2021屆二輪復(fù)習(xí)微生物的利用及傳統(tǒng)

發(fā)酵技術(shù)作業(yè)（統(tǒng)考版）

1.（2020?樂山三模）下面是關(guān)于微生物的培養(yǎng)和研究的一些問題，請

回答：

⑴觀察這些微生物的菌落所用的培養(yǎng)基類型是__________。培養(yǎng)基

中不加入可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物。

⑵微生物接種最常用的方法有o其

中既可分離又可計(jì)數(shù)活菌的接種方法是，原因是

⑶分離分解尿素的細(xì)菌時(shí)，培養(yǎng)基中需加入指示劑。而分

離分解纖維素的細(xì)菌時(shí)，在培養(yǎng)基中需加入染料來篩選。

解析（1）菌落是指單個(gè)微生物在固體培養(yǎng)基上經(jīng)過繁殖形成的肉眼

可見的子細(xì)胞群體；自養(yǎng)微生物可以利用CO2合成有機(jī)物，所以在

培養(yǎng)時(shí)不需要添加有機(jī)碳源。（2）常用的微生物接種方法有平板劃線

法和稀釋涂布平板法；利用稀釋涂布平板法可以進(jìn)行計(jì)數(shù)，原因是當(dāng)

樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面的一個(gè)菌落就來源于稀釋液中的

一個(gè)活菌。（3）鑒別分解尿素的微生物時(shí)，需要加入酚紅指示劑；鑒

別分解纖維素的微生物時(shí)，用剛果紅染料染色。

答案（1）固體培養(yǎng)基有機(jī)碳源

⑵平板劃線法、稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法當(dāng)樣品的稀釋

度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面的一個(gè)菌落就來源于稀釋液中的一個(gè)活菌

（3）酚紅剛果紅

2.（2020?衡陽三模）已知微生物P是一種可以分解尿素的細(xì)菌，微生

物Q是一種可以分解纖維素的微生物。請回答：

⑴由于微生物形體微小，不便于直接觀察，因此對微生物的了解通

常是觀察其群體的特征，該群體就是生長在固體培養(yǎng)基上的

⑵根據(jù)微生物功能分析，微生物Q能產(chǎn)生酶。

⑶如果從土壤中分離得到微生物P并對其活菌數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，通常接

種的方法是________________,為了獲得好的計(jì)數(shù)效果，要對培養(yǎng)的

菌液進(jìn)行c

（4）在某次實(shí)驗(yàn)中，統(tǒng)計(jì)到平板內(nèi)微生物P的菌落數(shù)是348個(gè)，試分

析此結(jié)果與真實(shí)值相比是（填“偏大”或“偏小”），理由是

⑸在某次實(shí)驗(yàn)中，觀察到平板內(nèi)菌落分布情況如圖所示，試分析原

因是_________________________________________________________

解析（1）單個(gè)微生物不容易觀察，但在固體培養(yǎng)基上形成一個(gè)肉眼

可見的子細(xì)胞群體，稱為菌落。（2）微生物Q可以分解纖維素，說明

可以產(chǎn)生纖維素酶。（3）對微生物的計(jì)數(shù)常用的接種方法是稀釋涂布

平板法，為獲得好的計(jì)數(shù)效果，要對培養(yǎng)的菌液進(jìn)行梯度稀釋，獲得

菌落數(shù)在30?300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。（4）利用稀釋涂布平板法進(jìn)行微

生物計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一

個(gè)菌落，所以統(tǒng)計(jì)的結(jié)果偏小。另外，稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，菌落

數(shù)不能太多，否則菌落很容易連在一起。（5）從題圖平板中看出，菌

落集中在一起，可能的原因是涂布不均勻。

答案（1）菌落

（2）纖維素

⑶稀釋涂布平板法梯度稀釋

（4）偏小菌落數(shù)太多時(shí)，菌落很容易重疊；當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在

一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落

（5）涂布不均勻

3.（2020?濮陽二模）“分離”作為一種傳統(tǒng)生物技術(shù)，在生產(chǎn)實(shí)踐中

具有廣泛的用途。請回答下列有關(guān)微生物的分離純化和血紅蛋白分離

的問題：

⑴微生物分離實(shí)驗(yàn)中常用的接種工具有;分離純化微

生物的方法有很多，最常用的是平板劃線法和，平

板劃線法是通過________________________________，從而實(shí)現(xiàn)對微

生物的分離。

⑵已知一種有機(jī)物X（僅含有C、H兩種元素）不易降解，會造成環(huán)境

污染。要從土壤中篩選出能高效降解有機(jī)物X的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)

基時(shí)應(yīng)以作為唯一碳源，因此這類培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)

基；在接種前，通常要隨機(jī)選取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時(shí)

間，這樣做的目的是o

⑶分離不同種類的蛋白質(zhì)常用凝膠色譜法，該方法是根據(jù)

對蛋白質(zhì)進(jìn)行分離,利用血紅蛋白作為分離樣

品的優(yōu)點(diǎn)有____________________________________________________

___________________________________________________________________________________________________________________________________________O

解析（1）微生物接種和分離純化的方法最常用的是平板劃線法和稀

釋涂布平板法，使用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器。平板劃線法

是通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面的連續(xù)劃線，使聚集的菌體逐步稀釋

以便獲得單個(gè)菌落，從而實(shí)現(xiàn)對微生物的分離。（2）要篩選能降解有

機(jī)物X的細(xì)菌，應(yīng)該以有機(jī)物X作為唯一的碳源，只有能分解有機(jī)

物X的細(xì)菌才能生長，其他不能利用有機(jī)物X的細(xì)菌不能生長，這

種類型的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空

白平板先培養(yǎng)一段時(shí)間，用于檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。（3）凝

膠色譜法是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)。由于血紅蛋白有顏

色，利用血紅蛋白作為分離樣品能清晰觀察到紅色的區(qū)帶在洗脫過程

中的移動情況。

答案（1）接種環(huán)、涂布器稀釋涂布平板法接種環(huán)在固體培養(yǎng)基

表面的連續(xù)劃線

⑵有機(jī)物X選擇檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格

⑶相對分子質(zhì)量的大小能清晰觀察到紅色的區(qū)帶在洗脫過程中的

移動情況

4.（2020?曲靖二模）枯草芽農(nóng)桿菌產(chǎn)生的蛋白酶在醫(yī)藥和化工等領(lǐng)域

具有重要的價(jià)值。為篩選蛋白酶產(chǎn)量高的枯草芽泡桿菌菌株，分別將

浸過不同菌株的提取液（a?e）及無菌水⑴的無菌圓紙片置于平板培

養(yǎng)基表面，在37c恒溫箱中放置2?3天，結(jié)果如圖所示。請回答問

題：

滅菌后培養(yǎng)基中高濃度的

蛋白質(zhì)導(dǎo)致培養(yǎng)基不透明

⑴在培養(yǎng)包括枯草芽抱桿菌在內(nèi)的異養(yǎng)型微生物時(shí)，培養(yǎng)基營養(yǎng)成

分應(yīng)包括水和，配制如圖培養(yǎng)基的基本步驟是計(jì)算

一稱量f一滅菌f倒平板。

（2）a?e中蛋白酶產(chǎn)量最高的菌株是_______（用字母回答）,判斷依據(jù)

是。

⑶分離和純化枯草芽抱桿菌可用稀釋涂布平板法。在進(jìn)行稀釋涂布

平板操作時(shí)，要將菌液進(jìn)行一系列的，涂布時(shí)，要將涂布器

末端浸在盛有體積分?jǐn)?shù)為的燒杯中。

解析（1）培養(yǎng)基營養(yǎng)成分應(yīng)包括水和無機(jī)鹽、碳源、氮源，配制題

圖固體培養(yǎng)基的基本步驟是計(jì)算一稱量f溶化f滅菌—倒平板。

（2）a?e中，a周圍的透明圈最大，說明其產(chǎn)生的蛋白酶數(shù)量最多，

蛋白質(zhì)分解的效果最好。（3）分離和純化枯草芽袍桿菌可用稀釋涂布

平板法，在進(jìn)行稀釋涂布平板操作時(shí)，要將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀

釋，涂布時(shí)，要將涂布器末端浸在盛有體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精的燒

杯中，再引燃進(jìn)行灼燒滅菌。

答案（1）無機(jī)鹽、碳源、氮源溶化

（2）aa周圍的透明圈最大，說明其產(chǎn)生的蛋白酶數(shù)量最多

⑶梯度稀釋70%的酒精

5.（2020?開封三模）生物技術(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中廣泛應(yīng)用，請回答相應(yīng)問

題：

⑴腐乳制作中鹽、酒和各種香辛料的作用的相同之處是

(2)如圖1是某生物活動小組記錄的3種食鹽濃度下泡菜中的亞硝酸

鹽含量與發(fā)酵天數(shù)的關(guān)系圖。據(jù)圖分析選擇濃度的食鹽制

作，且在天以后食用較為適宜。

6

5

4

3

2

1

■^3579IIl'3||.jfnj；＜|

圖I

⑶用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀

釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果：涂布的3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是27、

169和176,取平均數(shù)124。請對該實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度進(jìn)行分析：

(4)圖2中所示的接種方法不能對土壤中的纖維素分解菌進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)

數(shù)，其原因是__________________________________________

圖2

解析(1)腐乳制作中鹽、酒和各種香辛料都能調(diào)味、殺菌防腐。(2)

據(jù)題圖1分析，選擇5%濃度的食鹽制作，且在11(11?13)天以后泡

菜中的亞硝酸鹽含量最低，食用較為適宜。(3)因?yàn)?個(gè)平板的計(jì)數(shù)

結(jié)果與另2個(gè)相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差，不能簡單地用其平均數(shù)作

為最終結(jié)果，所以該實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度低。（4）多個(gè)細(xì)菌可能連在一起

形成一個(gè)菌落，導(dǎo)致菌落數(shù)不能準(zhǔn)確反映實(shí)際細(xì)菌數(shù)；劃線過程中菌

液的稀釋倍數(shù)未知，導(dǎo)致無法計(jì)算原土壤中的細(xì)菌數(shù)。因此題圖2

中所示的接種方法即平板劃線法不能對土壤中的纖維素分解菌進(jìn)行

準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。

答案（1）調(diào)味、殺菌防腐

（2）5%11（11?13）

⑶實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度低，因?yàn)?個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差懸殊,

結(jié)果的重復(fù)性差，不能簡單地用其平均數(shù)作為最終結(jié)果

（4）多個(gè)細(xì)菌可能連在一起形成一個(gè)菌落，導(dǎo)致菌落數(shù)不能準(zhǔn)確反映

實(shí)際細(xì)菌數(shù)；劃線過程中菌液的稀釋倍數(shù)未知，導(dǎo)致無法計(jì)算原土壤

中的細(xì)菌數(shù)

6.（2020?丹東二模）禾本科植物小麥?zhǔn)俏覈匾募Z食作物。在小麥

的深加工過程中，以其麥芽為原料制取的胚芽油，富含維生素E、亞

油酸等高營養(yǎng)活性物質(zhì)；以其種子、秸稈為原料制取的葡萄糖，經(jīng)加

工可制得酒、醋等產(chǎn)品。如圖是利用小麥為原料制備農(nóng)產(chǎn)品的流程圖

（圖中數(shù)字代表過程），請回答問題：

「秸稈一纖維素一葡萄糖二釀酒二釀醋

鐘/淀粉一一'

I種子V

I麥芽（胚芽）一胚芽油

⑴若①過程中含有醋酸菌，在發(fā)酵旺盛時(shí),醋酸菌（填“能”

或“不能”）將糖發(fā)酵為醋酸。從培養(yǎng)條件角度分析，主要原因是:

⑵釀酒完成后，可以用來檢測酒精的生成，酒精與之

反應(yīng)呈現(xiàn)________色。

⑶為鑒定醋是否釀制成功，除可以通過觀察菌膜、嘗、嗅之外，還

可以通過檢測和比較作進(jìn)一步的鑒定。

解析（1）題圖①為酒精發(fā)酵過程，酒精發(fā)酵時(shí)的缺氧環(huán)境能抑制醋

酸菌生長，醋酸菌的發(fā)酵條件是氧氣充足，因此若①過程中含有醋酸

菌，在發(fā)酵旺盛時(shí)，醋酸菌不能將糖發(fā)酵為醋酸。（2）酒精可用（酸性）

重鋁酸鉀來檢測，顏色由橙色變成灰綠色。（3）為鑒定醋是否釀制成

功，除可以通過觀察菌膜、嘗、嗅之外，還可以通過檢測和比較（醋

酸發(fā)酵前后的）pH作進(jìn)一步的鑒定。

答案（1）不能酒精發(fā)酵時(shí)的缺氧環(huán)境能抑制醋酸菌生長，醋酸菌

的發(fā)酵條件是氧氣充足

（2）（酸性）重鋁酸鉀灰綠

⑶（醋酸發(fā)酵前后的）pH

7.（2020?鄭州三模）某學(xué)校生物興趣小組學(xué)習(xí)完生物技術(shù)實(shí)踐后，欲

進(jìn)行傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作，請分析他們的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作過

程，根據(jù)所學(xué)知識回答下列問題。

⑴將果汁裝入發(fā)酵裝置時(shí)，要留有約1/3的空間，這種做法的目的是

⑵如果將制作好的果酒用于果醋的制作，主要是利用醋酸菌將乙醇

轉(zhuǎn)化為，然后再轉(zhuǎn)化為o

⑶制作腐乳時(shí)，要?jiǎng)?chuàng)造合適的條件讓豆腐長“毛”，這些毛狀的微

生物是_______,它產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成

;產(chǎn)生的脂肪酶可將脂肪水解為

，這樣使豆腐的口味更加豐富。

（4）泡菜腌制過程中，要注意控制好腌制的

,這些條件都會影響亞硝酸鹽的含量。測定亞硝酸

鹽含量依據(jù)的原理是：在鹽酸酸化的條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺

酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1一蔡基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合生成

________色染料.

解析（1）酵母菌是兼性厭氧型生物，發(fā)酵過程中會產(chǎn)生CO2,所以

預(yù)留1/3的空間可以為酵母菌大量繁殖提供適量的氧氣；防止發(fā)酵旺

盛時(shí)汁液溢出。（2）果醋的制作原理是醋酸菌將乙醇轉(zhuǎn)化為乙醛，再

轉(zhuǎn)化成乙酸。（3）腐乳的制作原理是利用毛霉生長過程中產(chǎn)生的蛋白

酶將蛋白質(zhì)分解成氨基酸和小分子肽;產(chǎn)生的脂肪酶將脂肪水解為甘

油和脂肪酸。（4）泡菜腌制過程中，腌制的時(shí)間、溫度和食鹽的用量

會影響亞硝酸鹽的含量；測定亞硝酸鹽含量依據(jù)的原理是：在鹽酸酸

化的條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1

一蔡基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合生成玫瑰紅色物質(zhì)。

答案（1）為酵母菌大量繁殖提供適量的氧氣；防止發(fā)酵旺盛時(shí)汁液

溢出

（2）乙醛乙酸

⑶毛霉小分子的肽和氨基酸甘油和脂肪酸

（4）時(shí)間、溫度和食鹽的用量玫瑰紅

8.（2020?梅州二模）微生物在自然界中無處不在，隨人類對微生物認(rèn)

識的加深，對其利用越來越廣泛，與我們的日常生活息息相關(guān)。結(jié)合

有關(guān)生物技術(shù)知識回答下列問題：

⑴制作葡萄酒時(shí)，首先需要把發(fā)酵瓶清洗干凈，然后用

消毒。發(fā)酵最終是否產(chǎn)生酒精，可用來檢驗(yàn)。某同

學(xué)在發(fā)酵過程中發(fā)現(xiàn)葡萄酒變酸，表面觀察到菌膜，造成此現(xiàn)象的微

生物是________________，該微生物新陳代謝類型為0

（2）民間制作腐乳時(shí)（填“需要”或“不需要”）滅菌。生產(chǎn)上

為了獲取純種的毛霉菌種，實(shí)驗(yàn)室一般采用平板劃線法_______菌

種，然后從中挑出所需菌種接種到另一個(gè)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時(shí)間后

會觀察到菌落，菌落的含義是_______________________________

_____________________________________________________________________________________O

解析（1）制作葡萄酒時(shí)，發(fā)酵瓶清洗干凈后，需用70%的酒精消毒。

酒精和酸性重鋸酸鉀溶液反應(yīng)呈灰綠色，故可用酸性重輅酸鉀溶液來

檢驗(yàn)是否產(chǎn)生酒精。發(fā)酵過程中發(fā)現(xiàn)葡萄酒變酸，表面觀察到菌膜，

是因?yàn)榇姿峋拇罅糠敝?，醋酸菌新陳代謝類型為異養(yǎng)需氧型。（2）

民間制作腐乳時(shí)，豆腐塊上生長的毛霉來自空氣中的毛霉袍子，不需

要滅菌。實(shí)驗(yàn)室一般采用平板劃線法分離純化菌種。菌落是指一個(gè)細(xì)

胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體。

答案（1）70%的酒精酸性重倍酸鉀溶液醋酸菌異養(yǎng)需氧型

⑵不需要分離純化一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體

9.（2020?大連二模）陳醋是我國發(fā)明的傳統(tǒng)調(diào)味品之一，釀制及食用

已有3000多年歷史。陳醋生產(chǎn)工藝流程如圖所示。

糖化酒精醋酸處理

淀粉類原料一一葡萄糖不二成熟酒醋不一成熟醋醋一一成品醋

友酵發(fā)酵

⑴在糖化階段添加酶制劑需要控制反應(yīng)溫度，這是因?yàn)?/p>

⑵在酒精發(fā)酵階段需添加酵母菌，在操作過程中，發(fā)酵罐先通氣,

后密閉。先通氣的目的是______________________________________

技術(shù)員定時(shí)抽取發(fā)酵液，向發(fā)酵液中滴加酸性重鋁酸鉀溶液，以是否

呈現(xiàn)色來判斷是否有酒精產(chǎn)生,若要使檢驗(yàn)的結(jié)果更有說服

力，應(yīng)該O

⑶利用醋酸菌獲得醋酸的條件有兩種情況，一是在

時(shí)，將糖分解成醋酸；二是在糖源不充足時(shí)，也可

以利用酒精生成醋酸。

（4）研究表明，在陳醋的釀造過程中，起主導(dǎo)作用的是醋酸菌，而乳

酸菌也存在于醋醋中，其代謝產(chǎn)生的乳酸含量的高低是影響陳醋風(fēng)味

的重要因素。成熟醋酷中乳酸菌的種類明顯減少，主要原因是：發(fā)酵

后期（至少寫二種）等環(huán)境因素的變化，

______________________________________，淘汰了部分乳酸菌種類。

解析（1）糖化階段以淀粉類為原料，需要添加淀粉酶和麥芽糖酶制

劑形成葡萄糖，由于在最適溫度條件下酶的活性最強(qiáng)，因此在糖化階

段添加酶制劑需要控制反應(yīng)溫度。（2）在酒精發(fā)酵階段需添加酵母菌,

在操作過程中，發(fā)酵罐先通氣，后密閉。先通氣的目的是讓酵母菌進(jìn)

行有氧呼吸，有利于酵母菌的繁殖，有利于密閉時(shí)獲得更多的酒精產(chǎn)

物。酸性重輅酸鉀溶液遇到酒精呈現(xiàn)灰綠色，若要使檢驗(yàn)的結(jié)果更有

說服力，應(yīng)該設(shè)計(jì)對照（實(shí)驗(yàn)）。（3）利用醋酸菌獲得醋酸的條件有兩種

情況，一是在氧氣和糖源都充足時(shí)，將糖分解成醋酸；二是在糖源不

充足時(shí)，也可以利用酒精生成醋酸。（4）在陳醋的釀造過程中，起主

導(dǎo)作用的是醋酸菌，成熟醋酷中乳酸菌的種類明顯減少，主要原因是

發(fā)酵后期氧氣、營養(yǎng)物質(zhì)、pH等環(huán)境因素的變化，加劇了不同種乳

酸菌之間的種間競爭（或競爭），淘汰了部分乳酸菌種類。

答案（1）淀粉酶在最適溫度條件下催化能力最強(qiáng)

⑵讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，有利于酵母菌的繁殖，有利于密閉時(shí)獲

得更多的酒精產(chǎn)物灰綠設(shè)計(jì)對照（實(shí)驗(yàn)）

⑶氧氣和糖源都充足

（4）氧氣、營養(yǎng)物質(zhì)、pH（答出2點(diǎn)即可）加劇了不同種乳酸菌之間

的種間競爭

10.（2020?吳忠模擬）人們利用微生物發(fā)酵制作果酒、果醋的歷史，源

遠(yuǎn)流長。果酒的制作離不開酵母菌，果醋的制作需要醋酸菌。

⑴果酒的制作流程是：挑選葡萄一沖洗一榨汁一酒精發(fā)酵。在這個(gè)

過程中沒有接種酵母菌的環(huán)節(jié)，發(fā)酵時(shí)的酵母菌來自

;若用密閉的裝置進(jìn)行酒精發(fā)酵，則

在發(fā)酵過程中需每