《靈芝及靈芝提取物中β-葡聚糖的測定》

團體標準編制說明

一、任務(wù)來源與起草單位

2023年9月28日，廣東省生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展協(xié)會接受無限極(中國)有限公

司、天方健藥業(yè)有限公司、浙江科達靈芝有限公司、金寨喬康有限公司、廣東省科學院生物

與醫(yī)學工程研究所、廣州中醫(yī)藥大學、廣東藥科大學、廣州市食品檢驗所、南昌市食品檢驗

所等單位關(guān)于《靈芝及靈芝提取物中β-葡聚糖的測定》團體標準的立項申請，開啟標準編制

工作。該團標由無限極(中國)有限公司、天方健藥業(yè)有限公司、浙江科達靈芝有限公司、金

寨喬康有限公司、廣東省科學院生物與醫(yī)學工程研究所、廣州中醫(yī)藥大學、廣東藥科大學、

廣州市食品檢驗所、南昌市食品檢驗所等單位共同起草和編制。

二、目的和意義

現(xiàn)代藥理研究表明，靈芝具有補益安神、止咳平喘、抗癌、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗氧化、

抗過敏、抗高血壓、保肝、降血糖等方面的藥理作用，在臨床中發(fā)揮著重要作用，2020年版

《中國藥典》將靈芝分列為赤芝與紫芝。目前從靈芝屬中分離鑒定出600多種化合物,包括

三萜、多糖、甾醇、生物堿、核苷酸、類固醇等類別。其中，多糖是靈芝子實體中的主要有

效成分之一，目前已經(jīng)從不同來源的靈芝材料中分離獲得200多個多糖組分，大部分為葡聚

糖，還有以葡萄糖甘露糖、半乳糖、巖藻糖和阿拉伯糖等單糖組成的雜多糖。β-葡聚糖是靈

芝中主要的活性多糖種類，在免疫調(diào)節(jié)和抑制腫瘤方面發(fā)揮著重要作用，因此，提純并檢測

靈芝提取物中的β-葡聚糖方面的研究具有很大的意義。

現(xiàn)有技術(shù)中的研究主要集中在如何以靈芝原料提取出富含β-葡聚糖的靈芝提取物，例如：

采用熱水浸提法、超聲輔助提取法、微波輔助提取法、亞臨界水提取法等。熱水浸提法是工

業(yè)生產(chǎn)常用的方法，但提取時間長和能耗高限制其產(chǎn)業(yè)化發(fā)展；超聲輔助提取以超聲高頻振

蕩產(chǎn)生的空穴效應破壞細胞壁使多糖溶出，但中試及產(chǎn)業(yè)化投資成本高；微波輔助提取以微

波破壞細胞壁,但對設(shè)備要求高，樣品處理量小，會產(chǎn)生大量蒸汽，難以大規(guī)模應用；亞臨界

水提取法溫度和壓力要求更高，高溫易導致β-葡聚糖生物活性的下降。本標準方法操作簡單，

大幅度提高β-葡聚糖的提取率，能適用于靈芝及靈芝提取物中β-葡聚糖的測定，可廣泛推廣

在行業(yè)內(nèi)使用，為我國生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展提供技術(shù)支撐。

三、項目主要過程

1、申請立項階段

2023年9月，由無限極(中國)有限公司、天方健藥業(yè)有限公司、浙江科達靈芝有限公司、

金寨喬康有限公司、廣東省科學院生物與醫(yī)學工程研究所、廣州中醫(yī)藥大學、廣東藥科大學、

廣州市食品檢驗所、南昌市食品檢驗所向廣東省生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展協(xié)會提出團體標準

編制申請，并于2023年9月28日獲準立項。

2、起草階段

2023年9月，在獲準立項后，無限極(中國)有限公司、天方健藥業(yè)有限公司、浙江科達

靈芝有限公司、金寨喬康有限公司、廣東省科學院生物與醫(yī)學工程研究所、廣州中醫(yī)藥大學、

廣東藥科大學、廣州市食品檢驗所、南昌市食品檢驗所成立了“靈芝及靈芝提取物中β-葡聚

糖的測定”起草工作組，確定工作方案。項目小組成立后，起草工作組迅速開展工作，在工

作過程中廣泛收集有關(guān)β-葡聚糖含量測定的資料，在認真研究了國內(nèi)外相關(guān)標準及資料的基

礎(chǔ)上，開發(fā)出了靈芝及靈芝提取物中β-葡聚糖的分光光度檢測方法，并對靈芝提取物樣品進

行了一系列的比對驗證實驗，在遵循先進性、科學性、實用性的基礎(chǔ)上編制出《靈芝及靈芝

提取物中β-葡聚糖的測定》標準草案初稿，經(jīng)組織內(nèi)部有關(guān)專家研討后，對標準草案初稿進

行了認真地修改，于2024年5月形成了標準征求意見稿，由組長審核后報各起草組。

3、標準方法驗證

2024年3月-5月，起草小組完成本方法的研究工作，根據(jù)相關(guān)參與單位修改意見，完

成驗證報告。收集相關(guān)驗證樣品，將驗證樣品分別寄往驗證單位，進行標準方法的室間驗證

工作。

四、標準編制原則和技術(shù)內(nèi)容說明

1、標準編制原則

遵循規(guī)范性、適用性和可操作性原則，遵循政策性和協(xié)調(diào)統(tǒng)一性的原則，以滿足國家強

制性標準為前提，結(jié)合政府監(jiān)管部門、檢測機構(gòu)、生產(chǎn)企業(yè)等的需求，以國家有關(guān)相關(guān)法律

法規(guī)、規(guī)章、技術(shù)政策和規(guī)劃為依據(jù)，促進環(huán)境效益、經(jīng)濟效益和社會效益的統(tǒng)一，體現(xiàn)重

點突出和市場需求的原則；標準制定工作遵循“面向市場、服務(wù)產(chǎn)業(yè)、自主制定、適時推出”

的原則，本標準制定與技術(shù)創(chuàng)新、試驗驗證、產(chǎn)業(yè)推進、應用推廣相結(jié)合，統(tǒng)籌推進。

依據(jù)《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》（GB/T1.1-2020），

在標準修訂過程中力求做到技術(shù)內(nèi)容的敘述準確無誤，文字表達準確、簡明、易懂，標準的

構(gòu)成嚴謹合理，內(nèi)容編排、層次劃分等符合邏輯與規(guī)定。

2、標準技術(shù)內(nèi)容說明

1

標準方法的開發(fā)研究、驗證、技術(shù)指標等主要參照《中國藥典2020年版》四部9101

分析方法驗證指導原則、GB/T27404-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》等代表

性標準。

五、標準主要技術(shù)內(nèi)容

1、范圍

本文件規(guī)定了靈芝及靈芝提取物相關(guān)產(chǎn)品中β-葡聚糖的分光光度法檢測方法。

本文件適用于靈芝實體，靈芝孢子粉和靈芝提取物中β-葡聚糖的測定。

2、原理

靈芝子實體，靈芝孢子粉和靈芝提取物中β-葡聚糖和α-葡聚糖經(jīng)水提取，使用α-淀粉酶和

淀粉葡萄糖苷酶（糖化淀粉酶）酶解α-葡聚糖成單糖和寡糖；使用纖維素酶酶解纖維素成單

糖和寡糖；使用蛋白質(zhì)酶酶解蛋白質(zhì)成氨基酸；乙醇沉淀β-葡聚糖，單糖、寡糖和氨基酸溶

于乙醇被除去；β-葡聚糖經(jīng)水溶解，在硫酸的作用下，先水解成單糖，并迅速脫水形成糖醛

化合物，與苯酚形成黃色化合物，在485nm下具有特征吸收，與標準系列比較定量。

3、樣品前處理

取樣品約0.5g放入50mL離心管中，加入10mL水，將樣品渦旋至完全溶解，用0.2

mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液至pH6.9，加入0.1mL淀粉酶（20000-60000U/mL），并在20℃

恒溫水浴振蕩2小時酶解。用0.2mol/L鹽酸溶液將溶液的pH值調(diào)至5.0加入10mg纖維素

酶，并在37℃恒溫水浴酶解2小時。用0.2mol/L氫氧化鈉將溶液的pH值調(diào)至7.5，向溶液

中加入約50mg的蛋白酶，并在37℃恒溫水浴振蕩2小時酶解。用0.2mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)

pH至4.8，將約0.1mL的淀粉葡萄糖苷酶(10000U/mL)添加到溶液，并在60℃恒溫水浴

中振搖2小時酶解。酶解液轉(zhuǎn)移并用水洗滌干凈至50mL容量瓶，用水定容至刻度。將溶液

轉(zhuǎn)移至50mL離心管，將溶液離心（3000rpm，10min），取上清液5mL于50mL離心管，

加入20mL無水乙醇，搖勻（多管式渦旋振蕩器，轉(zhuǎn)速：約2000rpm，10min），放置4℃

沉淀過夜（8h以上）。將溶液離心（3000rpm，20min），棄上清液。向沉淀中加入25mL80%

乙醇樣品，并在4℃下沉淀1小時。將溶液離心（3000rpm，20min）。離心后棄去上清液，

沉淀加水溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

4、標準工作曲線的繪制

精密量取β-葡聚糖對照品溶液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL分別置

于25mL具塞比色管中，準確補充水至1.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，混勻；繼續(xù)加

入濃硫酸5.0mL后小心混勻，置沸水浴中煮沸15min取出，置冰浴中冷卻5min，用分光光

度計在485nm波長處以試劑空白溶液為參比，1cm比色皿中測定吸光度值，以β-葡聚糖質(zhì)量

2

(μg)為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。

5、試樣的測定

準確量取供試品溶液1mL，置25mL具塞比色管中，照標準工作曲線制備項下的方法，

自“加入50g/L苯酚溶液1.0mL”起，同法操作，測定吸光度值，從標準曲線上讀出供試品

溶液中β-葡聚糖的質(zhì)量，計算即得。

6、結(jié)果計算

?×?1×?3

?=

式中：?×?2×1000

X——β-葡聚糖的含量，單位為毫克每克（mg/g）；

C——從標準曲線查得樣品的β-葡聚糖的質(zhì)量，單位為微克（μg）；

M——樣品的取樣量，單位為克（g）；

V1——酶解液轉(zhuǎn)移并用水洗滌干凈后定容體積，單位為毫升（mL）；

V2——取上清液于50mL離心管的體積，單位為毫升（mL）；

V3——醇沉后獲得沉淀物用水洗后定容的體積，單位為毫升（mL）；

1000——單位換算系數(shù)

計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

7、精密度

重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不超過算術(shù)平均值的10%。

六、實驗室間方法驗證

本標準的驗證工作分別由廣東省科學院生物與醫(yī)學工程研究所、廣州中醫(yī)藥大學、廣東

藥科大學、廣州市食品檢驗所、南昌市食品檢驗所五家機構(gòu)組織進行，分別就方法的專屬性、

線性范圍、精密度、準確度、耐用性進行驗證。各實驗室驗證結(jié)果均符合要求，說明建立的

方法能很好地用于靈芝及其提取物中β-葡聚糖含量測定。

七、貫徹標準的要求、措施和建議

β-葡聚糖作為一種重要的免疫調(diào)節(jié)劑，已成為當今醫(yī)藥和保健品行業(yè)關(guān)注的焦點，對β-

葡聚糖的定量檢測是進行靈芝相關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要