ICS65.020DB43DB43/T1964—2020苧麻根腐線蟲病綜合防控技術(shù)規(guī)程RegulationforIntegratedPreventionandControlTechnologyofRamierootrotnematodedisease2020-12-29發(fā)布2021-03-29實(shí)施湖南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB43/T1964—2020前言 Ⅲ 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4苧麻根腐線蟲病癥狀 2 27病害檢測(cè)與監(jiān)測(cè) 28廢棄物處理 9檔案管理 附錄A（資料性）苧麻根腐線蟲病病原線蟲形態(tài)學(xué)鑒定、分子生物學(xué)檢測(cè)方法 4附錄B（資料性）苧麻根腐線蟲病防治檔案記錄 6DB43/T1964—2020本文件按照GB/T1.1—2020給出的規(guī)則起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：湖南省植物保護(hù)研究所。本文件主要起草人：朱春暉、張德詠、劉勇、成飛雪、程菊娥、解嘯、孫書娥、王東偉。1苧麻根腐線蟲病綜合防控技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了苧麻根腐線蟲病的術(shù)語和定義、癥狀、防控原則、防控方法、病害檢測(cè)與監(jiān)測(cè)、廢棄物處理、檔案管理等技術(shù)要求。本文件適用于苧麻根腐線蟲病的綜合防控。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T8321農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則GB/T17980.38農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則（一）殺線蟲劑防治根部線蟲病NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則NY/T1321—2007農(nóng)作物種質(zhì)資源鑒定技術(shù)規(guī)程-苧麻3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1苧麻根腐線蟲病RamieRootRotNematodeDisease為害苧麻地下根莖的一種線蟲病，由咖啡短體線蟲引起，屬于動(dòng)物界（Animalia）、線蟲門（Nematoda）、側(cè)尾腺綱（Secernentea）、墊刃目（Tylenchida）、墊刃科（Tylenchidea）、短體屬3.2綜合防控IntegratedPreventionandControl堅(jiān)持“預(yù)防為主、綜合防治”的植保方針，以“科學(xué)植保、綠色植保、公共植?！睘榉结?，以確保農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境安全為目標(biāo)，以減少農(nóng)藥使用為目的，優(yōu)先采取生態(tài)調(diào)控、生物防治、物理防治和科學(xué)用藥等資源節(jié)約型、環(huán)境友好型技術(shù)來控制農(nóng)作物病蟲害的植物保護(hù)措施。4苧麻根腐線蟲病癥狀苧麻根腐線蟲病主要是由短體屬線蟲為害引起的，主要為害苧麻根部，特別是苧麻的蘿卜根。受害麻株初期根常出現(xiàn)黑褐色不規(guī)則病斑，稍凹陷，后漸擴(kuò)大為黑褐色大病斑，并深入木質(zhì)部使之變黑褐色海綿狀朽腐，質(zhì)地疏松似糠狀，病灶交接處常見黑綠色病變。被害麻兜地上部分常常表現(xiàn)出麻株減少且矮小，葉片發(fā)黃，干旱時(shí)凋萎，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)整根腐爛，麻株枯死。（圖1）。2DB43/T1964—2020圖1苧麻根腐線蟲病為害癥狀5防控原則按照“預(yù)防為主，綜合防控”的植保方針。堅(jiān)持以“農(nóng)業(yè)防治、物理防治、生物防治為主，化學(xué)防治為輔，分區(qū)治理”的防控原則。6.1農(nóng)業(yè)防控6.1.1應(yīng)選擇抗性強(qiáng)的品種，如獨(dú)山圓麻、牛耳青、華苧4號(hào)、中苧1號(hào)、湘苧2號(hào)和川苧系列8號(hào)、6.1.2采用無病土育苗或基質(zhì)育苗，并進(jìn)行苗床消毒；選用健康壯苗。6.1.3新建麻園栽培前施有機(jī)肥500kg-1000kg/667m2，并每年冬季進(jìn)行培土、施有機(jī)肥500kg/667m2。6.1.4實(shí)行高壟栽培，適時(shí)開溝排水，降低地下水位。6.1.5注意田園衛(wèi)生，在定植前，結(jié)合整地，應(yīng)及時(shí)中耕除草，拔除病株，清除病殘?bào)w，并帶出田外，集中無害化處理。6.1.6重病田應(yīng)與水稻等禾本科非寄主作物進(jìn)行輪作。6.2生物防控可利用生物農(nóng)藥或微生物菌肥抑制苧麻根腐線蟲病的發(fā)生。如用阿維菌素（乳油或顆粒劑）、光合細(xì)菌嗜硫小紅卵菌（Rhodovulumsulidophilum）等。6.3化學(xué)防控對(duì)重病麻園有必要進(jìn)行施用化學(xué)藥劑防治。化學(xué)藥劑使用應(yīng)符合GB/T8321NY/T1276和GB/T17980.38的相關(guān)規(guī)定。7病害檢測(cè)與監(jiān)測(cè)調(diào)查苧麻根腐線蟲發(fā)生情況，加強(qiáng)苧麻根腐線蟲病的檢測(cè)與監(jiān)測(cè)，對(duì)病害進(jìn)行早期診斷與預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)。并根據(jù)發(fā)病情況及土壤中線蟲種群密度，選擇合理的防治方法。定期對(duì)田間發(fā)病情況進(jìn)行調(diào)查，并取田間土壤進(jìn)行苧麻根腐線蟲病原檢測(cè)，具體檢測(cè)方法參見附錄A。根據(jù)NY/T1321—2007農(nóng)作物種質(zhì)資源鑒定技術(shù)規(guī)程-苧麻A.2、A.4、A.5的內(nèi)容進(jìn)行病原分離、DB43/T1964—20203病情分級(jí)和病情指數(shù)的計(jì)算。8廢棄物處理生產(chǎn)過程中的農(nóng)藥和肥料包裝物、塑料軟盤、農(nóng)膜、雜草等生產(chǎn)廢棄物，應(yīng)及時(shí)收集到回收箱內(nèi)，帶離生產(chǎn)區(qū)集中進(jìn)行無害化處理。9檔案管理9.1建立苧麻根腐線蟲病防治檔案記錄檔案，為生產(chǎn)活動(dòng)追溯提供有效的證據(jù)。記錄主要包括前茬作物、病蟲害發(fā)生情況、曾使用過防治方法防治病害、當(dāng)茬作物、當(dāng)前使用防治方法、根腐線蟲數(shù)量、根腐線蟲病情指數(shù)、調(diào)查人員等。9.2加強(qiáng)檔案管理，注意防蟲、放鼠、防霉變等。9.3檔案記錄應(yīng)真實(shí)準(zhǔn)確，保存期限不少于3年。DB43/T1964—20204苧麻根腐線蟲病病原線蟲形態(tài)學(xué)鑒定、分子生物學(xué)檢測(cè)方法一、苧麻根腐線蟲病病原線蟲形態(tài)學(xué)鑒定土壤中或者根中分離的線蟲顯微鏡下形態(tài)圖為圖A1。線蟲形態(tài)的大小符合表A1數(shù)據(jù)，則為咖啡短體線蟲引起的苧麻根腐線蟲病害。圖A1苧麻根腐線蟲病病原咖啡短體線蟲形態(tài)圖表A1咖啡短體線蟲形態(tài)特征測(cè)量值二、苧麻根腐線蟲病病原分子生物學(xué)鑒定取病麻兜及周圍土樣，采用淺盆法或蔗糖漂浮離心法分離苧麻根樣中或土樣中線蟲。取分離的單條線蟲用無菌水清洗3次，放于0.2mLPCR薄壁管中，-20℃冷凍10min，加小量蛋白酶PKase，65℃消化1h，95℃滅活10min，離心上清液作為PCR反應(yīng)模板。引物：5’-CGTAACAAGGTAGCTGTAG-3’和5’DB43/T1964—20205-TCCTCCGCTAAATGATATG-3’。94℃預(yù)變性4min，之后94℃變性30sec，退火溫度62℃30sec，72℃延伸45sec，28個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min。取擴(kuò)增產(chǎn)物8μL，加入到1.5％瓊脂糖凝膠（100mL1.5%瓊脂糖凝膠含有5μLSYGBGreen）的點(diǎn)樣孔內(nèi)。電泳緩沖液1×TAE，120V，電泳30min。電泳結(jié)束后，取出瓊脂糖凝膠，通過凝膠成像儀觀察結(jié)果并拍照記錄，擴(kuò)增片段與預(yù)期目標(biāo)條帶大小一致，則結(jié)果判定為陽(yáng)性，未擴(kuò)增出預(yù)期大小條帶，則結(jié)果判定為陰性；若陽(yáng)性對(duì)照未擴(kuò)增出預(yù)期大小片段或空白對(duì)照擴(kuò)增出任何條帶，則檢測(cè)結(jié)果失敗，需要重新檢測(cè)。進(jìn)一步可以通過克隆擴(kuò)增片段、測(cè)序及比較分析，加以確認(rèn)檢測(cè)結(jié)果。800bp圖A2苧麻根腐線蟲（80