第一編

考點通關(guān)練第九單元發(fā)酵工程考點37基因工程及生物技術(shù)的安全性與倫理問題題號12345678難度★★★★★★★★對點基因工程的工具基因工程的基本操作程序DNA粗提取與鑒定、DNA片段的擴(kuò)增及電泳膀胱生物反應(yīng)器基因工程的成果及應(yīng)用生物技術(shù)的安全性和倫理問題PCR蛋白質(zhì)工程題號910111213141516難度★★★★★★★★★★★★★★對點基因工程基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序蛋白質(zhì)工程基因編輯技術(shù)基因工程1．(2024·甘肅高臺一中開學(xué)考)某研究小組擬用限制酶和DNA連接酶為基本工具，對目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行切割、連接，以構(gòu)建含目的基因的重組表達(dá)載體。下列有關(guān)敘述正確的是(

)A．構(gòu)建重組表達(dá)載體時，目的基因和質(zhì)粒均用酶3切割，用E.coliDNA連接酶連接成功率最高B．構(gòu)建重組表達(dá)載體時，目的基因用酶2切割，質(zhì)粒用酶4切割，用T4DNA連接酶連接成功率最高C．目的基因和質(zhì)粒均用酶1切割，用T4DNA連接酶連接構(gòu)建重組表達(dá)載體既方便操作又容易成功D．酶1和酶3屬于同尾酶，切割產(chǎn)生相同的黏性末端，但不適宜使用二者來構(gòu)建重組表達(dá)載體解析：構(gòu)建重組表達(dá)載體時，使用同一種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，容易造成二者自身環(huán)化，也容易造成目的基因和質(zhì)粒反向連接，成功率不高，A錯誤；酶2和酶4切割產(chǎn)生的末端不相同，無法連接成新的片段，B錯誤；酶1會破壞目的基因，C錯誤；酶1和酶3屬于同尾酶，二者切割產(chǎn)生相同的黏性末端，但酶1會破壞目的基因，不適宜使用二者來構(gòu)建重組表達(dá)載體，D正確。2．如圖表示科學(xué)家通過基因工程培育抗蟲棉時，從蘇云金芽孢桿菌中提取Bt毒蛋白基因“放入”棉花細(xì)胞中發(fā)揮作用的過程。以下說法正確的是(

)A．轉(zhuǎn)化就是指將Bt毒蛋白基因?qū)胧荏w細(xì)胞內(nèi)的過程B．圖中Ⅱ是含目的基因的重組Ti質(zhì)粒，步驟②是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入棉花細(xì)胞C．可用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌D．檢驗轉(zhuǎn)基因棉的抗蟲性狀，常用的方法是抗原—抗體雜交技術(shù)解析：轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程，A錯誤；圖中Ⅱ是含目的基因的重組Ti質(zhì)粒，步驟②是將含目的基因的重組Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，步驟③是導(dǎo)入棉花細(xì)胞，B錯誤；含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌中含有四環(huán)素的抗性基因，可以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生存，故可以用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，C正確；檢測轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的抗蟲性狀，常用的方法是通過采摘抗蟲棉的葉片飼喂棉鈴蟲來確定Bt基因是否賦予了棉花抗蟲特性以及抗蟲程度，D錯誤。3．(2024·山西運(yùn)城階段練習(xí))下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定、DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定的原理的敘述正確的是(

)A．利用DNA溶于酒精，但蛋白質(zhì)不溶于酒精的原理，可分離DNA與蛋白質(zhì)B．將白色絲狀物加入二苯胺試劑后沸水浴，待試管冷卻后觀察顏色變化C．PCR擴(kuò)增的特異性一般是由引物的特異性決定的，可在引物的3′端添加限制酶識別序列D．電泳鑒定DNA利用了DNA在電場中會向著與它所帶電荷相反的電極移動的原理解析：DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精，可將DNA與蛋白質(zhì)分離，A錯誤；將白色絲狀物溶于2mol/L的NaCl溶液中，然后加入二苯胺試劑沸水浴，待試管冷卻后觀察顏色變化，B錯誤；由于引物的序列具有特異性，所以PCR擴(kuò)增的特異性一般是由引物的特異性決定的，可在引物的5′端添加限制酶識別序列，C錯誤。4．W是一種具有特定功能的人體蛋白質(zhì)。某學(xué)習(xí)小組利用膀胱生物反應(yīng)器制備W的過程如圖，下列有關(guān)說法不正確的是(

)A．步驟①構(gòu)建的重組表達(dá)載體中含有膀胱中特異表達(dá)基因的啟動子B．步驟②可使用顯微注射技術(shù)將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵C．膀胱生物反應(yīng)器與乳腺生物反應(yīng)器相比，具有不受年齡和性別限制等優(yōu)點D．W基因只在轉(zhuǎn)基因動物膀胱細(xì)胞中存在并表達(dá)解析：啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄，重組表達(dá)載體中含有膀胱中特異表達(dá)基因的啟動子，目的是使目的基因只能在膀胱組織中表達(dá)，A正確；步驟②是將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵，顯微注射技術(shù)常用于將重組表達(dá)載體導(dǎo)入動物細(xì)胞，B正確；乳腺生物反應(yīng)器要求性別是雌性、處于哺乳期，膀胱生物反應(yīng)器不限制動物性別且可以從動物出生時即開始收集產(chǎn)物，C正確；重組表達(dá)載體的受體細(xì)胞是受精卵，故在所有體細(xì)胞中都有W基因，但只在轉(zhuǎn)基因動物膀胱細(xì)胞中表達(dá)，D錯誤。5．(2024·湖北襄陽月考)下列有關(guān)基因工程的成果及應(yīng)用的說法，錯誤的是(

)A．基因工程中抗蟲、抗病轉(zhuǎn)基因植物的種植減少了農(nóng)藥的使用B．基因工程在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用主要是培育高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、品質(zhì)優(yōu)良和具有抗逆性的農(nóng)作物C．基因治療是把正?；?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能，以達(dá)到治療的目的D．利用基因工程技術(shù)，將人的胰島素基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌后，大腸桿菌內(nèi)表達(dá)出的胰島素與人的胰島素結(jié)構(gòu)相同解析：利用基因工程技術(shù)，將人的胰島素基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌后，大腸桿菌內(nèi)表達(dá)出的胰島素與人的胰島素結(jié)構(gòu)不相同，因為大腸桿菌沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細(xì)胞器，不能對胰島素進(jìn)行加工，D錯誤。6．生物技術(shù)安全性和倫理問題是社會關(guān)注的熱點。下列敘述不正確的是(

)A．應(yīng)嚴(yán)格選擇轉(zhuǎn)基因植物的目的基因，避免產(chǎn)生對人類有害的物質(zhì)B．當(dāng)今社會的普遍觀點是禁止克隆人的實驗，但不反對治療性克隆C．反對設(shè)計試管嬰兒的原因之一是有人濫用此技術(shù)選擇性設(shè)計嬰兒D．生物武器是用微生物、毒素、干擾素及重組致病菌等來形成殺傷力解析：生物武器包括致病菌類、病毒類、生化毒劑類等，干擾素為細(xì)胞因子，不屬于生物武器，D錯誤。7．(不定項)RT-PCR是將RNA逆轉(zhuǎn)錄(RT)成cDNA(與mRNA互補(bǔ)的DNA單鏈)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)相結(jié)合的技術(shù)，具體過程如圖所示。下列敘述正確的是(

)A．過程Ⅰ獲得cDNA的過程與DNA復(fù)制過程中存在的堿基配對方式相同B．圖中A、B兩種引物的核苷酸序列不同，但參與子鏈合成的酶均相同C．圖中子鏈的合成均是以四種核糖核苷酸為原料從引物的5′端開始延伸的D．過程Ⅱ中，若進(jìn)行6輪循環(huán)，則共需要加入引物的數(shù)量為63個解析：過程Ⅰ是以四種脫氧核糖核苷酸為原料，以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成DNA的過程，催化該過程的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶，存在的堿基配對方式是U—A、A—T、C—G、G—C；過程Ⅱ是DNA單鏈復(fù)制過程，是以四種脫氧核糖核苷酸為原料，以DNA單鏈為模板合成DNA單鏈的過程，催化該過程的酶為耐高溫的DNA聚合酶，該過程中存在的堿基配對方式是T—A、A—T、C—G、G—C，且子鏈延伸的方向是從引物的3′端開始延伸的，A、B、C錯誤；過程Ⅱ開始是一條DNA單鏈，經(jīng)6輪循環(huán)后，產(chǎn)生25＝32個DNA分子，共32×2＝64條單鏈，新合成的子鏈數(shù)為63條，則進(jìn)行6輪循環(huán)，共需要加入引物的數(shù)量為63個，D正確。8．(不定項)(2024·廣東韶關(guān)階段練習(xí))水蛭是我國的傳統(tǒng)中藥材，主要藥理成分水蛭素為水蛭蛋白中重要成分之一，具有良好的抗凝血作用。擬通過蛋白質(zhì)工程改造水蛭素結(jié)構(gòu)，提高其抗凝血活性。蛋白質(zhì)工程流程如圖所示。下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程敘述正確的是(

)A．蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對DNA分子直接進(jìn)行操作，定向改變分子的結(jié)構(gòu)B．圖中的b為mRNA，a為蛋白質(zhì)，b和a對應(yīng)的單體序列都是唯一的C．通過蛋白質(zhì)工程改造的水蛭蛋白是自然界已有的蛋白質(zhì)D．蛋白質(zhì)工程改造水蛭蛋白過程中涉及中心法則解析：據(jù)圖可知，物質(zhì)a是具有氨基酸序列的多肽鏈，物質(zhì)b是mRNA，在生產(chǎn)過程中，物質(zhì)b可能不同，原因是密碼子的簡并性，即一種氨基酸可能對應(yīng)幾種密碼子，B錯誤；通過蛋白質(zhì)工程改造的水蛭蛋白是自然界沒有的蛋白質(zhì)，C錯誤；根據(jù)中心法則逆推以確定目的基因的堿基序列，涉及到了中心法則，D正確。9．(2022·河北，24)蛋白酶抑制劑基因轉(zhuǎn)化是作物抗蟲育種的新途徑。某研究團(tuán)隊將胰蛋白酶抑制劑(NaPI)和胰凝乳蛋白酶抑制劑(StPin1A)的基因單獨(dú)或共同轉(zhuǎn)化棉花，獲得了轉(zhuǎn)基因植株?；卮鹣铝袉栴}：(1)蛋白酶抑制劑的抗蟲機(jī)制是_________________________________________________________________。(2)_____________________是實施基因工程的核心。(3)利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法時，必須將目的基因插入質(zhì)粒的__________上，此方法的不足之處是_______________________________。

抑制害蟲胰蛋白酶活性，從而使害蟲不能正常消化食物達(dá)到抗蟲的目的基因表達(dá)載體的構(gòu)建T－DNA該方法一般不適用于單子葉植物(4)為檢測目的基因在受體細(xì)胞基因組中的整合及其轉(zhuǎn)錄和翻譯，可采用的檢測技術(shù)有______________________________(寫出兩點即可)。(5)確認(rèn)抗蟲基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)后，還需進(jìn)一步做抗蟲的_________以鑒定其抗性程度。圖為三種不同遺傳操作產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因棉花抗蟲實驗結(jié)果，據(jù)結(jié)果分析_______________(填“NaPI”“StPin1A”或“NaPI＋StPin1A”)轉(zhuǎn)基因棉花的抗蟲效果最佳，其原因是____________________________________________________________。PCR技術(shù)、抗原—抗體雜交技術(shù)接種試驗NaPI＋StPin1A

NaPI＋StPin1A的轉(zhuǎn)基因棉花的蟲體質(zhì)量最低且每株棉鈴數(shù)最多(6)基因突變可產(chǎn)生新的等位基因，在自然選擇的作用下，昆蟲種群的基因頻率會發(fā)生_________，導(dǎo)致昆蟲朝著一定的方向不斷進(jìn)化。據(jù)此推測，被蛋白酶抑制劑轉(zhuǎn)基因作物長期選擇后，某些昆蟲具有了抗蛋白酶抑制劑的能力，其分子機(jī)制可能是_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________(寫出兩點即可)。定向改變

害蟲基因突變，產(chǎn)生了可與蛋白酶抑制劑競爭性結(jié)合的蛋白質(zhì)；或表達(dá)出不與蛋白酶抑制劑結(jié)合的、具有水解蛋白質(zhì)的功能的新蛋白酶；或作物蛋白酶抑制劑基因發(fā)生突變后不能編碼蛋白酶抑制劑解析：(1)蛋白酶抑制劑可與害蟲消化道內(nèi)的蛋白酶結(jié)合形成復(fù)合物，從而阻斷或降低蛋白酶的活性，使昆蟲不能正常消化食物中的蛋白質(zhì)，從而達(dá)到抗蟲的目的。(2)基因工程的核心是基因表達(dá)載體的構(gòu)建。(3)農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有Ti質(zhì)粒，當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后，可將Ti質(zhì)粒上的T－DNA轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并將其整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上。故利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法時，需將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T－DNA上。但農(nóng)桿菌一般只感染雙子葉植物和裸子植物，故其不足之處是該方法一般不適用于單子葉植物。(4)在分子水平上可通過PCR技術(shù)檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞染色體DNA上或檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA；是否翻譯出相應(yīng)的蛋白質(zhì)則需要使用抗原—抗體雜交技術(shù)。(5)抗蟲基因?qū)胫参锛?xì)胞后，要鑒定其是否賦予植物抗蟲特性，需要做抗蟲接種試驗。題圖中，NaPI＋StPin1A轉(zhuǎn)基因棉花的蟲體質(zhì)量最低，每株棉鈴數(shù)最多，故其抗蟲效果最佳。(6)昆蟲種群本來就存在抗蟲性強(qiáng)或弱的變異，在抗蟲劑(蛋白酶抑制劑)的選擇作用下，昆蟲種群的基因頻率會發(fā)生定向改變，使昆蟲朝著一定的方向不斷進(jìn)化。蛋白酶抑制劑通過與害蟲消化道內(nèi)的蛋白酶結(jié)合使害蟲不能消化蛋白質(zhì)而死亡。昆蟲具有抗蛋白酶抑制劑的能力可能是因為害蟲的蛋白酶基因突變，表達(dá)出的新蛋白酶不能與蛋白酶抑制劑結(jié)合，但仍具有水解蛋白質(zhì)的能力；或者是害蟲基因突變，產(chǎn)生了某種蛋白質(zhì)可與蛋白酶抑制劑結(jié)合；或者是導(dǎo)入作物中的蛋白酶抑制劑基因突變，不能合成蛋白酶抑制劑。10．載體是基因工程中攜帶目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞的重要工具，常見的載體類型主要有基因克隆載體和基因表達(dá)載體，如圖是利用細(xì)菌生產(chǎn)人胰島素的基本流程示意圖，下列相關(guān)敘述正確的是(

)A．重組載體A、重組載體B分別是基因克隆載體和基因表達(dá)載體B．載體B必須含有限制酶切割位點、復(fù)制原點和標(biāo)記基因，而載體A可以沒有C．重組載體B需要有起始密碼子和終止密碼子序列，而載體A可以沒有D．培養(yǎng)細(xì)菌A和細(xì)菌B的培養(yǎng)基在營養(yǎng)成分和功能上沒有明顯差異解析：重組載體A導(dǎo)入受體菌后隨著受體菌的繁殖而擴(kuò)增，因此是基因克隆載體，而重組載體B導(dǎo)入受體菌后，表達(dá)產(chǎn)生胰島素，因此是基因表達(dá)載體，A正確；作為載體必須要具備的條件有：含有限制酶的切割位點(便于目的基因的插入)、復(fù)制原點(便于目的基因的擴(kuò)增)及標(biāo)記基因(便于篩選含有目的基因的受體細(xì)胞)等，因此載體A和載體B都必須含有限制酶切割位點、復(fù)制原點和標(biāo)記基因等，B錯誤；起始密碼子和終止密碼子序列位于mRNA上，重組載體B為環(huán)狀DNA分子，其上不含起始密碼子和終止密碼子，C錯誤；培養(yǎng)細(xì)菌A的目的是擴(kuò)增目的基因，培養(yǎng)細(xì)菌B的目的是獲得胰島素，因此培養(yǎng)兩者的培養(yǎng)基在營養(yǎng)成分和功能上有區(qū)別，D錯誤。11．(2025·遼寧開學(xué)考試)圖甲、乙中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點。下列關(guān)于培育轉(zhuǎn)基因大腸桿菌的敘述錯誤的是(

)A．若通過PCR獲取該目的基因，應(yīng)該選用引物甲和引物丙B．圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建表達(dá)載體，應(yīng)選用BclⅠ和HindⅢ剪切C．若將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞中，需選用Ca2＋轉(zhuǎn)化法D．在受體細(xì)胞中，氨芐青霉素抗性基因和目的基因可能同時表達(dá)解析：引物是根據(jù)目的基因兩側(cè)序列獲得，需要與目的基因兩端互補(bǔ)，故若通過PCR技術(shù)大量擴(kuò)增該目的基因，應(yīng)該選用引物甲和引物丙，A正確；圖甲中BamHⅠ會破壞兩種抗性基因，不能選用，故圖乙中目的基因左側(cè)只能選BclⅠ，而質(zhì)粒上沒有目的基因右側(cè)Sau3AⅠ的酶切位點，兩者都有HindⅢ的酶切位點，故質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建表達(dá)載體，應(yīng)選用BclⅠ和HindⅢ剪切，B正確；若將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞大腸桿菌時，需用鈣離子等處理，使其處于易于吸收外源DNA的狀態(tài)，C正確；在受體細(xì)胞中，插入目的基因時氨芐青霉素抗性基因被破壞，不能和目的基因同時表達(dá)，D錯誤。12．(不定項)(2024·北京海淀一模改編)雙向啟動子可同時結(jié)合兩個RNA聚合酶來驅(qū)動下游基因的表達(dá)，研究人員構(gòu)建了如圖所示的表達(dá)載體，以檢測雙向啟動子作用效果。下列分析正確的是(

)A．可用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將構(gòu)建好的表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞B．為連入GUS基因，需用SalⅠ和SphⅠ酶切已整合了雙向啟動子及LUC基因的質(zhì)粒C．在培養(yǎng)基中添加潮霉素可篩選出成功導(dǎo)入表達(dá)載體的微生物受體細(xì)胞D．可通過觀察是否出現(xiàn)熒光和藍(lán)色物質(zhì)確認(rèn)雙向啟動子的作用解析：將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，A正確；如果用SphⅠ酶切已整合了雙向啟動子及LUC基因的質(zhì)粒時就會破壞LUC基因，B錯誤；如果成功導(dǎo)入含有潮霉素抗性基因的基因表達(dá)載體，受體細(xì)胞就具有抗潮霉素的能力，在含有潮霉素的培養(yǎng)基上能生存，因此可以篩選出成功導(dǎo)入表達(dá)載體的微生物受體細(xì)胞，C正確；雙向啟動子如果正常表達(dá)，就會合成熒光素酶和β-葡萄糖苷酶，催化底物分別產(chǎn)生熒光和生成藍(lán)色物質(zhì)，從而確定雙向啟動子的作用，D正確。13．(2025·八省聯(lián)考內(nèi)蒙)在人胰島素A鏈基因前端加入甲硫氨酸編碼序列，置于β－半乳糖苷酶基因(不含終止編碼序列)末端，插入到質(zhì)粒中，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌(缺失內(nèi)源性β－半乳糖苷酶基因)，經(jīng)培養(yǎng)、切割和純化等得到成熟胰島素A鏈，回答下列問題：(1)使用限制酶________和________對質(zhì)粒和插入DNA片段進(jìn)行切割。(2)在轉(zhuǎn)化大腸桿菌前，一般先用______處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于容易吸收重組DNA分子的生理狀態(tài)。HindⅢBamHⅠCa2＋(3)重組DNA分子在大腸桿菌中開始轉(zhuǎn)錄時，RNA聚合酶首先結(jié)合的位點是________。(4)將經(jīng)過轉(zhuǎn)化的大腸桿菌涂布在含氨芐青霉素和X－gal的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，若觀察到___色菌落，可以確定大腸桿菌成功表達(dá)胰島素A鏈，原因是____________________________________________________________________________________________________________________________。另一種顏色的菌落中可能不含重組DNA分子，在不考慮突變的情況下，這些菌落不含重組DNA分子的原因是___________________。啟動子藍(lán)大腸桿菌缺失內(nèi)源性β－半乳糖苷酶基因，而導(dǎo)入成功后含有內(nèi)源性β－半乳糖苷酶基因，表達(dá)出的β－半乳糖苷酶分解X－gal產(chǎn)生藍(lán)色導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒(5)溴化氰可以在甲硫氨酸殘基C端切割肽鏈，成熟的人胰島素A鏈不含甲硫氨酸殘基。使用溴化氰在甲硫氨酸殘基C端切割的目的是______________________________________________________________________。

切割β－半乳糖苷酶和胰島素A鏈結(jié)合而成的融合蛋白，獲得成熟的人的胰島素解析：(1)據(jù)圖分析，EcoRⅠ和EcoRⅤ都會破壞目的基因，故不能選擇，且SacⅠ不在啟動子和終止子之間，也不能選擇，則目的基因左側(cè)只能選擇BamHⅠ，右側(cè)應(yīng)選擇HindⅢ，故使用限制酶BamHⅠ和HindⅢ對質(zhì)粒和插入DNA片段進(jìn)行切割。(3)啟動子是RNA聚合酶識別與結(jié)合的位點，可用于驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄，故重組DNA分子在大腸桿菌中開始轉(zhuǎn)錄時，RNA聚合酶首先結(jié)合的位點是啟動子。(4)大腸桿菌缺失內(nèi)源性β－半乳糖苷酶基因，若導(dǎo)入成功，則重組質(zhì)粒中含有β－半乳糖苷酶基因，表達(dá)出的β－半乳糖苷酶分解X－gal產(chǎn)生藍(lán)色；由于導(dǎo)入率并非100%，另一種顏色(白色)的菌落中導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒。14．(2024·武漢調(diào)研)FⅧ基因主要在肝臟中表達(dá)，控制合成凝血因子(FⅧ)。若將FⅧ第309位的丙氨酸替換為絲氨酸，可增加FⅧ的分泌。A型血友病是由FⅧ基因突變使FⅧ含量降低或功能異常引起的。下列敘述錯誤的是(

)A．上述得到高分泌量的FⅧ的操作過程屬于蛋白質(zhì)工程B．構(gòu)建基因表達(dá)載體時應(yīng)將編輯后的FⅧ基因連接于肝臟細(xì)胞特異性啟動子下游C．以腺病毒為載體將編輯后的FⅧ基因插入肝細(xì)胞核基因組可對A型血友病患者進(jìn)行治療D．為了檢測編輯后的FⅧ基因是否成功表達(dá)，不能從血液中提取蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原—抗體雜交解析：通過改造編碼FⅧ基因得到高分泌量的FⅧ的操作過程屬于蛋白質(zhì)工程，A正確；由題意知，F(xiàn)Ⅷ基因主要在肝臟中表達(dá)，且目的基因應(yīng)位于啟動子下游，故構(gòu)建基因表達(dá)載體時應(yīng)將編輯后的FⅧ基因連接于肝臟細(xì)胞特異性啟動子下游，B正確；由題意可知，以腺病毒為載體將編輯后的FⅧ基因插入肝細(xì)胞核基因組可對A型血友病患者進(jìn)行治療，C正確；編輯后的FⅧ基因表達(dá)的凝血因子可存在于血漿中，因此可以從血液中提取蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原—抗體雜交，以檢測編輯后的FⅧ基因是否成功表達(dá)，D錯誤。15．(不定項)(2024·廣東佛山期末)我國科研人員利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除了水稻香味抑制基因Badh2，獲得了有香味的水稻，機(jī)理如圖所示。下列敘述正確的是(

)注：潮霉素能抑制植物細(xì)胞生長。A．sgRNA的識別序列過短可能會導(dǎo)致編輯對象出錯B．Cas9蛋白功能類似于限制酶，可以識別并剪切特定DNA片段C．在培養(yǎng)基中加入潮霉素，可用于篩選導(dǎo)入基因敲除載體的植物細(xì)胞D．構(gòu)建好的基因敲除載體可用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入水稻細(xì)胞解析：由圖可知，sgRNA能識別靶基因的特定序列，引導(dǎo)Cas9蛋白去切割特定序列，sgRNA的識別序列過短可能會導(dǎo)致編輯對象出錯，A正確，B錯誤；由圖可知，基因敲除載體中有sgRNA基因、Cas9基因和潮霉素抗性基因，使轉(zhuǎn)基因水稻也帶有潮霉素抗性基因，所以在培養(yǎng)基中加入潮霉素進(jìn)行選擇，C正確。16．(2024·湖北部分高中聯(lián)考)多不飽和脂肪酸(PUFAs)是人體必需脂肪酸，豬肉是我國主要的肉類消費(fèi)品，提高其PUFAs含量對居民健康具有重要意義。為解決豬肉中PUFAs含量不足的問題，研究者從線蟲中獲得控制PUFAs合成的必需酶基因fat－1，培育轉(zhuǎn)fat－1基因豬，操作過程如下圖所示，圖中GFP基因表達(dá)出綠色熒光蛋白。請回答下列問題：(1)利用PCR擴(kuò)增fat－1基因時，為了將目的基因與質(zhì)粒定向連接，應(yīng)在兩種引物的一端分別加上限制酶__________________識別與切割的序列；PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳結(jié)果符合預(yù)期，但仍需通過基因測序進(jìn)一步確認(rèn)，原因是________________________________________________________。E