食品中4-氯雙異丁酚丁的執(zhí)法檢驗(yàn)方法本方法規(guī)定了食品中4-氯雙異丁酚丁的高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本方法適用于蜜餞、果凍、糖果、果蔬粉、餅干、代用茶、液體飲料、果試樣經(jīng)甲醇提取，采用高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)，外標(biāo)法定量。除另有規(guī)定外，本方法中所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。3.2.150%甲醇溶液：量取甲醇(3.1.1)500mL,加水稀釋至1000mL,混勻備用。3.2.20.05%甲酸水溶液：量取甲酸(3.1.2)0.5mL,加水稀釋至1000mL,混勻備用。3.3標(biāo)準(zhǔn)品4-氯雙異丁酚丁[化學(xué)名稱為(5-氯-2-氧代吲哚啉-3,3-二基)雙(4,1-亞苯基)二異丁酸酯，又名4-氯雙異丁酚汀]標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥94%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品。標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式和相對(duì)分子量等信息見附錄A。3.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1000mg/L):準(zhǔn)確稱取4-氯雙異丁酚丁標(biāo)準(zhǔn)品適量(相當(dāng)于有效成分10mg,精確至0.01mg),加甲醇(3.1.1)溶解，然后轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，用甲醇(3.1.1)定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-18℃及以下避光貯存，有效期3個(gè)月。容量瓶中，用甲醇(3.1.1)稀釋至刻度，搖勻，配制成標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，質(zhì)量濃度為10.0mg/L。0~4℃避光保存，有效期1個(gè)月。3.4.3標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(3.4.2)適量，用50%甲醇溶液(3.2.1)配100ng/mL,或依儀器響應(yīng)情況配制適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。若樣品基質(zhì)效應(yīng)較強(qiáng)，可采用空白基質(zhì)提取液配制適當(dāng)濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，臨用現(xiàn)配。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀，配電噴霧離子源(ESI)。4.2天平：感量分別為0.01mg和1mg。4.3超聲波清洗器。4.4恒溫水浴鍋。4.6渦旋混合器。5.1試樣制備和保存取50g試樣或所有試樣(低于50g時(shí)),糖果(除膠質(zhì)糖果)、果蔬粉、餅干、代用茶樣品研磨或粉碎混勻，蜜餞取可食部分剪碎至2mm以下，膠質(zhì)糖果加熱融化后混勻，果凍樣品充分?jǐn)囁橹翝{狀，含二氧化碳的液體樣品通過加熱或超聲去除二氧化碳。制備好的試樣根據(jù)樣品儲(chǔ)存條件進(jìn)行存儲(chǔ)。稱取1.0g(精確至0.001g)樣品于25mL具塞刻度離心管中，加入20mL甲醇(3.1.1),超聲提取10min(超聲過程中搖勻2～3次),渦旋振蕩10min,冷卻至室溫，用甲醇(3.1.1)稀釋至刻度并搖勻。取5mL溶液經(jīng)4000r/min離心5min,精確吸取1.0mL離心后上清液，用水稀釋至2mL,渦旋混勻后用微孔濾膜(3.5.1)過濾，待高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。5.3儀器參考條件b)流動(dòng)相：A為0.05%甲酸水溶液(3.2.2),B為甲醇(3.1.1),梯度洗脫程序見表1。d)柱溫：30℃。表1梯度洗脫程序表55b)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。佳靈敏度，定量離子對(duì)和定性離子對(duì)等信息見附錄B。將標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液(3.4.3)分別注入高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀中，測(cè)定按照高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜條件(5.3)測(cè)定試樣溶液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜保留時(shí)間相對(duì)偏差不大于2.5%,且定量離子與定性離子的相對(duì)離子豐度與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液中相對(duì)離子豐度比(k)偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可確定試樣中存在對(duì)表2相對(duì)離子豐度的最大允許偏差5.5.2定量測(cè)定將試樣溶液(5.2)按儀器參考條件(5.3)進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)物的濃度。試樣溶液中待測(cè)物的響應(yīng)值均應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍時(shí)應(yīng)根據(jù)測(cè)定濃度進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋。除不加試樣外，其他操作與試樣操作一致。7結(jié)果計(jì)算試樣中待測(cè)物的含量按式(1)計(jì)算：X——試樣中4-氯雙異丁酚丁的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);c——試樣溶液中4-氯雙異丁酚丁的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V——定容體積，單位為毫升(mL);V?——移取離心后上清液稀釋后的體積，單位為毫升(mL);m——試樣稱取的質(zhì)量，單位為克(g);V?移取離心后上清液的體積，單位為毫升(mL);以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的15%。當(dāng)取樣量為1.0g,定容體積為25mL時(shí)，移取體積1.0mL并稀釋至2mL,4-氯雙異丁酚丁的檢出限為0.03mg/kg,定量限為0.10mg/kg。(資料性)中文名稱/。(資料性)d)干燥氣溫度：300℃。e)鞘氣溫度：300℃。g)毛細(xì)管電壓：3500V。i)噴嘴電壓：500V。k)離子模式、母離子、子離子、碰撞能見表B.1?；衔锩戒汣(資料性)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖標(biāo)準(zhǔn)溶液的提取離子色譜圖見圖C.1。62t4.24.34.44.54.6t4-氯雙異丁酚?。?92.2/258.04-氯雙異丁酚?。?92.2/223.0圖C.14-氯雙異丁酚丁提取離子色譜圖(10ng/mL)本方法起草單位：南陽(yáng)市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)中心、河南省食品和鹽業(yè)檢驗(yàn)技術(shù)研究院(河南省糧油飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心)本方法驗(yàn)證單位：中國(guó)質(zhì)