實(shí)驗(yàn)-細(xì)菌的生理生化反應(yīng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵罅私饧?xì)菌生理生化反應(yīng)原理，掌握細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)的測(cè)定方法；通過不同細(xì)菌對(duì)不同含碳、含氮化合物的分解利用情況，了解細(xì)菌碳、氮代謝類型的多樣性；了解細(xì)菌在不同培養(yǎng)基中的不同生長(zhǎng)現(xiàn)象及其代謝產(chǎn)物在鑒別細(xì)菌中的意義。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)菌生化試驗(yàn)：在生活細(xì)胞中存在的化學(xué)反應(yīng)稱之為代謝。代謝過程主要是酶促反應(yīng)過程。各種微生物在代謝類型上表現(xiàn)出很大的差異，反應(yīng)出它們具有不同的酶系和不同的生理特性，這些特性可被用作細(xì)菌鑒定和分類的內(nèi)容。用生化試驗(yàn)的方法檢測(cè)細(xì)菌對(duì)各種基質(zhì)的代謝作用及其代謝產(chǎn)物，從而鑒別細(xì)菌的種屬，稱之為細(xì)菌的生化反應(yīng)。二、實(shí)驗(yàn)原理－－大分子物質(zhì)的水解試驗(yàn)微生物對(duì)大分子物質(zhì)如淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解才能被微生物吸收利用。微生物的胞外酶（如淀粉酶、脂肪酶等）將大分子物質(zhì)的分解過程可以通過觀察細(xì)菌菌落周圍的物質(zhì)變化來證實(shí)。例如：淀粉遇碘液會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色，但細(xì)菌水解淀粉的區(qū)域，用碘測(cè)定不再產(chǎn)生藍(lán)色，表明細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶。二、實(shí)驗(yàn)原理－－大分子物質(zhì)的水解試驗(yàn)淀粉水解試驗(yàn)細(xì)菌對(duì)大分子的淀粉不能直接利用，須靠產(chǎn)生的胞外酶(淀粉酶)將淀粉水解為小分子糊精或進(jìn)一步水解為葡萄糖(或麥芽糖)，再被細(xì)菌吸收利用，細(xì)菌水解淀粉的過程可通過底物的變化來證明，即用碘測(cè)定不再產(chǎn)生藍(lán)色。油脂水解試驗(yàn)脂肪水解后產(chǎn)生脂肪酸可改變培養(yǎng)基的pH，使pH降低，加入培養(yǎng)基的中性紅指示劑會(huì)使培養(yǎng)基從淡紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樯罴t色，說明細(xì)胞外存在脂肪酶。二、實(shí)驗(yàn)原理－－糖發(fā)酵試驗(yàn)糖(醇)類發(fā)酵試驗(yàn)不同的細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖(醇)的酶，因而發(fā)酵糖(醇)的能力各不相同。其產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物亦不相同，如有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。酸的產(chǎn)生可利用指示劑來判定。在配制培養(yǎng)基時(shí)預(yù)先加入溴甲酚紫[pH5.2(黃色)~6.8(紫色)]，當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，可使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色。氣體產(chǎn)生可由發(fā)酵管中倒置的杜氏小管中有無氣泡來證明。大家有疑問的，可以詢問和交流可以互相討論下，但要小聲點(diǎn)二、實(shí)驗(yàn)原理－－甲基紅試驗(yàn)甲基紅(Methylred)試驗(yàn)(該試驗(yàn)簡(jiǎn)稱MR試驗(yàn))很多細(xì)菌，如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸再被分解，產(chǎn)生甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基的pH降低到4.2以下，這時(shí)若加甲基紅指示劑呈現(xiàn)紅色。因甲基紅指示劑變色范圍是pH4.4(紅色)～pH6.2(黃色)。若某些細(xì)菌如產(chǎn)氣桿菌，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，但很快將丙酮酸脫羧，轉(zhuǎn)化成醇等物，則培養(yǎng)基的pH仍在6.2以上，故此時(shí)加入甲基紅指示劑，呈現(xiàn)黃色。吲哚實(shí)驗(yàn)有些細(xì)菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，就會(huì)形成紅色的玫瑰吲哚。色氨酸水解反應(yīng)吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛反應(yīng)大腸桿菌吲哚反應(yīng)陽性，產(chǎn)氣腸桿菌為陰性。二、實(shí)驗(yàn)原理－－吲哚試驗(yàn)三、實(shí)驗(yàn)器材試驗(yàn)菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、變形桿菌和產(chǎn)氣桿菌菌種的斜面各1支。試劑：盧戈氏碘液、中性紅試劑、甲基紅試劑、溴甲酚紫等；培養(yǎng)基各成份。其他實(shí)驗(yàn)器材：培養(yǎng)皿、接種環(huán)、試管、試管架、酒精燈、記號(hào)筆、德漢氏小管、37℃恒溫培養(yǎng)箱等。四、實(shí)驗(yàn)步驟淀粉水解試驗(yàn)將配制好的淀粉培養(yǎng)基冷卻到50℃左右，以無菌操作制成平板。用記號(hào)筆在平板底部劃分成4部分。將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌分別在不同的部分劃線接種，在平板的反面分別做好標(biāo)記。將平板倒置在37℃溫箱培養(yǎng)24h。將平皿取出，打開皿蓋，滴加少量盧戈氏碘液于平板上，輕輕搖動(dòng)平皿，使碘液均勻鋪滿整個(gè)平板。如菌苔周圍有無色透明圈出現(xiàn)，說明淀粉已被水解。透明圈的大小，說明該菌水解淀粉能力的大小。四、實(shí)驗(yàn)步驟油脂水解試驗(yàn)將配制好的固體油脂培養(yǎng)基冷卻到50℃左右，充分搖勻，使油脂均勻分布，以無菌操作制成平板。用記號(hào)筆在平板底部劃分成4部分。將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌分別在不同的部分劃線接種，在平板的反面分別做好標(biāo)記。將平板倒置在37℃溫箱培養(yǎng)24h。將平皿取出，觀察菌苔顏色。如出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，說明脂肪水解，為陽性反應(yīng)。四、實(shí)驗(yàn)步驟糖(醇)類發(fā)酵試驗(yàn)編號(hào)：在各試管上分別標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱，所接種的菌名和組號(hào)，下同。接種：取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基3支，按編號(hào)1支接種大腸桿菌，另1支接種普通變形桿菌，第3支不接種，作為對(duì)照。同樣取3支乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，1支接種大腸桿菌，1支接種普通變形桿菌，第3支不接種，作為對(duì)照。將已接種好的培養(yǎng)基置37℃溫箱中培養(yǎng)24h。觀察結(jié)果：被檢細(xì)菌若能發(fā)酵培養(yǎng)基中的糖時(shí)，則使培養(yǎng)基的pH降低，這時(shí)培養(yǎng)基中的指示劑呈酸性反應(yīng)(為黃色)，若發(fā)酵培養(yǎng)基中的糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則培養(yǎng)基不僅顯酸色反應(yīng)，并且在培養(yǎng)基中倒置的小玻璃管(德漢氏小管)中有氣體。若被檢細(xì)菌不分解培養(yǎng)基中的糖，則培養(yǎng)基不發(fā)生變化。四、實(shí)驗(yàn)步驟甲基紅試驗(yàn)(MR試驗(yàn))

將大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌分別接種到葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)48h，加甲基紅指示劑數(shù)滴，觀察結(jié)果，呈現(xiàn)紅色者為陽性，呈現(xiàn)黃色者為陰性。吲哚實(shí)驗(yàn)將大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌分別接種于2支蛋白胨水培養(yǎng)基中（做吲哚試驗(yàn)），置37℃溫室中培養(yǎng)2天，向蛋白胨水培養(yǎng)物內(nèi)加3—4滴乙醚，搖動(dòng)數(shù)次，靜置1~3分鐘，待乙醚上升后，沿管壁徐徐加入2滴吲哚試劑，在乙醚和培養(yǎng)物之間產(chǎn)生紅色環(huán)狀物為陽性反應(yīng)。相關(guān)圖片淀粉水解實(shí)驗(yàn)糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)相關(guān)圖片吲哚實(shí)驗(yàn)甲基紅實(shí)驗(yàn)五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1.將結(jié)果填入下表?！埃北硎娟栃裕埃北硎娟幮?。菌名枯草芽孢桿菌大腸桿菌金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌淀粉水解試驗(yàn)油脂水解試驗(yàn)五.實(shí)驗(yàn)報(bào)告2.將結(jié)果填入下表?！?”表示產(chǎn)酸或產(chǎn)氣