DNA分子的堿基序列，因此對(duì)于PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果符合預(yù)期的質(zhì)粒，通常需進(jìn)一步通過(guò)基因測(cè)序確認(rèn)。5．（2022·江蘇·高考真題）纖毛是廣泛存在的細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)，功能異?？梢鸲喾N疾病。因此，研究纖毛形成的作用機(jī)制具有重要意義。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1)纖毛結(jié)構(gòu)如圖1所示，由細(xì)胞膜延伸形成的纖毛膜主要由中心體轉(zhuǎn)變而來(lái)，中心體在有絲分裂中的功能是。(2)某病人腎小管上皮細(xì)胞纖毛異常，為了分析纖毛相關(guān)基因X是否發(fā)生了變異，對(duì)基因X進(jìn)行了PCR擴(kuò)增與產(chǎn)物測(cè)序。從細(xì)胞樣品中分離DNA時(shí)，可通過(guò)交替調(diào)節(jié)鹽濃度將與核蛋白結(jié)合的DNA分離出來(lái)，溶液中添加NaC1至2．0mol/L的目的是。PCR擴(kuò)增時(shí)，需在催化下，在引物端進(jìn)行DNA鏈的延伸，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物用于測(cè)序。(3)為研究蛋白質(zhì)X在細(xì)胞中的定位，構(gòu)建綠色熒光蛋白GFP與X的融合蛋白，融合蛋白具有綠色熒光，可示其在細(xì)胞內(nèi)位置。將X-GFP基因融合片段M導(dǎo)入如圖Ⅱ所示載體質(zhì)粒Y，構(gòu)建Y-M重組質(zhì)粒（在EcoRⅤ位點(diǎn)插入片段）。請(qǐng)完成下表。分步實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)簡(jiǎn)易操作、結(jié)果、分析PCR鑒定正向重組質(zhì)粒Y-M（圖Ⅱ中融合片段M中有白色的箭頭，代表方向）①選擇圖Ⅱ引物；②PCR目的產(chǎn)物約為bp。確保M及連接處序列正確，Y-M的連接處上游含有HindIII+EcoRV的識(shí)別序列，下游含有EcoRV+BamHI的識(shí)別序列③質(zhì)粒測(cè)序，圖Ⅲ中正確的是（選填序列編號(hào)）檢測(cè)融合蛋白定位④對(duì)照質(zhì)粒Y-GFP（僅表達(dá)GFP）與實(shí)驗(yàn)質(zhì)粒Y-M分別導(dǎo)入細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組整個(gè)細(xì)胞均有綠色熒光，而實(shí)驗(yàn)組熒光集中在纖毛基部，說(shuō)明。(4)為研究另一纖毛病相關(guān)基因Z表達(dá)的變化，采用熒光定量PCR法檢測(cè)健康人與病人基因Z的轉(zhuǎn)錄水平。采集樣本、提取總RNA，經(jīng)形成cDNA作為模板，PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示，在總cDNA模板量相等的條件下，健康人Ct值為15，而病人Ct值為20（Ct值是產(chǎn)物熒光強(qiáng)度達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)的PCR循環(huán)數(shù)）。從理論上估算，在PCR擴(kuò)增20個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物中，健康人樣品的目的產(chǎn)物大約是病人的倍。【答案】(1)與有絲分裂有關(guān)（參與紡錘體的形成，是紡錘體形成中心）(2)溶解DNA耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）3'(3)a、b1100Q4X蛋白參與中心體的形成(4)逆轉(zhuǎn)錄32【詳析】（1）中心體與有絲分裂有關(guān)，是紡錘體的組織中心。（2）從細(xì)胞樣品中分離DNA時(shí)，可通過(guò)交替調(diào)節(jié)鹽濃度將與核蛋白結(jié)合的DNA分離出來(lái)，DNA在2．0mol/L的NaC1溶液中的濃度最大，高于或低于這一濃度，DNA的溶解度均會(huì)下降，因此實(shí)驗(yàn)過(guò)程中添加NaC1至2．0mol/L的目的是溶解DNA。PCR擴(kuò)增時(shí)，需在耐高溫的DNA聚合酶（即Taq聚合酶）的催化下，在引物的3’端進(jìn)行DNA鏈的延伸，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物用于測(cè)序。（3）PCR擴(kuò)增目的DNA片段時(shí)，在引物的3’端進(jìn)行DNA鏈的延伸，據(jù)圖可知，應(yīng)選擇圖II中的引物a和引物b，PCR目的產(chǎn)物約為300+800=1100bp。確保M及連接處序列正確，Y-M的連接處上游含有HindIII+EcoRV的識(shí)別序列，下游含有EcoRV+BamHI的識(shí)別序列，根據(jù)題干信息構(gòu)建Y-M重組質(zhì)粒（在EcoRⅤ位點(diǎn)插入片段），Y-M的連接處測(cè)序后部分序列應(yīng)含有EcoRV+BamHI的識(shí)別序列，根據(jù)EcoRV識(shí)別位點(diǎn)，應(yīng)選擇序列Q4。對(duì)照質(zhì)粒Y-GFP（僅表達(dá)GFP）與實(shí)驗(yàn)質(zhì)粒Y-M分別導(dǎo)入細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組整個(gè)細(xì)胞均有綠色熒光，而實(shí)驗(yàn)組熒光集中在纖毛基部，說(shuō)明蛋白質(zhì)X參與中心體的組成。（4）研究另一纖毛病相關(guān)基因Z表達(dá)的變化，采用熒光定量PCR法檢測(cè)健康人與病人基因Z的轉(zhuǎn)錄水平。采集樣本、提取總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA作為模板，PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示，在總cDNA模板量相等的條件下，健康人Ct值為15，而病人Ct值為20（Ct值是產(chǎn)物熒光強(qiáng)度達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)的PCR循環(huán)數(shù)），說(shuō)明病人基因Z表達(dá)較弱，設(shè)健康人Z基因的cDNA數(shù)為x，病人Z基因的cDNA數(shù)為y，則有x×215=y×220，從理論上估算，在PCR擴(kuò)增20個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物中，健康人樣品的目的產(chǎn)物大約是病人的25=32倍。6．（2021·江蘇·高考真題）某小組為研究真菌基因m的功能，構(gòu)建了融合表達(dá)蛋白M和tag標(biāo)簽的質(zhì)粒，請(qǐng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)流程回答下列問(wèn)題：(1)目的基因的擴(kuò)增①提取真菌細(xì)胞，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，進(jìn)一步獲得基因m片段。②為了獲得融合tag標(biāo)簽的蛋白M，設(shè)計(jì)引物P2時(shí)，不能包含基因m終止密碼子的編碼序列，否則將導(dǎo)致。③熱啟動(dòng)PCR可提高擴(kuò)增效率，方法之一是：先將除TaqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加熱到80℃以上再混入酶，然后直接從94℃開(kāi)始PCR擴(kuò)增，下列敘述正確的有A．Taq酶最適催化溫度范圍為50～60℃B．與常規(guī)PCR相比，熱啟動(dòng)PCR可減少反應(yīng)起始時(shí)引物錯(cuò)配形成的產(chǎn)物C．兩條子鏈的合成一定都是從5′端向3′端延伸D．PCR產(chǎn)物DNA堿基序列的特異性體現(xiàn)了Taq酶的特異性(2)重組質(zhì)粒的構(gòu)建①將SmaI切開(kāi)的載體A與添加同源序列的m混合，用特定DNA酶處理形成黏性末端，然后降溫以促進(jìn)，形成A-m結(jié)合體。將A-m結(jié)合體導(dǎo)入大腸桿菌，利用大腸桿菌中的DNA聚合酶及酶等，完成質(zhì)粒的環(huán)化。②若正確構(gòu)建的重組質(zhì)粒A—m仍能被SmaI切開(kāi)，則SmaI的酶切位點(diǎn)可能在。(3)融合蛋白的表達(dá)①用含有尿嘧啶的培養(yǎng)基培養(yǎng)URA3基因缺失型酵母，將其作為受體菌，導(dǎo)入質(zhì)粒A-m，然后涂布于無(wú)尿嘧啶的培養(yǎng)基上，篩選獲得目的菌株，其機(jī)理是。②若通過(guò)抗原一抗體雜交實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到酵母蛋白中含tag標(biāo)簽，說(shuō)明，后續(xù)實(shí)驗(yàn)可借助tag標(biāo)簽進(jìn)行蛋白M的分離純化?！敬鸢浮?1)mRNA蛋白M上不含tag標(biāo)簽BC(2)黏性末端堿基配對(duì)DNA連接基因m的連接處或基因m的內(nèi)部(3)受體菌在無(wú)尿嘧啶的培養(yǎng)基上無(wú)法生長(zhǎng)，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體菌含有URA3基因可以長(zhǎng)成菌落融合基因表達(dá)（或融合基因正確解碼）【詳析】（1）①以逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA的方式，要先從真菌細(xì)胞中提取基因m轉(zhuǎn)錄出來(lái)的mRNA。②從構(gòu)建好的重組質(zhì)粒上看，tag序列位于目的基因下游，若m基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA上有終止密碼子，核糖體移動(dòng)到終止密碼子多肽鏈就斷開(kāi)，則不會(huì)對(duì)tag序列的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物繼續(xù)進(jìn)行翻譯，蛋白M上就不含tag標(biāo)簽。③A、從題干信息可知，“80℃以上再混入酶，然后直接從94℃開(kāi)始PCR擴(kuò)增”，故Taq酶最適催化溫度范圍為94℃左右，A錯(cuò)誤；B、PCR反應(yīng)的最初加熱過(guò)程中，樣品溫度上升到70℃之前，在較低的溫度下引物可能與部分單鏈模板形成非特異性結(jié)合，并在TaqDNA聚合酶的作用下延伸，結(jié)果會(huì)導(dǎo)致引物錯(cuò)配形成的產(chǎn)物的擴(kuò)增，影響反應(yīng)的特異性；熱啟動(dòng)可減少引物錯(cuò)配形成的產(chǎn)物的擴(kuò)增，提高反應(yīng)的特異性，B正確；C、DNA分子復(fù)制具有方向性，都是從5′端向3′端延伸，C正確；D、Taq酶沒(méi)有特異性，與普通的DNA聚合酶相比，Taq酶更耐高溫，D錯(cuò)誤。故選BC。（2）①?gòu)膱D上看，載體A只有一個(gè)SmaI的酶切位點(diǎn)，故被SmaI切開(kāi)后，載體由環(huán)狀變?yōu)殒湢頓NA，將SmaI切開(kāi)的載體A與添加同源序列的m混合，用特定DNA酶處理形成黏性末端，然后降溫以促進(jìn)載體A與添加同源序列的m的黏性末端堿基互補(bǔ)配對(duì)。將A-m結(jié)合體導(dǎo)入大腸桿菌，利用大腸桿菌中的DNA聚合酶及DNA連接酶等，完成質(zhì)粒的環(huán)化。②重組質(zhì)粒中，載體A被SmaI切開(kāi)的位置已經(jīng)與基因m相連，原來(lái)的酶切位點(diǎn)已不存在，若正確構(gòu)建的重組質(zhì)粒A—m仍能被SmaI切開(kāi)，則SmaI的酶切位點(diǎn)可能在基因m的連接處或基因m內(nèi)部。（3）①篩選目的菌株的機(jī)理是：導(dǎo)入了質(zhì)粒A-m的目的菌株由于含有URA3基因，能在無(wú)尿嘧啶的培養(yǎng)基上存活，而URA3基因缺失型酵母則不能存活。②若通過(guò)抗原一抗體雜交實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到酵母蛋白中含lag標(biāo)簽，位于lag標(biāo)簽上游的基因m應(yīng)該正常表達(dá)，說(shuō)明融合基因表達(dá)（或融合基因正確解碼）?？键c(diǎn)02基因工程的應(yīng)用1．（2021·江蘇·高考真題）下圖是剔除轉(zhuǎn)基因植物中標(biāo)記基因的一種策略，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．分別帶有目的基因和標(biāo)記基因的兩個(gè)質(zhì)粒，都帶有T-DNA序列B．該方法建立在高轉(zhuǎn)化頻率基礎(chǔ)上，標(biāo)記基因和目的基因須轉(zhuǎn)到不同染色體上C．若要獲得除標(biāo)記基因的植株，轉(zhuǎn)化植株必須經(jīng)過(guò)有性繁殖階段遺傳重組D．獲得的無(wú)篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植株發(fā)生了染色體結(jié)構(gòu)變異【答案】D【詳析】A、農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上，故分別帶有目的基因和標(biāo)記基因的兩個(gè)質(zhì)粒，都帶有T-DNA序列，進(jìn)而成功整合到受體細(xì)胞染色體上，A正確；B、該方法需要利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，在高轉(zhuǎn)化頻率的基礎(chǔ)上，將目的基因和標(biāo)記基因整合到染色體上，由圖可知，標(biāo)記基因和目的基因位于細(xì)胞中不同的染色體上，B正確；C、通過(guò)雜交分離結(jié)果可知，經(jīng)過(guò)有性繁殖階段遺傳重組后獲得了三種類(lèi)型細(xì)胞，其中包括只含目的基因的，只含標(biāo)記基因的和既含目的基因又含標(biāo)記基因的，C正確；D、獲得的無(wú)篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植株發(fā)生了基因重組，D錯(cuò)誤。故選D。一、單選題1．（2025·江蘇淮安·二模）AI技術(shù)通過(guò)大數(shù)據(jù)分析、機(jī)器學(xué)習(xí)、深度學(xué)習(xí)等方法，為生物醫(yī)藥研究、藥物開(kāi)發(fā)、臨床診斷和治療等帶來(lái)革命性的變化。下列關(guān)于AI技術(shù)在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用，下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．AI技術(shù)對(duì)大量的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，能夠預(yù)測(cè)患者體內(nèi)某些蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)以便設(shè)計(jì)新藥物，該過(guò)程屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)B．AI技術(shù)通過(guò)智能穿戴設(shè)備和移動(dòng)應(yīng)用程序可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)患者的生理參數(shù)，預(yù)測(cè)健康風(fēng)險(xiǎn)，并提供相應(yīng)的診斷和治療建議C．AI技術(shù)對(duì)大量的基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，可以識(shí)別疾病相關(guān)的基因突變，為精準(zhǔn)醫(yī)療提供支持D．AI技術(shù)設(shè)計(jì)的某種蛋白質(zhì)的氨基酸序列推導(dǎo)出的對(duì)應(yīng)基因序列不唯一，且基因序列中不包含啟動(dòng)子和終止子【答案】A【詳析】A、蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，利用AI技術(shù)設(shè)計(jì)新藥物，沒(méi)有對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，不屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)，A錯(cuò)誤；B、利用AI技術(shù)，通過(guò)智能穿戴設(shè)備和移動(dòng)應(yīng)用程序，能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)患者的生理參數(shù)，預(yù)測(cè)健康風(fēng)險(xiǎn)，并提供相應(yīng)的診斷和治療建議，AI技術(shù)為臨床診斷和治療等方面帶來(lái)了革命性的變化，B正確；C、AI技術(shù)在基因組數(shù)據(jù)處理和分析中的應(yīng)用，通過(guò)識(shí)別疾病相關(guān)的基因突變，為精準(zhǔn)醫(yī)療的實(shí)現(xiàn)提供了強(qiáng)大的技術(shù)支持，C正確；D、密碼子具有簡(jiǎn)并性，故AI技術(shù)設(shè)計(jì)的某種蛋白質(zhì)的氨基酸序列推導(dǎo)出的對(duì)應(yīng)基因序列不唯一，啟動(dòng)子和終止子為非編碼區(qū)，由氨基酸序列推理的基因序列中不包含啟動(dòng)子和終止子，D正確。故選A。2．（2025·江蘇南通·二模）南通某生物興趣小組的同學(xué)用豬肝進(jìn)行DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)，主要實(shí)驗(yàn)流程如下圖。相關(guān)敘述正確的是（

）A．過(guò)程①向豬肝組織塊中加入研磨液進(jìn)行充分研磨B．過(guò)程②過(guò)濾后棄去濾液，取紗布上的絲狀物C．過(guò)程⑤加入酒精后，也可將溶液倒入離心管離心后取上清液D．過(guò)程⑥中A、B試管均會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色，但B試管中藍(lán)色更深【答案】A【詳析】A、過(guò)程①向豬肝組織塊中加入研磨液進(jìn)行充分研磨，得到含DNA的混合液，A正確；B、過(guò)程②是第一次過(guò)濾，應(yīng)保留濾液，棄去紗布上的物，B錯(cuò)誤；C、DNA不溶于酒精溶液，過(guò)程⑤加入酒精后，需要靜置析出，如果將溶液倒入離心管離心后應(yīng)取沉淀，C錯(cuò)誤；D、將DNA絲狀物放入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液中，使其溶解，再加入二苯胺試劑，沸水浴加熱出現(xiàn)藍(lán)色，過(guò)程⑥中B試管均會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色，A試管為無(wú)色的二苯胺溶液，D錯(cuò)誤。故選A。3．（2025·江蘇蘇州·三模）蛋白質(zhì)表面含有很多極性基團(tuán)，易溶于苯酚，可采用苯酚/氯仿法分離蛋白質(zhì)和DNA。圖示提取純化草莓DNA的具體過(guò)程。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．在細(xì)胞裂解環(huán)節(jié)需對(duì)樣本進(jìn)行充分研磨以釋放更多的DNAB．轉(zhuǎn)移DNA時(shí)需吸取水相溶液，并可重復(fù)上一步驟進(jìn)一步純化C．加入預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇后離心，DNA分布于沉淀物中D．提取出的DNA復(fù)溶后加入適量的二苯胺試劑，即可呈現(xiàn)出藍(lán)色【答案】D【詳析】A、細(xì)胞研磨能破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使DNA釋放，充分研磨可讓更多DNA釋放，A正確；B、DNA溶于水相，轉(zhuǎn)移水相并重復(fù)酚、氯仿抽提步驟，可進(jìn)一步去除雜質(zhì)純化DNA，B正確；C、DNA不溶于乙醇，95%冷乙醇能使DNA析出，離心后DNA在沉淀物，C正確；D、二苯胺檢測(cè)DNA需在沸水浴條件下才會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，僅復(fù)溶后加入不處理不會(huì)顯色，D錯(cuò)誤。故選D。4．（2025·江蘇南京·二模）生物技術(shù)與工程學(xué)相結(jié)合，可研究、設(shè)計(jì)和加工生產(chǎn)各種生物工程產(chǎn)品。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．二倍體植株的花藥離體培養(yǎng)得到的單倍體植株可用于基因突變的研究B．由iPS細(xì)胞產(chǎn)生的特定細(xì)胞，可以在新藥的測(cè)試中發(fā)揮重要作用C．將含指示劑的凝膠載樣緩沖液與PCR產(chǎn)物混合后滴入加樣孔指示電泳進(jìn)程D．大量制備一種單克隆抗體時(shí)需要用大量的B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合【答案】D【詳析】A、二倍體花藥離體培養(yǎng)的單倍體植株只有一個(gè)染色體組，控制每種性狀的基因只有一個(gè)，該基因的突變會(huì)直接影響生物的性狀，因此二倍體植株的花藥離體培養(yǎng)得到的單倍體植株可用于基因突變的研究，A正確；B、iPS細(xì)胞為多功能干細(xì)胞，能分裂分化產(chǎn)生的特定細(xì)胞，可以在新藥的測(cè)試中發(fā)揮重要作用，B正確；C、電泳指示劑遷移速度較PCR產(chǎn)物快，因此將含指示劑的凝膠載樣緩沖液與PCR產(chǎn)物混合后滴入加樣孔指示電泳進(jìn)程，C正確；D、單克隆抗體是由一個(gè)能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞經(jīng)分裂、分泌而來(lái)的，因此大量制備一種單克隆抗體時(shí)并不需要用大量的B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，D錯(cuò)誤。故選D。5．（2025·江蘇揚(yáng)州·模擬預(yù)測(cè)）關(guān)于“DNA粗提取與鑒定”和“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法正確的是（）A．DNA粗提取時(shí)加入冷酒精出現(xiàn)白色絲狀物后可以用離心法收集B．PCR緩沖液中需保持較高濃度的Mg2+，以確保DNA聚合酶最佳活性C．將白色絲狀物加入二苯胺試劑，沸水浴待冷卻后觀察顏色變化D．DNA電泳指示劑需要加入到稍冷卻的瓊脂糖溶液中【答案】A【詳析】A、DNA不溶于酒精溶液，粗提取時(shí)加入冷酒精出現(xiàn)白色絲狀物（DNA）后，用離心法可以將DNA收集起來(lái)，A正確；B、PCR緩沖液中需要保持一定濃度的Mg2+，Mg2+可以激活DNA聚合酶，但不是較高濃度，過(guò)高濃度可能會(huì)對(duì)反應(yīng)產(chǎn)生不利影響，B錯(cuò)誤；C、將白色絲狀物（DNA）溶解在2mol/L的NaCl溶液中，再加入二苯胺試劑，沸水浴待冷卻后觀察顏色變化，不能直接將白色絲狀物加入二苯胺試劑，C錯(cuò)誤；D、DNA電泳指示劑是在加樣時(shí)與DNA樣品混合加入到凝膠加樣孔中的，而不是加入到稍冷卻的瓊脂糖溶液中，D錯(cuò)誤。故選A。6．（2025·江蘇·一模）關(guān)于"瓊脂糖凝膠電泳"實(shí)驗(yàn)，下列敘述正確的是（

）A．根據(jù)待分離DNA片段的大小，需用無(wú)菌水配制0.8%～1.2%的瓊脂糖溶液B．向瓊脂糖溶液中加入適量的核酸染料后，需在沸水浴內(nèi)加熱至瓊脂糖熔化C．將PCR產(chǎn)物和電泳緩沖液混合后，需用微量移液器將混合液緩慢注入加樣孔D．待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時(shí)，需及時(shí)斷電并取出凝膠置于紫外燈下觀察【答案】D【詳析】A、配制瓊脂糖溶液時(shí)，應(yīng)該用緩沖液而不是無(wú)菌水來(lái)配制，這樣才能維持合適的離子強(qiáng)度和pH等條件，保證電泳效果，A錯(cuò)誤；B、應(yīng)該是先將瓊脂糖加入緩沖液中，在沸水浴或微波爐中加熱至瓊脂糖熔化，冷卻至50-60℃左右時(shí)再加入適量的核酸染料，而不是先加染料再加熱熔化瓊脂糖，B錯(cuò)誤；C、PCR產(chǎn)物和上樣緩沖液混合，而不是和電泳緩沖液混合，然后用微量移液器將混合液緩慢注入加樣孔，C錯(cuò)誤；D、待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時(shí)，及時(shí)斷電并取出凝膠置于紫外燈下觀察，這樣可以清晰地觀察到DNA條帶的位置和情況，D正確。故選D。7．（2025·江蘇鹽城·二模）下列有關(guān)“DNA的提取與鑒定”“利用PCR擴(kuò)增DNA片段及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．洋蔥切碎加研磨液研磨過(guò)濾后，濾液放置4℃冰箱中靜置，DNA存在于上清液中B．將絲狀物溶于體積分?jǐn)?shù)95%的酒精，再加入二苯胺試劑在沸水浴中進(jìn)行DNA鑒定C．PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中dNTP既可以為擴(kuò)增提供原料，也可以為子鏈的合成提供能量D．PCR擴(kuò)增后，瓊脂糖凝膠電泳鑒定結(jié)果不止一條條帶，可能是引物特異性不強(qiáng)導(dǎo)致【答案】B【詳析】A、洋蔥切碎加研磨液研磨過(guò)濾后，濾液放置4°C冰箱中靜置，DNA存在于上清液中。因?yàn)樵谠搶?shí)驗(yàn)中，破碎細(xì)胞釋放出DNA等物質(zhì)，經(jīng)過(guò)離心或靜置分層后DNA會(huì)溶解在上清液中，A正確；B、應(yīng)該將絲狀物溶于2mol/L的NaCl溶液，再加入二苯胺試劑在沸水浴中進(jìn)行DNA鑒定，而不是溶于體積分?jǐn)?shù)95%的酒精，B錯(cuò)誤；C、PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中dNTP（脫氧核糖核苷三磷酸）既可以為擴(kuò)增提供原料，在形成磷酸二酯鍵時(shí)，dNTP脫去兩個(gè)磷酸基團(tuán)，釋放的能量為子鏈的合成提供能量，C正確；D、PCR擴(kuò)增后，瓊脂糖凝膠電泳鑒定結(jié)果不止一條條帶，可能是引物特異性不強(qiáng)，導(dǎo)致引物與模板結(jié)合位點(diǎn)不唯一，擴(kuò)增出多種不同的DNA片段，從而在電泳結(jié)果上出現(xiàn)多條條帶，D正確。故選B。8．（2025·江蘇·三模）瓊脂糖凝膠電泳通常用于PCR產(chǎn)物的鑒定，相關(guān)敘述正確的是（

）A．DNA分子所帶電荷越多，在凝膠中的遷移速率越快B．用微量移液器將PCR產(chǎn)物與核酸染料的混合物緩慢注入凝膠的加樣孔內(nèi)C．電場(chǎng)強(qiáng)度增大，DNA在凝膠中的遷移速率加快，電泳時(shí)的電壓一般為1~5VD．PCR非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物電泳、樣品上樣量過(guò)多電泳均會(huì)導(dǎo)致電泳條帶模糊【答案】D【詳析】A、在瓊脂糖凝膠電泳中，DNA分子在凝膠中的遷移速率主要取決于DNA分子的大小，而非所帶電荷多少。因?yàn)镈NA分子本身帶有大量負(fù)電荷，在電場(chǎng)中都會(huì)向正極移動(dòng)，且在凝膠介質(zhì)中，分子大小對(duì)遷移的阻礙作用更為關(guān)鍵，A正確；B、用微量移液器將PCR產(chǎn)物緩慢注入凝膠的加樣孔內(nèi)，核酸染料是在制膠時(shí)加入到瓊脂糖凝膠中，而不是與PCR產(chǎn)物混合后注入加樣孔，B錯(cuò)誤；C、電場(chǎng)強(qiáng)度增大，DNA在凝膠中的遷移速率確實(shí)會(huì)加快，但電泳時(shí)的電壓一般為5-15V，而不是1-5V，C錯(cuò)誤；D、CR非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物電泳時(shí)，由于存在多種不同的擴(kuò)增片段，會(huì)導(dǎo)致電泳條帶混亂模糊；樣品上樣量過(guò)多時(shí)，會(huì)使條帶變寬、分辨率降低，也會(huì)導(dǎo)致電泳條帶模糊，D正確。故選D。9．（2025·江蘇南京·二模）關(guān)于“DNA粗提取與鑒定”、“瓊脂糖凝膠電泳”、“PCR擴(kuò)增”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法正確的是（）A．將洋蔥切碎、研磨、過(guò)濾，濾液放置4℃冰箱中靜置幾分鐘后，取沉淀物再溶解B．在DNA鑒定和PCR擴(kuò)增過(guò)程中，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)都會(huì)改變C．凝膠載樣緩沖液中加入的核酸染料能與DNA分子結(jié)合，便于在紫外燈下觀察D．a(chǎn)個(gè)DNA模板分子完成第20輪循環(huán)需要a×（220-2）個(gè)引物【答案】B【詳析】A、將洋蔥切碎、研磨、過(guò)濾，濾液放置4°C冰箱中靜置幾分鐘后，DNA主要存在于上清液中，應(yīng)取上清液進(jìn)行后續(xù)操作，而不是沉淀物，A錯(cuò)誤；B、在DNA鑒定實(shí)驗(yàn)中，在沸水浴條件下，DNA與二苯胺反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色，此過(guò)程中DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)被破壞；在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，高溫變性使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)，B正確；C、核酸染料是在制備凝膠時(shí)加入到凝膠中的，而不是在凝膠載樣緩沖液中加入，C錯(cuò)誤；D、PCR技術(shù)中，DNA復(fù)制遵循半保留復(fù)制原則。一個(gè)雙鏈DNA分子經(jīng)過(guò)n次循環(huán)后得到2?個(gè)DNA分子，需要的引物數(shù)量為（2??1-2）×a個(gè)（因?yàn)樽畛醯?個(gè)DNA分子各有2條模板鏈，不需要引物）。n-1次循環(huán)共需引物（2?-2）×a，第n次循環(huán)共需引物a2n個(gè)，D錯(cuò)誤。故選B。二、多選題10．（2025·江蘇鹽城·模擬預(yù)測(cè)）單細(xì)胞RNA測(cè)序是一種在單細(xì)胞水平上利用RNA測(cè)序?qū)μ丶?xì)胞群體進(jìn)行基因表達(dá)譜定量的高通量實(shí)驗(yàn)技術(shù)。待測(cè)組織經(jīng)過(guò)單細(xì)胞分離、裂解、反轉(zhuǎn)錄、cDNA擴(kuò)增、文庫(kù)構(gòu)建、測(cè)序和計(jì)算機(jī)分析，便可獲得多個(gè)細(xì)胞的基因表達(dá)譜。下列相關(guān)敘述正確的有（

）A．將單個(gè)細(xì)胞從組織中分離出來(lái)可以利用有限稀釋法或顯微操作法B．實(shí)驗(yàn)室裂解細(xì)胞后提取的RNA，需要利用特定的技術(shù)富集mRNAC．通過(guò)反轉(zhuǎn)錄、cDNA擴(kuò)增以及構(gòu)建基因組文庫(kù)等技術(shù)可確定單細(xì)胞中基因表達(dá)情況D．相比于多細(xì)胞混合測(cè)序，該技術(shù)可以揭示罕見(jiàn)的細(xì)胞類(lèi)型【答案】ABD【詳析】A、單細(xì)胞分離的常用方法包括有限稀釋法（通過(guò)稀釋獲得單個(gè)細(xì)胞）和顯微操作法（如顯微切割或流式細(xì)胞分選），A正確；B、實(shí)驗(yàn)室裂解細(xì)胞后提取的RNA數(shù)量有限，因此，需要利用特定的技術(shù)富集mRNA，B正確；C、單細(xì)胞RNA測(cè)序構(gòu)建的是cDNA文庫(kù)，通過(guò)測(cè)序分析基因表達(dá)?；蚪M文庫(kù)用于研究DNA序列，與基因表達(dá)無(wú)關(guān)，C錯(cuò)誤；D、單細(xì)胞分辨率避免了群體測(cè)序的平均化效應(yīng)，能夠檢測(cè)稀有細(xì)胞亞群，因而可以揭示罕見(jiàn)的細(xì)胞類(lèi)型，D正確。故選ABD。11．（2025·江蘇·二模）與DNA相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，下列敘述正確的有（

）A．利用DNA在酒精中溶解度較大的特性提取DNAB．粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)C．用二苯胺試劑鑒定DNA時(shí)，沸水浴加熱后呈藍(lán)色D．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通常利用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)進(jìn)行鑒定【答案】BCD【詳析】A、DNA在酒精（尤其是體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精）中的溶解度較低，實(shí)驗(yàn)中通過(guò)加入酒精使DNA析出，而蛋白質(zhì)等雜質(zhì)溶解，A錯(cuò)誤；B、粗提取的DNA可能殘留細(xì)胞破碎后的雜質(zhì)，如蛋白質(zhì)（未完全被酶分解或鹽析去除）、脂質(zhì)（細(xì)胞膜成分）等，B正確；C、二苯胺試劑與DNA在沸水浴條件下反應(yīng)生成藍(lán)色產(chǎn)物，C正確；D、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分離，DNA片段因大小不同呈現(xiàn)不同遷移速率。凝膠經(jīng)核酸染料染料染色，在紫外燈照射下DNA會(huì)發(fā)出熒光，據(jù)此可判斷產(chǎn)物是否存在及分子量大小，D正確。故選BCD。12．（2025·江蘇南通·模擬預(yù)測(cè)）下列關(guān)于“提取”和“分離”的敘述，正確的是（）A．提取葉綠素可以用無(wú)水乙醇、丙酮或無(wú)水乙醇與丙酮的混合物B．提取DNA需同時(shí)兼顧DNA的完整性、純度和含量C．光合色素用不同的層析液可能會(huì)得到不同的色素排列順序D．DNA和蛋白質(zhì)分離常采用瓊脂糖凝膠電泳，但用的標(biāo)準(zhǔn)參照物是統(tǒng)一的【答案】ABC【詳析】A、葉綠素易溶于有機(jī)溶劑，幾乎不溶于水，根據(jù)其性質(zhì)，可以用無(wú)水乙醇、丙酮或無(wú)水乙醇與丙酮的混合物等有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，A正確；B、在DNA提取過(guò)程中應(yīng)盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，純度和含量，B正確；C、不同的色素在不同的層析液中溶解度不同，所以光合色素用不同的層析液可能會(huì)得到不同的色素排列順序，C正確；D、PCR產(chǎn)物常用瓊脂糖凝膠電泳鑒定，依據(jù)條帶位置、大小等判斷產(chǎn)物，利用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)，將得到的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，在電泳過(guò)程中，影響蛋白質(zhì)遷移速度的因素包括蛋白質(zhì)分子的帶電性質(zhì)差異、形狀差異以及本身的大小等，可見(jiàn)兩者的標(biāo)準(zhǔn)參照物不統(tǒng)一，D錯(cuò)誤。故選ABC。13．（2025·江蘇·模擬預(yù)測(cè)）人鼠嵌合抗體是鼠源抗體的可變區(qū)（V區(qū)）與人源抗體的恒定區(qū)（C區(qū)）結(jié)合而成的抗體。下圖1是抗體的示意圖（H代表重鏈，L代表輕鏈），圖2是制備抗腫瘤的人鼠嵌合抗體的部分過(guò)程。相關(guān)敘述正確的是（）A．過(guò)程①?gòu)慕?jīng)免疫處理的小鼠脾中獲取的B淋巴細(xì)胞都能產(chǎn)生特定抗體B．過(guò)程③獲得的VL、VH基因堿基序列與B淋巴細(xì)胞中的VL、VH基因堿基序列不同C．過(guò)程④構(gòu)建人鼠重組基因，其表達(dá)產(chǎn)物在人體內(nèi)的免疫原性比鼠源性抗體低D．過(guò)程⑥常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將基因嵌合表達(dá)載體轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞【答案】BC【詳析】A、過(guò)程①?gòu)慕?jīng)免疫處理的小鼠脾中獲取的B淋巴細(xì)胞有很多種，不是都能產(chǎn)生特定抗體，A錯(cuò)誤；B、過(guò)程③獲得的VL、VH基因堿基序列與B淋巴細(xì)胞中的VL、VH基因堿基序列不同，B正確；C、過(guò)程④構(gòu)建人鼠重組基因，其表達(dá)產(chǎn)物在人體內(nèi)的免疫原性比鼠源性抗體低，C正確；D、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將基因嵌合表達(dá)載體轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞的方法，D錯(cuò)誤。故選BC。14．（2025·江蘇鹽城·模擬預(yù)測(cè)）如圖表示花粉管通道法介導(dǎo)植物基因轉(zhuǎn)移。下列說(shuō)法正確的是（）A．花粉管通道法可適用獲得轉(zhuǎn)基因擾蟲(chóng)棉花B．外源DNA不需要構(gòu)建基因表達(dá)載體，就能借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞并表達(dá)C．必須在雌蕊成熟時(shí)才能進(jìn)行圖中所示的處理方法D．相比于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，花粉管通道法避免了植物組織培養(yǎng)這一操作【答案】ACD【詳析】A、花粉管通道法是一種常用的植物基因轉(zhuǎn)移方法，適用于多種植物，包括棉花，A正確；B、要讓目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后能穩(wěn)定存在并得到復(fù)制和表達(dá)，不管采用什么導(dǎo)入方法，都需要構(gòu)建基因表達(dá)載體才能實(shí)現(xiàn)，外源DNA也需要構(gòu)建基因表達(dá)載體，才能借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞并表達(dá)，B錯(cuò)誤；C、授粉過(guò)程需要在雌蕊成熟后，因此，花粉管通道法也應(yīng)該必須在雌蕊成熟時(shí)才能進(jìn)行圖中所示的處理方法，C正確；D、花粉管通道法可以直接實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植物的自然生成，而農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法還需要對(duì)成功導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞進(jìn)行植物組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植物，故花粉管通道法避免了植物組織培養(yǎng)這一操作，D正確。故選ACD。15．（2025·江蘇淮安·二模）關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法正確的是（）A．根據(jù)DNA片段大小配置一定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的瓊脂糖溶液以便分離DNA分子B．瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液中含指示劑，其可以在紫外燈下被檢測(cè)出來(lái)C．實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌處理D．?dāng)U增得到的PCR產(chǎn)物與凝膠載樣緩沖液混勻后需緩慢注入加樣孔以防樣品飄散【答案】ACD【詳析】A、高濃度凝膠孔徑小，適合分離小片段；低濃度凝膠孔徑大，適合大片段。因此需根根據(jù)DNA片段大小配置一定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的瓊脂糖溶液以便分離DNA分子，A正確；B、瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液中不含指示劑，與PCR產(chǎn)物混合的凝膠載樣緩沖液中含有指示劑，B錯(cuò)誤；C、PCR實(shí)驗(yàn)對(duì)污染極為敏感，微量離心管、槍頭等需高壓滅菌以去除外源DNA或核酸酶。蒸餾水也需滅菌確保無(wú)核酸酶污染，C正確；D、載樣緩沖液含甘油或蔗糖以增加樣品密度，使其沉入加樣孔。操作時(shí)應(yīng)緩慢注入，避免因沖擊力導(dǎo)致樣品溢出孔外或飄散至周?chē)彌_液中，D正確。故選ACD。16．（2025·江蘇常州·三模）如圖表示花粉管通道法介導(dǎo)植物基因轉(zhuǎn)移。下列說(shuō)法正確的是（）A．花粉管通道法可適用獲得轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉花B．相比于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，花粉管通道法避免了植物組織培養(yǎng)這一操作C．必須在雌蕊成熟時(shí)才能進(jìn)行圖中所示的處理方法D．外源DNA不需要構(gòu)建基因表達(dá)載體，就能借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞并表達(dá)【答案】ABC【詳析】A、花粉管通道法是一種常用的植物基因轉(zhuǎn)移方法，適用于多種植物，包括棉花，A正確；B、花粉管通道法可以直接實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植物的自然生成，而農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法還需要對(duì)成功導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞進(jìn)行植物組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植物，故花粉管通道法避免了植物組織培養(yǎng)這一操作，B正確；C、授粉過(guò)程需要在雌蕊成熟后，因此，花粉管通道法也應(yīng)該必須在雌蕊成熟時(shí)才能進(jìn)行圖中所示的處理方法，C正確；D、要讓目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后能穩(wěn)定存在并得到復(fù)制和表達(dá)，不管采用什么導(dǎo)入方法，都需要構(gòu)建重組載體才能實(shí)現(xiàn)，外源DNA也需要構(gòu)建基因表達(dá)載體，才能借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞并表達(dá)，D錯(cuò)誤。故選ABC。三、解答題17．（2025·江蘇·三模）病毒誘導(dǎo)的基因沉默技術(shù)（VIGS）是利用病毒載體攜帶目的基因侵染植物細(xì)胞，在植物細(xì)胞中復(fù)制產(chǎn)生dsRNA（雙鏈RNA），激活植物自身的基因沉默機(jī)制，降解植物目標(biāo)mRNA的技術(shù)。葉用萵苣生長(zhǎng)到一定時(shí)期極易抽薹（莖迅速生長(zhǎng)），從而導(dǎo)致萵苣減質(zhì)減產(chǎn)。研究表明LsMET1基因（甲基轉(zhuǎn)移酶1基因）促進(jìn)葉用萵苣抽薹，研究人員利用VIGS嘗試使LsMET1基因沉默來(lái)驗(yàn)證該觀點(diǎn)，主要操作如圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1)過(guò)程①反應(yīng)體系中加入的物質(zhì)除引物、原料、模板外，還有，下列四種引物中用于過(guò)程①的是。A．5'GAATTCATGA………3'

B．5'CTTAAGTTAC………3'C．5'CTGCAGTAGA………3'

D．5'GACGTCATCT………3'(2)過(guò)程②將環(huán)狀DNA擴(kuò)增為線(xiàn)性DNA的目的是。(3)在TRV1、TRV2質(zhì)粒中插入雙啟動(dòng)子目的是。過(guò)程④將TRV1質(zhì)粒和重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌后，在培養(yǎng)基中應(yīng)加入進(jìn)行篩選。(4)導(dǎo)入植物細(xì)胞的CP-LsMET1-RZ基因轉(zhuǎn)錄后在催化下，被剪切為CPRNA、LsMET1RNA、RZRNA。LsMET1RNA誘導(dǎo)內(nèi)源LsMET1基因沉默的機(jī)制如圖2，AGO1蛋白選擇性降解3'端穩(wěn)定性較低的一條鏈。據(jù)圖分析，向農(nóng)桿菌中導(dǎo)入TRV1質(zhì)粒的目的是，激活的RISC有的能誘導(dǎo)LsMET1mRNA降解，有的不能誘導(dǎo)LsMET1mRNA降解，其原因是。(5)研究人員測(cè)定了LsMET1表達(dá)量和抽墓（莖生長(zhǎng)）狀況，結(jié)果如圖3。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期是否一致，并說(shuō)明理由。。【答案】(1)逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶（Mg2+緩沖液）A、C(2)有利于目的基因與載體連接(3)提高目的基因的表達(dá)水平氨芐青霉素和卡那霉素(4)CP-LsMET1-RZRNA中的RZRNA片段（自切割核糖核酸酶）在植物細(xì)胞中合成RNA聚合酶，催化合成dsRNAAGO1蛋白水解siRNA的鏈不同(5)一致，實(shí)驗(yàn)組LsMET1基因表達(dá)量明顯下降，莖生長(zhǎng)受抑制?！驹斘觥浚?）圖中過(guò)程①是由RNA獲得目的基因的過(guò)程，該過(guò)程首先應(yīng)經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得DNA，隨后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，所以反應(yīng)體系中加入的物質(zhì)除引物、原料、模板外，還有逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶（Mg2+緩沖液，用于激活TaqDNA聚合酶）。擴(kuò)增過(guò)程中子鏈延伸的方向?yàn)?'端→3'端，結(jié)合圖中序列可知，應(yīng)選擇引物A和C進(jìn)行擴(kuò)增。（2）過(guò)程②將環(huán)狀DNA擴(kuò)增為線(xiàn)性DNA有利于目的基因與載體連接。（3）啟動(dòng)子的作用是與RNA聚合酶結(jié)合，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，在TRV1、TRV2質(zhì)粒中插入雙啟動(dòng)子可有效提高目的基因的轉(zhuǎn)錄水平。由于導(dǎo)入的TRV1質(zhì)粒含有氨芐青霉素抗性基因、重組質(zhì)粒含有卡那霉素抗性基因，所以在培養(yǎng)基中應(yīng)加入氨芐青霉素和卡那霉素進(jìn)行篩選。（4）由圖1注可知，RZ為自切割核糖核酸酶基因，所以導(dǎo)入植物細(xì)胞的CP-LsMET1-RZ基因轉(zhuǎn)錄后在CP-LsMET1-RZRNA中的RZRNA片段（自切割核糖核酸酶）催化下，被剪切為CPRNA、LsMET1RNA、RZRNA。由圖1可知，RdRp為病毒的RNA聚合酶基因，向農(nóng)桿菌中導(dǎo)入TRV1質(zhì)粒的目的是在植物細(xì)胞中合成RNA聚合酶，催化合成dsRNA，由于AGO1蛋白選擇性降解3'端穩(wěn)定性較低的一條鏈，而不同LsMET1鏈的穩(wěn)定性，即AGO1蛋白水解siRNA的鏈不同，所以激活的RISC有的能誘導(dǎo)LsMET1mRNA降解，有的不能誘導(dǎo)LsMET1mRNA降解。（5）由圖3可知，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組LsMET1基因表達(dá)量明顯下降，莖生長(zhǎng)受抑制，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期一致。18．（2025·江蘇蘇州·三模）我國(guó)科學(xué)家嘗試構(gòu)建地衣芽孢桿菌基因編輯系統(tǒng)，并通過(guò)將外源vgb基因定向插入19T-pflB質(zhì)粒中對(duì)該系統(tǒng)進(jìn)行初步驗(yàn)證，主要過(guò)程如圖1。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1)步驟①利用已構(gòu)建的質(zhì)粒19T-pflB，通過(guò)反向PCR獲得左右同源片段，除圖中已有的組分外，還應(yīng)添加緩沖液（Mg2+）和等。下表為pflB部分基因序列和設(shè)計(jì)的相關(guān)引物，可選用的引物是（填編號(hào)）。根據(jù)不同的引物，需要重新設(shè)置PCR程序中的。DNA序列（虛線(xiàn)處省略了部分核苷酸序列）pflB基因5′-TCGCACACCTGACTACAATT……TCGCAATGGCAATCGGCAAACT-3′3′-AGCGTGTGGACTGATGTTAA……AGCGTTACCGTTAGCCGTTTGA-5'PCR引物①5'ACGGGATCCTTGTAGTCAGGTGTGCGA3'②5'ACGGGATCCTTTGCCGATTGCCATTGC3'③5'AACTGCAGTCGCACACCTGACTACAA3'④5'AACTGCAGGCAATGGCAATCGGCAAA3'注：下劃線(xiàn)標(biāo)注的序列為限制酶識(shí)別序列。(2)步驟②雙酶切時(shí)，需使用的限制酶a和限制酶b分別是和，影響DNA連接酶反應(yīng)速率的因素有反應(yīng)體系的溫度、pH、酶濃度和等。(3)圖2是質(zhì)粒PNZTK-PFTF-vgb轉(zhuǎn)入地衣芽孢桿菌后，將目的基因插入基因組的過(guò)程示意圖。將受體菌接種在含四環(huán)素和（含/不含）卡那霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間后，因沒(méi)有選擇壓力，會(huì)導(dǎo)致發(fā)生雙交換的質(zhì)粒丟失。挑取一定數(shù)量的單菌落，接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上，并一一對(duì)應(yīng)接種到含卡那霉素的培養(yǎng)基上，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。其中在兩種培養(yǎng)基均能生長(zhǎng)的菌株是只發(fā)生單交換或的受體菌。(4)科學(xué)家通過(guò)分析vgb基因在重組菌株及原始菌株中的表達(dá)水平驗(yàn)證該基因編輯系統(tǒng)。分析時(shí)需要以rpsE基因（核糖體S5蛋白基因）為參照，該基因表達(dá)的特點(diǎn)是，可采用的方法檢測(cè)基因表達(dá)的產(chǎn)物量?！敬鸢浮?1)四種脫氧核苷酸（dNTP）、TagDNA聚合酶①④退火溫度(2)SmaIXhoIDNA片段濃度（底物濃度）、DNA片段末端類(lèi)型(3)不含未發(fā)生交換(4)在細(xì)胞中的表達(dá)水平相對(duì)恒定瓊脂糖凝膠電泳【詳析】（1）PCR反應(yīng)除了圖中已有的組分外，還需要添加TagDNA聚合酶（用于催化DNA的合成）、四種脫氧核苷酸（dNTP）。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物需要與模板鏈進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)，且引物的延伸方向是5'到3'。分析pflB基因序列和各引物序列，①中5'端含有BamHⅠ識(shí)別序列（GGATCC），且其堿基序列能與pflB基因的一條鏈互補(bǔ)配對(duì)；④中5'端含有PstⅠ識(shí)別序