忻州市人民醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)范性考核一、單選題（每題2分，共20題）1.在進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)前，必須獲得以下哪種資質(zhì)？A.醫(yī)師資格證B.動物實(shí)驗(yàn)許可證C.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)理論證書D.實(shí)驗(yàn)室安全培訓(xùn)合格證2.使用移液器時，若需轉(zhuǎn)移100μl液體，應(yīng)選擇哪種規(guī)格的移液器？A.10μl移液器B.100μl移液器C.1000μl移液器D.200μl移液器3.在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)時，若發(fā)現(xiàn)背景值過高，可能的原因是？A.抗體濃度過高B.封閉不當(dāng)C.樣本干擾D.加樣誤差4.離心操作時，若樣品需在4℃條件下離心，應(yīng)選擇哪種離心機(jī)？A.室溫離心機(jī)B.冷凍離心機(jī)C.高速離心機(jī)D.粉碎型離心機(jī)5.實(shí)驗(yàn)室廢棄物分類中，哪種屬于有害廢棄物？A.廢棄試管B.油污手套C.含汞溫度計(jì)D.過期培養(yǎng)基6.配制0.1mol/L的HCl溶液時，應(yīng)使用哪種量器？A.容量瓶B.移液管C.滴定管D.刻度試管7.在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時，若擴(kuò)增效率低，可能的原因是？A.引物設(shè)計(jì)不合理B.DNA模板質(zhì)量差C.循環(huán)數(shù)過少D.試劑過期8.使用電子天平稱量樣品時，應(yīng)確保天平處于什么狀態(tài)？A.溫度穩(wěn)定B.防震狀態(tài)C.校準(zhǔn)后D.加蓋9.實(shí)驗(yàn)室中的生物安全柜應(yīng)定期進(jìn)行哪種檢測？A.細(xì)菌培養(yǎng)B.空氣流速檢測C.溫濕度檢測D.清潔度檢測10.在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時，培養(yǎng)基pH值應(yīng)維持在什么范圍？A.6.0-7.0B.7.0-7.4C.8.0-9.0D.5.0-6.0二、多選題（每題3分，共10題）1.實(shí)驗(yàn)室安全操作中，以下哪些行為是正確的？A.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即洗手B.佩戴護(hù)目鏡進(jìn)行操作C.在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)吃零食D.使用酒精燈時遠(yuǎn)離易燃物2.進(jìn)行WesternBlot實(shí)驗(yàn)時，以下哪些步驟是必要的？A.蛋白質(zhì)變性B.SDS電泳C.轉(zhuǎn)膜D.化學(xué)發(fā)光檢測3.實(shí)驗(yàn)室常用的消毒劑包括哪些？A.75%酒精B.甲醛C.氯仿D.過氧乙酸4.細(xì)胞培養(yǎng)過程中，以下哪些屬于常見污染？A.細(xì)菌污染B.真菌污染C.草履蟲污染D.細(xì)胞自發(fā)變異5.實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理應(yīng)符合哪些原則？A.分類收集B.安全儲存C.隨意丟棄D.合法處置6.使用移液器時，以下哪些操作是正確的？A.吸液前輕彈管壁B.快速釋放吸頭C.吸頭與槍頭匹配D.吸液后立即混勻7.進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）時，以下哪些步驟是必要的？A.抗體封閉B.樣品孵育C.底物顯色D.空白調(diào)零8.實(shí)驗(yàn)室中的生物安全等級包括哪些？A.生物安全一級B.生物安全二級C.生物安全三級D.生物安全四級9.細(xì)胞培養(yǎng)過程中，以下哪些因素會影響細(xì)胞生長？A.培養(yǎng)基成分B.溫度C.CO?濃度D.pH值10.實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法包括哪些？A.高壓蒸汽滅菌B.燃燒滅菌C.紫外線照射D.乙醇浸泡三、判斷題（每題1分，共20題）1.實(shí)驗(yàn)室中的所有廢棄物都可以直接倒入下水道。（×）2.使用移液器時，吸頭應(yīng)與槍頭緊密貼合，避免漏液。（√）3.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時，模板DNA濃度越高越好。（×）4.實(shí)驗(yàn)室中的生物安全柜應(yīng)定期進(jìn)行風(fēng)速檢測。（√）5.細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基應(yīng)每周更換一次。（×）6.使用酒精燈時，可以用一只手遮擋火焰。（×）7.實(shí)驗(yàn)室廢棄物分類中，化學(xué)廢液屬于有害廢棄物。（√）8.配制溶液時，應(yīng)將固體先溶解，再定容。（×）9.進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)時，背景值越低越好。（√）10.細(xì)胞培養(yǎng)過程中，CO?濃度應(yīng)維持在5%左右。（√）11.實(shí)驗(yàn)室中的所有設(shè)備使用前都需要校準(zhǔn)。（√）12.使用電子天平稱量時，樣品應(yīng)放在稱量紙上。（×）13.PCR實(shí)驗(yàn)中，引物濃度過高會導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。（√）14.實(shí)驗(yàn)室廢棄物應(yīng)儲存在密閉容器中。（√）15.細(xì)胞培養(yǎng)過程中，溫度應(yīng)維持在37℃。（√）16.實(shí)驗(yàn)室中的生物安全柜可以用于普通實(shí)驗(yàn)操作。（×）17.配制溶液時，應(yīng)使用蒸餾水或去離子水。（√）18.細(xì)胞培養(yǎng)過程中，pH值應(yīng)維持在7.0-7.4。（√）19.實(shí)驗(yàn)室廢棄物可以隨意丟棄，只要不污染環(huán)境即可。（×）20.使用移液器時，應(yīng)緩慢釋放吸頭，避免氣泡產(chǎn)生。（√）四、簡答題（每題5分，共5題）1.簡述實(shí)驗(yàn)室廢棄物分類的標(biāo)準(zhǔn)和常見類別。2.說明WesternBlot實(shí)驗(yàn)的基本步驟和原理。3.列舉三種實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法，并簡述其適用場景。4.解釋PCR實(shí)驗(yàn)中引物設(shè)計(jì)的重要性，并說明影響引物設(shè)計(jì)的因素。5.描述細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的污染類型及預(yù)防措施。五、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合忻州市人民醫(yī)院的實(shí)際情況，論述實(shí)驗(yàn)室生物安全的重要性及管理措施。2.分析實(shí)驗(yàn)室科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作不規(guī)范可能帶來的風(fēng)險，并提出改進(jìn)建議。答案與解析一、單選題答案1.B2.B3.B4.B5.C6.A7.A8.C9.B10.B二、多選題答案1.A,B,D2.A,B,C,D3.A,B,D4.A,B,C5.A,B,D6.A,C,D7.A,B,C,D8.A,B,C,D9.A,B,C,D10.A,B,C,D三、判斷題答案1.×2.√3.×4.√5.×6.×7.√8.×9.√10.√11.√12.×13.√14.√15.√16.×17.√18.√19.×20.√四、簡答題答案1.實(shí)驗(yàn)室廢棄物分類標(biāo)準(zhǔn)及常見類別實(shí)驗(yàn)室廢棄物分類主要依據(jù)《國家危險廢物名錄》及相關(guān)環(huán)保法規(guī)，分為以下類別：-化學(xué)廢液：如強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)溶劑（氯仿、甲苯等）、重金屬廢液等。-生物廢液：如培養(yǎng)液、血液樣本、病原微生物培養(yǎng)物等。-物理廢棄物：如試管、培養(yǎng)皿、玻璃器皿等。-有害廢棄物：如含汞溫度計(jì)、過期化學(xué)試劑、受污染的實(shí)驗(yàn)服等。2.WesternBlot實(shí)驗(yàn)的基本步驟和原理原理：通過SDS分離蛋白質(zhì)，再轉(zhuǎn)膜至NC膜，用特異性抗體孵育，最后用化學(xué)發(fā)光劑檢測目標(biāo)蛋白。步驟：-蛋白質(zhì)變性（SDS電泳）；-轉(zhuǎn)膜（電轉(zhuǎn)移或濕轉(zhuǎn)）；-封閉（阻斷非特異性結(jié)合）；-一抗孵育（特異性結(jié)合）；-二抗孵育（放大信號）；-化學(xué)發(fā)光檢測（成像）。3.實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法及適用場景-高壓蒸汽滅菌：適用于耐熱物品（如培養(yǎng)基、玻璃器皿），121℃15min可殺滅所有微生物。-燃燒滅菌：適用于一次性廢棄物（如注射器），直接焚燒可徹底滅菌。-紫外線照射：適用于空氣和表面消毒，但穿透力弱，需保持干燥。4.PCR實(shí)驗(yàn)中引物設(shè)計(jì)的重要性及影響因素重要性：引物是PCR擴(kuò)增的起始模板，其特異性直接影響擴(kuò)增效率。影響因素：-Tm值：兩引物Tm值應(yīng)相近（50-60℃）；-GC含量：引物GC含量應(yīng)占40%-60%；-二級結(jié)構(gòu)：避免引物自身或引物間形成二聚體；-特異性：引物應(yīng)僅與目標(biāo)序列結(jié)合。5.細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的污染類型及預(yù)防措施污染類型：-細(xì)菌污染：表現(xiàn)為渾濁、氣泡；-真菌污染：表現(xiàn)為絲狀生長、培養(yǎng)基變酸；-支原體污染：表現(xiàn)為細(xì)胞生長緩慢、形態(tài)改變。預(yù)防措施：-嚴(yán)格無菌操作；-使用無菌耗材；-定期更換培養(yǎng)基；-空氣過濾。五、論述題答案1.實(shí)驗(yàn)室生物安全的重要性及管理措施重要性：忻州市人民醫(yī)院作為區(qū)域性醫(yī)療科研中心，涉及多種病原微生物實(shí)驗(yàn)，生物安全直接關(guān)系到醫(yī)護(hù)人員和患者健康。管理措施：-分級防護(hù)：按BSL-1至BSL-3標(biāo)準(zhǔn)配置實(shí)驗(yàn)室；-規(guī)范操作：嚴(yán)格執(zhí)行SOP，避免氣溶膠產(chǎn)生；-廢棄物處理：分類收集并無害化處理；-培訓(xùn)考核：定期開展生物安全培訓(xùn)。2.實(shí)驗(yàn)室科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作不規(guī)范的風(fēng)險