生物安全實驗室消毒技術(shù)指南2024-09-10實施2024-09-10實施新疆維吾爾自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心提出。本文件由新疆維吾爾自治區(qū)衛(wèi)生健康委員會歸口。本文件起草單位：新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心、新疆維吾爾自治區(qū)標(biāo)準(zhǔn)化研究院、新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院、烏魯木齊市血液中心、新疆醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院、新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院、天康生物制藥有限公司、烏魯木齊市第四人民醫(yī)院、新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)疾病預(yù)防控制中心。本文件主要起草人：張燕、黃佳、樊玉娟、陳敏、哈麗旦·艾比布拉、石佳瑋、曹雪卉、馬嵋、曹都拉、羅玲娟、何華、張裴雯。本文件實施應(yīng)用中的疑問，請咨詢新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心。對本文件的修改意見及建議，請反饋至新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心(烏魯木齊市堿泉一街380號)、新疆維吾爾自治區(qū)衛(wèi)生健康委員會(烏魯木齊市龍泉街191號)、新疆維吾爾自治區(qū)市場監(jiān)督管理局(烏魯木齊市新華南路167號)。新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心聯(lián)系電話傳真郵編：830002新疆維吾爾自治區(qū)衛(wèi)生健康委員會聯(lián)系電話傳真郵編：830001新疆維吾爾自治區(qū)市場監(jiān)督管理局聯(lián)系電話傳真郵編：8300041生物安全實驗室消毒技術(shù)指南本文件規(guī)定了生物安全實驗室消毒、滅菌技術(shù)方法及廢棄物處理的要求。本文件適用于涉及生物因子操作實驗室的室內(nèi)空氣、物體表面、手、個人防護(hù)用品、生物安全柜等的消毒、滅菌方法。本文件并未指出所有可能的安全問題。使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧?，并保證符合國家相關(guān)規(guī)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)實驗室生物安全通用要求空氣消毒劑通用要求手消毒劑通用要求生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生規(guī)范3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。殺滅或清除傳播媒介上病原微生物，使其達(dá)到無害化的處理。殺滅或清除傳播媒介上一切微生物的處理。[來源：GB15982—2012,3.4,有修改]低水平消毒low-leveldisinfection僅能殺滅細(xì)菌繁殖體(分枝桿菌除外)和親脂性病毒的消毒處理。中水平消毒intermediate-leveldisinfection殺滅除細(xì)菌芽孢以外的各種病原微生物的消毒處理。2生物安全實驗室biosafetyl4.1.2明確人員崗位職責(zé)，保障安全管理。應(yīng)加強對實驗、工作人員培訓(xùn)，培訓(xùn)應(yīng)包括但不限于消毒4.1.3應(yīng)急預(yù)案完整有效，意外事件處置反應(yīng)迅速。應(yīng)形成完整的預(yù)案管理文件體系，針對各類可能4.3.1應(yīng)對消毒滅菌設(shè)備器械的應(yīng)用、監(jiān)督等情34.3.2應(yīng)根據(jù)消毒工作技術(shù)內(nèi)容和標(biāo)準(zhǔn)，制定設(shè)備器械維護(hù)保障制度及相關(guān)工作流程，全流程監(jiān)管消毒設(shè)備器械管理工作。4.4方法的選擇4.4.1根據(jù)病原微生物對消毒因子的抵抗力選擇消毒方法。對由芽孢菌、真菌孢子、分枝桿菌和經(jīng)血傳播病原體(乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒等)污染的物品，應(yīng)選用高水平消毒或滅菌的方法；對由真菌、親水病毒、螺旋體，支原體、衣原體等病原微生物污染的物品，應(yīng)選用中水平消毒以上的消毒方法；對由一般細(xì)菌和親脂病毒等病原微生物污染的物品，可選用中水平消毒或低水平消毒的方法。4.4.2根據(jù)消毒物品的性質(zhì)選擇消毒方法。應(yīng)考慮保護(hù)消毒物品不受或少受損壞，且消毒方法易于發(fā)揮作用。耐高溫、耐潮濕的物品和器材，應(yīng)首選壓力蒸汽滅菌；對耐高溫的玻璃器材、油劑類和干粉類等可選擇干熱滅菌；不耐熱、不耐濕，以及貴重物品，可選擇環(huán)氧乙烷或低溫等離子體消毒、滅菌；光滑物體表面消毒可選擇紫外線消毒器近距離照射，或液體消毒劑擦拭；多孔材料表面可采用噴霧消毒法。4.5個人防護(hù)消毒時應(yīng)注意個人安全防護(hù)，包括但不限于：1)配制、分裝和稀釋消毒液時應(yīng)戴手套及口罩；2)化學(xué)消毒劑應(yīng)按要求運輸和保存；3)使用消毒器械時應(yīng)注意用電安全，并避免消毒因子的傷害。4)應(yīng)按消毒要求增加特殊防護(hù)，并加強安全性評估。4.6效果的評價及監(jiān)測4.6.1應(yīng)采取正確可靠的方法進(jìn)行消毒效果監(jiān)測與評價，包括但不限于實驗室評價、模擬現(xiàn)場與現(xiàn)場評價。4.6.2預(yù)防性消毒后，消毒對象中自然菌的殺滅率應(yīng)≥90%,如以模擬實驗來評價，以試驗菌的殺滅率≥99.9%為合格標(biāo)準(zhǔn)，并依據(jù)GB15979、GB15982開展相關(guān)細(xì)菌菌落總數(shù)、致病菌的檢測。4.6.3終末消毒后，物體表面自然菌殺滅率應(yīng)≥90%,并不得檢出實驗用病原微生物；空氣中自然菌殺滅率應(yīng)≥90%,并不得檢出乙型溶血鏈球菌和其他病原微生物；可根據(jù)傳播途徑選擇物體表面、空氣等監(jiān)測對象開展指示微生物消毒效果評價，相應(yīng)致病菌與相關(guān)指示菌的采樣、分離與鑒定，參見有關(guān)傳染病診斷、消毒等國家標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，由具備檢測能力的專業(yè)實驗室進(jìn)行。4.6.4壓力蒸汽滅菌效果評價可采用物理監(jiān)測法、化學(xué)監(jiān)測法、生物監(jiān)測法等。4.6.5實驗室應(yīng)定期對實驗室環(huán)境進(jìn)行檢查與監(jiān)測，總結(jié)分析與反饋，如發(fā)現(xiàn)問題立即糾正。4.7產(chǎn)品的使用管理4.7.1根據(jù)消毒目的選擇消毒產(chǎn)品。對于預(yù)防性消毒，由于消毒對象的病原微生物污染不清楚，一般選用中水平或低水平消毒劑，也可選用性能溫和的高水平消毒劑；對于終末消毒，應(yīng)根據(jù)傳染病的種類、病原微生物對消毒劑的抵抗力選擇相應(yīng)的消毒劑。4.7.2首先選擇安全有效及環(huán)保性高的消毒產(chǎn)品，其次通過價格、使用濃度、作用時間選擇經(jīng)濟實用4.7.3在消毒產(chǎn)品的采購、運輸、貯存和使用過程中，應(yīng)符合國家有關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范等管理規(guī)定，并按照批準(zhǔn)或規(guī)定的范圍和方法使用、遠(yuǎn)輸和存放?；瘜W(xué)消毒劑應(yīng)存放在陰涼、通風(fēng)、干燥處，并經(jīng)常檢查消毒劑的安全狀況。4.7.4嚴(yán)格按照消毒產(chǎn)品使用說明書要求的劑量、濃度、作用時間和其他條件使用。本文件各部分中4所提到的消毒劑濃度，均為消毒劑的有效殺菌成分濃度。本文件中推薦的使用濃度如與使用說明書的濃度不一致時，以產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。4.7.5使用消毒產(chǎn)品時，工作人員應(yīng)有自我保護(hù)意識，并采取相應(yīng)防護(hù)措施，以防止消毒事故發(fā)生和因消毒操作方法不當(dāng)對人體造成傷害。使用熱力滅菌器時，干熱滅菌應(yīng)防止燃燒；壓力蒸汽滅菌應(yīng)防止發(fā)生爆炸事故及可能對操作人員造成的灼傷事故；紫外線、微波消毒，應(yīng)避免對人體的直接照射；氣體化學(xué)消毒劑，應(yīng)防止有毒有害消毒氣體的泄漏；使用液體化學(xué)消毒劑，應(yīng)防止過敏和可能對皮膚、黏膜的損傷。4.7.6消毒液使用和存放過程中，應(yīng)注意觀察其外觀變化，定期測定消毒因子有效含量并監(jiān)測微生物污染情況。5常用消毒滅菌方法5.1物理法5.1.1熱力滅菌法。分為干熱滅菌法和濕熱滅菌法。5.1.1.1干熱滅菌法包括焚燒、燒灼及干熱空氣滅菌等。焚燒適用于動物尸體或廢棄的污染物品；燒灼常用于小件金屬器械如接種環(huán)、鑷子和剪刀等的滅菌；干熱空氣滅菌常用于高溫下不變質(zhì)、不損壞、不蒸發(fā)的物品滅菌，但熱穿透性較差，條件較高(需要160℃~180℃,1h～2h)。5.1.1.2濕熱滅菌法包括壓力蒸汽滅菌法、巴氏消毒法及煮沸消毒法等。壓力蒸汽滅菌法適用于耐高溫、高濕的醫(yī)用器械和物品的滅菌，以及實驗室常用物品的消毒滅菌；巴氏消毒法用較低溫度殺滅液體中的病原菌或特定微生物，而其不耐熱成分不被破壞；煮沸法簡單方便，主要用于注射器、刀剪等消毒，在水中加入2%的碳酸氫鈉，既可以提高沸點至105℃,也可增強消毒效果。5.1.2射線消毒。主要包括紫外線消毒和輻射消毒。5.1.2.1紫外線消毒以C波段殺菌效果最好，可以殺滅多種微生物，但輻照能量較低，穿透力弱，僅能殺滅直接照射到的微生物?？諝庀緯r應(yīng)按房間面積選擇安裝紫外燈的功率大小和數(shù)量，懸吊式紫外燈對室內(nèi)空氣消毒時常用數(shù)量為平均1.5W/m3,照射時間不少于30min;物體表面消毒時可按殺滅細(xì)菌繁殖體不低于10000μW·s/cm2,殺滅細(xì)菌芽孢不低于100000μW·s/cm2,殺滅真菌孢子不低于600000μW·s/cm2的輻照劑量計算照射時間。使用紫外線消毒時應(yīng)注意消毒時應(yīng)使消毒部位充分暴露，同時注意電源電壓、照射距離、潔凈度、溫度、有機物、物品材料性質(zhì)及空氣相對濕度等因素。5.1.2.2輻射消毒包括電離輻射消毒和微波輻射消毒?？蓱?yīng)用于包裝的物品進(jìn)行消毒滅菌，穿透力強，滅菌徹底，不污染環(huán)境，無殘留毒性，但輻射操作復(fù)雜成本較高，且對人體有很大傷害，操作人員要特別注意防護(hù)，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程。5.1.3過濾滅菌。適用于對熱不穩(wěn)定的溶液、氣體、水等物品的滅菌。滅菌用過濾器應(yīng)有較高的過濾效率，注意濾材與濾液中的成分不得發(fā)生相互交換。5.2化學(xué)法5.2.1高效消毒劑。包括過氧化物類、含氯類、醛類消毒劑等，應(yīng)用于細(xì)菌芽孢、孢子、分枝桿菌、經(jīng)血傳播病原體(HBV、HCV、HIV等)等微生物污染的消毒。5.2.2中效消毒劑。包括碘類、酚類、醇類及醇類復(fù)方消毒劑等，應(yīng)用于真菌、親水病毒、支原體、衣原體等微生物污染的消毒。5.2.3低效消毒劑。包括季銨鹽、胍類消毒劑等，應(yīng)用于一般細(xì)菌和親脂病毒等微生物污染的消毒。5.3物理化學(xué)結(jié)合法消毒滅菌56.1室內(nèi)空氣6.1.1.1通風(fēng)。通風(fēng)時間應(yīng)根據(jù)室內(nèi)溫度及空氣流通條件確定。夏季可經(jīng)常打開門窗通風(fēng)每日通風(fēng)1次～2次，每次20min～30min;使用換氣扇通風(fēng)時，新風(fēng)量應(yīng)滿足20m3/(h·人)～306.1.1.2循環(huán)式空氣消毒機消毒。紫外線空氣消毒機可用于有人情況下空氣消毒，環(huán)境中低于0.1mg/m3;消毒式中央空調(diào)和靜電吸附式空氣消毒機也可用于有人情況下室內(nèi)空氣消毒；臭氧空消毒機循環(huán)風(fēng)量(m/h)應(yīng)是房間體積的8倍以上。6.1.1.3紫外線照射消毒。室內(nèi)無人的情況下，可采取紫外線燈懸吊式或移動室內(nèi)懸吊式照射時，室內(nèi)安裝30W紫外線燈在1.0m處的輻照強度應(yīng)大于70μW/cm2,安裝數(shù)量每立方米不少于1.5W,照射時間應(yīng)大于30min;紫外線燈管應(yīng)保持清潔，一般每2周用75%酒精擦拭1次；6.1.1.4化學(xué)消毒劑熏蒸或噴霧消毒。無人情況下可用過氧化氫15mg/m3~20mg/m3噴霧，密閉作用6.1.2.1物理消毒法。循環(huán)式空氣消毒機、紫外線燈照射使用安裝等基本要求與6.1.1.2、6.16.1.2.2化學(xué)消毒噴霧或熏蒸消毒法。只用于室內(nèi)無人情況下的消毒，且消毒后應(yīng)通風(fēng)散氣，去除殘留消毒劑，人員方可進(jìn)入。噴霧可使用100mg/L二氧化氯30mL/m3,作用30min或15000mg/L過氧化氫15mL/m3~30mL/m3,作用60min;熏蒸可使用5000mg/L～10000mg/L過氧乙酸加熱蒸發(fā)，當(dāng)室溫下相對濕度60%～80%時，用量1g/m3,作用60min。雙鏈和單鏈季銨鹽配以增效劑和穩(wěn)定劑制成的空氣消毒劑，只用于一般細(xì)菌繁殖體和親脂病毒污染的空氣消毒，10mg/m3作用30min,不能6.1.2.3空氣消毒所用消毒劑應(yīng)符合GB27946.2.1預(yù)防性消毒6.2.1.1物體表面。實驗操作臺面應(yīng)保持清潔?？捎煤行然蛴行т?50mg/L～500mg/L、二氧化氯100mg/L溶液擦拭或噴酒；實驗器材、設(shè)備表面可用75%乙醇或異丙醇擦拭消毒，也可使用消毒濕巾擦拭消毒；織物可煮沸30min,或流通蒸汽消毒30min,或用250mg/L～500mg/L二溴海因或二氧化氯消毒劑浸泡30min后清洗晾干備用。66.2.1.2地面。地面無明顯污染情況下，可采用濕式拖掃，每日1次～2次；當(dāng)?shù)孛婵赡苁艿讲≡廴緯r，可用含有效氯500mg/L、有效溴250mg/L、二氧化氯100mg/L或過氧乙酸1000mg/L的消毒劑溶液拖擦或噴灑，用量以噴濕為度，作用15min～30min。6.2.1.3墻壁、門窗、天花板。一般情況下污染情況輕于地面，通常不需要進(jìn)行消毒；當(dāng)可能受到病原微生物污染時，可用含有效氯500mg/L、有效溴250mg/L、二氧化氯250mg/L或1000mg/L過氧乙酸消毒劑溶液噴酒或擦洗，以噴濕為度，作用15min,墻面消毒至2.0m高，后用清水擦拭?；蜻^氧乙酸1000mg/L消毒劑溶液拖擦或噴酒，作用15min～30min,然后用清水擦拭，每日1次~2次；衛(wèi)生潔具和便具可用1000mg/L～2000ng/L的過氧乙酸、500mg/L的含溴消毒劑或二氧化氯溶液、500mg/L～2000mg/L的含氯消毒溶液浸泡，作用30min。衛(wèi)生間和清潔區(qū)的拖把不得混用，使用后應(yīng)選用上述消毒液浸泡30min,再用清水洗凈懸掛晾干。6.2.2.1物體表面。當(dāng)室內(nèi)各種用品的表面受到病原菌的污染時應(yīng)采取嚴(yán)格的消毒處理。a)一般污染的表面，可用500mg/L二溴海因或二氧化氯均勻噴灑，作用30min;對肝炎病毒和結(jié)核桿菌污染的表面，用1000mg/L二氧化氯均勻噴灑，作用60min;對艾滋病實驗的臺面、儀器表面等也可用70%乙醇或1000mg/L～10000mg/L次氯酸鈉消毒。b)若被明顯污染，立即使用1000mg/L～2000mg/L的有效氯溶液或2000mg/L～5000mg/L過氧乙酸溶液灑于污染表面，并使消毒液浸過污染物表面，作用30min～60min;若已知被肝炎病毒或結(jié)核桿菌污染，應(yīng)用2000mg/L有效氯溶液或5000mg/L過氧乙酸溶液或500mg/L二氧化氯擦拭，若結(jié)核桿菌標(biāo)本污染，也可用紗布或衛(wèi)生紙吸滿5%的苯酚溶液或70%酒c)可通過空氣與物體表面一體化的噴霧、熏蒸法消毒，參照6.1.2.2執(zhí)行。d)懸吊式或移動式紫外線燈照射時，距離污染表面不宜超過1m,消毒有效區(qū)為燈管周圍1.5m~2m;高強度便攜式紫外線燈近距離照射(≤3cm),一般細(xì)菌繁殖體照射3s~5s。e)化學(xué)品熏蒸對人有毒性刺激性，應(yīng)嚴(yán)格控制溫濕度及注意人員操作防護(hù)。6.2.2.2地面。通常采用二溴海因消毒劑500mg/L作用30min;致病性芽孢菌污染可用1000mg/L作用60min;對結(jié)核菌污染的表面，可用5000mg/L過氧乙酸、1000mg/L含氯或含溴消毒劑溶液擦洗，作用30min;對烈性傳染病病原體污染的表面，如霍亂、炭疽等可用有效溴或有效氯1000mg/L,分別作用30min(霍亂)和60min(炭疽)。6.2.2.3墻面。可采用化學(xué)消毒劑噴霧或擦洗消毒。對細(xì)菌繁殖體、肝炎病毒、芽孢污染者，分別用含二溴海因或二氧化氯250mg/L～500mg/L、1000mg/L～2000mg/L的消毒劑溶液作噴霧和擦洗處理。噴霧量根據(jù)墻面結(jié)構(gòu)不同，以濕潤為度，用量50ml/m2~200ml/m2,高度至2.0m～2.5m。銳利的刀剪受污染后不宜燒灼滅菌，可煮沸10min～30min或用2%堿性/中性戊二醛溶液浸應(yīng)立即投入洗滌劑或肥皂液中，再煮沸15min~30min,反復(fù)洗刷瀝干，30℃~60℃烘干，或用1000mg/L有效氯/溴的消毒液浸泡30min。熱塑料器材及橡膠制品可用洗滌劑或肥皂液煮沸15min～30min,洗凈后121℃,102.9kPa下滅菌20min～30min;不耐熱的塑料制品可用5000mg/L過氧乙酸或有效氯為1000mg/L7的消毒劑中浸泡30min~60min,一般血清學(xué)作用2h以上；工作衣等紡織品放污物袋內(nèi)用70℃以上熱水加洗滌劑洗滌，如有明顯污染時，可隨時用有效氯或有效溴500mg/L的消毒液浸泡30min~60min,或壓力蒸汽121℃15min～30min滅菌。中性戊二醛溶液、0.5%醋酸氯己定-乙醇溶液或消毒濕巾重復(fù)擦拭2次消毒；如污染嚴(yán)重，可將所需消毒儀器集中在密閉房內(nèi)，使用5000mg/L～10000mg/L過氧乙酸15mL/m3~30mL/m3噴霧，作用60min。d)紙張類。污染記錄單送出前可用高強度紫外線消毒器距檢驗射3s~5s,兩面照射；也可用專用甲醛消毒器6.3.1預(yù)防性消毒。實驗室工作完畢后應(yīng)立即進(jìn)行手0.3%～0.5%碘伏或60%異丙醇作用1min～3min、酸性氧化電位水原液作用3min~5min、2000mg/L～5000mg/L季銨鹽類手消毒液作用5min～10min。6.3.3手衛(wèi)生的管理與6.3.4手消毒劑的選擇和使用按照GB6.2.2.1對袋表面消毒后，高壓滅菌處理。6.4.2擬回收再用的不耐熱用品可用0.5%過氧乙酸噴灑、1000mg/L有效氯或有效溴的消毒液浸泡60min,或用5000mg/L～10000mg/L過氧乙酸15mL/m3~30mL/m3噴霧，作用60min,然后清水洗滌瀝干；擬回收再用的耐熱用品，按要求打包、表面消毒后，121℃15min~30min(根據(jù)微生物特性而定)高壓滅菌處理。6.4.3橡膠手套等受污染后可用121℃15min壓力蒸汽滅菌處理后，0.5%～1.0%皂液或洗滌劑溶液6.4.4可重復(fù)使用的工作服、帽子、鞋襪等按其性質(zhì)參照6.2.2.4處理。6.4.5正壓防護(hù)服和正壓生物防護(hù)面罩?？墒褂糜行然蛴行т?00mg/L～1000mg/L消毒劑淋浴噴灑或浸泡30min以上或參照產(chǎn)品說明書進(jìn)行消毒處理。6.5.1預(yù)防性消毒?？蓞⒄?.2.1.1對臺