ICS65.150

CCSB52

41

河南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB41/T2761—2024

淡水常見經(jīng)濟(jì)綠藻規(guī)?；a(chǎn)技術(shù)規(guī)范

2024-10-10發(fā)布2025-01-09實(shí)施

河南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB41/T2761—2024

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................3

2規(guī)范性引用文件.....................................................................3

3術(shù)語(yǔ)和定義.........................................................................3

4培養(yǎng)要求...........................................................................4

5一級(jí)培養(yǎng)...........................................................................4

6二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng).......................................................................5

7規(guī)模化生產(chǎn).........................................................................5

8采收...............................................................................6

9保藏...............................................................................6

10生產(chǎn)記錄..........................................................................7

附錄A（資料性）簡(jiǎn)化BG11培養(yǎng)基配方..................................................8

參考文獻(xiàn)..............................................................................9

I

DB41/T2761—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請(qǐng)注意本文件某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由河南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。

本文件由河南省漁業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（HN/TC36）歸口。

本文件起草單位：河南師范大學(xué)、河南省水產(chǎn)技術(shù)推廣站、河南省水產(chǎn)科學(xué)研究院。

本文件主要起草人：張曼、王先鋒、郜小龍、許歡歡、吳小軍、胡建平、楊博、呂緒聰、張圓圓、

趙道全、張開松、吳麗莉。

II

DB41/T2761—2024

淡水常見經(jīng)濟(jì)綠藻規(guī)?；a(chǎn)技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了淡水常見經(jīng)濟(jì)綠藻規(guī)模化生產(chǎn)的培養(yǎng)要求、一級(jí)培養(yǎng)、二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)、規(guī)?；a(chǎn)、

采收、保藏和生產(chǎn)記錄等內(nèi)容。

本文件適用于生產(chǎn)單位淡水常見經(jīng)濟(jì)綠藻的自養(yǎng)規(guī)模化生產(chǎn)。常見經(jīng)濟(jì)綠藻種類有：小球藻

（Chlorella）、柵藻（Scenedesmus）、卵囊藻（Oocystis）等屬中的種類。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6920水質(zhì)pH值的測(cè)定

GB11607漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)

NY/T5361無(wú)公害產(chǎn)品淡水養(yǎng)殖產(chǎn)地環(huán)境條件

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

活化藻種

將處于休眠狀態(tài)的藻種放入適宜的培養(yǎng)基中活化，得到無(wú)菌的活性藻種。

3.2

一次性培養(yǎng)

將藻類接種于培養(yǎng)基并培養(yǎng)至峰值密度后，一次性收獲的培養(yǎng)方式。

[來(lái)源：SC/T2047—2006，3.6，有修改]

3.3

半連續(xù)培養(yǎng)

將藻類接種于培養(yǎng)基并培養(yǎng)至峰值密度后，一部分藻液用于收獲，另一部分被保留在培養(yǎng)容器中繼

續(xù)培養(yǎng)的方式。

[來(lái)源：SC/T2047—2006，3.7，有修改]

3.4

無(wú)菌培養(yǎng)

在滅菌條件下進(jìn)行的藻種純培養(yǎng)。

3.5

單種培養(yǎng)

有細(xì)菌共存條件下的單一藻種培養(yǎng)。

[來(lái)源：SC/T2047—2006，3.4，有修改]

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4培養(yǎng)要求

4.1環(huán)境

應(yīng)符合NY/T5361的規(guī)定。

4.2水質(zhì)

應(yīng)符合GB11607的要求。

4.3場(chǎng)地及設(shè)備

4.3.1場(chǎng)地條件

應(yīng)具備室外場(chǎng)地、藻種保藏室、一級(jí)培養(yǎng)室、二級(jí)培養(yǎng)場(chǎng)、規(guī)?；a(chǎn)場(chǎng)和清洗滅菌室等6個(gè)功能

分區(qū)。

4.3.2室外場(chǎng)地

應(yīng)建有室外儲(chǔ)水池、沉淀池、砂濾罐、加熱罐，以及所需的輸水管道。

4.3.3藻種保藏室

應(yīng)配備放置固體斜面或液體藻種的光照培養(yǎng)架，空調(diào)、冰箱或液氮罐。

4.3.4一級(jí)培養(yǎng)室

應(yīng)配有光照通氣培養(yǎng)架、超凈工作臺(tái)、控溫條件設(shè)施、分光光度計(jì)、顯微鏡、pH計(jì)等。

4.3.5二級(jí)培養(yǎng)場(chǎng)

應(yīng)建有陽(yáng)光房、控溫設(shè)施、進(jìn)水和排水管道，配備100L～500L密閉玻璃柱或100L～500L開放式

塑料桶或100L～500L開放式水族箱、通氣裝置、二氧化碳裝置等。

4.3.6規(guī)?；a(chǎn)場(chǎng)

應(yīng)具備控溫設(shè)施、進(jìn)水和排水管道等，配備二氧化碳裝置、密閉式光生物反應(yīng)器或開放式培養(yǎng)池配

備攪拌裝置等。

4.3.7清洗滅菌室

應(yīng)配備高壓滅菌鍋、清洗水槽、烘箱等。

5一級(jí)培養(yǎng)

5.1培養(yǎng)基配制

按BG11藍(lán)綠藻培養(yǎng)基配方配制培養(yǎng)基，加入250mL、1L或5L的錐形瓶，加蓋防塵膜，高壓滅菌鍋

121℃滅菌30min。

5.2接種

4

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選擇細(xì)胞完整、無(wú)破碎，細(xì)胞內(nèi)含有明顯色素體的純化藻種進(jìn)行接種。在超凈工作臺(tái)上按接種濃度

20%的量，將藻種轉(zhuǎn)接于已滅菌的三角瓶中，加蓋防塵膜后，放置在光照培養(yǎng)架上連續(xù)培養(yǎng)7d左右。當(dāng)

藻液顏色變?yōu)榇渚G色后，再將藻種逐步擴(kuò)培，直至獲得二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)所需的液體量。

5.3培養(yǎng)

采用無(wú)菌培養(yǎng)。放置于光強(qiáng)為1000lux～3000lux的光照通氣培養(yǎng)架上，使用全光譜燈光光源，

通入經(jīng)0.22μm規(guī)格的濾膜過(guò)濾后的加富0.5%～1%二氧化碳的空氣，進(jìn)行通氣培養(yǎng)；控制水溫在22℃～

28℃范圍內(nèi)。藻細(xì)胞密度達(dá)到峰值密度后，獲得活化藻種。

6二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)

6.1容器消毒

選用100L～500L容器進(jìn)行消毒及培養(yǎng)。

次氯酸鈉法或二氧化氯法：使用有效氯濃度為0.1‰～0.3‰的次氯酸鈉或二氧化氯溶液浸泡消毒

24h，用蒸餾水沖洗至余氯檢測(cè)值低于0.05mg/L。

高錳酸鉀法：當(dāng)發(fā)生病蟲害后采用全面消殺，使用10mg/L～20mg/L的高錳酸鉀溶液浸泡30min

進(jìn)行消毒，用蒸餾水清洗干凈。

6.2培養(yǎng)基配制

采用BG11配方，用水應(yīng)符合GB11607規(guī)定。經(jīng)過(guò)砂濾系統(tǒng)去除水體中顆粒物質(zhì)和水生生物，加入有

3

效氯濃度為0.3‰的次氯酸鈉滅菌，采用25g/m硫代硫酸鈉（Na2S2O3）中和余氯，檢測(cè)余氯低于0.05mg/L

后方可用于培養(yǎng)基配制。

6.3接種

將活化好的藻種按照不低于培養(yǎng)體積10%的比例進(jìn)行接種，接種時(shí)間選取在上午8:00～10:00為宜，

接種時(shí)活化藻種與二級(jí)培養(yǎng)的培養(yǎng)基溫差小于5℃。

6.4培養(yǎng)

采用單種培養(yǎng)，使用管道式或平板式密閉培養(yǎng)器、培養(yǎng)槽或培養(yǎng)桶進(jìn)行。充入加富0.5%～1%二氧化

碳的空氣進(jìn)行通氣培養(yǎng)，通氣開口接入培養(yǎng)容器底部，充氣量確保藻液均勻懸浮。控制光照強(qiáng)度

3000lux～5000lux，溫度22℃～28℃，培養(yǎng)7d～10d，藻細(xì)胞密度達(dá)到峰值濃度后可轉(zhuǎn)入規(guī)模

化生產(chǎn)。

7規(guī)模化生產(chǎn)

7.1容器消毒

參照6.1次氯酸鈉法或二氧化氯法。

7.2培養(yǎng)基配制

采用簡(jiǎn)化BG11配方（見附錄A），用水符合GB11607的規(guī)定。用水需經(jīng)過(guò)砂濾系統(tǒng)過(guò)濾后方可用于

培養(yǎng)基配制。

5

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7.3接種

接種時(shí)間以上午8:00～10:00為宜。使用二級(jí)培養(yǎng)的藻種，一次性培養(yǎng)時(shí)按不低于培養(yǎng)體積10%進(jìn)行

接種，半連續(xù)培養(yǎng)時(shí)按不低于培養(yǎng)體積20%接種。

7.4生產(chǎn)條件

培養(yǎng)溫度20℃～30℃，供氣氣體為空氣或加富0.5%～1%二氧化碳的空氣。密閉培養(yǎng)時(shí)，在固定接

口處供氣，確保培養(yǎng)液循環(huán)流動(dòng)；開放式培養(yǎng)時(shí)，使用通氣泵底部供氣。藻液pH值控制在7～9之間，當(dāng)

pH值大于9時(shí)應(yīng)及時(shí)向藻液中補(bǔ)給二氧化碳。

規(guī)?；a(chǎn)藻細(xì)胞密度達(dá)到峰值濃度時(shí)采收。

7.5生產(chǎn)管理

7.5.1生長(zhǎng)監(jiān)測(cè)

每日監(jiān)測(cè)藻細(xì)胞密度。采用血球板計(jì)數(shù)法在光學(xué)顯微鏡下直接計(jì)數(shù)，監(jiān)測(cè)藻密度峰值。觀察藻液顏

色，出現(xiàn)發(fā)白、黃化、沉淀、菌膜或掛壁時(shí)，采用顯微鏡觀察藻細(xì)胞形態(tài)改變、或細(xì)胞聚團(tuán)現(xiàn)象時(shí)，應(yīng)

重新消毒滅菌培養(yǎng)。

7.5.2防蟲管理

觀察到原生動(dòng)物、輪蟲等生物出現(xiàn)時(shí)，加入4mg/L～10mg/L的有效氯進(jìn)行處理。重度污染時(shí)，需

要對(duì)培養(yǎng)裝置做好全面消毒滅菌后，重新培養(yǎng)。

7.5.3酸堿度管理

每日測(cè)定藻液pH值，測(cè)定方法應(yīng)符合GB/T6920的規(guī)定。控制藻液pH值在7～9范圍內(nèi)，當(dāng)超出適宜

范圍時(shí)，通入二氧化碳?xì)怏w降低藻液pH值。

8采收

8.1一次性培養(yǎng)的采收

規(guī)?；a(chǎn)結(jié)束時(shí)，將藻液全部采收。

8.2半連續(xù)培養(yǎng)的采收

規(guī)?；囵B(yǎng)結(jié)束時(shí)，采收部分藻液，剩余不低于20%的藻液作為下次規(guī)?；囵B(yǎng)的藻種，直接加入

培養(yǎng)基開展下次培養(yǎng)。

9保藏

9.1藻種保藏

常溫保藏：將藻種保藏在光照培養(yǎng)架上，持續(xù)在弱光（500lux～1000lux）、室溫（15℃～20℃）

條件下保藏。六個(gè)月后，加入新鮮培養(yǎng)基轉(zhuǎn)接活化后重新保藏。

超低溫保藏：將固態(tài)瓊脂保藏的藻種存放至液氮罐中。

9.2液體商品保藏

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將生產(chǎn)好的罐裝商品置于光照強(qiáng)度500lux～1000lux、溫度15℃～20℃的陽(yáng)光房保藏，保存3～

6個(gè)月。

10生產(chǎn)記錄

應(yīng)全面記錄藻種來(lái)源、各階段培養(yǎng)接種時(shí)間、接種量、培養(yǎng)基用量、溫度、pH、光照強(qiáng)度、藻密度、

藻狀態(tài)、采收時(shí)間、產(chǎn)地等信息。

A

A

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附錄A

（資料性）

簡(jiǎn)化BG11培養(yǎng)基配方

表A.1給出了簡(jiǎn)化BG11培養(yǎng)基配方。

表A.1簡(jiǎn)化