ICS65.020.20CCSB05DB23黑龍江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布Ⅰ本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由黑龍江省林業(yè)和草原局提出。本文件起草單位：東北林業(yè)大學(xué)、黑龍江省電力科學(xué)研究院、綏棱縣應(yīng)急管理局、綏棱縣國(guó)有林場(chǎng)發(fā)展服務(wù)中心、海倫市森林資源保護(hù)中心、海倫市陳家店林場(chǎng)。本文件主要起草人：范麗娟、王玉喜、趙玉彬、苗雨蕾、錢(qián)大勇、史恭發(fā)、閆蕾、呂汝彤、葉王斌、趙蕊陽(yáng)、劉桂伶、楊娟、付海靜、王玲、王金紅。DB23/T3033—20211東北百里香組培繁殖技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了東北百里香（ThymusmandschuricusRonn.）組培繁殖的環(huán)境與設(shè)備消毒、培養(yǎng)基配制、外植體的制備、培養(yǎng)條件、不定芽誘導(dǎo)、不定芽增殖、生根培養(yǎng)、煉苗、溫室移栽及管理和生產(chǎn)檔案。本文件適用于東北百里香組培繁殖。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用性文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T2306—2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4環(huán)境與設(shè)備消毒4.1接種室消毒接種室消毒按NY/T2306—2013中8.6的規(guī)定執(zhí)行。4.2培養(yǎng)室消毒培養(yǎng)室消毒按NY/T2306—2013中8.7的規(guī)定執(zhí)行。4.3超凈工作臺(tái)消毒超凈工作臺(tái)消毒按NY/T2306—2013中8.5和8.6的規(guī)定執(zhí)行。4.4接種器具消毒接種器具按NY/T2306—2013中8.4的規(guī)定執(zhí)行。5培養(yǎng)基配制5.1母液配制培養(yǎng)基母液配制按NY/T2306—2013中7.3的規(guī)定執(zhí)行。DB23/T3033—202125.2培養(yǎng)基配制5.2.1培養(yǎng)基配方培養(yǎng)基配制成分如下：a)初代培養(yǎng)基：MS＋0.5mg/L6-BA＋30g/L蔗糖＋固化劑，滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)制為5.8～6.0；b)不定芽增殖培養(yǎng)基：MS＋0.5mg/L6-BA＋0.1mg/LNAA＋30g/L蔗糖＋固化劑，滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)制為5.8～6.0；c)生根培養(yǎng)基：1/2MS＋0.5mg/LIBA＋30g/L蔗糖＋固化劑，滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)制為5.8～6.0。5.2.2培養(yǎng)基配制方法培養(yǎng)基配制方法按NY/T2306—2013中7.4執(zhí)行。5.3培養(yǎng)基滅菌及保存培養(yǎng)基滅菌及保存方法按LY/T1882—2010中4.2進(jìn)行。6外植體的制備6.1外植體的選擇宜6月~8月，從健康植株上選取中上部半木質(zhì)化的枝條，剪成5cm長(zhǎng)的莖段。6.2消毒將外植體在洗衣粉水中浸泡15min，自來(lái)水沖洗1h~2h后，置于超凈工作臺(tái)上，用75%的酒精浸泡10s～30s，無(wú)菌水沖洗4遍~6遍，加入2%的次氯酸鈉溶液攪拌殺菌15min或0.1%的升汞殺菌8min~10min，無(wú)菌水沖洗4遍~6遍，用無(wú)菌濾紙吸干材料表面水分，切割成1cm~1.5cm長(zhǎng)的帶腋芽的莖段。7培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件為24℃~28℃,光周期為14h/d，光照強(qiáng)度3000Lux，空氣相對(duì)濕度60%～80%。8不定芽誘導(dǎo)將帶有腋芽的莖段接種到誘導(dǎo)不定芽的初代培養(yǎng)基上，培養(yǎng)15d～20d，獲取不定芽備用。9不定芽增殖切下不定芽，垂直插入不定芽增殖培養(yǎng)基中，插入深度0.5cm左右，培養(yǎng)30d。待分化的不定芽形成芽叢后，分割新長(zhǎng)出的不定芽。可按需求重復(fù)繼代。10生根培養(yǎng)選取培養(yǎng)瓶中長(zhǎng)度2cm～3cm生長(zhǎng)健壯的不定芽轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基中，插入深度為0.5cm，培養(yǎng)DB23/T3033—2021311煉苗、溫室移栽及管理11.1煉苗在組培苗根長(zhǎng)至2cm～3cm時(shí)，在培養(yǎng)室中半開(kāi)封口膜放置1d，再去掉封口膜放置1d，用鑷子取出組培苗，用自來(lái)水沖洗附著在根上的培養(yǎng)基，放入底部裝有自來(lái)水的三角瓶中水培，水的深度以沒(méi)到組培苗根頸部為宜，2d后移栽。11.2溫室移栽及管理11.2.1移栽準(zhǔn)備將蛭石在121℃高壓滅菌鍋中滅菌20min，放涼后裝入規(guī)格為10cm×11cm×8.5cm的花盆中，裝至花盆高度的2/3，壓實(shí)。11.2.2移栽取出組培苗，在散射光下移栽至花盆的蛭石中，使根盡量伸展開(kāi)，壓實(shí)，浸透水，放入人工氣候箱內(nèi)緩苗，培養(yǎng)條件為24℃~28℃,光周期為14h/d，光照強(qiáng)度3000Lux，空氣相對(duì)濕度60%～80%。15d后移至溫室。11.2.3移栽后管理移栽初期，保持空氣濕度≥60%，適時(shí)