1T/SZBMPAXXX—2025 4 2.規(guī)范性引用文件 53.術(shù)語和定義 3.1人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞（HumanMesenchymalStromalCell，hMSC） 3.2細(xì)胞外囊泡（ExtracellularVesicles，EVs） 3.3凍干保護(hù)劑（Lyoprotectant） 3.4凍干粉（LyophilizedPowder） 3.5復(fù)溶（Reconstitution） 3.6粒子總數(shù)（ParticleConcentration） 73.7粒徑分布（ParticleSizeDistribution） 3.8標(biāo)志蛋白（EVMarkerProteins） 3.9顆粒蛋白比（Particle-to-ProteinRatio） 3.10放行檢驗(yàn)（ReleaseTesting） 3.11留樣（RetentionSample） 3.12復(fù)核檢驗(yàn)（Retest） 73.13異常批次（DeviatedBatch） 73.14供試品前處理（Pre-treatmentofTestSample） 3.15效期（ShelfLife） 83.16冷鏈（ColdChain） 4.縮略詞 5.人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞要求 86.細(xì)胞外囊泡凍干粉質(zhì)量要求 96.1細(xì)胞外囊泡凍干粉制備 96.2細(xì)胞外囊泡凍干粉關(guān)鍵質(zhì)量屬性 97.檢驗(yàn)方法 7.1外觀 7.2復(fù)溶性 7.5裝量差異 127.6形態(tài) 7.7標(biāo)志蛋白 127.8粒徑分布 132T/SZBMPAXXX—20257.9粒子總數(shù) 137.10生物學(xué)效能評(píng)價(jià) 137.11pH值測(cè)定 7.12水分 7.13顆粒蛋白比 137.14微生物污染檢測(cè) 137.15內(nèi)毒素 147.16復(fù)溶后保存穩(wěn)定性檢測(cè) 147.17異常免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè) 148.檢驗(yàn)規(guī)則 8.1總原則 8.2供試品前處理 158.3放行檢驗(yàn) 15 8.5復(fù)核檢驗(yàn) 158.6判定規(guī)則 158.7異常批處理機(jī)制 159.包裝、儲(chǔ)存和運(yùn)輸 169.1包裝 9.2標(biāo)簽 9.3儲(chǔ)存 9.4運(yùn)輸 10.廢棄物處理 參考文獻(xiàn) T/SZBMPAXXX—20253本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本文件由深圳匯芯生物醫(yī)療科技有限公司提出。本文件由深圳市生物醫(yī)藥促進(jìn)會(huì)歸口。本文件起草單位：深圳匯芯生物醫(yī)療科技有限公司、深圳市藥品檢驗(yàn)研究院（深圳市醫(yī)療器械檢測(cè)中心）、香港中文大學(xué)（深圳）、深圳市北科生物科技有限公司、優(yōu)銳生命科技（江蘇）有限公司、璞賽生物科技（成都）有限公司、深圳市寶舜泰生物醫(yī)藥股份有限公司、北昊干細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)研究院有限公司、貴州星博元生物醫(yī)學(xué)科技有限公司、廣州外泌體生物科技有限公司、杭州星源未來科技有限公司、北京瀛海藍(lán)鯨生物科技有限公司、株式會(huì)社日本生命科學(xué)服務(wù)、西湖艾凱利元（杭州）生物科技有限公司、北京漢氏聯(lián)合生物技術(shù)股份有限公司、Cellese,Inc.、深圳恒通瑞安生物科技有限公司、深圳科興藥業(yè)有限公司、喀什地區(qū)第一人民醫(yī)院、喀什廣東科學(xué)技術(shù)研究院、河北禾沐春生物科技有限公司、中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院、深圳市人民醫(yī)院、南方科技大學(xué)、清華大學(xué)國(guó)際研究生院、福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院、湖北泰木各科技有限公司、國(guó)家高性能醫(yī)療器械創(chuàng)新中心、鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科醫(yī)學(xué)部、廣東醫(yī)科大學(xué)、廣州表觀生物科技有限公司、南開大學(xué)、廣州實(shí)驗(yàn)室、廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院、四川大學(xué)。本文件主要起草人：楊一杰、向愿、賴運(yùn)浩、李萌、吳熙、王爾一、李晨鐘、蔣成、蔡車國(guó)、孟碩、王勇、朱海影、馬峰、賴默溫、祁振強(qiáng)、唐芳、黃春艷、鄧志攀、何志旭、趙星、翟紹華、余堪健、孟一然、王涵、劉子源、吳華、劉冠宏、劉曉東、胡博文、馮春敬、別鵬飛、Dr.RobertKnight、Dr.ChiZhang、王瑞寧、秦鎖富、楊敏、許愛敏、何川疆、謝紹建、石動(dòng)力、張翠萍、李富榮、譚英、陳小松、范麗娜、潘騰、鄭峰、唐俊楠、郭嘉城、路陽、胡柯、呂炎、彭新生、周艷芳、楊學(xué)敏、陳永順、王悅冰、楊令延、ChanYunshen、黃奔、王啟光、樊渝江、王書崎。本標(biāo)準(zhǔn)首次制定。T/SZBMPAXXX—20254細(xì)胞外囊泡（ExtracellularVesicles,EVs）是由細(xì)胞分泌的、具有磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)的囊泡，涵蓋不同大小和生物發(fā)生途徑的亞群。常見小尺寸EV的粒徑范圍為30～200nm，內(nèi)含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNA等多種生物活性物質(zhì)，可介導(dǎo)細(xì)胞間信息傳遞。細(xì)胞外囊泡凍干粉（ExtracellularVesiclesLyophilizedPowder）是將符合藥用標(biāo)準(zhǔn)的EVs懸液，經(jīng)低溫冷凍和真空升華干燥制備而成的固態(tài)生物制品，可實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期儲(chǔ)存和運(yùn)輸。該劑型在保留囊泡原有囊泡膜結(jié)構(gòu)與生物活性的同時(shí)，顯著延長(zhǎng)有效期、降低對(duì)冷鏈運(yùn)輸?shù)囊蕾?，提升了?chǔ)運(yùn)與臨床應(yīng)用的可及性。然而，凍干過程中的冷凍應(yīng)力、脫水應(yīng)力與凍干保護(hù)劑選擇不當(dāng)，均可能導(dǎo)致EVs膜結(jié)構(gòu)破裂、核酸或蛋白等內(nèi)容物泄漏，甚至蛋白聚集沉淀，進(jìn)而降低復(fù)溶后囊泡的完整性與功能。MISEV2023強(qiáng)調(diào)，任何對(duì)EVs的處理（包括凍干、濃縮、儲(chǔ)存）均應(yīng)評(píng)估并報(bào)告其對(duì)粒徑分布、數(shù)量、結(jié)構(gòu)和功能的影響，并提供相應(yīng)的對(duì)照和驗(yàn)證。此外，EVs的凍干效果受多種因素影響，包括來源差異（如臍帶、胎盤、脂肪或骨髓等來源人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞（hMSC））、供體生理狀態(tài)（如年齡、疾病背景）、分離純化方法（如超速離心、切向流過濾、超聲納濾、微流控或尺寸排阻等方法）、以及凍干工藝參數(shù)和保護(hù)劑（如冷凍速率、升華條件和添加劑組成）。這些因素均會(huì)影響凍干后EVs的粒子總數(shù)、粒徑分布、形態(tài)結(jié)構(gòu)完整性、表面標(biāo)志物、載藥量及復(fù)溶后穩(wěn)定性和功能。因此，建立人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞來源EVs凍干粉的質(zhì)量要求，是保障EV凍干粉其安全性、有效性和可控性的前提。本文件參考《中國(guó)藥典》及《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》等相關(guān)法規(guī)和指南，結(jié)合EVs凍干粉的物理、化學(xué)與生物學(xué)屬性，對(duì)成品放行及全生命周期監(jiān)測(cè)提出統(tǒng)一規(guī)范，旨在為生產(chǎn)企業(yè)、檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)及監(jiān)管部門提供可執(zhí)行的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，推動(dòng)人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞來源EVs凍干粉在疾病治療、組織修復(fù)與美容抗衰等領(lǐng)域的合規(guī)應(yīng)用。本文件所稱“細(xì)胞外囊泡（Extracellularvesicles,EVs）”涵蓋了國(guó)際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(huì)（ISEV）《MISEV2018》及《MISEV2023》中定義的、通過標(biāo)準(zhǔn)方法制備獲得的細(xì)胞外囊泡。常見 小尺寸EVs（30～200nm）在行業(yè)中俗稱“外泌體”。為遵循國(guó)際科學(xué)共識(shí)并確保術(shù)語的嚴(yán)謹(jǐn)性，本標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一采用“細(xì)胞外囊泡（ExtracellularVesicles,EVs）”進(jìn)行表述。T/SZBMPAXXX—20255人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞來源細(xì)胞外囊泡凍干粉質(zhì)量要求1.范圍本文件規(guī)定了人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞來源EVs凍干粉的質(zhì)量要求及管理規(guī)范，包括細(xì)胞來源的倫理規(guī)范、樣本采集與運(yùn)輸、EVs凍干粉制備、關(guān)鍵質(zhì)量屬性、檢測(cè)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、包裝、儲(chǔ)存、運(yùn)輸及標(biāo)簽及廢棄物處置等內(nèi)容。本文件適用于以人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞為來源，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)工藝制備并經(jīng)過凍干過程獲得的EVs制劑，適用于科研、工業(yè)、醫(yī)療以及相關(guān)應(yīng)用中的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)。2.規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及法規(guī)文件：GB/T1.1標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T42466-2023生物樣本庫多能干細(xì)胞管理技術(shù)規(guī)范GB19489《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》中華人民共和國(guó)藥典（2025年版）全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第5版）藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例危險(xiǎn)廢物名錄中華人民共和國(guó)生物安全法行業(yè)指南與技術(shù)文件：干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則（試行）人源干細(xì)胞產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）人源干細(xì)胞產(chǎn)品非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）無菌藥品附錄征求意見稿實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求WS293-2019艾滋病和艾滋病病毒感染診斷WS213-2008丙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)WS273-2018梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)無菌制劑團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)：T/SZBMPAXXX—20256T/CSCB0001-2020干細(xì)胞通用要求T/CSCB0003-2021人間充質(zhì)干細(xì)胞T/CRHA001-2021人間充質(zhì)干細(xì)胞來源的小細(xì)胞外囊泡T/CRHA002-2021人多能干細(xì)胞來源的小細(xì)胞外囊泡T/SZJCH0003-2022細(xì)胞外泌體通用技術(shù)要求T/CSCB0015-2022人干細(xì)胞來源細(xì)胞外囊泡制備通用要求T/SBIAORG001-2023間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)T/FDSA049—2024人源間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體制備與檢驗(yàn)規(guī)范T/CEAC045—2024皮膚抗衰中干細(xì)胞外泌體的應(yīng)用技術(shù)要求T/CEAC057—2024干細(xì)胞外泌體載藥技術(shù)規(guī)范T/CQAP3015—2025人間充質(zhì)干細(xì)胞藥品生產(chǎn)和質(zhì)量控制規(guī)范MISEV2023Minimalinformationforstudiesofextracellularvesicles3.術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞（HumanMesenchymalStromalCell，hMSC）來源骨髓、脂肪組織、胎盤、臍帶及臍帶血等組織。主要通過免疫調(diào)節(jié)和旁分泌作用參與組織修復(fù)與微環(huán)境調(diào)控。其表型特征為表達(dá)CD73、CD90、CD105等陽性標(biāo)志物，同時(shí)缺乏CD14、CD34、CD45、HLA-DR等造血及免疫相關(guān)等陰性表面標(biāo)志物[1,2]。3.2細(xì)胞外囊泡（ExtracellularVesicles，EVs）由細(xì)胞分泌的、具有磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)的囊泡，涵蓋不同大小和生物發(fā)生途徑的亞群。常見小尺寸EVs的粒徑為30～200nm，內(nèi)含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNA等多種生物活性物質(zhì)，可介導(dǎo)細(xì)胞間信息傳遞。3.3凍干保護(hù)劑（Lyoprotectant）指在凍干過程中用于保護(hù)活性物質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的一類添加劑，常見類型包括糖類（如蔗糖、海藻糖）、多元醇類（如甘露醇）等。其作用為減緩相變損傷，并維持EVs的形態(tài)與結(jié)構(gòu)完整性。3.4凍干粉（LyophilizedPowder）指通過真空冷凍干燥工藝將制品懸液中的水分移除后形成的粉末狀或塊狀制劑，具有良好的穩(wěn)定性和便于儲(chǔ)運(yùn)的特點(diǎn)。T/SZBMPAXXX—202573.5復(fù)溶（Reconstitution）指通過加入特定溶劑（如無菌生理鹽水或無菌注射用水）并輕柔混勻，使其恢復(fù)為溶液或懸浮液的過程。復(fù)溶應(yīng)在規(guī)定條件和時(shí)限內(nèi)進(jìn)行。3.6粒子總數(shù)（ParticleConcentration）指每一成品包裝單元中所含EVs的粒子數(shù)量。3.7粒徑分布（ParticleSizeDistribution）指復(fù)溶后EVs在一定粒徑范圍內(nèi)的分布特性。3.8標(biāo)志蛋白（EVMarkerProteins）指用于鑒定EVs存在與來源的特征性蛋白。常見的陽性標(biāo)志物包括CD9、CD63、CD81等跨膜蛋白，以及Alix、TSG101等胞內(nèi)EV相關(guān)蛋白；常見的陰性標(biāo)志物包括Calnexin、HistoneH3和GM130等非EV相關(guān)蛋白。3.9顆粒蛋白比（Particle-to-ProteinRatio）指凍干制品復(fù)溶后EVs的粒子濃度與蛋白濃度的比值。3.10放行檢驗(yàn)（ReleaseTesting）指產(chǎn)品完成全部生產(chǎn)流程后，在上市或交付使用前，依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行的全項(xiàng)或必要項(xiàng)檢驗(yàn)，用于判斷該批產(chǎn)品是否予以放行及流通。3.11留樣（RetentionSample）指企業(yè)對(duì)每一批產(chǎn)品按規(guī)定留存的具有代表性的樣本，用于復(fù)核檢測(cè)、質(zhì)量追溯或監(jiān)管抽查。3.12復(fù)核檢驗(yàn)（Retest）指在首輪檢驗(yàn)結(jié)果存在爭(zhēng)議、質(zhì)疑或質(zhì)量糾紛時(shí)，由具有檢測(cè)資質(zhì)的第三方機(jī)構(gòu)或企業(yè)內(nèi)部質(zhì)量管理部門對(duì)該批次產(chǎn)品重新進(jìn)行的檢驗(yàn)。3.13異常批次（DeviatedBatch）指在生產(chǎn)、檢驗(yàn)或放行過程中，出現(xiàn)質(zhì)量不合格、檢驗(yàn)偏差、封裝問題或其他不符合標(biāo)準(zhǔn)要求情況的產(chǎn)品批次。T/SZBMPAXXX—202583.14供試品前處理（Pre-treatmentofTestSample）指在正式檢驗(yàn)前，對(duì)供試樣品進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)化準(zhǔn)備過程，以確保檢測(cè)條件一致、樣品狀態(tài)穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果具有可比性和科學(xué)性。3.15效期（ShelfLife）指在規(guī)定的儲(chǔ)存條件下，產(chǎn)品能保持其規(guī)定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和預(yù)期功效的時(shí)間期限。3.16冷鏈（ColdChain）在生產(chǎn)、儲(chǔ)存、運(yùn)輸、銷售及使用前等各環(huán)節(jié)，持續(xù)提供穩(wěn)定低溫環(huán)境的物流體系。4.縮略詞下列縮略語適用于本文件。CFSE：羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（CarboxyfluoresceinSuccinimidylEster）EBV：人類皰疹病毒（Epstein-BarrVirus）GMP：藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GoodManufacturingPractice）HBV：乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus）HCMV：人巨細(xì)胞病毒（HumanCytomegalovirus）HCV：丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus）HIV：人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）HTLV：人類T淋巴細(xì)胞病毒（HumanT-lymphotropicVirus）hMSC：人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞（humanMesenchymalStromalCell）TP：梅毒螺旋體（TreponemaPallidum）NTA：納米顆粒跟蹤分析（NanoparticleTrackingAnalysis）TEM：透射電子顯微鏡（TransmissionElectronMicroscopy）5.人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞要求人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞/組織來源應(yīng)符合國(guó)家相關(guān)的法律法規(guī)和倫理要求，經(jīng)具備資質(zhì)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)或區(qū)域倫理委員會(huì)審批，并獲得供者簽署的知情同意書（用于研究或應(yīng)用）。人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞獲取應(yīng)建立完整的供者篩選和采集制度：如供者健康評(píng)估和篩選標(biāo)準(zhǔn)、組織/細(xì)胞采集的操作規(guī)范、標(biāo)本的包裝與運(yùn)輸、接收與交接流程、以及全過程的記錄與追蹤體系。相關(guān)流程應(yīng)經(jīng)過研究和驗(yàn)證，并據(jù)此制訂明確的規(guī)范和要求，比如供者細(xì)胞的特征、培養(yǎng)情況、代次、生長(zhǎng)特性、保存狀態(tài)、保存條件及檢驗(yàn)情況等。人間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞獲取過程中應(yīng)配套完整的資料記錄，包括供者基本信息、當(dāng)前健康狀況、組織來源、既往病史、家族史（尤其關(guān)注傳染病和遺傳?。z測(cè)報(bào)告、運(yùn)輸和交接記錄等。對(duì)既往史和家族史中的遺傳病信息應(yīng)詳細(xì)采集；傳染病檢測(cè)內(nèi)容應(yīng)包括但不限于HBV、T/SZBMPAXXX—20259HCV、HIV、HTLV、EBV、HCMV和TP。必要時(shí)，還應(yīng)補(bǔ)充供者近期出入疫區(qū)或相關(guān)接觸史等流行病學(xué)信息，以保障生物安全。所有信息需真實(shí)、完整、可追溯。原則上，對(duì)于適合建立細(xì)胞庫的供者細(xì)胞，應(yīng)建立細(xì)胞庫進(jìn)行保存和生產(chǎn)。細(xì)胞庫的層級(jí)可根據(jù)自身特性、生產(chǎn)情況及臨床應(yīng)用需求綜合考慮，并應(yīng)建立細(xì)胞庫的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，檢驗(yàn)應(yīng)滿足安全性、質(zhì)量可控性和/或有效性的基本要求。6.細(xì)胞外囊泡凍干粉質(zhì)量要求6.1細(xì)胞外囊泡凍干粉制備6.1.1凍干保護(hù)劑應(yīng)選用對(duì)人體無害、經(jīng)驗(yàn)證安全有效、符合注射級(jí)標(biāo)準(zhǔn)、非動(dòng)物來源的凍干保護(hù)劑原材料。凍干保護(hù)劑體系應(yīng)能有效地減輕相變應(yīng)力，維持EVs的完整結(jié)構(gòu)和生物活性，常用成分包括蔗糖、海藻糖、甘露醇等。6.1.2細(xì)胞外囊泡凍干粉制備應(yīng)在符合現(xiàn)行中國(guó)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求的潔凈環(huán)境中進(jìn)行凍干操作，并對(duì)關(guān)鍵工藝條件（如預(yù)凍速率、升溫速率、凍干曲線、凍干體積、設(shè)備驗(yàn)證等）及相關(guān)設(shè)備進(jìn)行工藝驗(yàn)證，生產(chǎn)過程應(yīng)有完整記錄。凍干結(jié)束后，應(yīng)在無菌條件下完成封裝，并對(duì)封口密閉性進(jìn)行驗(yàn)證（如真空密閉測(cè)試或染色測(cè)試）。封裝結(jié)束后，制品應(yīng)貼上標(biāo)識(shí)，內(nèi)容至少包括制品名稱、批號(hào)、規(guī)格、數(shù)量、分裝或凍干日期等。依據(jù)：中國(guó)藥典三部生物制品通則《生物制品分裝和凍干規(guī)程》6.2細(xì)胞外囊泡凍干粉關(guān)鍵質(zhì)量屬性6.2.1外觀凍干粉應(yīng)為白色疏松體，無明顯萎縮、塌陷現(xiàn)象。[依據(jù)：2025版中國(guó)藥典三部治療用卡介苗]6.2.2復(fù)溶性按標(biāo)示量加入生理鹽水或無菌注射用水，復(fù)溶后應(yīng)在規(guī)定時(shí)間內(nèi)為無色、澄明、無可見異物的均一懸液。[依據(jù)：2025版中國(guó)藥典三部治療用卡介苗]6.2.3可見異物依法檢查（通則0904），應(yīng)符合規(guī)定。T/SZBMPAXXX—2025[依據(jù)：2025版中國(guó)藥典通則0904]6.2.4不溶性微粒a若產(chǎn)品用于靜脈注射，應(yīng)檢測(cè)不溶性微粒。依法檢查（通則0903第一法），應(yīng)符合規(guī)定。[依據(jù)：2025版中國(guó)藥典通則0903]6.2.5裝量差異每瓶的裝量應(yīng)在標(biāo)識(shí)值±10%范圍內(nèi)，檢測(cè)依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》“0102注射劑”通則執(zhí)行。[依據(jù)：中國(guó)藥典在0102注射劑通則下，明確要求中國(guó)藥典要求，0.05g-0.15g的凍干產(chǎn)品裝量差異不能超過±10%]6.2.6形態(tài)透射電鏡（TEM）下，EVs應(yīng)呈現(xiàn)茶托狀或杯狀形態(tài)，具有清晰的膜結(jié)構(gòu)，邊緣清晰，不聚團(tuán)、無破損。[依據(jù)：T/SBIAORG001-2023]6.2.7標(biāo)志蛋白需同時(shí)滿足以下條件：表面跨膜蛋白（CD9、CD63、CD81和CD82）任意兩種為陽性；胞內(nèi)蛋白（Alix、Flotillin1/2、TSG101）任意一種為陽性；細(xì)胞污染蛋白（Calnexin、HistoneH3和GM130）應(yīng)檢測(cè)為陰性或在可忽略水平。[來源：T/FDSA049-2024，MISEV2023]6.2.8粒徑復(fù)溶后EVs粒徑分布應(yīng)主要集中在30～200nm范圍內(nèi)，并在該范圍內(nèi)存在明顯的主峰。本標(biāo)準(zhǔn)適用的對(duì)象為hMSC來源的小尺寸EVs。[依據(jù)：TCRHA001-2021小于30nm為蛋白聚集，大于200nm為細(xì)胞碎片]6.2.9粒子總數(shù)復(fù)溶后粒子總數(shù)應(yīng)為標(biāo)識(shí)值的85%～115%。[依據(jù)：根據(jù)企業(yè)生產(chǎn)多批次數(shù)據(jù)及有效性數(shù)據(jù)制定的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定]a產(chǎn)品用于靜脈注射需檢測(cè)不溶性微粒。T/SZBMPAXXX—20256.2.10生物學(xué)效能評(píng)價(jià)生物活性檢測(cè)應(yīng)采用經(jīng)過驗(yàn)證的、與預(yù)期作用[依據(jù)：T/CQAP3015-2025]6.2.11pH值復(fù)溶懸液pH應(yīng)在6.0-8.0范圍內(nèi)。[依據(jù)：P/CIQA-197-2024]6.2.12水分凍干粉水分含量應(yīng)≤3%。[依據(jù)：無菌制劑凍干部分]6.2.13顆粒蛋白比復(fù)溶后EVs的顆粒數(shù)與蛋白含量比值應(yīng)不低于1.0E+8particles/μgprotein。6.2.14微生物真菌、細(xì)菌、支原體、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP等常見病原體檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性，不得有外源病毒污染。[依據(jù)：2025版《中國(guó)藥典》、《干細(xì)胞制劑放行檢驗(yàn)規(guī)范》]6.2.15內(nèi)毒素按照《中華人民共和國(guó)藥典》“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”，質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：藥品、生物制品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L），按公式L=K/M確定式中：K--人每千克體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量，單位為EU/(kg?h);M--人用每千克體重每小時(shí)的最大供試品劑量，單位為mL/(kg?h)[依據(jù)：T/CQAP3015-2025、2025版中國(guó)藥典]6.2.17復(fù)溶后保存穩(wěn)定性復(fù)溶后樣品應(yīng)在2-8℃條件下保存，使用時(shí)限應(yīng)不超過24h，或應(yīng)提供驗(yàn)證數(shù)據(jù)支持的更長(zhǎng)的復(fù)溶后穩(wěn)定性時(shí)間。穩(wěn)定性判定標(biāo)準(zhǔn)：24小時(shí)內(nèi)平均粒徑相對(duì)變化不超過±10%，粒子總數(shù)不低于初始值的90%，且無明顯沉淀或蛋白降解。T/SZBMPAXXX—20256.2.18異常免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群應(yīng)無異常增殖（p≥0.05）。[依據(jù)：T/SBIAORG001-2023、《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則（試行）7.檢驗(yàn)方法7.1外觀外觀應(yīng)于自然光或白光下肉眼觀察，檢查凍干粉的色澤、形態(tài)和有無明顯萎縮、塌陷等異常。7.2復(fù)溶性按標(biāo)識(shí)量向EVs凍干粉中加入生理鹽水或無菌注射用水，室溫?fù)u勻復(fù)溶，觀察所得懸液是否無色、澄清、無可見異物。7.3可見異物參照《中華人民共和國(guó)藥典》通則“0904可見異物檢查法”檢測(cè)。7.4不溶性微粒參照《中華人民共和國(guó)藥典》通則“0903不溶性微粒檢查法”檢測(cè)。7.5裝量差異參照《中華人民共和國(guó)藥典》通則“0102注射劑”中的關(guān)于裝量差異的規(guī)定進(jìn)行檢測(cè)。抽樣應(yīng)覆蓋每一批次中多個(gè)包裝單元。7.6形態(tài)使用TEM進(jìn)行觀察。樣品應(yīng)經(jīng)負(fù)染處理，顯微圖像應(yīng)顯示為典型的杯狀或茶托狀EVs結(jié)構(gòu)，具備清晰雙層膜結(jié)構(gòu)，無聚團(tuán)或膜破損現(xiàn)象。[依據(jù)：T/SBIAORG001-2023]7.7標(biāo)志蛋白采用免疫印跡法（WesternBlot）檢測(cè)EVs標(biāo)志蛋白：表面跨膜蛋白（CD9、CD63、CD81和CD82）任意兩種為陽性；胞內(nèi)蛋白（Alix、Flotillin1/2、TSG101）任意一種為陽性。細(xì)胞污染蛋白（Calnexin、HistoneH3和GM130）應(yīng)檢測(cè)為陰性或處于可忽略水平?？蓞⒖肌吨腥A人民共和國(guó)藥典》2025版通則“3401免疫印跡法”檢測(cè)，也可使用納米流式細(xì)胞術(shù)等方法進(jìn)行等效檢測(cè)，前提是需要完成等效性驗(yàn)證。T/SZBMPAXXX—20257.8粒徑分布優(yōu)先使用納米顆粒跟蹤分析儀（NTA）或納米流式測(cè)定。結(jié)果應(yīng)以納米（nm）為單位，并提供粒徑分布曲線圖。標(biāo)識(shí)值應(yīng)基于經(jīng)過驗(yàn)證的定標(biāo)方法（如NTA或納米流式）確定。[依據(jù)：T/SBIAORG001-2023]7.9粒子總數(shù)使用納米顆粒跟蹤分析儀（NTA）或納米流式測(cè)定復(fù)溶后懸液的EVs粒子濃度，并結(jié)合復(fù)溶體積計(jì)算粒子總數(shù)。檢測(cè)前樣品應(yīng)適當(dāng)稀釋至合適范圍（具體根據(jù)使用的檢測(cè)設(shè)備的要求），并與標(biāo)識(shí)值進(jìn)行對(duì)比，以計(jì)算粒子保留率。（標(biāo)識(shí)值應(yīng)基于經(jīng)過驗(yàn)證的定標(biāo)方法（如NTA、納米流式等方法）確定）。[依據(jù)：T/SBIAORG001-2023]7.10生物學(xué)效能評(píng)價(jià)應(yīng)建立與治療作用機(jī)制相關(guān)的生物學(xué)活性測(cè)定方法（如免疫調(diào)節(jié)、促血管生成、抗凋亡、細(xì)胞存活、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、遷移實(shí)驗(yàn)等功能），并對(duì)方法的準(zhǔn)確性、精密度、專屬性進(jìn)行驗(yàn)證。7.11pH值測(cè)定參照《中華人民共和國(guó)藥典》通則“0631溶液pH測(cè)定法”檢測(cè)。樣品應(yīng)在室溫下復(fù)溶并靜置5min后測(cè)定，測(cè)定過程應(yīng)避免泡沫干擾，測(cè)量結(jié)果應(yīng)在6.0-8.0范圍內(nèi)。7.12水分參照《中華人民共和國(guó)藥典》通則“0382水分測(cè)定法”進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果以百分比（%）表示。7.13顆粒蛋白比使用NTA或納米流式方法測(cè)定EVs顆粒濃度（單位：particles/mL），使用Qubit熒光法或BCA法測(cè)定蛋白濃度（單位：μg/mL），計(jì)算顆粒/蛋白比值（單位：particles/μgprotein）。檢測(cè)結(jié)果應(yīng)符合6.2.13中規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(≥1.0E+8particles/μgprotein）。7.14微生物污染檢測(cè)應(yīng)按照以下方法檢測(cè)：7.14.1細(xì)菌、真菌參照《中華人民共和國(guó)藥典》通則“1101無菌檢查法”檢測(cè)。T/SZBMPAXXX—20257.14.2支原體參照《中華人民共和國(guó)藥典》通則“3301支原體檢查法”檢測(cè)。7.14.3HIV參照《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》（WS293-2019）核酸法檢測(cè)。7.14.4HCV參照《丙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)》（WS213-2008）核酸法檢測(cè)。7.14.5HBV、HTLV、EBV、HCMV參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》核酸法檢測(cè)。7.14.6TP參照《梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)》（WS273-2007）核酸法檢測(cè)。7.14.7外源病毒因子參照《中華人民共和國(guó)藥典》通則“3302外源病毒因子檢查法”檢測(cè)。7.15內(nèi)毒素參照《中華人民共和國(guó)藥典》通則“1143細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”檢測(cè)。結(jié)果以EU/mg總重量表示。7.16復(fù)溶后保存穩(wěn)定性檢測(cè)將復(fù)溶后的細(xì)胞外囊泡懸液于2-8°C條件下保存，分別于0、12、24小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間后取樣進(jìn)行下列檢測(cè)：粒徑及粒子數(shù)（NTA或納米流式）；外觀變化（澄清度、沉淀）；pH值變化。說明：此檢測(cè)用于工藝驗(yàn)證階段，也可作為企業(yè)內(nèi)控項(xiàng)目，根據(jù)實(shí)際產(chǎn)品設(shè)定檢測(cè)頻率。7.17異常免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè)采用CFSE熒光染料標(biāo)記法通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞的增殖情況。8.檢驗(yàn)規(guī)則8.1總原則在一個(gè)制備周期中，來源于同一供體、同一組織類型、同一工藝條件下制備完成的產(chǎn)品，定義為同一批次。T/SZBMPAXXX—20258.2供試品前處理供試品按標(biāo)示量加入無菌生理鹽水，于室溫輕輕混勻1min內(nèi)形成無色、澄明、無可見異物的均一懸液。復(fù)溶樣品應(yīng)于2～8℃條件下保存，并在復(fù)溶后24小時(shí)或經(jīng)過驗(yàn)證時(shí)間內(nèi)用于檢測(cè)。8.3放行檢驗(yàn)取樣量及取樣方法應(yīng)遵循GB/T2828.1《計(jì)數(shù)抽樣檢驗(yàn)程序》或企業(yè)基于質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的取樣規(guī)程，并符合《藥品抽樣原則及程序》（國(guó)藥監(jiān)藥管〔2019〕34號(hào)）的要求，同時(shí)滿足檢驗(yàn)和留樣的需求。每批產(chǎn)品應(yīng)隨機(jī)抽取具有代表性的最小包裝單元樣品，取樣量一般應(yīng)為檢驗(yàn)需求量的2倍。放行檢驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)覆蓋標(biāo)準(zhǔn)第6章全部關(guān)鍵質(zhì)量屬性。每批次產(chǎn)品均應(yīng)附帶放行檢驗(yàn)報(bào)告。8.4留樣每一批EVs凍干粉應(yīng)在無菌條件下留樣。留樣數(shù)量應(yīng)滿足至少2次全項(xiàng)檢測(cè)需求，儲(chǔ)存條件為2～8℃,保存期應(yīng)至少為產(chǎn)品有效期后一年。留樣的包裝形式應(yīng)當(dāng)與放行包裝形式一致，標(biāo)簽信息完整。8.5復(fù)核檢驗(yàn)如發(fā)現(xiàn)批次檢驗(yàn)存在異議或質(zhì)量糾紛，應(yīng)委托具備資質(zhì)的第三方檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)/實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)核檢驗(yàn)，并記錄復(fù)核原因、結(jié)果與處理意見。8.6判定規(guī)則若放行檢驗(yàn)項(xiàng)目全部符合第6章規(guī)定的EVs質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，即判為合格產(chǎn)品；若任1項(xiàng)不符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，則被判為不合格產(chǎn)品。對(duì)不合格產(chǎn)品應(yīng)進(jìn)行超標(biāo)（outofspecification,OOS）調(diào)查，以排除檢驗(yàn)誤差，并追溯原因、隔離封存、記錄處理。8.7異常批處理機(jī)制當(dāng)產(chǎn)品出現(xiàn)以下任一情況時(shí)，應(yīng)啟動(dòng)異常批次處理機(jī)制，并由企業(yè)質(zhì)量管理部門組織偏差調(diào)查、處置與記錄歸檔：a.同一批產(chǎn)品中任一放行檢驗(yàn)項(xiàng)目不符合第6章規(guī)定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；b.連續(xù)兩批或累計(jì)三批產(chǎn)品在近半年內(nèi)出現(xiàn)相同項(xiàng)目的不合格；c.經(jīng)復(fù)核檢驗(yàn)后確認(rèn)存在重大偏差或安全隱患；d.封裝破損、外觀異常、內(nèi)毒素突升等產(chǎn)品質(zhì)量問題引發(fā)產(chǎn)品召回的情形。企業(yè)應(yīng)暫停該產(chǎn)品批次上市或使用，并啟動(dòng)內(nèi)部偏差調(diào)查及質(zhì)量體系