ICSCCS65.020.20B0543CodeofpracticefortissuecultureandrapidpropagationofHydrangeamacrophyllaIDB43/T3075—2024前言 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14組培室條件 15培養(yǎng)基制備 1 培養(yǎng)基母液及配制51 6外植體選擇與消毒 2 7無菌苗生產(chǎn) 2 7.2 8移栽與生根 2 3 3附錄AMS （資料性）培養(yǎng)基成分表4 （資料性）大花繡球組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方表5 （資料性）1/2培養(yǎng)基成分表6附錄D（資料性）大花繡球組織培養(yǎng)生產(chǎn)檔案 7DB43/T3075—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由湖南省林業(yè)局提出。本文件由湖南省林業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本文件起草單位：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)、湖南景然園林發(fā)展有限公司。本文件主要起草人：陳海霞、蔣輝、王練文、李玉帆、彭盡暉。DB43/T3075—20241大花繡球組織培養(yǎng)快繁育苗技術(shù)規(guī)程本文件確立了大花繡球（Hydrangeamacrophylla）組織培養(yǎng)快繁育苗技術(shù)的組培室條件、培養(yǎng)基制備、外植體選擇與處理、無菌苗生產(chǎn)、移栽與生根、出圃、檔案管理等技術(shù)要求。本文件適用于大花繡球組織培養(yǎng)快繁育苗。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T2289林木種苗生產(chǎn)經(jīng)營檔案NY/T2306花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1大花繡球Hydrangeamacrophylla為繡球花科（Hydrangeaceae）繡球?qū)伲℉ydrangea）灌木，又名八仙花。4組培室條件植物組織培養(yǎng)室應(yīng)包括準(zhǔn)備室、洗滌滅菌室、無菌操作室、培養(yǎng)室和馴化室。組培所需設(shè)備應(yīng)包括冰箱、天平、酸度計、高壓滅菌鍋、超聲波清洗器、干燥滅菌器、超凈工作臺、滅菌接種儀、接種器械、全自動光照培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架等。5培養(yǎng)基制備5.1培養(yǎng)基母液及配制按照附錄A的MS培養(yǎng)基成分表依次稱取藥品，制備成20倍大量元素母液，200倍的微量元素母液、鐵鹽母液和有機(jī)成分母液。培養(yǎng)基的配制按照NY/T2306執(zhí)行。5.2培養(yǎng)基配方采用MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加不同的激素、30g/L食用白砂糖和7g/L瓊脂，分別配制初代培養(yǎng)基和繼代培養(yǎng)基，培養(yǎng)基用0.1mol/L鹽酸或0.1mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為5.8。不同品種的培養(yǎng)基配方詳見附錄B。5.3培養(yǎng)基滅菌2DB43/T3075—2024培養(yǎng)基封口后放入高壓滅菌鍋內(nèi)，121℃滅菌15min～20min，滅菌完成冷卻后取出，放置3d~5.4培養(yǎng)條件溫度25℃±1℃,光照強(qiáng)度2500lx，每天光照時間10h～12h。6外植體選擇與消毒6.1外植體選擇應(yīng)選擇當(dāng)年生、生長健壯、芽體飽滿、無病蟲害的枝條。6.2外植體消毒將長5cm～10cm的大花繡球枝條去除葉片，用洗滌劑清洗表面污垢，流水沖洗1h～2h后用紗布吸干表面水分。在超凈工作臺上用75%酒精浸泡震蕩30s，再用3%～5%次氯酸鈉溶液浸泡15min，最后用無菌水洗3次～5次，取出后用無菌濾紙吸干表面水分。6.3外植體處理將消毒后的莖段剪成2cm～3cm帶腋芽的小段。7無菌苗生產(chǎn)每瓶初代培養(yǎng)基中接種2個～4個外植體，插入誘導(dǎo)培養(yǎng)基的深度以芽體露出培養(yǎng)基為準(zhǔn)，注明品種及日期等，放至培養(yǎng)室培養(yǎng)30d左右。7.2繼代培養(yǎng)將初代培養(yǎng)的叢生芽切成單芽，接種到繼代培養(yǎng)基中，每瓶接種2個～4個，培養(yǎng)30d左右。8移栽與生根宜選用珍珠巖、蛭石和草炭土體積比為1:1:2的混合基質(zhì)，用50%多菌靈500倍液淋透混合基質(zhì)，并用塑料薄膜覆蓋24h后，打開薄膜放置1d～2d后備用。8.2煉苗無根苗生長健壯，苗高約3cm時，將組培瓶置于馴化室2d，開瓶煉苗2d后取出洗凈基部培養(yǎng)基，然后置于0.1%高錳酸鉀溶液中浸泡8min～10min，取出后晾干10分鐘左右。8.3移栽無根苗移栽后澆透定根水，用50%的多菌靈1000倍液噴霧，搭建小拱棚，外加透光率為50%遮陽網(wǎng)，保持基質(zhì)濕潤，溫度以20℃~25℃為宜。DB43/T3075—202438.4生根8.5移栽后管理移栽14d后至30d，每7d噴施一次稀釋50倍的1/2MS培養(yǎng)基溶液，配方詳見附錄C。幼苗生長健壯，無病蟲害，根系較發(fā)達(dá)，苗高≥6cm即可出圃。10檔案管理建立大花繡球組培快繁育苗技術(shù)基本情況檔案，按照附錄D記載大花繡球材料來源、培養(yǎng)基配制、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、移栽和生根、出圃等主要繁育過程技術(shù)內(nèi)容；檔案管理按照LY/T2289的規(guī)定執(zhí)行。DB43/T3075—20244MS培養(yǎng)基成分表MS培養(yǎng)基成分見表A.1。表A.1MS培養(yǎng)基成分表NHNOOO5HBOOOO5O5Na-EDTA5O5DB43/T3075—20245大花繡球組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方表大花繡球組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方見表B.1。表B.1大花繡球組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方表‘藍(lán)色媽媽’0000‘紅寶石’00‘銀邊繡球’00‘無盡夏’00DB43/T3075—202461/2MS培養(yǎng)基成分表不含有機(jī)成分的1/2MS培養(yǎng)基成分見表C.1。表C.11/2MS培養(yǎng)基成分表NHNO