地址215600江蘇省蘇州市張家港市國泰北限公司32103代理人孫仿衛(wèi)汪青(54)發(fā)明名稱一種(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的生(57)摘要本發(fā)明涉及一種(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲液中，在20℃~50℃下反應(yīng)生成(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿，其中，所述的輔酶再生系統(tǒng)為葡萄糖和葡萄糖脫氫酶、或者異丙醇，在起始反應(yīng)體系中，中間體的濃度為90~150g/L,酮還原酶、輔酶與中間體的投料質(zhì)量比為咯烷基去甲麻黃堿，剩余的R構(gòu)型中間體在反應(yīng)21.一種(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的生物制備方法，其特征在于：中間體在酮還原酶、輔酶及輔酶再生系統(tǒng)的存在下，在pH7~9.5的緩沖溶液中，在20℃~50℃下反應(yīng)生成所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿，其中，所述的輔酶再生系統(tǒng)為葡萄糖和葡萄糖脫氫酶、或者異丙醇，在起始反應(yīng)體系中，所述的中間體的濃度為90~150g/L,所述的酮還原酶、所述的輔酶與所述的中間體的投料質(zhì)量比為0.01~0.03:0.001~0.003:1,所述的中間體的結(jié)構(gòu)式為：所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿為：2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的生物制備方法，其特征在于：所述的酮還原酶為購自蘇州漢酶生物技術(shù)有限公司的牌號(hào)為EW104的酮還原酶。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的生物制備方法，其特征4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的生物制備方法，其特征在于：所述的緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液或三乙醇胺鹽酸緩沖溶液。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的生物制備方法，其特征在于：所述的緩沖溶液的pH為7.5~8.5,摩爾濃度為95~105mM。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的生物制備方法，其特征在于：所述的反應(yīng)溫度為30℃~40℃。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的生物制備方法，其特征在于：當(dāng)所述的輔酶再生體系為異丙醇時(shí)，所述的異丙醇與所述的緩沖溶液的投料體積比為1:4~10;當(dāng)所述的輔酶再生體系為葡萄糖和葡萄糖脫氫酶時(shí)，所述的中間體、所述的葡萄糖、所述的葡萄糖脫氫酶、所述的酮還原酶的投料質(zhì)量比為1:1.2~1.3:0.005~0.015:8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的生物制備方法，其特征在于：所述的中間體通過如下方法制備獲得：底物在乙酸丁酯和溴的存在下，在25℃~35℃下反應(yīng)，靜置分層，取有機(jī)相，向所述的有機(jī)相中加入碳酸鈉溶液和吡咯烷，在pH為5~7、15℃~25℃下反應(yīng)，靜置分層，取有機(jī)相，3然后干燥得到所述的中間體，其中，所述的底物的結(jié)構(gòu)式為：9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的生物制備方法，液、所述的吡咯烷的投料質(zhì)量比為1:2~2.4:1~1.3:2.8~3.2:0.8~1,所述的碳酸鈉溶液的質(zhì)量百分比為12%~18%。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的生物制備方法，其特征在于：制備所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的具體步驟如下：步驟(1)、在反應(yīng)器中加入所述的乙酸丁酯和所述的底物，在29℃~31℃下滴加所述的層，水層以乙酸丁酯洗滌多次后，合并有機(jī)相，19℃~21℃下同時(shí)滴加吡咯烷和質(zhì)量百分比為14%~16%的碳酸鈉溶液，控制pH5.0~7.0,滴加結(jié)束后繼續(xù)反應(yīng)18min~22min,然后加入冰水靜置分層，水層以乙酸丁酯洗滌多次后，合并有機(jī)相，旋蒸干燥得到所述的中間體；步驟(2)、將所述的中間體、所述的酮還原酶、所述的輔酶、所述的輔酶再生體系加至裝有所述的緩沖溶液的反應(yīng)器中，在34℃~36℃下攪拌23~25小時(shí)，HPLC/MS檢測(cè)轉(zhuǎn)化率，調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH為2.8~3.2,加入乙酸乙酯攪拌，過濾后棄有機(jī)相，調(diào)節(jié)水相的pH為9.8~10.2,然后用乙酸乙酯萃取多次，合并有機(jī)相旋蒸獲得所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去4一種(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的生物制備方法[0001]本發(fā)明屬于生物制藥和生物化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種(1R,2S)-N-吡咯烷基(efavirenz)的關(guān)鍵手性中間體(EP0582455,WO9520389和WO9637457等)。合成(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿通常使用的方法如附圖1所示(US5856492和J.Org.Chem.1998,63,8536-8543等)。該合成方法需要用到去甲麻黃堿作為原料，[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種生產(chǎn)成本低的一種(1R,2S)-N-吡咯烷基及輔酶再生系統(tǒng)的存在下，在pH7～9.5的緩沖溶液中，在20℃~50℃下反應(yīng)生成所述的與所述的中間體的投料質(zhì)量比為0.01～0.03:0.001～0.003:1,[0006]所述的中間體的結(jié)構(gòu)式為：(1-苯基-2-吡咯烷-1-基丙-1-酮),[0007]所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿為：5[0011]具體地，所述的緩沖溶液的pH為7.5～8.5,摩爾濃度為95～105mM。[0012]具體地，所述的反應(yīng)溫度為30℃~40℃。[0013]具體地，在起始反應(yīng)體系中，所述的中間體的濃度為95～105g/L,所述的酮還原酶、所述的輔酶與所述的中間體的投料質(zhì)量比為0.018～0.022:0.0018～0.0022:1。[0014]具體地，當(dāng)所述的輔酶再生體系為異丙醇時(shí)，所述的異丙醇與所述的緩沖溶液的投料體積比為1:4～10;當(dāng)所述的輔酶再生體系為葡萄糖和葡萄糖脫氫酶時(shí)，所述的中間體、所述的葡萄糖、所述的葡萄糖脫氫酶、所述的酮還原酶的投料質(zhì)量比為1:1.2～1.3:[0015]具體地，所述的中間體通過如下方法制備獲得：[0016]底物在乙酸丁酯和溴的存在下，在25℃~35℃下反應(yīng)，靜置分層，取有機(jī)相，向所述的有機(jī)相中加入碳酸鈉溶液和吡咯烷，在pH為5～7、15℃~25℃下反應(yīng)，靜置分層，取有機(jī)相，然后干燥得到所述的中間體，其中，所述的底物的結(jié)構(gòu)式為：(苯丙酮)。酸鈉溶液、所述的吡咯烷的投料質(zhì)量比為1:2～2.4:1～1.3:2.8～3.2:0.8～1,所述的碳酸鈉溶液的質(zhì)量百分比為12%～18%。[0018]更具體地，制備所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿的具體步驟如下：[0019]步驟(1)、在反應(yīng)器中加入所述的乙酸丁酯和所述的底物，在29℃~31℃下滴加所述的溴，并將生成的溴化氫吸出，滴加完畢后繼續(xù)反應(yīng)18min～22min,然后加入冰水，靜置分層，水層以乙酸丁酯洗滌多次后，合并有機(jī)相，19℃~21℃下同時(shí)滴加吡咯烷和質(zhì)量百分比為14%～16%的碳酸鈉溶液，控制pH5.0～7.0,滴加結(jié)束后繼續(xù)反應(yīng)18min~22min,然后加入冰水靜置分層，水層以乙酸丁酯洗滌多次后，合并有機(jī)相，旋蒸干燥得到所述的中間體；[0020]將所述的中間體、所述的酮還原酶、所述的輔酶、所述的輔述的緩沖溶液的反應(yīng)器中，在34℃~36℃下攪拌23～25小時(shí)，HPLC/MS檢測(cè)轉(zhuǎn)化率，調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH為2.8～3.2,加入乙酸乙酯攪拌，過濾后棄有機(jī)相，調(diào)節(jié)水相的pH為9.8~10.2,然后用乙酸乙酯萃取多次，合并有機(jī)相旋蒸獲得所述的(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻[0021]由于以上技術(shù)方案的實(shí)施，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：[0022]本發(fā)明從廉價(jià)易得的底物出發(fā)得到中間體，中間體為消旋體，然后利用酮還原酶對(duì)S構(gòu)型的中間體進(jìn)行不對(duì)稱還原，得到(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿，剩余的R構(gòu)型中間體在反應(yīng)條件下發(fā)生自發(fā)消旋，本發(fā)明避免了去甲麻黃堿的使用，使產(chǎn)品的產(chǎn)率超過50%的理論收率，降低了生產(chǎn)成本。附圖說明[0023]附圖1為現(xiàn)有技術(shù)的合成路線；6[0024]附圖2為本發(fā)明的合成路線。[0027]實(shí)施例1:[0028]反應(yīng)器中加入300g乙酸丁酯和134g底物(苯丙酮),30℃下緩慢滴加溴160g,保持負(fù)壓將生成的溴化氫吸出，滴加完畢后繼續(xù)攪拌20min,加入100g冰水后靜置分層，120g吡咯烷，控制pH5.5,滴加結(jié)束后繼續(xù)攪拌20min,加入150g冰水后靜置分層，水層以150g乙酸丁酯洗滌三次后，合并有機(jī)相，旋蒸干燥得到中間體(1-苯基-2-吡咯烷-1-基丙-1-酮)160g,HPLC純度99%。[0029]實(shí)施例2:[0030]中間體(1-苯基-2-吡咯烷-1-基丙-1-酮)100g、異丙醇200mL加至裝有800mL牌號(hào)EW104)2g,NADP0.2g,在35℃下攪拌24小時(shí)，HPLC/MS檢測(cè)轉(zhuǎn)化率99.5%,調(diào)節(jié)pH至3.0,加入1L乙酸乙酯攪拌，過濾后棄有機(jī)相，調(diào)節(jié)水相的pH至10.0,用1L乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)相旋蒸獲得產(chǎn)物(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿95g,ee值99.5%,de值99.9%,純度99.0%。[0031]實(shí)施例3:[0032]中間體(1-苯基-2-吡咯烷-1-基丙-1-酮)100g、異丙醇100mL加至裝有900mL牌號(hào)EW104)2g,NADP0.2g,在35℃下攪拌20小時(shí)，HPLC/MS檢測(cè)轉(zhuǎn)化率99.5%,調(diào)節(jié)pH至3.0,加入1L乙酸乙酯攪拌，過濾后棄有機(jī)相，調(diào)節(jié)水相的pH至10.0,用1L乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)相旋蒸獲得產(chǎn)物(1R,2S)-N-吡咯烷基去甲麻黃堿95g,ee值99.5%,de值99.9%,純度99.0%。[0033]實(shí)施例4:[0034]中間體(1-苯基-2-吡咯烷-1-基丙-1-酮)100g、異丙醇100mL加至裝有900mL牌號(hào)EW104)2g,NADP0.2g,分別于20℃和50℃85.1%和52.5%,產(chǎn)物ee值分別為98.5%和98.0%。[0035]實(shí)施例5:[0036]中間體(1-苯基-2-吡咯烷-1-基丙-1-酮)100g、異丙醇100mL分別加至裝有900mL100mMpH7.5的磷酸鹽緩沖溶液和9.0的三乙醇胺-鹽酸緩沖溶液的2L反應(yīng)器中小時(shí)，HPLC/MS檢測(cè)轉(zhuǎn)化率分別為87.7%和96,6%,ee值分別為99.0和98.3%。[0037]實(shí)施例6:7[0038]中間體(1-苯基-2-吡咯烷-1-基丙-1-酮)100g、葡萄糖123g加至裝有900mL100mMpH7.5的磷酸鹽緩沖溶液的2L反應(yīng)器中攪拌均勻，依次加入KRED(采購自蘇州漢酶，