(12)發(fā)明專利道1800號代理有限公司23211代理人林娟本發(fā)明公開了一種利用亞胺還原酶生產(chǎn)麻方法以(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺為反應(yīng)原料反應(yīng)18h,即可使反應(yīng)液中麻黃堿的產(chǎn)率高達86.5%,利用此方法以苯甲醛、丙酮酸與甲胺為反應(yīng)原料反應(yīng)18h,即可使反應(yīng)液中麻黃堿21.一種生產(chǎn)麻黃堿的方法，其特征在于，所述方法為以(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺為反應(yīng)原料，將(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺在亞胺還原酶或表達亞胺還原酶的基因工程菌的作用下進行反應(yīng)，得到(1R,2S)-2-甲氨基-苯丙烷-1-醇，即麻黃堿；或者，所述方法為以苯甲醛、丙酮酸與甲胺為反應(yīng)原料，將苯甲醛、丙酮酸與甲胺在亞胺還原酶或表達亞胺還原酶的基因工程菌，和，丙酮酸脫羧酶或表達丙酮酸脫羧酶的基因工程菌的共同作用下進行反應(yīng)，得到(1R,2S)-2-甲氨基-苯丙烷-1-醇，即麻黃堿；所述亞胺還原酶為氨基酸序列如SEQIDNo.11、SEQIDNo.13或SEQIDNo.14所示的亞胺還原酶中的一種或多種。2.如權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)麻黃堿的方法，其特征在于，所述丙酮酸脫羧酶為氨基酸序列如SEQIDNo.15或SEQIDNo.16所示的丙酮酸脫羧酶中的一種或多種。3.如權(quán)利要求1-2任一所述的一種生產(chǎn)麻黃堿的方法，其特征在于，所述方法為以(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺為反應(yīng)原料，先將(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺加入緩沖液中，得到反應(yīng)體系，然后在反應(yīng)體系中加入亞胺還原酶或表達亞胺還原酶的基因工程或者，所述方法為以苯甲醛、丙酮酸與甲胺為反應(yīng)原料，先將苯甲醛、丙酮酸與甲胺加入緩沖液中，得到反應(yīng)體系，然后在反應(yīng)體系中加入亞胺還原酶或表達亞胺還原酶的基因工程菌，和，丙酮酸脫羧酶或表達丙酮酸脫羧酶的基因工程菌進行反應(yīng)，得到(1R,2S)-2-甲4.如權(quán)利要求3所述的一種生產(chǎn)麻黃堿的方法，其特征在于，當(dāng)反應(yīng)原料為(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺時，所述反應(yīng)體系中還含有葡萄糖脫氫酶、葡萄糖、第一輔酶以及二甲基亞砜，或者，所述反應(yīng)體系中還含有表達葡萄糖脫氫酶的基因工程菌、葡萄糖、第一輔酶以及二甲基亞砜；當(dāng)反應(yīng)原料為苯甲醛、丙酮酸與甲胺時，所述反應(yīng)體系中還含有葡萄糖脫氫酶、葡萄糖、第一輔酶、第二輔酶以及二甲基亞砜，或者，所述反應(yīng)體系中還含有表達葡萄糖脫氫酶5.如權(quán)利要求4所述的一種生產(chǎn)麻黃堿的方法，其特征在于，所述第一輔酶為NADPH和/6.如權(quán)利要求4或5所述的一種生產(chǎn)麻黃堿的方法，其特征在于，所述第二輔酶為焦磷酸硫胺素。7.如權(quán)利要求3-6任一所述的一種生產(chǎn)麻黃堿的方法，其特征在于，所述反應(yīng)體系中，亞胺還原酶的濃度為1.2～30U/mL。8.如權(quán)利要求3-7任一所述的一種生產(chǎn)麻黃堿的方法，其特征在于，所述反應(yīng)體系中，可表達亞胺還原酶的基因工程菌的濃度為16～50g/L。9.權(quán)利要求1所述亞胺還原酶或表達亞胺還原酶的基因工程菌或權(quán)利要求1-8任一所述的一種生產(chǎn)麻黃堿的方法在生產(chǎn)麻黃堿中的應(yīng)用。3技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明涉及一種利用亞胺還原酶生產(chǎn)麻黃堿的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。背景技術(shù)[0002]中藥麻黃具有良好的藥用價值，且具有用藥安全可靠、耐受性強、副作用小的優(yōu)點。它的主要有效成分為麻黃堿(ephedrine)和偽麻黃堿。其中，麻黃堿屬于擬腎上腺激動平滑肌、收縮血管、加速心率、升高血壓及中樞神經(jīng)興奮作用，被應(yīng)用在許多感冒藥中；另肥中有巨大的應(yīng)用前景。[0003]目前，對麻黃堿的生產(chǎn)，國內(nèi)主要采用植物提取法直接從麻黃草中提取麻黃堿，但是，由于麻黃草資源限制，大多數(shù)麻黃堿生產(chǎn)企業(yè)因原料不足而處于半停產(chǎn)狀態(tài)，麻黃堿產(chǎn)量不足已嚴重影響了我國醫(yī)藥企業(yè)的發(fā)展和麻黃堿類藥品在國際市場上的競爭力。國內(nèi)外也有部分廠家，例如，深圳沃蘭德和內(nèi)蒙古赤峰等，使用化學(xué)合成法生產(chǎn)麻黃堿，此方法為先生產(chǎn)L-麻黃堿和D-偽麻黃堿的外消旋體，然后將生產(chǎn)得到的外消旋體進行拆分，但是，此方法所使用的拆分試劑價格昂貴，成本過高。[0004]與植物提取法和化學(xué)合成法相比，生物轉(zhuǎn)化法天然具有原料來源廣以及生產(chǎn)成本低的優(yōu)勢。為解決麻黃堿生產(chǎn)過程中原料不足以及生產(chǎn)成本高的問題，1921年，Neuberg等人采用酵母轉(zhuǎn)化苯甲醛和丙酮酸生產(chǎn)得到了L-苯基乙酰基甲醇(具體可參考文獻：NeubergC,LibermannL.ZurKenntnisderCarboligase[隨后，Hildebrandt等人繼續(xù)將L-苯基乙?；状寂c甲基胺反應(yīng)合成了麻黃堿(具體可參考1956930(C.A.-28:4072),1934-05-01.),這首次實現(xiàn)了麻黃堿的半生物轉(zhuǎn)化。[0005]但是，上述方法依舊存在產(chǎn)量低以及生產(chǎn)得到的麻黃堿雜質(zhì)過多的缺陷，并不能實現(xiàn)真正的工業(yè)化生產(chǎn)。因此，仍需找到一種操作簡單、產(chǎn)量高、生產(chǎn)成本低且生產(chǎn)得到的麻黃堿雜質(zhì)少、穩(wěn)定性好的生產(chǎn)麻黃堿的方法，以早日實現(xiàn)麻黃堿的工業(yè)化生產(chǎn)。發(fā)明內(nèi)容[0007]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種操作簡單、產(chǎn)量高、生產(chǎn)成本低且生產(chǎn)得到的麻黃堿雜質(zhì)少、穩(wěn)定性好的生產(chǎn)麻黃堿的方法。[0008][技術(shù)方案][0009]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)麻黃堿的方法，所述方法為以(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺為反應(yīng)原料，將(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺在亞胺還原酶或表達亞胺還原酶的基因工程菌的作用下進行反應(yīng)，得到(1R,2S)-2-甲氨基-苯丙烷-4[0010]或者，所述方法為以苯甲醛、丙酮酸與甲胺為反應(yīng)原料，將苯甲醛、丙酮酸與甲胺在亞胺還原酶或表達亞胺還原酶的基因工程菌，和，丙酮酸脫羧酶或表達丙酮酸脫羧酶的基因工程菌的共同作用下進行反應(yīng)，得到(1R,2S)-2-甲氨基-苯丙烷-1-醇，即麻黃堿。[0011]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述亞胺還原酶為氨基酸序列如SEQIDNo.11、SEQIDNo.12、SEQIDNo.13或SEQIDNo.14所示的亞胺還原酶中的一種或多種。[0012]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述丙酮酸脫羧酶為氨基酸序列如SEQIDNo.15或SEQIDNo.16所示的亞胺還原酶中的一種或多種。[0013]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述方法為以(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺為反應(yīng)原料，先將(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺加入緩沖液中，得到反應(yīng)體系，然后在反應(yīng)體系中加入亞胺還原酶或表達亞胺還原酶的基因工程菌進行反應(yīng)，得到(1R,2S)-2-甲氨[0014]或者，所述方法為以苯甲醛、丙酮酸與甲胺為反應(yīng)原料，先將苯甲醛、丙酮酸與甲胺加入緩沖液中，得到反應(yīng)體系，然后在反應(yīng)體系中加入亞胺還原酶或表達亞胺還原酶的基因工程菌，和，丙酮酸脫羧酶或表達丙酮酸脫羧酶的基因工程菌進行反應(yīng)，得到(1R,2S)-2-甲氨基-苯丙烷-1-醇，即麻黃堿。[0015]在本發(fā)明的一種實施方式中，當(dāng)反應(yīng)原料為(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺應(yīng)體系中還含有表達葡萄糖脫氫酶的基因工程菌、葡萄糖、第一輔酶以及二甲基亞砜；[0016]當(dāng)反應(yīng)原料為苯甲醛、丙酮酸與甲胺時，所述反應(yīng)體系中還含有葡萄糖脫氫酶、葡萄糖、第一輔酶、第二輔酶以及二甲基亞砜，或者，所述反應(yīng)體系中還含有表達葡萄糖脫氫[0018]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述第二輔酶為焦磷酸硫胺素。[0019]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述反應(yīng)體系中，亞胺還原酶的濃度為1.2～30U/[0020]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述反應(yīng)體系中，可表達亞胺還原酶的基因工程菌的濃度為16～50g/L。[0021]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述反應(yīng)體系中，丙酮酸脫羧酶的濃度為2～12U/[0022]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述反應(yīng)體系中，可表達丙酮酸脫羧酶的基因工程菌的濃度為20～80g/L。[0023]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述反應(yīng)體系中，葡萄糖脫氫酶的濃度為1～8U/mL。[0024]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述反應(yīng)體系中，可表達葡萄糖脫氫酶的基因工程菌的濃度為14～56g/L。[0025]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述反應(yīng)體系中，葡萄糖的濃度為50～300g/L。[0026]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述反應(yīng)體系中，第一輔酶的濃度為0.4～5g/L。[0027]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述反應(yīng)體系中，第二輔酶的濃度為0.01～25mmol/[0028]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述反應(yīng)體系中，二甲基亞砜的濃度為5～20%(v/5[0029]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述反應(yīng)的溫度為20～35℃、pH為6.5～8.5、轉(zhuǎn)速為[0030]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、Tri-[0031]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述表達亞胺還原酶的基因工程菌以大腸桿菌為表[0032]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述表達丙酮酸脫羧酶的基因工程菌以大腸桿菌為[0033]本發(fā)明還提供了亞胺還原酶或表達亞胺還原酶的基因工程菌或上述一種生產(chǎn)麻黃堿的方法在生產(chǎn)麻黃堿中的應(yīng)用。[0034]在本發(fā)明的一種實施方式中，所述亞胺還原酶為氨基酸序列如SEQIDNo.11、SEQIDNo.12、SEQIDNo.13或SEQIDNo.14所示的亞胺還原酶中的一種或多種。[0036](1)本發(fā)明提供了一種利用亞胺還原酶生產(chǎn)麻黃堿的方法，利用此方法以(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺為反應(yīng)原料反應(yīng)18h,即可使反應(yīng)液中麻黃堿的產(chǎn)率高達86.5%,利用此方法以苯甲醛、丙酮酸與甲胺為反應(yīng)原料反應(yīng)18h,即可使反應(yīng)液中麻黃堿的產(chǎn)率高達62.7%,因此，利用此方法生產(chǎn)麻黃堿具有產(chǎn)量高的優(yōu)勢。[0037](2)本發(fā)明提供了一種利用亞胺還原酶生產(chǎn)麻黃堿的方法，利用此方法以(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺為反應(yīng)原料生產(chǎn)得到的麻黃堿的光學(xué)純度高達99.6%,利用此方法以苯甲醛、丙酮酸與甲胺為反應(yīng)原料生產(chǎn)得到的麻黃堿的光學(xué)純度高達92.1%,因此，利用此方法生產(chǎn)得到的麻黃堿雜質(zhì)含量少、穩(wěn)定性好。[0038](3)本發(fā)明提供了一種利用亞胺還原酶生產(chǎn)麻黃堿的方法，利用此方法可以(R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇與甲胺，或者，苯甲醛、丙酮酸與甲胺為反應(yīng)原料生產(chǎn)麻黃堿，這些反應(yīng)原料易獲得且獲得成本較低，因此，利用此方法生產(chǎn)麻黃堿具有成本低的優(yōu)勢。[0039](4)本發(fā)明提供了一種利用亞胺還原酶生產(chǎn)麻黃堿的方法，利用此方法生產(chǎn)麻黃堿僅需將相關(guān)原料和相關(guān)酶或可表達相關(guān)酶的相關(guān)基因工程菌投入反應(yīng)體系中即可完成，因此，利用此方法生產(chǎn)麻黃堿具有操作簡單的優(yōu)勢。具體實施方式[0040]以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細描述，但該實施例不應(yīng)該理解為對[0041]下述實施例中涉及的大腸桿菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)購自北納生物；下甲基亞砜購自國藥集團；述實施例中涉及的葡萄糖脫氫酶購自上海研生生化試劑有限公[0042]下述實施例中涉及的培養(yǎng)基如下：6[0046](R)-1-苯基-2-羰基-3-丙醇產(chǎn)率以及光學(xué)純度的檢測方法：參考文獻"ContinuousProductionReactorUsingaPotentMutantofPyruvatEenoo,F.T.Delbeke,DevelopmentandvalidationofanLC-MS/MSquantificationofephedrinesinurine,JChromatogr[0048]下述實施例中涉及的可表達丙酮酸脫羧酶的基因工程菌以及(R)-1-苯基-2-羰將其與質(zhì)粒pET-28a(+)相連，獲得重組質(zhì)粒pETXhoI雙酶切后進行電泳驗證，并對質(zhì)粒進行測序驗證，驗證正確，獲得重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a200rpm的條件下培養(yǎng)至OD在0.4～0.850g/L,硫胺素焦磷酸的濃度為2.5mmol/L,MgCl?的濃度為5mmol/L,二甲基亞砜的濃度為5為31.4～86.7%,光學(xué)純度為95.7～99.4%((R)-1-苯基2-羰基-3-丙醇的純化方法參考文7[0054]將反應(yīng)液離心收集上清，將上清用濃度為10mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為8,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將上清濃縮至體積為1/2,再用濃度為10mol/L的HC1溶液調(diào)節(jié)pH為7,0～8℃下放置12～14h,過濾收集固體，將所得固體融入濃度為1mol/L的NaOH溶液中，再用濃度為10mol/L的HCl溶液調(diào)節(jié)pH為7,加入乙醇進行結(jié)晶，收集結(jié)晶，洗滌后進行真空干燥，得到麻黃堿晶[0055]實施例1:可表達亞胺還原酶的基因工程菌的構(gòu)建[0056]化學(xué)合成編碼氨基酸序列分別如SEQIDNo.1～SEQIDNo.14所示的亞胺還原酶的基因，并將其與質(zhì)粒pET-28a(+)相連，獲得重組質(zhì)粒pET-28a(+)-ired1～pET-28a(+)-ired14,此步驟由南京金斯瑞生物科技有限公司完成；[0057]將獲得的重組質(zhì)粒pET-28a(+)-ired1～pET-28a(+)-ired14分別導(dǎo)入大腸桿菌E.coliBL21(DE3)中；將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌E.coliBL21(DE3)劃線于含有素的LB固體培養(yǎng)基上，于37℃的條件下培養(yǎng)20～24h;挑取陽性轉(zhuǎn)化子接種于含有50μg/mL卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，于37℃、200rpm的條件下培養(yǎng)12～14h,收集菌體，提取質(zhì)粒，將質(zhì)粒經(jīng)限制性內(nèi)切酶EcoRI和XhoI雙酶切后進行電泳驗證，并對質(zhì)粒進行測序驗證，驗證正確，獲得重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired1～重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-[0058]將重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired1～重組大腸桿菌E.coli℃的條件下培養(yǎng)20～24h,獲得單菌落；挑取單菌落接種于添加了50μg/mL卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，于37℃、200rpm的條件下培養(yǎng)6～8h,獲得種子液；將種子液以2～10%(v/v)的0.4～0.8之間后，在培養(yǎng)液中加入終濃度為0.1～1mmol/L的IPTG,于17～28℃的條件下繼續(xù)進行誘導(dǎo)12～20h,獲得發(fā)酵液；將發(fā)酵液進行離心，收集菌體，得到重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired1～重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired14全[0059]實施例2:麻黃堿的制備[0060]以含有空質(zhì)粒pET-28a(+)的大腸桿菌E.coliBL21(DE3)為空白對照，以(R)-1-苯基-2-羰基3-丙醇(30g,0.2mol)、甲胺(62g,2mol)和葡萄糖(36g,0.2mol)為底物，以磷酸鹽緩沖液為溶劑，分別以實施例1獲得的重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired1~重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired14全細胞和葡萄糖脫氫酶共同作為度為25℃、pH值為8.5、轉(zhuǎn)速為200rpm的條件下進行反應(yīng)18h,獲得含有麻黃堿的反應(yīng)液；反應(yīng)體系中，重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired全細胞的濃度為34g/L,NADP的濃度為0.4g/L,二甲基亞砜的濃度為10%(v/v)。檢測反應(yīng)液中麻黃堿的產(chǎn)率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：空白對照組獲得的反應(yīng)液中不能檢測到麻黃堿；以重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired1～重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired10全細胞為催化劑獲得的反應(yīng)液中也不能檢測到麻黃堿；以重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired11全細胞為催化劑時，產(chǎn)率為62.9～67.3%;以重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired12全細胞為催化劑時，產(chǎn)率為9.2～11.3%;以重組大腸桿菌E.coliBL218(DE3)/pET-28a(+)-ired13全細胞為催化劑時，產(chǎn)率為34.6～42.8%;以重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired14全細胞為催化劑時，產(chǎn)率為77.9～86.5%。[0061]將以重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired11～重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired14全細胞為催化劑時獲得的反應(yīng)液中的麻黃堿進行純化，得到麻黃堿晶體。檢測麻黃堿晶體的光學(xué)純度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：光學(xué)純度為99.1～99.6%。[0062]實施例3:麻黃堿的制備[0063]以苯甲醛(31.8g,0.3mol)、丙酮酸(17.6g,0.2mol)、甲胺(31g,1mol)和葡萄糖(45g,0.25mol)為底物，以磷酸鹽緩沖液為溶劑，分別以實施例1獲得的重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-iredl1～重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired14全細胞、可表達丙酮酸脫羧酶的基因工程菌和葡萄糖脫氫酶共同作為催化劑，以焦溫度為25℃、pH值為7.5、轉(zhuǎn)速為200rpm的條件下進行反應(yīng)26h,獲得含有麻黃堿的反應(yīng)液；反應(yīng)體系中，可表達丙酮酸脫羧酶的基因工程菌的濃度為50g/L,重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired全細胞的濃度為42g/L,焦磷酸硫胺素的濃度為3.2mmol/L,NADP+的濃度為0.45g/L,二甲基亞砜的濃度為10%(v/v)。檢測反應(yīng)液中麻黃堿的產(chǎn)率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：以重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired11全細胞為催化劑時，產(chǎn)率為42.6～59.7%;以重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired12全細胞為催化劑時，產(chǎn)率為3.1～6.2%;以重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired13全細胞為催化劑時，產(chǎn)率為19.8～22.6%;以重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired14全細胞為催化劑時，產(chǎn)率為48.5～62.7%。[0064]將以重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired11～重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a(+)-ired14全細胞為催化劑時獲得的反應(yīng)液中的麻黃堿進行純化，得到麻黃堿晶體。檢測麻黃堿晶體的光學(xué)純度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：光學(xué)純度為81.4～92.1%。[0065]雖然本發(fā)明已以較佳實施例公開如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動與修飾，因此本發(fā)明的保護范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所界定的為準。CN110564788B序列表1/21頁9[0002]<110>江南大學(xué)[0003]<120>一種利用亞胺還原酶生產(chǎn)麻黃堿的方法[0009]<213>人工序列[0017]AlaV[0038]210CN110564788B序列表2/21頁[0042][0052]<213>人工序列CN110564788B序列表3/21頁11210225230260265<213>人工序列CN110564788B序列表4/21頁12[0117]PheAspA[0123]ValGl[0124]210[0125]ArgTrpLeuGlyT[0126]225230[0127]ValAspGlu[0128][0129]Ile[0132]275[0140]<213>人工序列[0146]GlyCN110564788B序列表5/21頁[0156]AspThrProG[0169]210[0171]225230[0172]Asp[0173][0176]IleAlaLeuP[0177]275[0185]<213>人工序列[0191]GlyCN110564788B序列表6/21頁[0195]ValAlaSerPro[0217]AlaArg[0218][0220]260[0228]<213>人工序列CN110564788B序列表7/21頁[0257]210[0265]275CN110564788B序列表8/21頁[0287]AlaGlnAr[0300]210[0302]225230[0304]CN110564788B序列表9/21頁[0314]<213>人工序列[0322]AlaAlaSer[0330]Ile[0342]ThrAl[0343]210[0345]225230[0347][0350]AlaIleCN110564788B序列表10/21頁[0357]<213>人工序列[0361]<223>Xaacanbe[0365]<223>Xaacanbe[0369]<223>Xaacanbe[0373]<223>Xaacanbe[0377]<223>Xaacanbe[0381]<223>XaacanbeCN110564788B序列表11/21頁[0391]AlaSer[0410]210[0412]225230[0414]245[0426]<213>人工序列CN110564788B序列表12/21頁[0430]GlyS[0438]ProAlaArgG[0440]Gly[0455]210[0457]225230[0459][0460]ValAspThrGluCN110564788B序列表13/21頁21[0469]<213>人工序列[0498]210[0500]225230[0502][0506]275CN110564788B序列表14/21頁[0512]<213>人工序列[0541]210CN110564788B序列表15/21頁[0549]275[0555]<213>人工序列[0565]CysLeuLeu[0584]210CN110564788B序列表16/21頁[0586]225230[0588][0592]275[0597]<213>人工序列CN110564788B序列表17/21頁[0626]210[0628]225230[0630][0634]275[0640]<213>人工序列[0652]PheA[0658]LysAsnIle[0660]ProAlaLyCN110564788B序列表18/21頁210212252302452526026275