陽泉市人民醫(yī)院分子平臺維護考核一、單選題（每題2分，共20題）要求：根據題干選擇最符合題意的選項。1.陽泉市人民醫(yī)院分子診斷平臺常用的PCR儀品牌不包括以下哪一項？A.ABI7500B.Roche480C.ThermoFisherQuantStudioD.BiotekC10002.在處理陽泉地區(qū)高發(fā)肺癌患者樣本時，優(yōu)先選擇的腫瘤標志物檢測方法是？A.FISH檢測B.數字PCRC.基因芯片分析D.液體活檢ctDNA檢測3.分子診斷平臺中，用于檢測病原體核酸的實時熒光PCR試劑，其Tm值一般應控制在多少℃范圍內？A.60-75℃B.75-85℃C.85-95℃D.50-60℃4.陽泉市冬季氣溫較低，保存-20℃試劑時，以下哪項操作是錯誤的？A.定期檢查冰箱溫度記錄B.不同試劑混放以提高空間利用率C.做好試劑標簽和效期管理D.避免頻繁開關冰箱門5.在進行高通量測序數據分析時，常用的堿基質量評分參考標準是？A.Sanger評分B.Illumina評分C.IonTorrent評分D.PacBio評分6.陽泉市人民醫(yī)院分子平臺使用的生物信息學軟件中，用于變異檢測的是？A.TrimmomaticB.GATKC.FastQCD.Samtools7.病原體檢測樣本的運輸過程中，以下哪項措施能有效避免RNA降解？A.使用普通信封包裝B.加入RNA保護劑C.直接暴露在室溫下D.使用金屬尖銳容器8.在進行基因擴增實驗時，引物二聚體問題通常如何解決？A.提高退火溫度B.降低退火溫度C.增加引物濃度D.選擇更短引物序列9.陽泉地區(qū)消化道腫瘤篩查中，常用的分子標志物組合不包括？A.CEA+CA19-9B.APC+MLH1C.p16+K-rasD.AFP+HBsAg10.PCR實驗中，DMSO的作用主要是？A.增強酶活性B.抑制非特異性擴增C.提高退火溫度D.穩(wěn)定引物結構二、多選題（每題3分，共10題）要求：根據題干選擇所有符合題意的選項。1.陽泉市人民醫(yī)院分子平臺設備維護中，需要定期校準的項目包括？A.PCR儀溫度曲線B.流式細胞儀熒光強度C.高通量測序儀加樣針精度D.電泳儀電壓穩(wěn)定性2.液體活檢樣本處理過程中，以下哪些步驟有助于提高ctDNA檢出率？A.使用強磁珠純化B.避免反復凍融C.優(yōu)先選擇腫瘤富集管D.增加樣本采集量3.基因測序數據質控時，常用的評估指標包括？A.Q30值B.GC含量C.探針匹配率D.堿基重復序列4.在陽泉地區(qū)開展結核病快速篩查時，以下哪些方法適用？A.XpertMTB/RIF檢測B.16SrRNA基因測序C.熒光定量PCRD.肺部影像學結合分子檢測5.分子診斷平臺中，以下哪些屬于生物安全二級實驗室操作規(guī)范？A.使用可重復使用移液器吸頭B.定期消毒工作臺面C.高風險操作佩戴雙層手套D.廢棄物高溫高壓滅菌6.腫瘤基因檢測樣本拒收標準包括？A.樣本量小于100μLB.標本溶血嚴重C.RNA純度低于200ng/μLD.標本檢測出污染性核酸7.在進行宏基因組測序時，以下哪些步驟有助于提高病原體檢出率？A.優(yōu)化核酸提取方法B.增加測序深度C.使用靶向捕獲試劑盒D.調整過濾參數8.陽泉市人民醫(yī)院分子平臺設備維護中，以下哪些屬于預防性維護內容？A.定期清潔熒光顯微鏡物鏡B.檢查PCR儀水循環(huán)系統(tǒng)C.更換流式細胞儀鞘液D.校準測序儀電壓參數9.基因芯片實驗中，以下哪些因素可能導致結果偏差？A.樣本RNA降解B.探針雜交溫度不合適C.加樣槍重復性差D.試劑過期未更換10.在進行遺傳病檢測時，以下哪些屬于罕見變異的驗證方法？A.Sanger測序B.重復實驗驗證C.功能實驗檢測D.多基因位點聯合分析三、判斷題（每題2分，共10題）要求：根據題干判斷正誤。1.陽泉市人民醫(yī)院分子平臺使用的熒光染料SYBRGreenI適用于所有類型核酸的定量檢測。（×）2.PCR實驗中，DMSO可以提高引物結合效率。（√）3.液體活檢ctDNA檢測時，腫瘤患者樣本的循環(huán)數越高越好。（×）4.分子診斷平臺設備維護時，清潔消毒優(yōu)先使用強酸強堿溶液。（×）5.高通量測序數據質量控制中，N值越低代表數據質量越好。（×）6.陽泉地區(qū)夏季高溫可能影響PCR反應效率，需調整退火溫度。（√）7.腫瘤基因檢測報告中的“意義未明變異”需要進一步驗證。（√）8.宏基因組測序時，16SrRNA基因測序可以用于細菌群落分析。（×）9.生物信息學分析中，GATK主要用于基因表達定量。（×）10.分子診斷平臺廢棄物處理需嚴格遵循醫(yī)療廢物管理規(guī)定。（√）四、簡答題（每題5分，共5題）要求：根據題干簡潔作答。1.簡述陽泉市人民醫(yī)院分子平臺設備維護的流程。答案要點：-每日檢查設備運行狀態(tài)（溫度、電壓等）；-每周清潔關鍵部件（如PCR儀光學系統(tǒng)）；-每月校準關鍵參數（如熒光強度、溫度曲線）；-每季度進行深度維護（如更換耗材、潤滑機械部件）；-每半年評估設備性能，記錄維護日志。2.陽泉地區(qū)高發(fā)肺癌患者樣本進行ctDNA檢測時，如何提高檢出率？答案要點：-優(yōu)化樣本采集管（如使用腫瘤富集管）；-提高核酸提取純度（如磁珠純化）；-增加循環(huán)數（如≥5個循環(huán)）；-選擇高靈敏度檢測試劑。3.簡述液體活檢樣本處理過程中，防止RNA降解的關鍵措施。答案要點：-采集后立即加入RNA保護劑；-避免反復凍融；-使用低溫運輸（≤4℃）；-盡快進行核酸提取。4.分子診斷平臺生物安全防護中，如何防止交叉污染？答案要點：-設置單向流工作臺；-使用一次性吸頭和槍頭；-定期清潔工作區(qū)域；-區(qū)分高、中、低風險操作區(qū)域。5.陽泉市人民醫(yī)院分子平臺進行病原體檢測時，如何減少假陽性結果？答案要點：-嚴格樣本前處理（如去除抑制劑）；-優(yōu)化PCR反應條件（如調整引物濃度）；-使用內對照監(jiān)控擴增效率；-避免試劑反復凍融。五、論述題（每題10分，共2題）要求：結合陽泉市人民醫(yī)院實際情況，深入作答。1.結合陽泉地區(qū)常見病高發(fā)情況，論述分子診斷平臺如何優(yōu)化檢測項目組合以提高臨床效率。答案要點：-陽泉地區(qū)疾病譜分析：如肺癌、消化道腫瘤、結核病高發(fā)，可優(yōu)先配置相關檢測項目（如ctDNA、腫瘤標志物、XpertMTB/RIF）；-檢測項目整合：將常見病檢測整合為“一站式”套餐（如腫瘤多基因檢測）；-動態(tài)調整策略：根據流行病學數據定期更新檢測目錄；-技術選擇優(yōu)化：優(yōu)先選擇高靈敏度、快速出結果的技術（如液體活檢、快速PCR）。2.論述陽泉市人民醫(yī)院分子平臺在設備維護和質控方面的難點及解決方案。答案要點：-難點：-高原地區(qū)電力波動影響設備穩(wěn)定性；-冬季低溫對試劑保存提出挑戰(zhàn)；-臨床需求多樣化導致維護壓力增大；-解決方案：-增強設備抗干擾能力（如UPS供電）；-建立分區(qū)溫控系統(tǒng)（如-80℃?zhèn)浞荩?實施分級維護制度（常規(guī)/緊急）；-定期開展人員培訓（如設備操作、質控方法）。答案與解析一、單選題答案與解析1.D-ABI、Roche、ThermoFisher是主流PCR儀品牌，BiotekC1000主要用于電泳，非PCR設備。2.D-液體活檢ctDNA檢測適用于陽泉地區(qū)高發(fā)的肺癌、消化道腫瘤等，靈敏度更高。3.A-常用Tm范圍60-75℃，過高或過低易影響擴增特異性。4.B-不同試劑需分區(qū)保存，避免交叉污染。5.B-Illumina測序采用Phred33質量評分系統(tǒng)。6.B-GATK用于腫瘤基因變異檢測，其他選項為數據處理工具。7.B-RNA保護劑可穩(wěn)定RNA結構，避免降解。8.A-提高退火溫度可減少非特異性結合。9.B-APC+MLH1主要用于遺傳性結直腸癌篩查。10.B-DMSO可破壞DNA二級結構，抑制非特異性擴增。二、多選題答案與解析1.A、B、C、D-所有選項均為關鍵校準項目，確保檢測準確性。2.A、B、C-多項措施有助于提高ctDNA檢出率，D與檢出率無直接關系。3.A、B、D-Q30、GC含量、重復序列均反映數據質量，C為芯片特定指標。4.A、C-XpertMTB/RIF和熒光PCR為快速篩查方法，B、D為輔助手段。5.B、C、D-A項存在污染風險，其他為二級實驗室標準操作。6.A、B、D-樣本量、溶血、污染均導致拒收，C標準需≥200ng/μL。7.A、B、D-核酸提取、測序深度、過濾參數影響病原體檢出率，C為靶向測序手段。8.A、B、C、D-均為預防性維護內容，確保設備長期穩(wěn)定運行。9.A、B、C-RNA降解、探針溫度、加樣重復性影響芯片結果，D與試劑狀態(tài)無關。10.A、B、C-Sanger測序、重復實驗、功能驗證是罕見變異驗證方法，D為聯合分析策略。三、判斷題答案與解析1.×-SYBRGreenI僅用于雙鏈DNA定量，不適用于RNA。2.√-DMSO可增強引物與模板的結合能力。3.×-過高循環(huán)數易導致假陽性，需優(yōu)化檢測條件。4.×-應使用中性清潔劑，避免腐蝕設備。5.×-N值越高代表數據質量越差，低N值可能混入環(huán)境核酸。6.√-高溫可能導致引物退火不全，需調整參數。7.√-“意義未明變異”需進一步驗證其臨床意義。8.×-16SrRNA測序用于宏基因組分析，非細菌群落分析。9.×-GATK用于變異檢測，基因表達定量使用RNA-Seq或qPCR。10.√-醫(yī)療廢物需符合《醫(yī)療廢物管理條例》規(guī)定。四、簡答題答案與解析1.設備維護流程解析：-維護流程需系統(tǒng)化，涵蓋日常檢查、定期校準、深度保養(yǎng)及性能評估，確保設備長期穩(wěn)定運行。2.ctDNA檢測優(yōu)化解析：-結合陽泉地區(qū)疾病特點，優(yōu)化檢測策略可提高臨床診斷效率。3.RNA保護措施解析：-核酸穩(wěn)