生物醫(yī)藥慢病毒技術(shù)員考試試卷與答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.慢病毒載體的基因組是？A.單鏈DNAB.雙鏈DNAC.單鏈RNAD.雙鏈RNA2.以下哪種細(xì)胞不易被慢病毒感染？A.293T細(xì)胞B.神經(jīng)元細(xì)胞C.紅細(xì)胞D.肝癌細(xì)胞3.慢病毒包裝時(shí)常用的質(zhì)粒不包括？A.包裝質(zhì)粒B.包膜質(zhì)粒C.目的基因質(zhì)粒D.抗性基因質(zhì)粒4.慢病毒保存的最佳溫度是？A.4℃B.-20℃C.-80℃D.37℃5.慢病毒感染細(xì)胞時(shí)，常用的增強(qiáng)感染效率的試劑是？A.青霉素B.鏈霉素C.聚凝胺D.胰蛋白酶6.慢病毒滴度的單位是？A.CFU/mlB.TU/mlC.PFU/mlD.IU/ml7.以下哪種方法不能用于檢測(cè)慢病毒滴度？A.qPCRB.流式細(xì)胞術(shù)C.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)D.平板計(jì)數(shù)法8.慢病毒載體構(gòu)建過(guò)程中，連接目的基因和載體常用的酶是？A.限制性內(nèi)切酶B.DNA聚合酶C.連接酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶9.慢病毒感染細(xì)胞后，目的基因整合到細(xì)胞基因組的方式是？A.隨機(jī)整合B.定點(diǎn)整合C.不整合D.以上都不對(duì)10.制備慢病毒時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)用的血清要求是？A.普通胎牛血清B.熱滅活胎牛血清C.無(wú)血清D.馬血清二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.慢病毒的特點(diǎn)包括？A.可感染分裂和非分裂細(xì)胞B.免疫原性低C.攜帶基因容量大D.安全性高2.慢病毒包裝體系包含的質(zhì)粒有？A.pCMV-dR8.2dvprB.pMD2.GC.目的基因表達(dá)質(zhì)粒D.pUC193.影響慢病毒感染效率的因素有？A.細(xì)胞狀態(tài)B.病毒滴度C.感染時(shí)間D.細(xì)胞密度4.檢測(cè)慢病毒滴度的方法有？A.熒光定量PCRB.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)熒光標(biāo)記C.免疫印跡法D.噬斑形成試驗(yàn)5.慢病毒載體構(gòu)建需要的工具酶有？A.限制性內(nèi)切酶B.DNA連接酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.Taq酶6.慢病毒在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用包括？A.基因治療B.細(xì)胞治療C.藥物篩選D.疾病模型建立7.以下哪些細(xì)胞可用于慢病毒包裝？A.293T細(xì)胞B.HeLa細(xì)胞C.NIH3T3細(xì)胞D.Jurkat細(xì)胞8.慢病毒保存過(guò)程中需要注意的是？A.避免反復(fù)凍融B.保存于液氮C.標(biāo)注信息D.與其他病毒分開保存9.慢病毒感染實(shí)驗(yàn)中，需要設(shè)置的對(duì)照組有？A.未感染細(xì)胞對(duì)照組B.空載體感染對(duì)照組C.陽(yáng)性對(duì)照病毒感染組D.藥物處理對(duì)照組10.構(gòu)建慢病毒載體時(shí)，對(duì)目的基因的要求有？A.序列正確B.無(wú)突變C.有合適的酶切位點(diǎn)D.長(zhǎng)度不宜過(guò)長(zhǎng)三、判斷題（每題2分，共20分）1.慢病毒可以直接從自然界獲取用于基因治療。（）2.慢病毒感染細(xì)胞時(shí)不需要受體。（）3.包裝慢病毒的細(xì)胞代數(shù)越高越好。（）4.慢病毒滴度越高，感染效率一定越高。（）5.構(gòu)建慢病毒載體時(shí)，目的基因必須正向插入載體。（）6.慢病毒可以感染所有類型的哺乳動(dòng)物細(xì)胞。（）7.保存慢病毒時(shí)，加入甘油可以提高其穩(wěn)定性。（）8.檢測(cè)慢病毒滴度只能用生物學(xué)方法。（）9.慢病毒載體構(gòu)建成功后無(wú)需驗(yàn)證。（）10.慢病毒感染細(xì)胞后，目的基因一定會(huì)表達(dá)。（）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1.簡(jiǎn)述慢病毒載體的優(yōu)點(diǎn)。答：可感染分裂和非分裂細(xì)胞，能實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期穩(wěn)定的基因表達(dá)；免疫原性低，在體內(nèi)引起的免疫反應(yīng)較弱；攜帶基因容量相對(duì)較大，可滿足多種基因?qū)胄枨螅话踩韵鄬?duì)較高，經(jīng)過(guò)改造降低了野生型病毒風(fēng)險(xiǎn)。2.簡(jiǎn)述慢病毒包裝的基本流程。答：首先構(gòu)建含有目的基因的表達(dá)質(zhì)粒，同時(shí)準(zhǔn)備包裝質(zhì)粒和包膜質(zhì)粒。將這三種質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到包裝細(xì)胞（如293T細(xì)胞）中，細(xì)胞內(nèi)質(zhì)粒表達(dá)相應(yīng)蛋白和RNA進(jìn)行病毒組裝。培養(yǎng)一定時(shí)間后收集含有慢病毒的上清液，再進(jìn)行濃縮、純化等處理獲得高滴度慢病毒。3.如何提高慢病毒感染細(xì)胞的效率？答：確保細(xì)胞處于良好狀態(tài)，選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞；提高病毒滴度，使用高質(zhì)量慢病毒；適當(dāng)延長(zhǎng)感染時(shí)間；添加聚凝胺等促進(jìn)感染的試劑；控制合適的細(xì)胞密度，保證細(xì)胞有足夠空間和營(yíng)養(yǎng)進(jìn)行感染。4.簡(jiǎn)述檢測(cè)慢病毒滴度的意義。答：明確慢病毒制劑中病毒顆粒的數(shù)量，便于準(zhǔn)確控制感染細(xì)胞時(shí)的病毒用量，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性和可重復(fù)性；判斷慢病毒包裝和制備過(guò)程是否成功，若滴度過(guò)低可分析原因改進(jìn)；為后續(xù)基因治療等應(yīng)用提供劑量參考，確保安全性和有效性。五、討論題（每題5分，共20分）1.討論慢病毒在基因治療中的潛在風(fēng)險(xiǎn)及應(yīng)對(duì)策略。答：潛在風(fēng)險(xiǎn)有：病毒整合可能導(dǎo)致插入突變，激活原癌基因或破壞抑癌基因；免疫反應(yīng)，雖免疫原性低但仍可能引發(fā)免疫應(yīng)答；存在野生型病毒回復(fù)突變風(fēng)險(xiǎn)。應(yīng)對(duì)策略：優(yōu)化載體設(shè)計(jì)，減少插入突變風(fēng)險(xiǎn)；進(jìn)行充分的臨床前安全性評(píng)估；密切監(jiān)測(cè)患者免疫反應(yīng)，必要時(shí)進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)；嚴(yán)格控制生產(chǎn)過(guò)程，防止野生型病毒污染。2.探討在慢病毒載體構(gòu)建中，如何確保目的基因正確表達(dá)。答：首先要保證目的基因序列正確，無(wú)突變和移碼。選擇合適的載體啟動(dòng)子，其活性要與目的基因表達(dá)需求匹配。構(gòu)建載體時(shí)確保目的基因正確定向插入，閱讀框無(wú)誤。對(duì)構(gòu)建好的載體進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。在細(xì)胞水平進(jìn)行表達(dá)驗(yàn)證，可通過(guò)Westernblot等檢測(cè)目的蛋白表達(dá)，如有問(wèn)題分析調(diào)整載體構(gòu)建策略。3.當(dāng)慢病毒感染效率不理想時(shí)，從多個(gè)方面分析可能的原因及解決方法。答：細(xì)胞方面，可能細(xì)胞狀態(tài)差、密度不合適，應(yīng)選用健康活躍、密度適中細(xì)胞；病毒方面，滴度過(guò)低，需重新包裝或濃縮病毒；感染條件如時(shí)間、溫度不合適，延長(zhǎng)感染時(shí)間或調(diào)整溫度；也可能存在抑制劑等影響，更換培養(yǎng)液去除抑制因素；載體構(gòu)建問(wèn)題導(dǎo)致表達(dá)不佳，重新構(gòu)建驗(yàn)證載體。4.闡述慢病毒在細(xì)胞治療中的應(yīng)用及面臨的挑戰(zhàn)。答：應(yīng)用：將特定基因?qū)爰?xì)胞，如修飾免疫細(xì)胞增強(qiáng)抗腫瘤能力，或糾正細(xì)胞缺陷基因用于治療遺傳疾病。挑戰(zhàn)：病毒載體的安全性擔(dān)憂，如整合風(fēng)險(xiǎn)；細(xì)胞來(lái)源和質(zhì)量控制難度大，確保細(xì)胞活性和功能；臨床應(yīng)用的標(biāo)準(zhǔn)化，包括病毒制備、細(xì)胞處理等環(huán)節(jié)；高昂的成本限制其廣泛應(yīng)用，需降低成本提高可及性。答案一、單項(xiàng)選擇題