白鼠實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備

1.選擇健康、同批次、同品系的白鼠，體重在180-250克之間，年齡在4-8周。

2.實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)，環(huán)境溫度20-26℃，濕度50%-60%，光照周期12小時(shí)明暗交替。

3.實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)禁食，自由飲水，確保實(shí)驗(yàn)狀態(tài)穩(wěn)定。

（二）實(shí)驗(yàn)設(shè)備與耗材準(zhǔn)備

1.設(shè)備：無(wú)菌操作臺(tái)、電子天平、恒溫水浴鍋、注射器（1ml、5ml）、手術(shù)器械（剪刀、鑷子、縫合針線）、離心機(jī)等。

2.耗材：消毒液（75%酒精）、無(wú)菌棉球、生理鹽水、實(shí)驗(yàn)試劑（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求配置）、標(biāo)本袋。

（三）實(shí)驗(yàn)環(huán)境準(zhǔn)備

1.實(shí)驗(yàn)區(qū)域需保持清潔，每日消毒，避免交叉污染。

2.設(shè)備提前預(yù)熱或校準(zhǔn)，確保運(yùn)行狀態(tài)正常。

3.配備應(yīng)急處理措施，如急救箱、廢棄物處理裝置。

二、實(shí)驗(yàn)操作流程

（一）麻醉操作

1.使用吸入性麻醉劑（如異氟烷）或腹腔注射麻醉劑（如水合氯醛，劑量0.8-1.0ml/kg）。

2.麻醉前檢查動(dòng)物呼吸頻率，確保麻醉深度適宜。

3.麻醉期間維持溫度，防止體溫過(guò)低。

（二）手術(shù)操作（以腹部手術(shù)為例）

1.步驟（1）：消毒：用75%酒精擦拭手術(shù)區(qū)域，再用生理鹽水沖洗。

2.步驟（2）：麻醉：沿脊柱兩側(cè)注射麻醉劑，待動(dòng)物失去反應(yīng)后固定。

3.步驟（3）：切開(kāi)：用手術(shù)剪沿正中切開(kāi)皮膚和肌肉，暴露實(shí)驗(yàn)區(qū)域。

4.步驟（4）：操作：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行組織取材或植入等操作。

5.步驟（5）：縫合：逐層縫合肌肉和皮膚，確保無(wú)張力。

（三）采樣與處理

1.血液采樣：尾靜脈取血，每次采血量不超過(guò)0.5ml。

2.組織采樣：用無(wú)菌器械取材，立即放入4%多聚甲醛溶液固定。

3.數(shù)據(jù)記錄：實(shí)時(shí)記錄實(shí)驗(yàn)指標(biāo)（如生命體征、行為變化），存檔備查。

三、實(shí)驗(yàn)后處理

（一）動(dòng)物觀察

1.術(shù)后放置恢復(fù)區(qū)，觀察2-4小時(shí)，直至麻醉清醒。

2.記錄恢復(fù)情況，異常行為（如抽搐、呼吸困難）需立即隔離處理。

（二）標(biāo)本保存

1.血液樣本：離心分離血清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.組織樣本：固定后編號(hào)，送病理科處理或自行染色觀察。

（三）廢棄物處理

1.醫(yī)療廢棄物按規(guī)范分類(lèi)，高壓滅菌后焚燒。

2.實(shí)驗(yàn)廢水經(jīng)處理達(dá)標(biāo)后排放，避免環(huán)境污染。

四、注意事項(xiàng)

（一）操作規(guī)范

1.嚴(yán)格無(wú)菌操作，避免污染。

2.手術(shù)器械每次使用后需滅菌，重復(fù)使用需高溫高壓消毒。

（二）安全防護(hù)

1.操作人員需佩戴手套、口罩，必要時(shí)佩戴護(hù)目鏡。

2.麻醉劑使用需精確計(jì)量，過(guò)量可導(dǎo)致動(dòng)物死亡。

（三）倫理要求

1.實(shí)驗(yàn)前需獲得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，確保動(dòng)物福利。

2.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后如無(wú)特殊需求，需人道安樂(lè)死，減少痛苦。

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一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備

1.**選擇與接收**：

(1)選擇來(lái)源可靠、健康狀態(tài)良好的白鼠，優(yōu)先選用SPF級(jí)或具體品系（如C57BL/6,BALB/c等）動(dòng)物，以確保遺傳背景一致，減少實(shí)驗(yàn)誤差。

(2)接收時(shí)核對(duì)動(dòng)物檔案，檢查體重（成年鼠通常180-250克）、毛色、活力等基本指標(biāo)，剔除異常個(gè)體。

(3)動(dòng)物需在實(shí)驗(yàn)環(huán)境適應(yīng)至少5-7天，以適應(yīng)新環(huán)境，減少應(yīng)激反應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

2.**健康與檢疫**：

(1)入室前進(jìn)行健康檢查，觀察有無(wú)活動(dòng)遲緩、呼吸困難、皮膚破損、異常脫毛等癥狀。

(2)集中檢疫期不少于1周，期間隔離飼養(yǎng)，觀察其進(jìn)食、飲水、排泄是否正常，篩查傳染病（如鼠痘、漢坦病毒等）。

3.**飼養(yǎng)管理**：

(1)飼養(yǎng)密度：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，一般不超過(guò)5-10只/籠，避免過(guò)度擁擠引發(fā)應(yīng)激。

(2)基礎(chǔ)飲食：提供標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，自由攝食，每日定時(shí)更換新鮮飲水。

(3)環(huán)境控制：保持飼養(yǎng)環(huán)境安靜、通風(fēng)良好，避免強(qiáng)光直射和噪音干擾。

（二）實(shí)驗(yàn)設(shè)備與耗材準(zhǔn)備

1.**基本設(shè)備**：

(1)操作臺(tái)：超凈工作臺(tái)或生物安全柜，用于無(wú)菌操作，需定期進(jìn)行空氣潔凈度檢測(cè)和消毒。

(2)稱(chēng)重設(shè)備：精密電子天平，精度達(dá)0.1克，用于精確稱(chēng)量動(dòng)物體重、藥物劑量及耗材。

(3)加熱設(shè)備：恒溫水浴鍋（精度±0.5℃），用于維持試劑或生理鹽水在特定溫度。

(4)注射與采樣工具：1ml和5ml無(wú)菌注射器、針頭（規(guī)格根據(jù)需求選擇，如23G、25G）、無(wú)創(chuàng)采血針、手術(shù)剪、組織鑷、眼科鑷等。

(5)固定與麻醉設(shè)備：動(dòng)物固定板、麻醉儀（如使用吸入性麻醉）、溫控毯（維持麻醉期間體溫）。

(6)分離與處理設(shè)備：離心機(jī)（轉(zhuǎn)速范圍0-15000rpm）、培養(yǎng)箱（需預(yù)熱至所需溫度）。

2.**專(zhuān)用耗材**：

(1)消毒用品：75%酒精、碘伏棉球/消毒液、75%酒精棉球、生理鹽水（無(wú)菌，濃度0.9%）。

(2)麻醉藥品：異氟烷、水合氯醛、戊巴比妥鈉（需注明濃度和保存條件）。

(3)實(shí)驗(yàn)試劑：根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康臏?zhǔn)備，如細(xì)胞培養(yǎng)液、固定液（4%多聚甲醛）、染色劑（蘇木精、伊紅等）。

(4)標(biāo)記與記錄：動(dòng)物標(biāo)簽（含編號(hào)、日期、操作人員）、實(shí)驗(yàn)記錄本、電子記錄表格模板。

(5)保護(hù)用品：無(wú)菌手套（一次性）、手術(shù)衣、護(hù)目鏡、口罩。

(6)廢棄物處理：銳器盒、化學(xué)廢棄物桶、動(dòng)物尸體處理袋。

（三）實(shí)驗(yàn)環(huán)境準(zhǔn)備

1.**空間布局**：

(1)明確區(qū)分清潔區(qū)（操作臺(tái)內(nèi)）、潛在污染區(qū)（準(zhǔn)備區(qū)）、污染區(qū)（實(shí)驗(yàn)臺(tái)面），氣流方向應(yīng)從清潔區(qū)流向污染區(qū)。

(2)每個(gè)實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)應(yīng)有獨(dú)立的水電接口和廢液排放口。

2.**環(huán)境參數(shù)**：

(1)溫度：維持在20-26℃，避免劇烈波動(dòng)。

(2)濕度：相對(duì)濕度控制在40%-60%。

(3)光照：12小時(shí)明暗交替的光照周期，模擬自然節(jié)律。

(4)氣流：超凈工作臺(tái)應(yīng)保持30-40L/min的潔凈氣流。

3.**日常維護(hù)**：

(1)每日清潔工作臺(tái)面，使用75%酒精擦拭消毒。

(2)每周更換濾網(wǎng)，并進(jìn)行工作臺(tái)內(nèi)空氣滅菌（如使用紫外燈，需在無(wú)人時(shí)照射30分鐘以上）。

(3)定期檢測(cè)環(huán)境溫濕度、空氣潔凈度，確保符合標(biāo)準(zhǔn)。

二、實(shí)驗(yàn)操作流程

（一）麻醉操作

1.**麻醉方式選擇**：

(1)吸入性麻醉：適用于需保持呼吸系統(tǒng)自然狀態(tài)或進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間操作的情況。使用前需用生理鹽水預(yù)充麻醉儀，檢查氣密性，設(shè)置目標(biāo)麻醉濃度（異氟烷常用1.5%-3.0%）。

(2)腹腔注射麻醉：適用于短期、表淺操作。常用藥物為水合氯醛（劑量0.8-1.2ml/kg，需根據(jù)體重精確計(jì)算），緩慢勻速注入。

(3)注射途徑：選擇下腹部無(wú)毛區(qū)域，垂直進(jìn)針，回抽無(wú)血后推注藥物。

2.**麻醉深度判斷**：

(1)輕度麻醉：動(dòng)物反應(yīng)遲鈍，易激惹。

(2)中度麻醉：角膜反射減弱，對(duì)疼痛刺激反應(yīng)遲緩。

(3)深度麻醉：呼吸淺慢，四肢冰冷，角膜反射消失。

(4)實(shí)驗(yàn)中需根據(jù)操作需求調(diào)整麻醉深度，必要時(shí)補(bǔ)充麻醉劑。

3.**麻醉后管理**：

(1)麻醉未清醒前，需置于溫暖、安靜的恢復(fù)區(qū)，頭部墊高，防止誤吸。

(2)觀察呼吸、心率等生命體征，直至動(dòng)物恢復(fù)自主活動(dòng)能力。

（二）手術(shù)操作（以腹部造模/采樣為例）

1.**術(shù)前準(zhǔn)備**：

(1)備好所有器械和耗材，檢查銳器是否鋒利，藥物是否在有效期內(nèi)。

(2)動(dòng)物麻醉后，放置于固定板，暴露腹部，用75%酒精徹底消毒手術(shù)區(qū)域（范圍至少3cm×3cm），從中心向外環(huán)狀擦拭。

(3)等待酒精揮發(fā)（約1-2分鐘），再用無(wú)菌生理鹽水沖洗1-2次，吸干殘留液體。

2.**手術(shù)步驟**：

(1)**切口**：

a.用手術(shù)剪沿正中或指定區(qū)域，垂直切開(kāi)皮膚（約1-1.5cm）。

b.用組織鑷夾持皮膚邊緣，用手術(shù)剪銳性分離皮下組織，注意避免損傷肌肉。

c.用眼科鑷暴露肌肉層，沿肌纖維方向剪開(kāi)肌肉（如腹直?。?，暴露腹腔內(nèi)容物。

(2)**操作**（根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行）：

a.**造模**：如需注射藥物誘導(dǎo)模型，用1ml注射器吸取適量試劑，選擇合適部位（如腹腔、皮下、足底），緩慢注射。

b.**采樣**：如需采集組織或液體樣本，用無(wú)菌器械（如手術(shù)刀、組織鉗）進(jìn)行操作，快速、準(zhǔn)確獲取樣本。

(3)**縫合**：

a.用生理鹽水沖洗手術(shù)區(qū)域，清除血凝塊和壞死組織。

b.逐層縫合：先縫合肌肉層，用4-0號(hào)縫合線間斷縫合。

c.再縫合皮膚層，可用皮膚夾或皮內(nèi)縫合，或用4-0號(hào)縫合線結(jié)節(jié)縫合。

d.確?？p合緊密，避免形成死腔，但避免過(guò)度牽拉組織。

3.**術(shù)后處理**：

(1)覆蓋無(wú)菌紗布，并用醫(yī)用膠帶固定。

(2)記錄手術(shù)時(shí)間、過(guò)程、樣本信息等。

(3)給予鎮(zhèn)痛（如術(shù)后疼痛明顯，可皮下注射非甾體抗炎藥，劑量按體重計(jì)算）。

（三）采樣與處理

1.**血液采樣**：

(1)**尾靜脈采血**：

a.固定動(dòng)物，用75%酒精消毒尾部，從靠近末端處進(jìn)針（約0.5-1mm深），緩慢勻速采血（每次不超過(guò)0.5ml）。

b.采血后用止血鉗壓迫尾部血管，待血止后松開(kāi)，用創(chuàng)可貼覆蓋。

(2)**心臟采血**：

a.麻醉動(dòng)物，暴露心臟，用注射器穿刺心室，抽取血液。

b.采血后立即心臟灌注生理鹽水或特定液體，結(jié)束實(shí)驗(yàn)。

(3)**處理**：采血后立即編號(hào)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇抗凝（如肝素）或促凝（如EDTA、檸檬酸鈉），混勻后離心（3000rpm，5分鐘）分離血漿或血細(xì)胞。

2.**組織采樣**：

(1)**器官取材**：完整剝離目標(biāo)器官（如肝臟、腎臟），用生理鹽水沖洗血污，吸干表面液體。

(2)**固定**：立即放入4%多聚甲醛溶液（體積比1:10），確保組織完全浸沒(méi)。標(biāo)記容器，記錄固定時(shí)間。

(3)**脫水與包埋**：固定24-48小時(shí)后，依次轉(zhuǎn)移至30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇，各梯度脫水12-24小時(shí)。

a.脫水后用二甲苯透明（2次，每次12小時(shí)）。

b.石蠟包埋，切片機(jī)切片（厚度5-10μm）。

3.**數(shù)據(jù)記錄**：

(1)實(shí)時(shí)記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的反應(yīng)、生命體征變化、樣本獲取數(shù)量和質(zhì)量。

(2)使用標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)記錄表格，包含動(dòng)物編號(hào)、日期、操作人員、麻醉方式、劑量、手術(shù)時(shí)間、樣本信息等。

三、實(shí)驗(yàn)后處理

（一）動(dòng)物觀察

1.**短期觀察**（術(shù)后1-3天）：

(1)每日至少觀察2次，記錄動(dòng)物精神狀態(tài)（如活躍度、進(jìn)食飲水情況）、有無(wú)異常行為（如跛行、抽搐）、傷口愈合情況。

(2)監(jiān)測(cè)體溫，麻醉未完全清醒時(shí)注意保暖。

2.**長(zhǎng)期觀察**（如實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)）：

(1)定期記錄體重變化、毛發(fā)光澤、排泄物性狀等。

(2)注意有無(wú)腫瘤、感染等遲發(fā)并發(fā)癥。

（二）標(biāo)本保存

1.**血液樣本**：

(1)血漿：-20℃或-80℃冰箱凍存，避免反復(fù)凍融。

(2)血細(xì)胞：如需染色，需在采血后盡快處理；如需長(zhǎng)期保存，可使用特定保存液（如EDTA-抗凝管+RNAlater）。

2.**組織樣本**：

(1)石蠟切片：存放于專(zhuān)用切片柜，防潮防塵。染色后用中性樹(shù)膠封片，存檔備查。

(2)冰凍樣本：-80℃凍存，用于蛋白印跡、RNA提取等實(shí)驗(yàn)，避免反復(fù)凍融。

3.**樣本標(biāo)識(shí)**：

(1)所有樣本均需清晰標(biāo)注動(dòng)物編號(hào)、采集日期、處理方式、實(shí)驗(yàn)組別等信息。

（三）廢棄物處理

1.**銳器處理**：手術(shù)刀、針頭等一次性銳器直接放入專(zhuān)用銳器盒，封口后交由有資質(zhì)的回收機(jī)構(gòu)處理。

2.**化學(xué)廢棄物**：含有酒精、固定液等的廢液需先集中收集，根據(jù)成分進(jìn)行中和或滅菌處理，達(dá)標(biāo)后排放。

3.**生物廢棄物**：未使用的麻醉藥品、過(guò)期試劑、動(dòng)物尸體等需放入化學(xué)廢棄物桶，經(jīng)高壓滅菌后焚燒。

4.**組織樣本**：廢棄的組織樣本需經(jīng)滅活（如高壓滅菌或焚燒）后再處理。

四、注意事項(xiàng)

（一）操作規(guī)范

1.**無(wú)菌原則**：所有涉及無(wú)菌操作（如手術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)）必須在工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，嚴(yán)格遵守手衛(wèi)生、酒精消毒、無(wú)菌容器使用等規(guī)范。

2.**精準(zhǔn)操作**：藥物劑量、采血量、組織處理時(shí)間等均需精確控制，使用量具標(biāo)定，避免誤差。

3.**安全防護(hù)**：接觸化學(xué)試劑需佩戴合適的手套和護(hù)目鏡，避免皮膚和眼睛直接接觸。

（二）安全防護(hù)

1.**器械安全**：使用鋒利器械時(shí)注意避免刺傷；使用加熱設(shè)備時(shí)防止?fàn)C傷。

2.**環(huán)境安