ICS65.020.01CCSB0554IDB54/T0513—2025前言 32規(guī)范性引用文件 33術(shù)語(yǔ)和定義 34采樣前準(zhǔn)備 35采集方法 46樣品采集和保存 47采集樣本數(shù)量 58采集點(diǎn)環(huán)境數(shù)據(jù)記錄 59采集個(gè)體的后處理 510采集注意事項(xiàng) 511樣品質(zhì)量檢測(cè) 6附錄A（規(guī)范性）鳥類特征采集信息表 7附錄B（規(guī)范性）環(huán)境信息采集表 8附錄C（規(guī)范性）入庫(kù)登記表 9附錄D（資料性）常用設(shè)備、裝備、耗材、試劑清單 10DB54/T0513—2025本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由西藏自治區(qū)科學(xué)技術(shù)廳提出。本文件由西藏自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：西藏自治區(qū)高原生物研究所。本文件主要起草人：周生靈、楊樂、楊永炳、王蕊、范丹丹。DB54/T0513—20253鳥類種質(zhì)資源采集保存技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了西藏常見鳥類種質(zhì)資源采集保存的術(shù)語(yǔ)和定義、采集方法及保存方法，制定了采集保存的專用表格。本文件適用于西藏常見鳥類的種質(zhì)資源采集保存。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T35892實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理審查指南。HJ628生物遺傳資源采集技術(shù)規(guī)范（試行）。3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1鳥類體表被覆羽毛、有翼、恒溫和卵生的高等脊椎動(dòng)物。注：西藏常見鳥類如樹麻雀、灰背伯勞、巖鴿、赤麻鴨、藏雞等。3.2鳥類種質(zhì)資源從鳥類個(gè)體獲得具有實(shí)際或潛在利用價(jià)值的遺傳材料及其附屬信息，包括但不限于血液、組織、骨、精子、糞便、細(xì)胞系、核酸、蛋白質(zhì)等，附屬信息包括但不限于采集信息、表型信息、遺傳數(shù)據(jù)、研究數(shù)據(jù)等。4采樣前準(zhǔn)備4.1文獻(xiàn)查閱采集前應(yīng)進(jìn)行文獻(xiàn)查閱，掌握采集對(duì)象的種群數(shù)量、分布位點(diǎn)、生活習(xí)性等基本信息。4.2樣品采集和運(yùn)輸設(shè)備樣品采集過(guò)程中的所有操作人員必須嚴(yán)格遵循本文件的設(shè)備與工具使用要求開展采集工作，見附錄D。DB54/T0513—202544.3采集人員培訓(xùn)對(duì)于初次參與采集工作的人員，在開展采集保存工作前進(jìn)行理論知識(shí)和實(shí)操培訓(xùn)。5采集方法5.1非損傷性采集利用樣線法或樣點(diǎn)法對(duì)鳥類自然脫落的羽毛、排出的糞便、食丸等進(jìn)行收集，現(xiàn)場(chǎng)不能識(shí)別的后續(xù)通過(guò)分子方法鑒定識(shí)別。5.2非傷害性采集利用網(wǎng)捕法、誘捕法、陷阱法等方法對(duì)鳥類進(jìn)行捕捉，之后通過(guò)采集翅下靜脈或跗趾靜脈的血液、指甲、新鮮羽毛（帶毛囊）等方法進(jìn)行采樣；采集前用75%酒精對(duì)采集部位進(jìn)行擦拭消毒處理。5.3傷害性采集利用網(wǎng)捕法、誘捕法、陷阱法等方法對(duì)鳥類進(jìn)行捕捉，之后進(jìn)行處死、解剖，采集其心、肝、脾、肺、腦、眼、睪丸、卵巢等器官的組織樣品。6樣品采集和保存6.1DNA樣品采集優(yōu)先選擇采集肌肉、內(nèi)臟等角質(zhì)化程度低的部位，每只個(gè)體采集1份（管）組織材料，每份約1g（綠豆大?。┲糜趦龃婀軆?nèi)；添加至少5倍體積的無(wú)水乙醇完全浸泡；野外工作中臨時(shí)保存在2℃-8℃條件下；快速運(yùn)輸至保藏單位，在-80℃或-150℃條件下保存。6.2RNA樣品采集在個(gè)體死亡半小時(shí)內(nèi)完成解剖采樣，每只個(gè)體各器官（心、肝、脾、肺、腎等）采集2份組織材料，每份約1g置于凍存管內(nèi)，添加至少5倍體積RNAlater保存劑完全浸泡或立刻保存在液氮中；用干冰或-80℃車載冰箱運(yùn)輸至保藏單位，在-80℃或-150℃條件下保存。注：各器官包括：心、肝、脾、肺、腎等，樣品裝在凍存管保存在液氮環(huán)境時(shí)先用封口膜封口，再用錫箔紙包裹。6.3血液樣品的采集采集樣本翅下靜脈或跗跖靜脈的血液0.5ml-1ml，存儲(chǔ)在抗凝采血管中，上下緩慢顛倒混勻后暫存在2℃-8℃條件下；干冰或-20℃條件下運(yùn)輸至保藏單位，在-80℃或-150℃條件下保存。6.4細(xì)胞樣品的采集個(gè)體死亡半小時(shí)內(nèi)完成解剖采樣，每只個(gè)體各器官（心、肝、脾、肺、腎等）采集2g-3g組織材料，采集時(shí)剔除外層膜及結(jié)締組織，在75%乙醇中浸泡5s-10s后用1×PBS（磷酸鹽緩沖液）清洗3次，最后將組織材料裝于含有DMEM（細(xì)胞培養(yǎng)基）的50ml離心管中，2℃-8℃條件運(yùn)輸至保藏單位，在-80℃或-150℃條件下保存。DB54/T0513—202556.5糞便樣品的采集在排便20分鐘內(nèi)完成糞便樣品采集。以采集個(gè)體遺傳材料為目的時(shí)用干凈的采樣拭子/棉簽蘸取表面糞便；以采集個(gè)體腸道微生物為目的時(shí)用干凈的采樣拭子/棉簽撥去表面糞便，采集內(nèi)部糞便，采集后添加不少于5倍體積的糞便保存液或95%乙醇，暫存在2℃-8℃環(huán)境下；干冰或-20℃條件下運(yùn)輸至保藏單位，在-20℃條件保存。注：避免因反復(fù)凍融造成糞便樣品降解，按照HJ628的規(guī)定執(zhí)行。6.6羽毛樣品的采集取樣前用棉棒蘸取3%的次氯酸鈉溶液，擦拭取樣部位，清潔皮膚表面的污漬后直接拔取2根-3根翼羽、尾羽或腹羽，拔出的羽毛不需要添加任何保存液直接封裝于自封袋中，運(yùn)輸至保藏單位，在2℃-5℃條件下保存。注：要連羽根（毛囊）一起拔出。6.7樣品保存流程采集→分裝（長(zhǎng)期保存、備份）→入庫(kù)登記→信息錄入→打印、粘貼標(biāo)簽→存入→錄入存儲(chǔ)位置。7采集樣本數(shù)量小型鳥類（如樹麻雀）同一采樣地同一物種宜采集3只-5只個(gè)體；中型鳥類（如灰背伯勞）同一采樣地同一物種宜采集1只-3只個(gè)體；大型鳥類（如黑頸鶴）同一采樣地同一物種宜采集1只。8采集點(diǎn)環(huán)境數(shù)據(jù)記錄數(shù)據(jù)采集應(yīng)完整，包括樣地、樣點(diǎn)（精確到點(diǎn)位）、物種名稱、采集時(shí)間、采集人等信息，具體內(nèi)容見附錄A和附錄B。注：樣地（精確到自然村）、樣點(diǎn)（精確到點(diǎn)位）9采集個(gè)體的后處理對(duì)非傷害性采集方法進(jìn)行采樣后的個(gè)體，對(duì)采樣部位進(jìn)行消毒、止血和安撫，放飛后觀察至其能正常活動(dòng)后方可離開；對(duì)傷害性采集方法采樣后的個(gè)體進(jìn)行無(wú)害化處理，按GB/T35892的規(guī)定執(zhí)行。10采集注意事項(xiàng)為確保鳥類樣品采集的科學(xué)性、安全性與倫理合規(guī)性，所有操作需遵循以下注意事項(xiàng)：a)使用專業(yè)的采樣工具，如捕鳥網(wǎng)、陷阱或遠(yuǎn)程采樣設(shè)備等，確保采樣過(guò)程中對(duì)鳥類的傷害最小化。b)選擇在鳥類活動(dòng)頻繁且不易受到驚嚇的時(shí)間段進(jìn)行采樣，如清晨或黃昏；盡量避免在惡劣天氣、繁殖期進(jìn)行采樣。c)采集組織樣品時(shí)要佩戴醫(yī)用口罩、乳膠手套、實(shí)驗(yàn)服（必要時(shí)戴護(hù)目鏡防止傳染病的傳播。DB54/T0513—20256d)采集RNA樣品時(shí)，采集前對(duì)采樣工具進(jìn)行乙醇和高溫消毒，用75%乙醇清潔臺(tái)面和身體表面，3分鐘后用1000×RNA酶清除劑清潔環(huán)境，用10×RNA酶清除劑噴灑于剪刀和鑷子，1分鐘后用無(wú)菌紙擦拭干凈。e)采集前提前準(zhǔn)備好凍存管和備份EP管，填好編號(hào)按順序擺放。f)長(zhǎng)期低溫保存的樣品管內(nèi)做好編號(hào)備份，保存在液氮罐的樣品用專用液氮筆標(biāo)記。g)采集完的廢料，做無(wú)害化處理。11樣品質(zhì)量檢測(cè)每6個(gè)月對(duì)備份樣品進(jìn)行檢測(cè)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)存入樣品的活性，及時(shí)處理失效樣品。DB54/T0513—20257（規(guī)范性）鳥類特征采集信息表號(hào)色虹膜顏色跗跖顏色況必填。中文名名必填。統(tǒng)一單大型鳥類的測(cè)量單位可做相DB54/T0513—20258（規(guī)范性）環(huán)境信息采集表間點(diǎn)點(diǎn)與鳥類信日單非傷害性采脾、肺、腎、酒精、超低溫、低DB54/T0513—202