ICS67.050

CCSX04

15

內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)

DB15/T2784—2022

食用向日葵品種鑒定SNP標(biāo)記法

Varietalverificationoftheconfectionsunflower(Helianthusannuus

L.)SNPmarkertechnology

2022-08-30發(fā)布2022-09-30實(shí)施

內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB15/T2784—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC20）歸口。

本文件起草單位：三瑞農(nóng)業(yè)科技股份有限公司、華智生物技術(shù)有限公司、內(nèi)蒙古自治區(qū)質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)

化研究院。

本文件主要起草人：JIUHUANFENG(馮九煥)、常敏、唐順學(xué)、陳海軍、田冰川、涂偉偉、霍治軍、

李樂、安燕珂、魏志恒、張耀、侯敏、張龍梅。

I

DB15/T2784—2022

食用向日葵品種鑒定SNP標(biāo)記法

1范圍

本文件規(guī)定了利用單核苷酸多態(tài)性（SingleNucleotidePolymorphism,SNP）分子標(biāo)記進(jìn)行食用向

日葵（HelianthusannuusL.）品種鑒定的術(shù)語和定義、原理、儀器設(shè)備及耗材、試劑及溶液配制、檢

測(cè)程序與方法、數(shù)據(jù)采集和記錄、真實(shí)性驗(yàn)證、鑒定結(jié)果報(bào)告等要求。

本文件適用于食用向日葵的品種鑒定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T3543.2農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程扦樣

GB/T3543.5農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程真實(shí)性和品種純度鑒定

GB4407.2經(jīng)濟(jì)作物種子第2部分：油料類

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

品種鑒定varietyverification

判定及驗(yàn)證供檢品種與對(duì)照品種是否為相同品種。

單核苷酸多態(tài)性singlenucleotidepolymorphism（SNP）

基因組中基于單個(gè)核苷酸變異引起的DNA序列多態(tài)性。

競(jìng)爭(zhēng)性等位基因特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)kompetitiveallelespecificPCR（KASP）

通過引物末端特異性堿基競(jìng)爭(zhēng)性匹配DNA模板實(shí)現(xiàn)SNP基因型分型的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。

推薦標(biāo)記recommendedmarkers

能夠最大程度地將供檢品種與對(duì)照品種區(qū)分開來的優(yōu)先選用的一組標(biāo)記。

1

DB15/T2784—2022

基因型分型genotyping

通過檢測(cè)方法確定某品種（或遺傳材料）的基因、DNA區(qū)段或遺傳標(biāo)記的基因型。

4原理

不同向日葵品種的基因組間存在核苷酸序列差異，其中單核苷酸（A、C、G、T）多態(tài)性(SNP)在基

因組內(nèi)分布廣泛、密度高，這種差異可以通過熒光標(biāo)記的KASP基因型分型等技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

利用一套多態(tài)性高、穩(wěn)定性好、品種區(qū)別力強(qiáng)、具良好基因型分型質(zhì)量的推薦標(biāo)記，檢測(cè)供檢樣

品與對(duì)照樣品之間的SNP差異位點(diǎn)數(shù)目，從而判定及驗(yàn)證供檢樣品的品種真實(shí)性。

5儀器設(shè)備及耗材

所需儀器設(shè)備及耗材為：

——實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、全自動(dòng)樣品快速研磨儀、高速離心機(jī)、核酸濃度測(cè)定儀、微孔板離心

機(jī)、微量移液器、恒溫水浴鍋、高壓滅菌鍋、酸度計(jì)、磁力攪拌器、電子天平、冰箱等；

——微量離心管、普通槍頭、384孔PCR板（白色）、封板膜、鋼珠等。

6試劑及溶液配制

試劑要求

6.1.1所用試劑至少為分析純或分子生物學(xué)純。試劑配制用水應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水要求。

6.1.2十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）、乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA?2H2O）、三羥基甲基氨基甲烷（Tris-

base）、三氯甲烷、異丙醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、氫氧化鈉、鹽酸、氯化鈉、乙醇、PCRMasterMix

等。

溶液配制

6.2.10.5mol/LEDTA溶液（pH8.0）：稱取186.1gNa2EDTA?2H2O，溶于800mL水中，加入固體

NaOH（約20g）調(diào)pH至8.0，定容至1000mL，高壓滅菌。

6.2.21.0mol/LTris-HCl(pH8.0)：稱取60.55gTris堿，溶于400mL水中，用HCl調(diào)pH至

8.0，定容至500mL，高壓滅菌。

6.2.32×CTAB提取液：分別稱取20gCTAB和81.7gNaCl，加水溶解，分別加入40mL0.5mol/L

EDTA溶液（pH8.0）、100mL1.0mol/LTris-HCl(pH8.0)，加水定容至1000mL，高壓滅菌。使用

時(shí)，按2%（M/V）加入聚乙烯吡咯烷酮K30（PVP-K30）。

6.2.42×KASPMasterMix：包括TaqDNA聚合酶、通用熒光引物、dNTP、鎂離子、ROX內(nèi)參熒光染料。

6.2.5KASP引物：包括10μMPrimer_AlleleX、10μMPrimer_AlleleY、10μMPrimer_AlleleC。

7檢測(cè)程序與方法

樣品要求

供檢樣品與對(duì)照樣品應(yīng)符合下列要求：

2

DB15/T2784—2022

——供檢樣品和對(duì)照樣品可以為幼葉或種子；

——供檢樣品與對(duì)照樣品為種子時(shí)，樣品的取樣、分樣應(yīng)符合GB/T3543.2的規(guī)定；

——供檢樣品與對(duì)照樣品為種子時(shí)，樣品的純度應(yīng)符合GB4407.2的規(guī)定；

——供檢樣品允許采用混合樣檢測(cè)或單株檢測(cè)?；旌蠘又苽鋺?yīng)至少來源于30個(gè)個(gè)體，單株檢測(cè)

應(yīng)不少于30個(gè)個(gè)體。

DNA提取

本文件推薦采用CTAB法提取DNA，其它能滿足PCR擴(kuò)增質(zhì)量要求的提取方法均可適用。具體操作如下：

a)采集供檢及對(duì)照樣品的種子或幼嫩組織200mg～300mg，置于2.0mL離心管，放入4mm鋼

珠，用全自動(dòng)樣品快速研磨儀于50Hz振動(dòng)50s，重復(fù)2～3次，使葉片充分打碎；

b)加入600μL于65℃預(yù)熱的CTAB提取液，65℃溫浴60min，期間顛倒混勻多次；

c)加入等體積的三氯甲烷，顛倒混勻3min，于12000rpm離心10min；

d)取上清液450mL于新的1.5mL離心管，加0.6倍體積預(yù)冷的異丙醇，顛倒混勻，12000rpm

離心5min，棄去上清液；

e)用300μL70%乙醇溶液洗滌2遍，自然干燥后，加200μLddH2O充分溶解DNA；

f)檢測(cè)DNA濃度并稀釋至25ng/μL～50ng/μL，置于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

PCR檢測(cè)

7.3.1總則

配制反應(yīng)體系時(shí)，應(yīng)同時(shí)設(shè)置1～2個(gè)無DNA模板的陰性對(duì)照（NTC）。根據(jù)NTC信號(hào)強(qiáng)弱，判斷最適

擴(kuò)增循環(huán)數(shù)。若NTC信號(hào)過高，與其它基因型摻雜，則應(yīng)降低擴(kuò)增循環(huán)數(shù)。

7.3.2推薦標(biāo)記

標(biāo)記選擇的基本原則是：遺傳多態(tài)性高、基因組上分布均勻、基因型分型質(zhì)量好、重復(fù)穩(wěn)定性好等。

本文件采用的SNP推薦標(biāo)記及KASP引物序列見附錄A。

7.3.3實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系

本文件推薦以下PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系（見表1），其中2×KASPMasterMix含有dNTP、TaqDNA聚合酶、

通用熒光引物及ROX熒光內(nèi)參等。

其它兼容KASP的SNP檢測(cè)體系均適用于本文件。依據(jù)PCR緩沖液類型、微孔板類型及檢測(cè)平臺(tái)，試驗(yàn)

條件可做相應(yīng)調(diào)整。

表1PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系

成份原濃度終濃度推薦用量（μL）

DNA25ng/μL～50ng/μL7.5ng/μL～15ng/μL1.20

2×KASPMasterMix2×1×2.00

Primer_AlleleX10μM0.15μM0.06

Primer_AlleleY10μM0.15μM0.06

Primer_C10μM0.40μM0.16

ddH2O--0.52

總體積--4.00

7.3.4實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)程序

3

DB15/T2784—2022

熒光定量PCR反應(yīng)按照下列程序進(jìn)行：

a)預(yù)變性：94℃預(yù)變性15min；

b)梯度PCR：94℃變性20s，65℃（每循環(huán)降低0.8℃），退火和延伸60s，10個(gè)循環(huán)；

c)擴(kuò)增：94℃變性20s，57℃退火和延伸60s，熒光信號(hào)讀取，30個(gè)循環(huán)。

注：以上為推薦的基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)平臺(tái)的操作程序和參考條件，其他如GenomicsSNPLine、ArrayTape、

IntclliQube、微流控SNP芯片等利用KASP方法實(shí)現(xiàn)基因分型的檢測(cè)平臺(tái)同樣適用于本文件。

8數(shù)據(jù)采集和記錄

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀提供的數(shù)據(jù)分析軟件，對(duì)每個(gè)標(biāo)記產(chǎn)生的SNP熒光信號(hào)和基因型分型值

進(jìn)行分析。

按照分型明確、NTC(無樣品陰性對(duì)照)無特異性擴(kuò)增的原則，保留或剔除該標(biāo)記位點(diǎn)的數(shù)據(jù)。若一

個(gè)樣品的缺失標(biāo)記位點(diǎn)數(shù)占比大于等于5%，則不予采用，需重做。

數(shù)據(jù)記錄為X/Y，其中X、Y為同一位點(diǎn)上兩個(gè)不同的等位變異，即純合基因型記錄為XX或YY，

雜合基因型記錄為XY；缺失位點(diǎn)記錄為-/-。

9真實(shí)性驗(yàn)證

根據(jù)供檢樣品與對(duì)照樣品在96個(gè)推薦標(biāo)記中的差異位點(diǎn)數(shù)，進(jìn)行品種真實(shí)性驗(yàn)證。

實(shí)際檢測(cè)中，允許首先采用48個(gè)隨機(jī)挑選的標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè)，若出現(xiàn)大于5個(gè)以上的異型個(gè)體，可

終止檢測(cè)，進(jìn)行結(jié)果判定。

具體鑒定意見參考以下規(guī)則：

——當(dāng)差異位點(diǎn)數(shù)大于等于5個(gè)時(shí)，排除兩者為同一品種；

——當(dāng)差異位點(diǎn)數(shù)大于等于1且小于等于4個(gè)時(shí)，不確定兩者為同一品種；

——當(dāng)差異位數(shù)等于0個(gè)時(shí)，不排除兩者屬于同一品種。

注：對(duì)于有異議的樣品，可按GB/T3543.5的規(guī)定進(jìn)一步開展田間小區(qū)種植鑒定。

10鑒定結(jié)果報(bào)告

品種真實(shí)性驗(yàn)證結(jié)果可參考下列方式進(jìn)行填報(bào)：

利用個(gè)SNP引物，采用平臺(tái)進(jìn)行檢測(cè)，與對(duì)照樣品相比，供檢樣品中共

檢測(cè)出差異位點(diǎn)數(shù)個(gè)，差異位點(diǎn)的SNP標(biāo)記編號(hào)為，鑒定意見為。

4

DB15/T2784—2022

A

A

附錄A

（規(guī)范性）

推薦標(biāo)記的KASP引物序列及其信息

96個(gè)推薦標(biāo)記的KASP引物序列及基因組位置信息見表A.1：

表A.1推薦標(biāo)記的KASP引物序列及其信息

標(biāo)記IDLGPrimer_AlleleX/Ya（5'-3'）Primer__AlleleC（5’-3’）基因組位置b

TCTTTACCTGGTCCCACTGGTTA

RCP011CTTTACCTGGTCCCACTGGTTGGGAAAACTCAGCGGGGCCCAT1397147

TCATTATCATCTTCTCCGGTCACT

RCP021CATTATCATCTTCTCCGGTCACCGGCAGAATGACTGCAGGACGGTA108359927

TGACATTTGTTGAATCAAGTGCCGAT

RCP031GACATTTGTTGAATCAAGTGCCGACCAGAGCAAAACGGGTTATTTTTCATGGAA127046934

GATTTGTGGGTCCCATGTGGCT

RCP041TGTGGGTCCCATGTGGCCCTGCGAGCTCCTGCATGGTAGTT132999965

ATTTCGCGGTCAAACCGGCCA

RCP051TCGCGGTCAAACCGGCCGCATTGACCCTGCGTTGAGGCGAT140817683

GCACACGCAGAGCACCTACTT

RCP061GCACACGCAGAGCACCTACTCGTGTAAGATGTGGTAGACGCAGCTT144989472

ATGATTATTTAAAGAAGAAGAACCGTCGA

RCP072ATTTAAAGAAGAAGAACCGTCGCCATTTCGGTTTTCTTTAAAACTGTTGTCAA3234430

GGAACTTTTCTACGTAAAATTAACCGAAAA

RCP082GAACTTTTCTACGTAAAATTAACCGAAAGGCATTCGGTATAACTCGTGGCACTT16757787

GCATATTAACAGGCAAGAACACTTGT

RCP092GCATATTAACAGGCAAGAACACTTGCGTCTGTAATGATCTTGCAGCTGCGAA144865512

CGGTGGCTATGGTGGTGGTAAT

RCP102GGTGGCTATGGTGGTGGTAACCCGCCACCACTATATCCTCCATAT161173400

GGTATAACAACTCATAAGACTTGCACAA

RCP112GTATAACAACTCATAAGACTTGCACAGCGGATTTTGGTTACTTGCACAAGTGTAA170734326

AATTCCAGACGTCTGCGCACGT

RCP122CCAGACGTCTGCGCACGCGTTCAACAGACGAGTACATCATCATCATT174484195

CCCAGTTCCAATCAAACGCCGAT

RCP133CCAGTTCCAATCAAACGCCGACTAGTACGGGACGATGCTGTTACGAA4513575

GAAATTCCGGTCCCGCATTCCAT

RCP143AAATTCCGGTCCCGCATTCCACGGACTTTGGTTTTGAGGATCGGTGAA113166971

5

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表A.1推薦標(biāo)記的KASP引物序列及其信息（續(xù)）

標(biāo)記IDLGPrimer_AlleleX/YaPrimer_AlleleC基因組位置b

GGTAGATTAAAGAAACAGGCCTCT

RCP153GGTAGATTAAAGAAACAGGCCTCCCGACAATTTGAGGCTTTTGTGGGCTT142202147

TACACTATGATTTCTAATATTTAACAAACTGA

RCP163ACACTATGATTTCTAATATTTAACAAACTGGGAGGTTTTGAATGTTTGGTGTTGGTTTTAT165961910

GTTCTTCATGTATTTAACGCCTTTCGT

RCP173CTTCATGTATTTAACGCCTTTCGCACGTACGTTACAAGTTAAGAAACTGTAAAT171633367

TTAGACCTGTATATACTAATCGCATGTAT

RCP183AGACCTGTATATACTAATCGCATGTACCCCATCTTCTAGAGCTAGCAGATGAA174606695

GGCTTACCATCTTGACATTATGGGTT

RCP194GCTTACCATCTTGACATTATGGGTGTATGGCATCAACGAGGTATCCAGATAATA456506

TTCTCATATCCGCCAACACAAGAT

RCP204TCTCATATCCGCCAACACAAGACGGCGAGCCTGATGATGCTGCTA6212891

CTGCCACTTACGAACTAGACCT

RCP214CTGCCACTTACGAACTAGACCCTGCTGAAGACATTCCTAAAATGGATGCAA49035811

GTTCCATTGTGATCTATGTCATCGGT

RCP224CCATTGTGATCTATGTCATCGGGGCTTCCGGGCTTTCGATATCGATAA200817960

AATTAAACTCCCAAATCGGGGTCCA

RCP234AAACTCCCAAATCGGGGTCCGGCCTCCTTTGCCTTCTTACGGTTAT203305904

GTTGGCCATTCCATTCATTTTAGTGT

RCP244GTTGGCCATTCCATTCATTTTAGTGCCTGGATAAACTTACAACGATACAAAAGCTT207798715

GGTACTGTAGTTTATTAACACTAACGCTT

RCP255GTACTGTAGTTTATTAACACTAACGCTCTCCGTTTATAGCGAACATGCCTAAACTTA756598

TTCTCATGGGATTCCGCAAAAGCT

RCP265CTCATGGGATTCCGCAAAAGCCTATATTAACAGTAGGAACAACACACACATT6226605

AATCAAGAGGGAAACAAGTGTCTTCA

RCP275ATCAAGAGGGAAACAAGTGTCTTCGCGAATTACGCGCATTTCTTATGGAGTA19637565

CAAGGGTTGTATACAACACAAAGGCA

RCP285AAGGGTTGTATACAACACAAAGGCGCAAGCTGCAAGTTTCTTTAGCAAATCCAA154220962

TCCGGGTTCAGCATCTTGAAATTTT

RCP295CCGGGTTCAGCATCTTGAAATTTCTGGCTGACCGATCGCCCATGAT172357711

GTTGGTGTTCTTTCAGCCTGTAGT

RCP305GGTGTTCTTTCAGCCTGTAGCTTCAAAGTAACTTAAACCCTCATCCACCA177669464

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DB15/T2784—2022

表A.1推薦標(biāo)記的KASP引物序列及其信息（續(xù)）

標(biāo)記IDLGPrimer_AlleleX/YaPrimer_AlleleC基因組位置b

GCATCTTTACCGACACTAAGCTCATT

RCP316CATCTTTACCGACACTAAGCTCATCCGTACCAATTTCGCAAAATCGATCAACTT5441370

AGAAGCGTCCCAAACGCACTCT

RCP326GAAGCGTCCCAAACGCACTCCGCTCCCCGTTACAAGATTCGGAAAA9218248

CCCATAAACACTCGTATCCGGA

RCP336CCCATAAACACTCGTATCCGGCGAAGTTGGATGAGGAGGTGGTTAATTATA17517674

ATGTTGTGTTATGCAAGTGAGAGAGTT

RCP346GTTGTGTTATGCAAGTGAGAGAGTGCACCTTAACGATATTAACCCGATGGTTAT38051242

TATGCTTAAACATTATGGCTACAGCA

RCP356ATGCTTAAACATTATGGCTACAGCCCCAATAATTACAATTGGTGATCAAACCGTT62837136

ATCTAACGCTATGGAAGCCTCTGAA

RCP366CTAACGCTATGGAAGCCTCTGAGTCGCGTAGCCCTTTAAGTGGAGTTT116716827

CAAACCGACTGTTTCCCGGAACT

RCP377AAACCGACTGTTTCCCGGAACCCTAAGAACTTCAATCCGGTTGGGCAA3731765

TACGATGACGTTGTGGAACGACTT

RCP387CGATGACGTTGTGGAACGACTCGCCTGATTTTAGATGGATCGTCTAAGTTT115935118

TGCAACCTTTCCGGACCCATTATT

RCP397GCAACCTTTCCGGACCCATTATCCATCACTACACCAGGAGCACACATT134769457

TGCGTAAATGAGACCGATAATCTGT

RCP407GCGTAAATGAGACCGATAATCTGCCAGGGGTGAAGCGAAATTCCATCAA142344833

GAACCGGGTAACAAAGACAAGAGAT

RCP417AACCGGGTAACAAAGACAAGAGACGTCTTCATTATTTGGGATGATTGGGAGTT145004151

CGGTAACAACGACTGCATCA

RCP427CTCGGTAACAACGACTGCATCGCCCGAAATCAGGAAAGCCGAAGAAA147882845

CGGACCATTTTGACCCATAATAGAAA

RCP438CGGACCATTTTGACCCATAATAGAAGGGAAACGGGTCAAACAAGATTTGAGATAA1545473

GCCTTCACCTATACAATAGAATTTATGTT

RCP448GCCTTCACCTATACAATAGAATTTATGTCCATGCTTTTATCTGTTGGGGTACACATTT6567492

CCAATATGAATTCCATCCATTCACATACA

RCP458CAATATGAATTCCATCCATTCACATACCATGGGACTAATTTTGTTGTGGATGGGAAA17006342

GAGAGCGAGTTCACCAACATAATGT

RCP468AGAGCGAGTTCACCAACATAATGCCCACGGTTGAACCCTGATACTTGTT48738858

7

DB15/T2784—2022

表A.1推薦標(biāo)記的KASP引物序列及其信息（續(xù)）

標(biāo)記IDLGPrimer_AlleleX/YaPrimer_AlleleC基因組位置b

GAGTTAAACCTAATTGCAAGCCTGTA

RCP478GAGTTAAACCTAATTGCAAGCCTGTGAGCGAGACCGAGAAAAGAGCCAAA90753292

CGCATTAACTGCTTAGGATCCATCT

RCP488GCATTAACTGCTTAGGATCCATCCCACAACAAGAACACAAGATGTTGTAGGTT119273967

CGTTCCTTTACTCATCCTAAACGCT

RCP499GTTCCTTTACTCATCCTAAACGCCGTGGAAGTATCTCGATAGCGACGAA3348193

CATTTGAAAATGGGATGGTGCAGTCA

RCP509TGAAAATGGGATGGTGCAGTCGGATGCATTTAGAGTGCGAGCATGTATAAA18621914

GCATCATCAAAGAATCGAGCTAGCA

RCP519CATCATCAAAGAATCGAGCTAGCGAATTAAATTTCATTATGCTAGCTGACT137888783

TTTGACTGGCCTTACCCTTTTGCA

RCP529GACTGGCCTTACCCTTTTGCGCGGCACTGAGAGTTAAAACAAATAGCTT176732933

CGAAGTCCGCCGGCGATACA

RCP539GAAGTCCGCCGGCGATACGGCTGGTCTAACATCATCCTCACAGAA183272138

CATCTTGAAGTGGCCCAAAATCTAGT

RCP549ATCTTGAAGTGGCCCAAAATCTAGCCCTTGTCTTTATAGTTTTAGTTGCTTAAAA188917321

AGTCAACCGAAAAAGGACTCGCTT

RCP5510GTCAACCGAAAAAGGACTCGCTGAGCTTACCACCTTGGCATCGATA4145820

CAGCGGAGACCGACACTTTGAAA

RCP5610AGCGGAGACCGACACTTTGAACTCACTGGTCAGACTGGATCCTGTT11924743

CAAGTTCATAACAGAGAAGATTTTCAGAAT

RCP5710AAGTTCATAACAGAGAAGATTTTCAGAACCGAAACCTTGTGAAACTTGTTGGTTACTA27896920

GACCCATGTTTCGTTTTCTTCCACT

RCP5810ACCCATGTTTCGTTTTCTTCCACCGCCGGAGAGGATAATACTTACAACCAT165951333

CGCTGACGAAACTCCGTGTACTT

RCP5910GCTGACGAAACTCCGTGTACTCAATGTTACCGGAGAGGCCATTGGAT176713139

CAAATCCTATGAAACATCGTCGTCAT

RCP6010CAAATCCTATGAAACATCGTCGTCACAGCGCTTGGAGACGCATAACATGTT180201514

GAAGTTTGACCAAAAATACTAGAATTCAACA

RCP6111AAGTTTGACCAAAAATACTAGAATTCAACGACGATTCTTTACCTTCGGACACTATCAA2468174

CGCTACACAAGATTACAACGTTGCT

RCP6211GCTACACAAGATTACAACGTTGCCCGCCTATTCACGGGTCCTGTCAT9495869

8

DB15/T2784—2022

表A.1推薦標(biāo)記的KASP引物序列及其信息（續(xù)）

標(biāo)記IDLGPrimer_AlleleX/YaPrimer_AlleleC基因組位置b

ATCTTTGACACCACCAAACTCTAGTAT

RCP6311CTTTGACACCACCAAACTCTAGTACGTACATCCAAGGTTATGAAGACGCGAT17635352

TGGTGGGGACCATGAGCACA

RCP6411GGTGGGGACCATGAGCACCTCTGGTAGGAAGCCCGGGCAT162896462

CAATATTCGGATAACACCCTTCAGAAAA

RCP6511AATATTCGGATAACACCCTTCAGAAAGTCGGATAAAGTCGAAATGGCTTGTAGTTT174974441

TTTCAGGCTGAGTTGGAAGATCATAA

RCP6612CAGGCTGAGTTGGAAGATCATAGGACGTACAGCAAGTGTCACTTGTGAT1188124

CAATCGAAAGAGGCGCAACACTTATA

RCP6712AATCGAAAGAGGCGCAACACTTATGGCCGTTGTATGTGAATTCTTCGGAGAT5829759

ATCAACTGTTACATAGCCGGCACA

RCP6812CAACTGTTACATAGCCGGCACGCACAATCTTGCAAAATGGCTGCAGCAT13393767

GATAATGGTTTCCCGGTCGAAGAAA

RCP6912ATAATGGTTTCCCGGTCGAAGAAGACCGAACCGGCTCCTCCGTAAT26783877

ATATGTACTTTAGATACATTTTATTGTAACTT

RCP7012ATATGTACTTTAGATACATTTTATTGTAACTCCTACCCCTCCCTGCACAAAAACATT58926116

GTTCCCCAAGAAAAGTACCATACGA

RCP7113CCCCAAGAAAAGTACCATACGGGTATCAAAGCAGAATGGCGAGGTCA68749721

ATAACTATCTTTACAGCTTTACAAACATTCTT

RCP7213AACTATCTTTACAGCTTTACAAACATTCTCGAAGATGCTGGTGTGATGCAAGTGAA82781576

CCTGTTCGAACATCGGTAACGAAA

RCP7313CTGTTCGAACATCGGTAACGAAGTGGCAGTTTTGACCGATCGCTTGAA89317748

CAGAAACCATAAACTCTATATACATTTCTTAAT

RCP7413AGAAACCATAAACTCTATATACATTTCTTAAGGGTTCATGAGCATGTGTAATTTGACAAGTT97896231

GATAACGAAAGATCACACCGGGAT

RCP7513ATAACGAAAGATCACACCGGGACCACTGGACCCACCGTGAGACTT156633180

ATGAGAGTTAAGTAGCCAAGATCACA

RCP7613GAGAGTTAAGTAGCCAAGATCACGCATCTTGCGTGAAGCAAACATACCATTTA165893994

TACAAACTATGAGCATATGCATATCTAGT

RCP7714CAAACTATGAGCATATGCATATCTAGCGGATATGATCTGGGATGCTATTCTTGTTT81446782

TGTACAAAACCTGACATTAAACAGCATA

RCP7814GTACAAAACCTGACATTAAACAGCATGCTTATACTATCAGAAGTTGAAGCTTGAGAA115156655

9

DB15/T2784—2022

表A.1推薦標(biāo)記的KASP引物序列及其信息（續(xù)）

標(biāo)記IDLGPrimer_AlleleX/YaPrimer_AlleleC基因組位置b

GGCCGTGAAGTTGAAGGATAGGT

RCP7914GCCGTGAAGTTGAAGGATAGGCCCATCTAACCTATCCCTGATCCCAT132691300

GCGAATGGGCAAACGGTTGCTA

RCP8014CGAATGGGCAAACGGTTGCTGACATCCAAAAGCCAGTGCAAGGGAA155811112

CATAATCGAGAGTAAAAAGTTGTAGTTTAA

RCP8114CATAATCGAGAGTAAAAAGTTGTAGTTTACAGAATAAGAGATTCAGTACTCCACTGTGA172073231

GGAAGTCAAATCTCTAGTCACTCCT

RCP8215GAAGTCAAATCTCTAGTCACTCCCCACGCGAAATACGCGGGGAAGAA3426781

GTTAGACGAAGACGATAAGGTTATGTTA

RCP8315AGACGAAGACGATAAGGTTATGTTCGAAACTGGCAGCTTCATGACCCAAT6702056

GCAACAACAATGGCACAATCTCTCAA

RCP8415CAACAACAATGGCACAATCTCTCAGGTGTGAAGTCTGGTGAATGAGAGGTT