目錄TOC\o"1-3"\h\u24989摘要 摘要為了明確高纖維素酶活性的復(fù)合菌系在農(nóng)業(yè)廢棄物的循環(huán)利用中的作用。本研究將已有的兩株黑葉猴降解菌(X-01,X-02)以1:1的比例混合制備了復(fù)合菌系（HY-1），采用單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)對(duì)其羧甲基纖維素酶（CMC-ase）活性進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，當(dāng)接種量為2.23%；溫度為61.96℃；pH為6.14；時(shí)間為36.66h時(shí)，復(fù)合菌的CMC酶活性達(dá)到2.246U/mL，提高了1.09倍。HY-1具有發(fā)酵時(shí)間短、耐熱性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，在農(nóng)作物秸稈降解方面具有一定的應(yīng)用潛力。關(guān)鍵詞：黑葉猴；纖維素降解菌；復(fù)合菌；HY-1；產(chǎn)酶條件優(yōu)化AbstractToclarifytheroleofcompositebacterialstrainswithhighcellulaseactivityintherecyclingofagriculturalwaste.Thisstudypreparedacompositestrain(HY-1)bymixingtwoexistingblackleafmonkeydegradingbacteria(X-01,X-02)ina1:1ratio,andoptimizeditscarboxymethylcellulase(CMCase)activityusingsinglefactorandresponseexperiments.Theresultsshowedthatwhenthevaccinationamountwas2.23%;Thetemperatureis61.96℃;PHis6.14;At36.66hours,theCMCenzymeactivityofthecompositebacteriareached2.246U/mL,anincreaseof1.09times.HY-1hastheadvantagesofshortfermentationtimeandstrongheatresistance,andhascertainapplicationpotentialinthedegradationofcropstraw.Keywords:Fran?ois'langur(Trachypithecusfrancoisi);Compoundbacteria;Cellulosedegradingbacteria;HY-1;Optimizationofenzymeproductionconditions引言纖維素是一種廉價(jià)且分布廣泛的多糖物質(zhì)，是世界上最豐富的可再生資源REF_Ref24993\r\h[1]，也是農(nóng)業(yè)廢棄物的主要成分REF_Ref29585\r\h[2]。通常，大部分纖維素廢棄物是通過焚燒處理REF_Ref29719\r\h[3]，不僅浪費(fèi)了寶貴的農(nóng)業(yè)資源，而且造成嚴(yán)重的環(huán)境污染。隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，資源短缺可能成為經(jīng)濟(jì)進(jìn)一步持續(xù)增長(zhǎng)的阻力點(diǎn)。因此，開發(fā)利用纖維素資源對(duì)解決資源短缺問題具有重要意義。然而，目前纖維素并沒有得到有效使用，因?yàn)樗哂懈叨冉Y(jié)晶的結(jié)構(gòu)，且被堅(jiān)韌的木質(zhì)素層包圍REF_Ref29784\r\h[4]。一般的降解方法包括物理，化學(xué)和生物降解REF_Ref29830\r\h[5],生物降解主要是通過微生物分泌的酶進(jìn)行降解REF_Ref29875\r\h[6]，纖維素酶主要由細(xì)菌和真菌產(chǎn)生REF_Ref29957\r\h\#"[0]"[7-REF_Ref29970\r\h\#"[0]"9]，是實(shí)現(xiàn)纖維素生物利用的關(guān)鍵REF_Ref30124\r\h[10]，且生物降解由于其高效，成本低和對(duì)環(huán)境無污染等優(yōu)點(diǎn)成為最佳方法REF_Ref30199\r\h[11]。除土壤外，草食動(dòng)物腸道作為重要的纖維素降解菌的資源庫(kù)被廣泛探索。例如，Li等REF_Ref30264\r\h[12]從新鮮牛糞中分離出解淀粉芽孢桿菌MN-8，它能有效降解玉米秸稈中的木質(zhì)纖維素。Li等REF_Ref30313\r\h[13]從閩南豬糞中分離出產(chǎn)纖維素酶的菌株M2，并驗(yàn)證它有助于動(dòng)物代謝纖維素并產(chǎn)生小的有機(jī)酸，從而促進(jìn)動(dòng)物對(duì)飼料的消化、吸收和利用。Shang等REF_Ref30362\r\h[14]從藏豬糞便中分離出產(chǎn)纖維素酶菌株TL106，發(fā)現(xiàn)其對(duì)粗纖維、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、淀粉、阿拉伯木聚糖β-葡聚糖等具有良好的降解效果。然而，由于纖維素的化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜[1]，單個(gè)微生物菌株通常對(duì)纖維素的降解效率不是很高REF_Ref30705\r\h[15]。因此，越來越多的學(xué)者開始利用復(fù)合菌株的協(xié)同作用來提高纖維素的降解率。Wang等REF_Ref30770\r\h[16]設(shè)計(jì)了一個(gè)五菌株的復(fù)合體，顯著提高了苦參渣和秸稈的降解效率。Eida等REF_Ref30819\r\h[17]報(bào)道了從堆肥中分離出的由7菌株組成的纖維素降解復(fù)合菌的酶活性最高。Gu等REF_Ref30862\r\h[18]從稻田土壤樣本和腐爛的稻草中分離的六菌株，組成復(fù)合菌細(xì)后的半纖維素降解菌酶活性高達(dá)299U/mL。Jiang等REF_Ref30904\r\h[19]報(bào)道了五菌株的復(fù)合體纖維素降解效率顯著高于其單個(gè)成員。Zheng等REF_Ref30947\n\h[20]從常年寒冷的森林土壤中的微生物群落中分離出復(fù)合菌系LTF-27，有效降解了稻草纖維素、半纖維素和木質(zhì)素。Li等REF_Ref31093\n\h[21]從牦牛瘤胃中分離鑒定出兩株纖維分解菌（JFL12和JF85），協(xié)同加速了結(jié)構(gòu)碳水化合物的降解。黑葉猴以樹葉為食，尤其是嫩葉REF_Ref31146\n\h[22]，國(guó)內(nèi)主要分布在中國(guó)廣西、貴州和重慶南部的喀斯特山區(qū)REF_Ref31188\n\h[23]。根據(jù)適應(yīng)性進(jìn)化理論，相應(yīng)的微生物群落應(yīng)存在于黑葉猴的腸道中，以適應(yīng)其生活環(huán)境，并可能進(jìn)化為具有特定功能的微生物群落，可有效降解樹葉中的纖維素。然而，目前少有報(bào)道描述從黑葉猴腸道中分離和篩選纖維素降解菌。此前，我們從黑葉猴的糞便中分離出X-01和X-02細(xì)菌，這兩種細(xì)菌都表現(xiàn)出較強(qiáng)的纖維素降解能力。在本研究中，為了明確該復(fù)合菌系的纖維素降解能力，我們將X-01和X-02細(xì)菌以1:1的比例混合形成復(fù)合菌HY-1，并優(yōu)化培養(yǎng)條件以最大限度地提高復(fù)合細(xì)菌的纖維素酶產(chǎn)量，以期對(duì)農(nóng)業(yè)廢棄物的資源化利用方面提供參考。材料與方法1.1材料1.1.1菌株從黑葉猴糞便中分離并鑒定出兩株細(xì)菌菌株（X-01和X-02）。在初步篩選試驗(yàn)中，兩株菌在CMC富集培養(yǎng)基上均有較大透明圈，表明具有較好的纖維素降解能力。1.1.2儀器高壓滅菌鍋，型號(hào)YA28X6T/B，致微廈門儀器有限公司；恒溫水浴鍋，上海市一恒科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)DK-8D；恒溫培養(yǎng)箱，上海市博訊實(shí)業(yè)有限公司，型號(hào)BMJ-250C；超凈工作臺(tái)，蘇州市安泰空氣技術(shù)有限公司，型號(hào)SW-CJ-2FD。1.1.3培養(yǎng)基表1培養(yǎng)基配置方法Table1.Mediaconfigurationmethods培養(yǎng)基名稱配置藥品CMC液體培養(yǎng)基蛋白胨10g、NaCl5g、酵母粉5g、CMC-Na15g、蒸餾水1L、NH4NO31.0、MgSO4·7H2O0.5、KH2PO41、pH7.0～7.2濾紙降解培養(yǎng)基KH2PO41g、NaCl0.1g、MgSO4·7H2O0.5g、NaNO31.0g、酵母粉0.1gCaCl20.1g、蒸餾水1L酶生產(chǎn)培養(yǎng)基CMC-Na25g、(NH4）2SO41.4g、MgSO4·7H2O0.3g、KH2PO42g、CaCl20.3g、FeSO4·7H2O0.005g、MnSO40.0016g、ZnSO4·7H2O0.0014g、CoCl20.002g蛋白胨5g1.2方法1.2.1拮抗試驗(yàn)為了測(cè)試具有高纖維素降解效率的不同菌株之間的拮抗作用，將它們一起接種在CMC富集培養(yǎng)基上并培養(yǎng)3天。觀察兩個(gè)菌株之間是否形成抑菌圈，形成表明二者發(fā)生拮抗作用；否則不發(fā)生拮抗作用。選擇不相互拮抗的菌株構(gòu)建纖維素降解復(fù)合菌REF_Ref31319\n\h[24]。1.2.2濾紙降解試驗(yàn)濾紙降解試驗(yàn)用于進(jìn)一步評(píng)估微生物菌株的纖維素分解效果REF_Ref31378\n\h[25]。X-01、X-02和復(fù)合細(xì)菌首先在CMC液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在37℃下以180r·min-1的速度振蕩72h。然后將微生物分別接種到pH值為7.0，含有9cm直徑的無菌濾紙的濾紙降解培養(yǎng)基中，在37℃下振蕩培養(yǎng)3天。隨后觀察濾紙降解效果REF_Ref31515\r\h[26]。1.2.3酶活測(cè)定1.2.3.1粗酶液的制備為了測(cè)定纖維素酶活性，將所選菌株在取樣溫度下在液體酶生產(chǎn)培養(yǎng)基（pH7.0、接種量2%）中搖床培養(yǎng)（180r·min-1）3天。然后，將培養(yǎng)基在4℃、8000r·min-1的條件下下離心10min，收集上清液（即粗酶提取物）用于纖維素酶活性測(cè)定。1.2.3.2測(cè)定纖維素酶（CMC-ase）活性纖維素酶活性采用國(guó)際與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)推薦的3,5-二硝基水楊酸法測(cè)定。即CMC-ase活性是通過測(cè)量底物CMC-NaREF_Ref31515\r\h[26]釋放的葡萄糖來計(jì)算的，使用以下標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=0.1566x+0.001(R2=0.9992)。一個(gè)單位的CMC-ase活性被定義為在標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定條件下每分鐘每毫升底物釋放1克葡萄糖所需的酶量REF_Ref31639\r\h[27]。1.2.4單因素試驗(yàn)在單因素試驗(yàn)中依次測(cè)試四個(gè)影響因素，即培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度、pH和接種量，以優(yōu)化所選菌群纖維素生產(chǎn)的培養(yǎng)條件。在試驗(yàn)中獲得單因素的最佳值用于響應(yīng)面試驗(yàn)。培養(yǎng)時(shí)間24、30、36、42、48h、條件為37℃、pH7、接種量2%；培養(yǎng)溫度50、55、60、65和70℃、條件為pH7、接種量2%、72h；pH值4.0、5.0、6.0、7.0和8.0，條件為37℃、接種量2%、72h；接種量1、2、3、4、5和6%，條件為37℃、pH7、72h。1.2.5響應(yīng)面優(yōu)化基于單因素試驗(yàn)的結(jié)果，使用響應(yīng)面方法（RSM）中的Box-Behnken來進(jìn)一步優(yōu)化影響纖維素生產(chǎn)的因素，然后進(jìn)行多元回歸擬合試驗(yàn)數(shù)據(jù)以獲得每個(gè)因子的重要程度REF_Ref31688\r\h[28]。結(jié)果與分析2.1復(fù)合菌系的構(gòu)建如圖1所示，X-01和X-02在平板上共培養(yǎng)時(shí)沒有相互拮抗，且生長(zhǎng)良好，表明這兩種菌株可以組合成一個(gè)復(fù)合菌株，將其命名為HY-1菌株。圖1拮抗試驗(yàn)中接種菌株（HY-1）的平板布局（行為菌株X-02，列為菌株X-01）Figure1.Platelayoutoftheinoculatedstrain(HY-1)intheantagonismtest(row:strainX-02,column:strainX-01)2.2濾紙降解試驗(yàn)濾紙降解試驗(yàn)可用于評(píng)估微生物降解纖維素的能力。X-01、X-02和HY-1的濾紙降解如圖2所示。與A組（對(duì)照組）相比，B（X-01）、C（X-02）和D（HY-1）組的錐形瓶?jī)?nèi)濾紙邊緣相對(duì)不平整，明顯分裂，外觀呈糊狀。培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，濾紙的重量損失率分別為13%、19%和25%。結(jié)果表明，HY-1菌株具有較強(qiáng)的纖維素降解能力。圖2濾紙降解試驗(yàn)的試驗(yàn)結(jié)果。A代表對(duì)照組，B、C和D分別代表X-01、X-02和HY-1組Figure2.Experimentalresultsofthefilterpaperdegradationtest.ArepresentsthecontrolgroupandB,CandDrepresentgroupsX-01,X-02andHY-1,respectively.2.3單因素試驗(yàn)圖3A所示，CMC酶活隨著pH值的增加而持續(xù)增加，在pH6.0時(shí)達(dá)到峰值，隨后迅速降低；圖3B顯示了CMC酶活隨著溫度的增加而升高，在60℃時(shí)達(dá)到最大值，在55-65℃之間酶活變化小，表明復(fù)合細(xì)菌產(chǎn)生的纖維素酶具有良好的熱穩(wěn)定性；圖3C顯示24-36h小時(shí)內(nèi)，CMC酶活整體呈上升趨勢(shì)，在36小時(shí)時(shí)達(dá)到峰值，隨后，CMC活性急劇下降；圖3D顯CMC酶活在1-5%的接種量?jī)?nèi)變化不大，其中2%時(shí)酶活相對(duì)較高。圖3不同接種量對(duì)菌株產(chǎn)酶活力的影響Figure3.Effectofdifferentinoculumamountsontheenzymeproductionvigourofthestrains2.4響應(yīng)面優(yōu)化考慮到四個(gè)因素的相互作用，以CMC-ase活性作為因變量（Y），四個(gè)因素,即接種量（A）、培養(yǎng)溫度（B）、pH（C）和培養(yǎng)時(shí)間（D）作為自變量，使用Design-Expert12.0中的Box-Behnken進(jìn)行四因素三水平響應(yīng)面設(shè)計(jì)進(jìn)一步優(yōu)化纖維素酶的產(chǎn)生，其因素和水平見表2。表2響應(yīng)面試驗(yàn)因素和水平Table2.Responsesurfacetestfactorsandlevels.LevelA(%)B(°C)CD(h)-1155530026063613657422.4.1模型構(gòu)建及方差分析如表3所示，使用Design-Expert12.0軟件進(jìn)行多元回歸分析，生成了以下多元回歸模型：y=2.03+0.094A+0.0827B–0.0137C+0.069D+0.0475AB–0.0122AC–0.0007AD+0.1965BC–0.0135BD+0.0667CD–0.2776A2–0.1461B2–0.2808C2–0.3021D2。表3Design-Expert8.0設(shè)計(jì)的響應(yīng)面試驗(yàn)和相應(yīng)結(jié)果Table3.ResponsesurfacetestsandcorrespondingresultsforBehnkendesign.RunA(%)B(°C)CD(h)Y(U/ml)110011.7202-11001.65930-10-11.3354010-11.636500001.941600002.087711001.77881-1001.531900111.5391000-1-11.5611100002.13912-10101.30713-10-101.173140-1-101.858150-1011.4421601011.6891700002.1061801101.7591900001.858200-1101.2962110-101.5482200-111.42823001-11.4052410101.6332501-101.53526-1-1001.60227-100-11.19728100-11.38829-10011.532表4為方差分析的結(jié)果，該模型顯示P值小于0.01，極顯著，而缺失項(xiàng)P=0.3867，即>0.05并不顯著，這表明所有殘差都是隨機(jī)誤差造成的。所研究的因素影響復(fù)合菌CMC酶活性的順序?yàn)椋篈>B>D>C。模型的決定系數(shù)（R2）為0.8564，表明模型與數(shù)據(jù)非常吻合。調(diào)整后的R2值為0.7129，表明模型可以解釋CMC酶活性變化的71.29%，并且接近預(yù)測(cè)值2.055U/mL。表4方差分析結(jié)果Table4.AnovaresultsSourceSumofSquaresdfMeanSquareP-ValueSignificanceModel1.6140.11430.001significantA-seedvolume0.10610.1060.0338*B-Temperture0.08210.0820.0575C-pH0.002210.00220.7374D-time0.057110.05710.1062AB0.00910.0090.5037AC0.000610.00060.862AD2.250E-0612.250E-060.9915BC0.154410.15440.0131*BD0.000710.00070.8481CD0.017810.01780.3511A^20.499710.49970.0002**B^20.138410.13840.0177*C^20.511510.51150.0001**D^20.591810.5918<0.0001**Residual0.2682140.0192LackofFit0.2098100.0210.3877NotsignificantPureError0.058340.0146CorTotal1.8728R2R2adj0.7129如圖4-9中的平面圖與三維圖所示，AB、AC、AD、BD和CD模型之間沒有觀察到顯著的相互作用（P>0.05）。然而，B和C之間的相互作用顯著影響了CMC-ase活性（P<0.05)，如圖6所示，當(dāng)B保持不變時(shí)，CMC-ase活性隨著C的增加而逐漸增加，然后逐漸降低。圖4培養(yǎng)時(shí)間與初始pH對(duì)纖維素酶活的相互作用Figure4.InteractionbetweenincubationtimeandinitialpHoncellulaseactivity圖5培養(yǎng)時(shí)間與培養(yǎng)溫度對(duì)纖維素酶活的相互作用Figure5.Interactionbetweenincubationtimeandincubationtemperatureoncellulaseactivity圖6初始pH與培養(yǎng)溫度對(duì)纖維素酶活的相互作用Figure6.InteractionbetweeninitialpHandincubationtemperatureoncellulaseactivity圖7培養(yǎng)溫度與接種量對(duì)纖維素酶活的相互作用Figure7.Interactionbetweenincubationtemperatureandinoculumsizeoncellulaseactivity圖8初始pH與接種量對(duì)纖維素酶活的相互作用Figure8.InteractionbetweeninitialpHandinoculumsizeoncellulaseactivity圖9接種量與培養(yǎng)時(shí)間對(duì)纖維素降解菌的相互作用Figure9.Interactionbetweeninoculumsizeandincubationtimeoncellulosedegradingbacteria2.4.2最佳條件和CMC-ase活性的驗(yàn)證模型顯示，纖維素酶的最佳生產(chǎn)條件如下：接種體積為2.23%；溫度為61.96℃；pH為6.14；時(shí)間為36.66小時(shí)。在這些條件下獲得的酶理論活性為2.055U/ml。根據(jù)確定的最佳CMC-ase活性產(chǎn)生條件，進(jìn)行了三組平行驗(yàn)證試驗(yàn)。在這些條件下獲得的CMC-ase活性為2.246U/ml，較預(yù)測(cè)值提高了1.09倍。討論本研究利用從黑葉猴糞便中分離出的兩種纖維素降解細(xì)菌，將其混合形成復(fù)合菌（HY-1），已有研究表明互不拮抗的菌株可以構(gòu)建成為復(fù)合菌，且具有更好的降解能力，例如Wang等REF_Ref30770\r\h[16]利用互不拮抗的五菌株組成復(fù)合體后顯著提高了苦參渣和秸稈的降解效率，Zheng等REF_Ref30947\n\h[20]從常年寒冷的森林土壤中的微生物群落中分離出復(fù)合菌系LTF-27，有效降解了稻草纖維素、半纖維素和木質(zhì)素,同樣本研究利用互不拮抗的X-01和X-02復(fù)合成為HY-1，且HY-1的濾紙降解效果優(yōu)于單菌株的濾紙降解效果。接種量、初始pH值、培養(yǎng)溫度和發(fā)酵時(shí)間是影響微生物生長(zhǎng)、繁殖和代謝的重要因素。pH影響酶的產(chǎn)生和穩(wěn)定性，適宜的pH可以促進(jìn)菌株的生長(zhǎng)，提高酶的產(chǎn)量。先前研究表明，不同菌株的最佳pH值是不同的，例如從人工肥料中分離的芽孢桿菌菌株REF_Ref32076\r\h[29]和從土壤中分離的貝萊斯芽孢桿菌REF_Ref32119\r\h[30]的最佳pH值分別為6.0和5.0；溫度是影響酶穩(wěn)定性的重要因素之一，每種微生物都有一個(gè)最佳溫度，例如，Rawat等REF_Ref32168\r\h[31]和李豪等REF_Ref23835\r\h[32]分離的枯草芽孢桿菌LFS3和蠶沙堆肥中分離的肺炎克雷伯氏菌最適溫度均為60℃，二者具有較好的熱穩(wěn)定性，本研究中HY-1在55-65℃間酶活變化不大，在耐高溫發(fā)酵具有較大潛力；培養(yǎng)時(shí)間和接種量也是影響酶生產(chǎn)的重要因素，Li等REF_Ref31093\r\h[21]在牦牛瘤胃樣本中分離出兩種纖維素分解率高的微生物并將其組合后在36小時(shí)時(shí)酶活性達(dá)到最大值，李文兵等REF_Ref26617\r\h[33]從新鮮牛糞中分離的內(nèi)生芽孢桿菌的最適接種量為4%。響應(yīng)面優(yōu)化具有原理簡(jiǎn)單、適用性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，在可靠性分析和計(jì)算方法中得到廣泛應(yīng)用。例如胡麗娟等REF_Ref32259\r\h[34]利用響應(yīng)面優(yōu)化產(chǎn)酶條件，較優(yōu)化前酶活提高了1.748倍，崔秀秀等REF_Ref32321\r\h[35]利用響應(yīng)面優(yōu)化耐冷纖維素降解菌產(chǎn)酶條件使酶活提高了2.96倍，單建榮等REF_Ref32423\r\h[36]利用響應(yīng)面優(yōu)化牛糞堆肥，較優(yōu)化前提高了1.3倍，與之相比，本試驗(yàn)運(yùn)用響應(yīng)面法對(duì)復(fù)合菌產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化，酶活較優(yōu)前提高1.12倍。目前，國(guó)內(nèi)外已篩選到多種纖維降解菌并開展了較為系統(tǒng)的研究，例如，ShengP等從平行全毛蟲后腸分離的假單胞菌，在30℃下纖維素酶活為1.432U/mL，Ye等從鵝盲腸篩選出1株解淀粉芽孢桿菌S1，在37℃下纖維素酶活0.68U/mL，李雅靜等從蒙古馬盲腸內(nèi)容物中篩選出1株解淀粉芽孢桿菌H-3，在65℃條件下纖維素酶活力達(dá)到0.60U/mL，本研究復(fù)合的纖維素降解菌HY-1在60℃高溫下纖維素酶活達(dá)到2.139U/mL，具有在高溫下的產(chǎn)酶能力和較高的研究?jī)r(jià)值，表明該復(fù)合菌系在纖維素農(nóng)業(yè)廢棄物降解中具有較大的應(yīng)用前景。結(jié)論本研究通過拮抗試驗(yàn)復(fù)合兩菌株成為HY-1，通過單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化產(chǎn)酶條件，表明HY-1在接種量為2.2%，接種溫度為61.9℃，pH值為6.1，生長(zhǎng)周期為36.7小時(shí)時(shí)，獲得了最大的纖維素酶活性為2.139U/ml，提高了1.12倍，同時(shí)HY-1的最佳溫度為61.9℃，具有較高的熱穩(wěn)定性，可以較好適應(yīng)發(fā)酵環(huán)境中的溫度變化，可應(yīng)用于較高溫度下的農(nóng)作物降解，具有一定的開發(fā)潛力。參考文獻(xiàn)劉童童,盧晨曦,原楚妍,等.小熊貓糞便中纖維素降解菌株的篩選、基因改造及生物合成聚羥基丁酸酯條件的優(yōu)化[J].天津師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2022,42(01):45-50.HuangCM,ChiaPX,LimCS,etal.Synthesisandcharacterisationofcarboxymethylcellulosefromvariousagriculturalwastes[J].CellularChemicalTechnology,2017,51(7-8):665-672.GuptaP,SamantK,SahuA.Isolationofcellulose-degradingbacteriaanddeterminationoftheircellulolyticpotential[J].InternationalJournalofMicrobiology,2012,2012:1-5.YangWP,MengFX,PengJY,etal.IsolationandidentificationofacellulolyticbacteriumfromtheTibetanpig'sintestineandinvestigationofitscellulaseproduction[J].ElectronicJournalofBiotechnology,2014,17(6):262-267.LiuY.Tunableandfunctionaldeepeutecticsolventsforlignocellulosevalorization[J].NatureCommunications.202112(1)5424.KabirE,KaurR,LeeJ,etal.Prospectsofbiopolymertechnologyasanalternativeoptionfornon-degradableplasticsandsustainablemanagementofplasticwastes[J].JournalofCleanerProduction,2020,258:120536.ImmanuelG,BhagavathCA,RajPI,etal.ProductionandpartialpurificationofcellulasebyAspergillusnigerandA.fumigatusfermentedincoirwasteandsawdust[J].TheInternetJournalofMicrobiology,2007,3(1):1-20.BansalN,TewariR,SoniR,etal.ProductionofcellulasesfromAspergillusnigerNS-2insolidstatefermentationonagriculturalandkitchenwasteresidues[J].WasteManagement,2012,32(7):1341-1346.MenesesC,SilvaB,MedeirosB,etal.Ametagenomicadvanceforthecloningandcharacterizationofacellulasefromredricecropresidues[J].Molecules,2016,21(7):1-12.WilsonDB.Microbialdiversityofcellulosehydrolysis[J].CurrentOpinioninMicrobiology,2011,14(3):259-263.Cortes-TolalpaL,SallesJF,vanElsasJD.Bacterialsynergisminlignocellulosebiomassdegradation-complementaryrolesofdegradersasinfluencedbycomplexityoftheSeedvolume[J].FrontiersinMicrobiology.2017,8(01):1628-1642.李紅亞,李術(shù)娜,王樹香,等.解淀粉芽孢桿菌MN-8對(duì)玉米秸稈木質(zhì)纖維素的降解[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2015,26(05):1404-1410.LiL,XieY,GaoX,etal.ScreeningofcellulosedegradationbacteriafromMinpigsandoptimizationofitscellulaseproduction[J].ElectronicJournalofBiotechnology,2020,48:29-35.ShangZ,LiuS,DuanYZ,etal.Completegenomesequencingandinvestigationonthefiber-degradingpotentialofBacillusamyloliquefaciensstrainTL106fromthetibetanpig[J].BMCMicrobiology,2022,22(1):186-199.ZhangG,DongY.Designandapplicationofanefficientcellulose-degradingmicrobialconsortiumandcarboxymethylcellulaseproductionoptimization[J].FrontiersinMicrobiology,2022,13:957444.WangH,HanL,FengJ,etal.Screeningofhighlyefficientcellulosedegradationmicrobesandconstructionofcompositestrains[J].JournalofAgriculturalBiotechnology,2015,23(4):421-431.EidaMF,NagaokaT,WasakiJ,etal.Isolationandcharacterizationofcellulosedecomposing-bacteriainhabitingsawdustandcoffeeresiduecomposts[J].MicrobesandEnvironments,2012,27(3):226-233.GuWJ,XuYQ,XuPZ,etal.Screeningandidentificationofhemicellulosedegradingmicroorganismsinacidsoil[J].ActaMicrobiologicaSinica,2012,52(10):1251-1259.JiangGF,YangTF,ZhengHP,etal.Constructionandevaluationoffungalconsortiaeffectonmaizestraw[J].JournalofPlantNutritionandFertilizers,2021,27(2):284-292.ZhengGX,YinT,LuZX,etal.DegradationofricestrawatlowtemperatureusinganovelmicrobialconsortiumLTF-27withefficientability[J].Bioresourcetechnology,2020,304(10):e123064.LiJ,TangX,ZhaoJ,etal.ImprovementoffermentationqualityandcelluloseconvertibilityofNapiergrasssilagebyinoculationofcellulolyticbacteriafromTibetanyak[J].JournalofAppliedMicrobiology,2021,130(6):1857-1867.潘淑萍.廣西扶綏黑葉猴和白頭葉猴食物主要營(yíng)養(yǎng)成分的季節(jié)性變化[D].廣西師范大學(xué),2021.周岐海,黃乘明.中國(guó)石山葉猴生態(tài)學(xué)研究進(jìn)展[J].獸類學(xué)報(bào),2021,41(1):59-70.顧欣,黃凱悅,田彥梅,等.耐高溫沼渣降解菌的篩選及復(fù)合菌劑降解效果研究[J].微生物學(xué)雜志,2023,43(04):90-100.ZhangS,ShanD,LiuX,etal.Cellulose-degradingstrains:theirscreeningandapplicationtocornstrawinlow-temperatureenvironments[J].PolishJournalofEnvieonment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