2025年結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.結(jié)核分枝桿菌在萋-尼抗酸染色中的典型形態(tài)為（）A.革蘭陽性粗大桿菌B.抗酸染色陽性細(xì)長(zhǎng)桿菌，偶爾呈分枝狀C.抗酸染色陰性球菌D.革蘭陰性彎曲桿菌答案：B解析：結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁含大量分枝菌酸，抗酸染色呈紅色（陽性），形態(tài)細(xì)長(zhǎng)略彎，部分呈分枝狀；革蘭染色不易著色，故不選A、D；抗酸染色陰性為非結(jié)核分枝桿菌或其他細(xì)菌，排除C。2.下列哪種培養(yǎng)基是結(jié)核分枝桿菌固體培養(yǎng)的經(jīng)典選擇？（）A.巧克力瓊脂培養(yǎng)基B.羅氏（Lowenstein-Jensen）培養(yǎng)基C.麥康凱培養(yǎng)基D.血瓊脂培養(yǎng)基答案：B解析：羅氏培養(yǎng)基含馬鈴薯、甘油、雞蛋等成分，適合結(jié)核分枝桿菌緩慢生長(zhǎng)；巧克力培養(yǎng)基用于流感嗜血桿菌等，麥康凱用于腸道革蘭陰性菌，血瓊脂用于多數(shù)需氧菌，均不選。3.XpertMTB/RIF檢測(cè)的靶標(biāo)基因是（）A.rpoB基因（RNA聚合酶β亞基編碼基因）B.katG基因（過氧化氫酶-過氧化物酶編碼基因）C.inhA基因（烯酰基還原酶編碼基因）D.16SrRNA基因答案：A解析：XpertMTB/RIF通過檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的IS6110插入序列（確認(rèn)結(jié)核）和rpoB基因突變（檢測(cè)利福平耐藥）；katG和inhA是異煙肼耐藥相關(guān)基因，16SrRNA用于細(xì)菌通用鑒定，故排除B、C、D。4.痰標(biāo)本進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)前，常用的前處理試劑是（）A.0.5%氫氧化鈉（NaOH）溶液B.生理鹽水C.75%乙醇D.胰酶溶液答案：A解析：NaOH溶液可消化痰中黏液并殺滅雜菌，是經(jīng)典前處理試劑；生理鹽水無消化作用，乙醇用于表面消毒，胰酶用于某些標(biāo)本液化但非結(jié)核培養(yǎng)前處理首選，故不選B、C、D。5.結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)中，絕對(duì)濃度法判定耐藥的標(biāo)準(zhǔn)是（）A.含藥培養(yǎng)基菌落數(shù)≥不含藥培養(yǎng)基菌落數(shù)的1%B.含藥培養(yǎng)基菌落數(shù)≥不含藥培養(yǎng)基菌落數(shù)的10%C.含藥培養(yǎng)基菌落數(shù)≥不含藥培養(yǎng)基菌落數(shù)的20%D.含藥培養(yǎng)基出現(xiàn)任何菌落答案：B解析：絕對(duì)濃度法中，若含藥培養(yǎng)基菌落數(shù)≥對(duì)照培養(yǎng)基的10%，判定為耐藥；1%為比例法部分臨界值，20%無此標(biāo)準(zhǔn)，出現(xiàn)任何菌落可能為污染或低濃度耐藥，故排除A、C、D。6.以下哪種檢測(cè)方法可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌及其利福平耐藥性？（）A.萋-尼染色鏡檢B.液體培養(yǎng)（BACTECMGIT960）C.XpertMTB/RIFD.結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)（PPD）答案：C解析：XpertMTB/RIF通過實(shí)時(shí)熒光PCR同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌DNA（IS6110）和rpoB基因突變（利福平耐藥）；鏡檢僅提示抗酸菌，培養(yǎng)需后續(xù)藥敏，PPD反映結(jié)核感染狀態(tài)，均不選。7.結(jié)核分枝桿菌的最適生長(zhǎng)溫度是（）A.25℃B.30℃C.37℃D.42℃答案：C解析：結(jié)核分枝桿菌為嗜溫菌，37℃為最適生長(zhǎng)溫度；25℃適合部分非結(jié)核分枝桿菌（如瘰疬分枝桿菌），30℃和42℃非最適，故排除A、B、D。8.痰標(biāo)本抗酸染色鏡檢報(bào)告“3+”的標(biāo)準(zhǔn)是（）A.每視野1-9條抗酸菌（100個(gè)視野）B.每視野10-99條抗酸菌（10個(gè)視野）C.每視野≥100條抗酸菌（至少5個(gè)視野）D.全片發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌答案：B解析：根據(jù)《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》，抗酸染色鏡檢報(bào)告分級(jí)：“1+”為每視野1-9條（100視野）；“2+”為每視野10-99條（10視野）；“3+”為每視野≥100條（5視野）；“±”為全片1-9條，故正確答案為B。9.以下哪種情況需重新留取痰標(biāo)本？（）A.標(biāo)本為唾液（清亮、稀?。〣.標(biāo)本量約5ml（黃色膿痰）C.標(biāo)本容器無滲漏D.標(biāo)本采集后2小時(shí)內(nèi)送檢答案：A解析：唾液（非深部咳出的痰）含大量口腔正常菌群，無法準(zhǔn)確反映下呼吸道感染情況，需重新留取深部痰；B、C、D均為合格標(biāo)本條件，故不選。10.結(jié)核分枝桿菌的主要致病物質(zhì)是（）A.內(nèi)毒素B.外毒素C.分枝菌酸D.溶血素答案：C解析：分枝菌酸是細(xì)胞壁主要成分，可抵抗宿主溶酶體破壞，與致病性密切相關(guān)；結(jié)核分枝桿菌無內(nèi)毒素或外毒素（不產(chǎn)生經(jīng)典毒素），溶血素非主要致病物質(zhì)，故排除A、B、D。11.液體培養(yǎng)（BACTECMGIT960）檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的原理是（）A.檢測(cè)二氧化碳（CO?）產(chǎn)生量B.檢測(cè)氧氣（O?）消耗情況C.檢測(cè)細(xì)菌代謝產(chǎn)生的熒光D.檢測(cè)培養(yǎng)基pH變化答案：B解析：MGIT培養(yǎng)基含熒光指示劑，當(dāng)結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng)消耗氧氣時(shí)，指示劑從熒光狀態(tài)轉(zhuǎn)為非熒光狀態(tài)，儀器通過監(jiān)測(cè)熒光減弱判斷陽性；CO?檢測(cè)為傳統(tǒng)培養(yǎng)瓶原理，pH變化用于部分細(xì)菌鑒定，故排除A、C、D。12.以下哪種藥物不屬于一線抗結(jié)核藥物？（）A.異煙肼（INH）B.利福平（RFP）C.乙胺丁醇（EMB）D.左氧氟沙星（LVX）答案：D解析：一線抗結(jié)核藥物包括異煙肼、利福平、乙胺丁醇、吡嗪酰胺（PZA）、鏈霉素（SM）；左氧氟沙星為二線藥物（氟喹諾酮類），用于耐藥結(jié)核治療，故正確答案為D。13.結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群不包括（）A.牛分枝桿菌（M.bovis）B.非洲分枝桿菌（M.africanum）C.麻風(fēng)分枝桿菌（M.leprae）D.結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis）答案：C解析：結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群包括結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌、田鼠分枝桿菌等，均引起結(jié)核病；麻風(fēng)分枝桿菌引起麻風(fēng)病，屬于獨(dú)立分枝桿菌種，故正確答案為C。14.進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)時(shí)，接種菌液的濃度應(yīng)為（）A.0.5麥?zhǔn)蠞岫龋s1×10?CFU/ml）B.1.0麥?zhǔn)蠞岫龋s2×10?CFU/ml）C.0.1麥?zhǔn)蠞岫龋s2×10?CFU/ml）D.2.0麥?zhǔn)蠞岫龋s4×10?CFU/ml）答案：A解析：藥敏試驗(yàn)需標(biāo)準(zhǔn)化接種量，通常將菌懸液調(diào)整至0.5麥?zhǔn)蠞岫龋s1×10?CFU/ml），再1:100稀釋后接種，以保證培養(yǎng)基上菌落密度適宜；其他濃度可能導(dǎo)致結(jié)果偏差，故排除B、C、D。15.以下哪種檢測(cè)方法的靈敏度最高？（）A.痰涂片抗酸染色鏡檢B.痰培養(yǎng)（固體培養(yǎng)基）C.XpertMTB/RIFD.結(jié)核抗體檢測(cè)答案：C解析：XpertMTB/RIF的靈敏度（約90%）高于涂片鏡檢（約40%-60%）和固體培養(yǎng)（約60%-80%），結(jié)核抗體檢測(cè)因特異性和靈敏度均低（受宿主免疫狀態(tài)影響），故正確答案為C。二、填空題（每空1分，共20分）1.結(jié)核分枝桿菌的抗酸染色原理是因其細(xì)胞壁含有大量（分枝菌酸），可抵抗（鹽酸乙醇）的脫色作用，保留（石碳酸品紅）的紅色。2.結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)的常用氣體環(huán)境是（5%-10%二氧化碳），需氧或（微需氧）條件。3.液體培養(yǎng)（BACTECMGIT960）的陽性報(bào)警時(shí)間通常為（5-14天），較固體培養(yǎng)（2-8周）顯著縮短。4.結(jié)核分枝桿菌的主要傳播途徑是（呼吸道飛沫傳播），最常見感染部位是（肺部）。5.利福平耐藥的主要機(jī)制是（rpoB基因）發(fā)生突變，導(dǎo)致RNA聚合酶β亞基結(jié)構(gòu)改變，藥物無法結(jié)合。6.痰標(biāo)本前處理的目的是（消化黏液）、（殺滅雜菌）和（濃縮結(jié)核分枝桿菌）。7.結(jié)核分枝桿菌的毒力相關(guān)因子包括（索狀因子）、（蠟質(zhì)D）和（海藻糖二霉菌酸酯）。8.分子生物學(xué)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的常用靶標(biāo)包括（IS6110插入序列）、（16S-23SrRNA間隔區(qū)（ITS））和（katG基因）（列舉3種）。9.結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)的方法包括（絕對(duì)濃度法）、（比例法）和（分子生物學(xué)方法）（列舉3種）。三、簡(jiǎn)答題（每題8分，共40分）1.簡(jiǎn)述萋-尼抗酸染色的操作步驟及結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)。答案：操作步驟：①涂片：取痰標(biāo)本均勻涂片，自然干燥后火焰固定；②初染：滴加石碳酸品紅，加熱至冒蒸汽（不沸騰），維持5分鐘，冷卻后水洗；③脫色：滴加3%鹽酸乙醇，脫色至無紅色脫出（約1-3分鐘），水洗；④復(fù)染：滴加亞甲藍(lán)（美藍(lán)）復(fù)染1分鐘，水洗，干燥后鏡檢。結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)（油鏡×1000）：-陰性（-）：全片未發(fā)現(xiàn)抗酸菌；-可疑（±）：全片發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌；-1+：每100個(gè)視野發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌；-2+：每10個(gè)視野發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌；-3+：每1個(gè)視野發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌；-4+：每1個(gè)視野發(fā)現(xiàn)≥10條抗酸菌。2.比較結(jié)核分枝桿菌液體培養(yǎng)與固體培養(yǎng)的優(yōu)缺點(diǎn)。答案：優(yōu)點(diǎn)：-液體培養(yǎng)（如MGIT）：檢測(cè)速度快（平均5-14天陽性），靈敏度高（可檢測(cè)低菌量標(biāo)本），自動(dòng)化程度高（儀器自動(dòng)監(jiān)測(cè)），適合大規(guī)模篩查。-固體培養(yǎng)（如羅氏培養(yǎng)基）：可觀察菌落形態(tài)（干燥、粗糙、呈菜花樣），便于后續(xù)菌種鑒定和藥敏試驗(yàn)，成本較低，無需特殊儀器。缺點(diǎn)：-液體培養(yǎng)：易受污染（需嚴(yán)格無菌操作），無法直接觀察菌落形態(tài)，需結(jié)合其他方法鑒定菌種；-固體培養(yǎng)：檢測(cè)周期長(zhǎng)（2-8周），靈敏度較低（對(duì)低菌量標(biāo)本易漏檢），操作繁瑣（需手工接種和觀察）。3.簡(jiǎn)述XpertMTB/RIF檢測(cè)的臨床應(yīng)用價(jià)值及局限性。答案：臨床應(yīng)用價(jià)值：①快速診斷：2小時(shí)內(nèi)出具結(jié)果，顯著縮短診斷時(shí)間；②同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和利福平耐藥性，指導(dǎo)初始治療方案；③對(duì)痰涂片陰性、肺外結(jié)核（如腦脊液、胸水）標(biāo)本有較高靈敏度；④適合基層實(shí)驗(yàn)室和資源有限地區(qū)推廣。局限性：①無法區(qū)分結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群內(nèi)部菌種（如結(jié)核分枝桿菌與牛分枝桿菌）；②對(duì)極低菌量標(biāo)本（<100CFU/ml）可能漏檢；③存在假陽性風(fēng)險(xiǎn)（標(biāo)本交叉污染）；④無法提供其他藥物（如異煙肼、乙胺丁醇）的耐藥信息。4.痰標(biāo)本采集的質(zhì)量要求有哪些？答案：①標(biāo)本類型：需為深部咳出的痰液（非唾液或鼻后滴漏物），以黃色/黃綠色膿痰為佳（含較多炎性細(xì)胞和細(xì)菌）；②標(biāo)本量：每次采集量≥3ml，3份痰標(biāo)本（即時(shí)痰、夜間痰、清晨痰）可提高檢出率；③采集容器：使用無菌、防滲漏、帶螺旋蓋的塑料容器（容量≥50ml），避免使用玻璃容器（易破碎）；④采集時(shí)間：清晨痰（夜間痰液積聚，菌量較高）為首選；⑤送檢時(shí)間：標(biāo)本采集后需2小時(shí)內(nèi)送檢（室溫下結(jié)核分枝桿菌可存活數(shù)小時(shí)，延遲送檢可能導(dǎo)致雜菌過度生長(zhǎng)）；⑥標(biāo)識(shí)要求：容器外需標(biāo)注患者姓名、性別、年齡、標(biāo)本類型、采集時(shí)間等信息，避免混淆。5.簡(jiǎn)述結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)的臨床意義及操作注意事項(xiàng)。答案：臨床意義：①指導(dǎo)個(gè)體化治療：明確耐藥譜，避免使用耐藥藥物，提高治療成功率；②監(jiān)測(cè)耐藥流行趨勢(shì)：為地區(qū)耐藥結(jié)核防控提供數(shù)據(jù)支持；③評(píng)估治療效果：治療過程中復(fù)查藥敏，判斷是否出現(xiàn)繼發(fā)耐藥。操作注意事項(xiàng)：①標(biāo)本質(zhì)量：需使用純培養(yǎng)物（避免雜菌污染），菌液濃度需標(biāo)準(zhǔn)化（0.5麥?zhǔn)蠞岫龋?:100稀釋后接種）；②培養(yǎng)基選擇：需使用含特定藥物濃度的培養(yǎng)基（如利福平臨界濃度5μg/ml），培養(yǎng)基需新鮮配制（避免藥物降解）；③培養(yǎng)條件：37℃、5%-10%CO?環(huán)境培養(yǎng)，固體培養(yǎng)基需培養(yǎng)4-6周（液體培養(yǎng)7-14天）；④結(jié)果判讀：需同時(shí)設(shè)置陽性對(duì)照（已知敏感菌株）和陰性對(duì)照（不含藥培養(yǎng)基），避免假陽性/假陰性；⑤生物安全：操作需在生物安全柜（BSL-3實(shí)驗(yàn)室）中進(jìn)行，避免氣溶膠暴露。四、案例分析題（共10分）患者，男，35歲，咳嗽、咳痰2周，痰中帶血3天，低熱（37.8℃），無結(jié)核病史。門診查痰涂片抗酸染色鏡檢（+）（報(bào)告2+），胸部CT提示右肺上葉尖后段斑片狀陰影，內(nèi)見小空洞。問題：1.該患者需進(jìn)一步進(jìn)行哪些實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)？（4分）2.若痰培養(yǎng)結(jié)果為結(jié)核分枝桿菌陽性，利福平耐藥（RIF-R），應(yīng)如何解讀并指導(dǎo)治療？（6分）答案：1.需進(jìn)一步檢測(cè)項(xiàng)目：①痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)+藥敏試驗(yàn)（明確菌種及耐藥譜）；②XpertMTB/RIF（快速確認(rèn)結(jié)核及利福平耐藥，與涂片結(jié)果互補(bǔ)）；③痰抗酸桿菌菌種鑒定（區(qū)分結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群與非結(jié)核分枝桿菌）；④肝腎功能、血常規(guī)（評(píng)估基礎(chǔ)狀態(tài)，為抗結(jié)核治療提供依據(jù)）；⑤必要時(shí)行支氣管鏡檢查（留取支氣管肺泡灌洗液送檢，提高肺內(nèi)病灶檢出率）。2.結(jié)果解讀與治療指導(dǎo)：①痰培養(yǎng)陽性確認(rèn)結(jié)核分枝桿菌感染，結(jié)合涂片和CT