篇一：培養(yǎng)基的制備與滅菌試驗(yàn)匯報(bào)

陜西師范大學(xué)遠(yuǎn)程教育學(xué)院

生物學(xué)試驗(yàn)匯報(bào)

匯報(bào)題目培養(yǎng)基的制備與滅菌

姓名劉偉

學(xué)號(hào)

專業(yè)生物科學(xué)

批次/層次

指導(dǎo)教師

學(xué)習(xí)中心培養(yǎng)基的制備與滅菌

一、目的規(guī)定

1.掌握微生物試驗(yàn)室常用玻璃需皿的清洗及包扎措施。

2.掌握培養(yǎng)基的配置原則和措施。

3.掌握高壓蒸汽滅菌的操作措施和注意事項(xiàng)。

二、基本原理

牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基.

是一種應(yīng)用最廣泛和最一般的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時(shí)又稱為一般培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中具有一般細(xì)

胞生長(zhǎng)繁殖所需要的最基本的營養(yǎng)物質(zhì)，因此可供細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖之用。

高壓蒸汽滅菌：

重要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而到達(dá)殺死微生物的效果。將滅菌的物品放在一種密閉和加壓的滅菌鍋

內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋內(nèi)水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待蒸汽將鍋內(nèi)冷空氣從排氣閥中趨盡，關(guān)閉排氣催繼續(xù)

加熱。此時(shí)蒸汽不溢出，壓力增大，沸點(diǎn)升高，獲得高于100°⑥溫度導(dǎo)致菌體蛋白凝固變性，而到達(dá)

滅菌的目的。

三、試驗(yàn)材料

1.藥物：牛肉仔、蛋白陳'nacl、瓊脂、lmol/1的naoh和hcl溶液。

2.儀器及玻璃器皿：天平、高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、三

角瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等。

3.其他物品：藥匙、稱量紙、ph試紙、記號(hào)筆、棉花等。

四、操作環(huán)節(jié)

（-）玻璃器皿的洗滌和包裝

1.玻璃器皿的洗滌

玻璃器皿在使用前必須洗刷潔凈。將三角瓶、試管、培養(yǎng)皿、量筒等浸入具有洗滌劑的水中.用毛刷刷

洗，然后用自來水及蒸僧水沖凈。移液管先用品有洗滌劑的水浸泡，再用自來水及蒸儲(chǔ)水沖洗。洗刷潔

凈的玻璃器皿置于烘箱中烘干后備用。

2.滅菌前玻璃器皿的包裝

（1）培養(yǎng)皿的包扎：培養(yǎng)瓜由一蓋一底構(gòu)成一套，可用報(bào)紙將幾套培養(yǎng)皿包

成一包，或者將幾套培養(yǎng)皿直接置于特制的鐵皮圓筒內(nèi)，加蓋滅菌。包裝后的培養(yǎng)皿須經(jīng)滅菌之后才能

使用。

（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花（勿用脫脂棉），它的作

用是防止外界及口中雜菌進(jìn)入管內(nèi)，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應(yīng)距管口約0.5cm左

右，棉花自身長(zhǎng)度約17.55。塞棉花時(shí).可用一外圍拉直的曲別針、將少許棉花塞入管口內(nèi)。棉花要

塞得松緊合適，吹時(shí)以能通氣而又不使棉花滑下為準(zhǔn)。

先將報(bào)紙裁成寬約5cm左右的長(zhǎng)紙條，然后將已塞好棉花的移液管尖端放在長(zhǎng)條報(bào)紙的?端，約成45℃

角，折疊紙條包住尖端，用左手握住移液管身，有r?將移液管壓緊.在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，以螺旋式包扎

起來。上端剩余紙條，折桂打結(jié)，準(zhǔn)備滅菌。

（-）液體及固體培養(yǎng)基的配制過程

1.液體培養(yǎng)基配制

（1）稱量（假定配制1000ml培養(yǎng)基）

按培養(yǎng)基配方比例依次精確地稱取3.0g牛肉膏、10.0g蛋白陳、5.0gnacl放入燒杯（或lOGOml

刻度搪瓷杯）中.牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯。

（2）溶化

在上述燒杯中先加入少于所需要的水量（如約lOOml）,用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶

解，將藥物完全溶解后，補(bǔ)充水到所需的總體積（1000ml）：假如配制固體培養(yǎng)基時(shí)，將稱好的原脂

放人已溶的藥物中，再加熱溶化，最終補(bǔ)足所損失的水分。

（3）調(diào)ph

調(diào)ph：一般用ph試紙測(cè)定培養(yǎng)基的ph。用剪刀剪出一小段ph試紙，然后用鍛子夾取此段ph試紙，

在培養(yǎng)基中蘸一下，觀看其ph范圍，如培養(yǎng)基偏酸或偏堿時(shí)，可用naoh或lmol/1上cl溶

液進(jìn)行調(diào)整。調(diào)整ph時(shí)，應(yīng)逐滴加入naoh或hci溶液，防止局部過酸或過堿，破壞培養(yǎng)基中成分。

邊加邊攪拌，并不時(shí)用ph試紙測(cè)試，直至ph達(dá)7.4-7.6。反之，用imol/Ihcl進(jìn)行調(diào)整。

2.固體培養(yǎng)基的配制

配制固體培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)將已配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸，再將稱好的瓊脂（1.5~2%）加

入，并用玻棒不停攪拌，以免糊底燒焦。繼續(xù)加熱至瓊脂所有融化，最終補(bǔ)足因蒸發(fā)而失去水分。

（三）培養(yǎng)基的分裝

根據(jù)不一樣需要，可將已配好培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶?jī)?nèi)，分裝時(shí)注意不要使培養(yǎng)基沾污管口或瓶

口，導(dǎo)致污染。如操作不小心，培養(yǎng)基沾污管口或瓶口時(shí)，可用鐐子夾一小塊脫脂棉，擦去管口或瓶口

的培養(yǎng)基，并將脫脂棉棄去。

1.試管的分裝

取一種玻璃漏斗，裝在鐵架上，漏斗下連一根橡皮管，橡皮管下端再與另一玻璃管相接，橡皮管的中部

加一彈簧夾。分裝時(shí)，用左手拿住空試管中部，并將漏斗下的玻璃管嘴插入試管內(nèi)，以右手拇指及食指

開放彈簧夾，中指及無名指夾佐玻璃管嘴，使培養(yǎng)基直接流入試管內(nèi)。裝入試管培養(yǎng)基的量視試管大小

及需要而定，若所用試管大小為15x150mm時(shí)，液體培養(yǎng)基可分裝至試管高度1/4左有為宜；如分

裝固體或半固體培養(yǎng)基時(shí)，在瓊脂完全融化后，應(yīng)趁熱分裝于試管中。用于制作斜面的固體培養(yǎng)基的分

裝量為管高1/5（約3-4mi）,半固體培養(yǎng)基分裝量為管高的1/3為宜。

2.三角瓶的分裝

用于振蕩培養(yǎng)微生物時(shí)，可在250ml用于制作

平板培養(yǎng)基用時(shí)，可在250nl三角瓶中加入150ml粉（按2%計(jì)算），滅菌時(shí)瓶中瓊脂粉同步被觸

化。

（四）棉塞的制作及試管、三角瓶的包扎

為了培養(yǎng)好氣性微生物，需提供優(yōu)良通氣條件，同步為防止雜菌污染，則必須對(duì)通入試管或三角瓶?jī)?nèi)空

氣預(yù)先進(jìn)行過濾除菌。一般措施是在試管及三角瓶口加上棉花塞等。

1.試管棉塞的制作

制棉塞時(shí)，應(yīng)選用大小、厚薄適中的一般棉花一塊，鋪展于左手拇指和食指扣成的團(tuán)孔上，用右手食指

將棉花從中央壓入團(tuán)孔中制成棉塞.然后直接壓入試管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折尊

卷塞法制作棉塞。

制作的棉塞應(yīng)緊貼管壁，不留縫隙，以防外界微生物沿縫隙侵入，棉塞不適宜過緊或過松，塞好后以手

提棉塞，試管不下落為準(zhǔn)。棉塞的2/3在試管內(nèi)，1/3在試管外。目前也有■采用硅膠塞替代棉塞直接

蓋在試管口上。

將裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或硅膠塞的試管捆成一捆，外面包L：一層牛皮紙。用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱及

配制日期，火苗待用。

2.三角瓶棉塞制作

一般在棉塞外包上一層紗布，再塞在瓶口上。有時(shí)為了進(jìn)行液體振蕩培養(yǎng)加大通氣量，則可用8層紗布

替代棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅膠塞直接蓋在瓶口上。

在裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或包扎八層紗布或蓋好硅膠塞的三角瓶口上，再包上一層牛皮紙并用線純捆

好，滅菌待用。

（五）培養(yǎng)基的滅菌

將上述培養(yǎng)基以0.103mpa,121℃20min高壓蒸氣滅菌。

滅菌過程：

1.加水：首先將內(nèi)層鍋取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，及水面沒過加熱蛇

管，與三角擱架相平為宜。切勿忘掉檢查水位，加水量過少，滅菌鍋會(huì)發(fā)生燒干引起炸裂事故。

2.裝料：放回內(nèi)層鍋，并裝入待滅菌的物品。注意不要裝得太擠，以免阻礙蒸

汽流通而影響滅菌效果。裝有培養(yǎng)基的容器放置時(shí)要防止液體溢出，三角瓶與試管口端均不要與椎壁接

觸，以免冷凝水淋濕包扎的紙而透入棉塞。

3.加蓋：將蓋上與排氣孔用連的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣嘈內(nèi)，挖正鍋蓋，

對(duì)齊螺口，然后以對(duì)稱方式同步旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣，并打開排氣低。

4.排氣：打開電源加熱滅菌鍋，將水煮沸，使鍋內(nèi)的冷空氣和水蒸汽一起從排

氣孔中排出。一般認(rèn)為當(dāng)排出的氣流很強(qiáng)并有噓聲時(shí)，表明鍋內(nèi)的空氣己排盡，沸騰后約需5分伊。

5.升壓：冷空氣完全排盡后，關(guān)閉排氣閥，維續(xù)加熱，鍋內(nèi)樂力開始上升。

6.保壓：當(dāng)壓力表指針到達(dá)所需壓力時(shí)，控制電源，開始計(jì)時(shí)并維持壓力至所

需的時(shí)間。如本試驗(yàn)中采用O.lmpa,121.5℃20分鐘滅菌。

滅菌的重要原因是溫度而不是壓力，因此鍋內(nèi)的冷空氣必須完全排盡后，才能關(guān)閉排氣閥，維持所需壓

力。

7.降壓：到達(dá)滅菌所需的時(shí)間后，切斷電源，讓滅菌鍋溫度芻然下降，當(dāng)壓力

表的壓力降至''0〃后，方可打開排氣閥，排盡余下的蒸汽，旋松螺栓，打開鍋蓋，取出滅菌物品，倒掉

鍋內(nèi)剩水。壓力一定要降到''0〃后，才能打開排氣閥，開蓋取物。否則就會(huì)因鍋內(nèi)壓力忽然下降，使容

器內(nèi)的培養(yǎng)基或試劑由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出容器口，導(dǎo)致瓶口被污染，甚至灼傷操作者。

（六）斜面和平板的制作

1.斜面的制作

將已滅菌裝有瓊脂培養(yǎng)基的試管，趁熱置于木棒或玻棒上，使成合適斜度，凝固后即成斜面。斜直長(zhǎng)度

不超過試管長(zhǎng)度1/2為宜。如制作半團(tuán)體或固體深層培養(yǎng)基時(shí)，滅菌后則應(yīng)垂直放置至凝固。

2.平板的制作

將裝在三角瓶或試管中已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基融化后，待冷至50°。七右傾入無菌培養(yǎng)皿中。溫度過高時(shí)，

皿蓋上的冷凝水太多：溫度低于50℃培養(yǎng)基易于凝固而無法制作平板。

平板的制作應(yīng)在火旁進(jìn)行，左手拿培養(yǎng)皿，右手拿三角瓶的底部或試管，左手同步用小指和手掌招棉塞

打開，灼燒瓶口，用左手大拇指將培養(yǎng)皿蓋打開一縫，至瓶口恰好伸入，傾入1075ml培養(yǎng)基，迅速

蓋好皿蓋，置于桌上，輕輕旋轉(zhuǎn)平皿，使培養(yǎng)基均勻分布于整個(gè)平皿中，冷凝后即成平板。

（七）培養(yǎng)基的滅菌檢杳

滅菌后的培養(yǎng)基，一般需進(jìn)行無菌檢配最佳取出1~2管（瓶），置于37°（溫箱中培養(yǎng)1~2天，確定無

菌后方可使用。篇二：微生物試驗(yàn)匯報(bào)

膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)

專業(yè)：學(xué)號(hào)：姓名：

一、試驗(yàn)?zāi)康?/p>

探究檢測(cè)其病原菌的類型并通過一系列的觀測(cè)與鑒定從而確定其病原菌的名稱和性質(zhì)。在實(shí)踐中學(xué)習(xí)培

養(yǎng)基的制備、消毒和滅菌，細(xì)菌的分離與培養(yǎng)，細(xì)菌群體和個(gè)體形態(tài)特性的觀測(cè)，細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定等

技巧。從而掌握微生物試驗(yàn)的多種操作措施，培養(yǎng)對(duì)微生物試驗(yàn)的愛好。

二、試驗(yàn)材料

器材

打火機(jī)、油性筆、酒精燈、接種環(huán)、接種針、污物盤、一般冰柜、隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱、奧林巴斯

CX21型生物顯微鏡、電爐、試管（帶棉塞）、稱是紙、藥勺、牛皮紙、硫酸紙、橡皮筋、尺子、推形

瓶、高壓蒸汽滅菌器、鏡子、玻片、吸水紙、拭鏡紙

試劑藥物

一般營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、蒸儲(chǔ)水、膿汁標(biāo)本、糞便標(biāo)本、石蠟油、生理鹽水、結(jié)晶紫、盧戈碘液、95街乙

醉、稀釋復(fù)紅、葡萄糖微量發(fā)酵管（2支）、乳糖微量發(fā)酵管（2支）、青霉素抗菌素紙片、鏈霉素抗

菌素紙片、慶大霉素抗菌素紙片、血漿、福氏志賀菌診斷血清

三、措施與環(huán)節(jié)

干粉培養(yǎng)基-蒸儲(chǔ)水-加熱溶化-分裝-集中放在試管筐里-罩上疏酸紙、牛皮紙-用橡皮筋扎好-放入

講臺(tái)邊的滅菌桶或滅菌筐內(nèi)-送到高壓蒸汽滅菌室（洗刷室）-滅菌-

（1）平板培養(yǎng)基：傾注平板10ml-瓊脂完全凝固后，平板倒放-4°磔箱保留備用。

（2）斜面培養(yǎng)基：培養(yǎng)基趁熱斜放-瓊脂凝固后來，4°砒箱保留備用。-貼上標(biāo)簽后滅菌使用。

■氣的細(xì)菌學(xué)檢查

每組1個(gè)營養(yǎng)瓊脂平板，選擇采樣地點(diǎn)（試驗(yàn)室、衛(wèi)生間或任選地點(diǎn)）-將平板蓋打開，蓋朝卜放置在

平板旁邊-平板暴露下空氣中15min-平板倒扣蓋上-作標(biāo)識(shí)箱培養(yǎng)24h-觀測(cè)成果。

②k體體表的細(xì)菌學(xué)檢查

甲乙常規(guī)洗手，丙丁原則洗手。甲和乙、丙和丁共用1個(gè)平板

按規(guī)定在一股平板上接種手指上的細(xì)菌。第1格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4

格空白對(duì)照。

接種環(huán)燒灼滅菌r分別取膿汁標(biāo)本與糞便標(biāo)本點(diǎn)在一般平板和依紅美藍(lán)平板上，各做兩份，-燒掉接種

環(huán)上多出的標(biāo)本-冷卻后，應(yīng)用分區(qū)劃線分離法，將膿汁標(biāo)本接種于營養(yǎng)瓊脂平板（2份），糞便標(biāo)本

接種于伊紅美藍(lán)平板（2份）-接種環(huán)燒灼滅菌-將平?板倒置37Pg?養(yǎng)18?24h-觀測(cè)成果。

接種環(huán)燒灼滅菌-挑選平板上經(jīng)典的四種單菌落（白色、黃色、紫黑色、粉紅色）進(jìn)行斜面接種純培養(yǎng)

-做好標(biāo)識(shí)-接種環(huán)燒灼滅菌-斜面培養(yǎng)基置于37°G吾養(yǎng)過夜-保留備用

Q畀:工氏染色：

取潔凈載射片-用滅菌操作后的接種環(huán)取生理鹽水1-2環(huán)于玻片上一挑取細(xì)菌培養(yǎng)物少許與鹽水輕均抹

勻-待涂片干燥后在酒精燈火焰外側(cè)迅速來回2-3回合-結(jié)晶紫初染Imin-水洗-盧戈碘液媒染lmin-

水洗-95%乙醇脫色約20S-H洗-稀釋品紅-復(fù)染imin-水洗-吸干，鏡檢。

Q肉湯接種法：

接種環(huán)燒灼滅菌-分別在斜面培養(yǎng)物中挑取菌苔少許-立即移入肉湯培養(yǎng)基管中-在靠近液面的管壁上輕

輕研磨-活取少許肉湯調(diào)和-泡勻-試管口通過火焰2-3次滅菌-塞好棉塞-35°潞界4~6h

接種環(huán)燒灼滅菌-分別取之前試驗(yàn)中得到的四種菌液在一般平板密集涂布-接種環(huán)燒灼滅菌-標(biāo)識(shí)：

青、鏈、慶-鏡子火焰消毒.貼青霉素、鏈霉素、慶大霉素紙片-按壓-?銀子消毒-倒置37°G吾養(yǎng)二8八

24h-觀測(cè)成果取潔凈玻片?張-在左右兩邊分別滴加兔血漿1-2滴，生理鹽水1滴-接種環(huán)燒灼滅菌-

冷卻-分別用接種環(huán)取之前試驗(yàn)所得到的白色和黃色菌苔（2?3個(gè)菌落的菌量）血漿研磨混合-邊混勻

邊觀測(cè)成果,接種環(huán)燒灼滅菌.稍等半響，觀測(cè)成果

接種針燒灼滅菌-用滅菌接和針分別刮取試驗(yàn)所得到的紫黑色和粉紅色菌苔-分別接種在葡萄糖發(fā)醛微

量管中和乳糖發(fā)酵微量管內(nèi)-接種環(huán)燒灼滅菌-將微量管平放在平板內(nèi)-37°璐養(yǎng)過夜后-觀測(cè)成果。

接種針燒灼滅菌-分別用接和針在紫黑色和粉紅色的斜面取菌-從半固體培養(yǎng)基中心垂直刺入，可刺達(dá)

近底管處，但不要抵達(dá)管底-循本來的路線退出接種針-試管口迅速通過火焰2-3次滅菌-塞好棉塞-燒

灼滅菌接種針宮養(yǎng)24h-觀測(cè)成果

取潔凈的載破片一張-將磨面近端設(shè)為對(duì)照區(qū)-滴加牛理鹽水-遠(yuǎn)端設(shè)為試驗(yàn)區(qū)一滴加福氏志賀菌

診斷血清15ul-接種環(huán)燒灼滅菌-用接種環(huán)分別取粉紅色菌苔-研磨于鹽水或血清內(nèi)，混合均勻-接種環(huán)

燒灼滅菌-載玻片來回傾側(cè)-觀測(cè)成果

四、成果與討論對(duì)膿汁中細(xì)菌的分析討論

1、用一般平板，從膿汁標(biāo)本中分離出金黃色和白色兩種菌落。

2、在顯微鏡下觀測(cè)時(shí)，這兩種細(xì)菌均為g+球菌，排列不規(guī)則，呈葡萄串狀，是經(jīng)典的葡荀球菌。

3、結(jié)合菌落的顏色，可以初步斷定，這是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。

4、通過血漿凝固醐試驗(yàn)，觀測(cè)到黃色菌落的細(xì)菌能使血漿產(chǎn)生顆粒性物質(zhì)，闡明為凝固海陽性；白色

菌落則沒有凝集反應(yīng)，闡明其為凝固酶陰性。

5、最終進(jìn)行的是藥敏試驗(yàn)，從培養(yǎng)基上可以觀測(cè)到，不一樣的抗生素所形成的抑菌圈不一樣。其中青

霉素對(duì)金黃色葡萄球菌最敏感。

對(duì)糞便中細(xì)菌的分析討論

1、用伊紅美盤平板分離菌落E、j,?J以從囊便標(biāo)本中分離出紫黑色具有金屬光澤的菌落和粉紅色半透明

菌落0

2、在顯微鏡下觀測(cè)時(shí)，這兩種菌均為g-桿菌，排列不規(guī)則，從形態(tài)上不能鑒別是什么細(xì)菌。

3、經(jīng)糖發(fā)酵試驗(yàn)，可以觀測(cè)到，紫黑色的細(xì)菌能使葡萄糖和乳糖的試管變色和產(chǎn)生氣體：粉紅色的細(xì)

菌只能使葡萄糖的試管變色。

4、經(jīng)半固體動(dòng)力試驗(yàn)，觀測(cè)到紫黑色的細(xì)菌使半固體培養(yǎng)基成渾濁狀態(tài)，粉紅色的細(xì)菌只在接種針插

入的方向匯集。

5、綜上所述，紫黑色的細(xì)菌為大腸埃希菌，粉紅色的細(xì)菌為志賀菌。

6、最終進(jìn)行藥敏試驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)大腸埃希菌對(duì)青毒素不敏感，對(duì)慶大霉素和鏈霉素都敏感。

綜上所述，膿汁標(biāo)本中分離得黃色菌落為金黃色葡萄球菌，白色菌落為白色前萄球菌，致病菌為金黃色

葡萄球菌；糞便標(biāo)本中分離得紫黑色菌落為大腸埃希菌，粉紅菌落為福氏志賀菌，致病菌為福氏志賀

菌.篇三：微生物試驗(yàn)匯報(bào)

動(dòng)物微生物及免疫學(xué)試驗(yàn)匯報(bào)

一、試驗(yàn)?zāi)康?/p>

（一）掌握一般培養(yǎng)基的制備原理及規(guī)定，掌握培養(yǎng)基酸堿度的測(cè)定，熟悉一

般培養(yǎng)基的制備過程和多種借皿滅菌措施。

（二）掌握細(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和措施，掌握細(xì)菌抹片的制備措施和革蘭

氏染色法及油鏡的使用措施，并認(rèn)識(shí)革蘭氏染色的反應(yīng)特性。

（三）掌握學(xué)習(xí)用微生物學(xué)原理診斷疾病的一?般措施及環(huán)節(jié)。

二、試驗(yàn)用品

（一）器材

量筒、燒杯、電子天平、漏斗、三角燒瓶、空試劑瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、ph試紙、紗

布、脫脂棉、天平、電爐、試劑瓶瓶塞、扎繩、放大鏡、包裝紙、洗耳球、酒精燈、載玻片、火柴、吸

水紙、剪刀、記號(hào)筆、接種環(huán)、注射器、鑲子、鉗子、毫米尺、培養(yǎng)箱、水浴培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌

鍋、油鏡

（二）試劑及材料

肘膿、蛋白膿、豬膽鹽、氯化鈉、瓊脂、乳糖、0.0"結(jié)晶紫水溶液、0.5告中性紅水溶液、血清、胰化

蛋白膿、酵母提取物、氫氧化鈉、鹽酸、牛血清、革蘭氏染色液、蒸飽水、小白鼠、病豬內(nèi)臟

三、試驗(yàn)環(huán)節(jié)

（-）培養(yǎng)基的制備（所有用到的器皿都已121°GS壓滅苗15~30min,傾注平板在無菌操作臺(tái)內(nèi)完

畢，并放在無菌操作臺(tái)內(nèi)）

1、麥康凱培養(yǎng)基

（1）構(gòu)成：蛋白陳17g、肘陳3g、豬膽鹽5g、氯化鈉5g、瓊脂17g、乳糖

10g.0.01會(huì)結(jié)晶紫水溶液10ml、0.5%中性紅水溶液5m1、蒸儲(chǔ)水1000ml

（2）措施：將蛋白陳、時(shí)陳、豬膽鹽和氯化鈉溶解于400ml蒸儲(chǔ)水中，調(diào)整

液混合，分裝于燒瓶?jī)?nèi)，用紗布、扎繩等捆好后，121°■壓滅菌

15-30mino待冷卻至50~55°（Dj,加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，搖勻后

幀注平板。

注：結(jié)晶紫和中性紅水溶液倒好后需經(jīng)高壓滅菌。

2、血清平板

（1）構(gòu)成：營養(yǎng)瓊脂、牛血清

（2）措施：將滅菌的營養(yǎng)瓊脂加熱熔化，冷卻至45~50°?j,加入牛血清，并

混勻，傾注平板。

注：不得將牛血清一并加入后再滅菌。

3、1b培養(yǎng)基

（1）構(gòu)成：胰化蛋白陳10g、醉母提取物5g、氯化鈉10g、瓊脂15g

（2）措施：在950ml蒸飽水中加入胰化蛋白陳、酵母提取物、瓊脂和氯化鈉，

調(diào)整ph至7.4,加熱熔化，分裝于瓶中，用紗布、扎繩等捆好后，121°國壓滅菌15~30min。待冷卻

至S0~55W，傾注平板。

4、液體培養(yǎng)基（在1b培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，裝入大試劑瓶中，不加瓊脂，不分裝）

（二）病料取材在病豬死亡后，首先用顯微鏡檢查其末梢血液膜片中與否有炭疽桿菌存在，未發(fā)現(xiàn)，則

立即用消毒的器械對(duì)其進(jìn)行生理解剖，觀測(cè)其病理特性現(xiàn)象，取出病豬的十二指腸、胃、肝臟三處的組

織物，井注意組織的完整性，用儲(chǔ)物袋密封保留。

（三）細(xì)菌粗培養(yǎng)

1、消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好試驗(yàn)手套，再用消毒水對(duì)無菌操作臺(tái)內(nèi)桌面及用酒精

燈外焰看待用器械進(jìn)行火焰滅菌。

2、接種

（1）在無菌操作臺(tái)酒精燈旁打開用儲(chǔ)物袋密封保留的病料，先左手持鎰子右

手持剪刀，把病料剪出一種小口。

（2）右手持滅過菌的接種環(huán)，左手持平板，并用拇指、食指及中指將平皿揭

開約20左右，然后將接種環(huán)前端插入小口旋轉(zhuǎn)?下后，再用劃線接種的措施接種到一種血清平板上。

（3）用記號(hào)筆在平板底部作好日期、操作人員、部位等標(biāo)識(shí)，并將平板倒放。

以此措施，分別接種卜二指腸、胃粘膜、肝臟于血清平板上，各接種2個(gè)血清平板。

3、培養(yǎng)：將接種好的血清平板倒扣放入37°微養(yǎng)箱中,反向培養(yǎng)24小時(shí)。注：劃線接種時(shí)盡恃劃

開，以保證長(zhǎng)出單個(gè)菌落，R劃線時(shí)接種環(huán)應(yīng)盡量?jī)A斜，以免劃破培養(yǎng)基（后同）；待接種完畢后熄滅

無菌操作臺(tái)內(nèi)酒精燈，關(guān)閉好無菌操作臺(tái)窗口，打開無菌操作臺(tái)內(nèi)的紫外燈。。

（四）細(xì)菌純培養(yǎng)

1、菌落特性判斷

待粗培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)24小時(shí)后，取出用放大鏡觀測(cè)記錄單個(gè)小菌落的形態(tài)特性并用試驗(yàn)匯報(bào)紙記錄

好，并在平板底部上做好觀測(cè)標(biāo)識(shí)，其形態(tài)特性包括大小、形狀、菌落邊緣、表面構(gòu)造、隆起度、濕潤(rùn)

度、透明度、顏色等。2、取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢

（1）取潔凈的載玻片，用記號(hào)筆在其一面做好正背面標(biāo)識(shí)，再在載玻片另一

面中央滴上一小滴蒸儲(chǔ)水。

（2）將接種環(huán)在火焰上滅菌，待冷卻后，在酒精燈旁從標(biāo)識(shí)的單個(gè)小菌落中

取少許細(xì)菌置于蒸餡水中混勻（同步蓋好平板倒扣置于一旁），用接種環(huán)涂成直徑約1.5cm的菌膜，

再在酒精燈火焰上方以鐘擺速度通過固定好細(xì)菌，待冷卻進(jìn)行染色。

（3）先滴加草酸結(jié)晶紫溶液染色卜2min,再水洗；然后滴加革蘭氏碘液溶液

染色再水洗：隨即滴加953的酒精脫色30~60$,再水洗：最終滴加稀釋的品紅進(jìn)行復(fù)染

30?60s,再水洗：待干燥或吸水紙吸干后鏡檢。

（4）將干燥的載玻片放在1000倍油鏡卜，滴加一滴松柏油送行鏡檢，觀測(cè)其

形態(tài)特性，判斷細(xì)菌的種屬。

3、細(xì)菌接種培養(yǎng)

（1）消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好試驗(yàn)手套，再用消毒水對(duì)

無菌操作臺(tái)內(nèi)桌面及用酒