2025年生化藥品附錄及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題1分，共30分）1.2025版《中國(guó)藥典》生化藥品附錄中，對(duì)重組蛋白類(lèi)藥物宿主DNA殘留量的限度要求為A.≤10ng/劑量B.≤100pg/劑量C.≤10pg/劑量D.≤1pg/劑量答案：C2.下列哪種檢測(cè)方法被新版附錄列為β-葡聚糖污染的首選定量手段A.鱟試劑顯色法B.高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測(cè)法C.熒光偏振免疫法D.重組因子C熒光法答案：B3.關(guān)于單抗制品的電荷異質(zhì)性，附錄規(guī)定強(qiáng)制表征的pH范圍是A.4.0–7.0B.5.0–8.0C.6.0–9.0D.3.0–10.0答案：D4.病毒清除驗(yàn)證中，對(duì)“縮小模型”縮比比例的接受標(biāo)準(zhǔn)為A.≥1/10B.≥1/50C.≥1/100D.≥1/500答案：C5.2025版新增“連續(xù)制造”章節(jié)，要求對(duì)中間體取樣頻率不得低于A.每2小時(shí)一次B.每4小時(shí)一次C.每6小時(shí)一次D.每批一次答案：A6.對(duì)聚山梨酯80的氧化降解產(chǎn)物，附錄首次規(guī)定需單獨(dú)控制的醛類(lèi)限度為A.甲醛≤15ppmB.乙醛≤10ppmC.丙醛≤5ppmD.壬醛≤3ppm答案：D7.采用LC-MS進(jìn)行N-糖譜分析時(shí)，附錄推薦的衍生化試劑為A.2-ABB.2-AAC.ProcainamideD.InstantPC答案：C8.對(duì)高濃度蛋白制劑（>100mg/mL），滲透壓測(cè)定允許的最大偏差為A.±5mOsm/kgB.±10mOsm/kgC.±15mOsm/kgD.±20mOsm/kg答案：B9.2025版將“可見(jiàn)異物”檢查光照強(qiáng)度統(tǒng)一調(diào)整為A.2000–3000lxB.3000–4000lxC.4000–5000lxD.5000–6000lx答案：B10.對(duì)重組凝血因子，附錄要求強(qiáng)制檢測(cè)的活化因子為A.FVIIaB.FIXaC.FXaD.FXIa答案：A11.關(guān)于生物類(lèi)似藥外推適應(yīng)癥，附錄新增要求提供A.體外功能學(xué)比對(duì)數(shù)據(jù)B.真實(shí)世界證據(jù)C.免疫原性橋接研究D.臨床藥代動(dòng)力學(xué)相似性報(bào)告答案：B12.對(duì)mRNA疫苗，模板DNA殘留限度為A.≤1ng/劑量B.≤100pg/劑量C.≤10pg/劑量D.≤1pg/劑量答案：D13.2025版首次將哪種元素列為Class2B需批量監(jiān)控的微量元素A.NiB.CoC.VD.As答案：C14.對(duì)腺相關(guān)病毒載體，空殼率測(cè)定推薦采用A.AEX-HPLCB.CEX-HPLCC.SEC-MALSD.AF4-MALS答案：A15.關(guān)于細(xì)胞庫(kù)遺傳穩(wěn)定性，附錄規(guī)定最高傳代限度為A.30代B.40代C.50代D.60代答案：C16.對(duì)聚乙二醇化蛋白，游離PEG的限度為A.≤1.0%B.≤0.5%C.≤0.3%D.≤0.1%答案：D17.2025版新增“人工智能輔助放行”條款，要求模型驗(yàn)證集樣本數(shù)不少于A.50B.100C.150D.200答案：B18.對(duì)雙特異性抗體，附錄要求強(qiáng)制檢測(cè)的錯(cuò)配形式為A.?抗體B.?抗體C.雙抗-單抗雜合D.輕鏈錯(cuò)配答案：B19.關(guān)于無(wú)菌檢查，2025版將培養(yǎng)基靈敏度試驗(yàn)菌株增至A.3株B.4株C.5株D.6株答案：C20.對(duì)凍干制劑，水分限度由3.0%收緊至A.2.5%B.2.0%C.1.5%D.1.0%答案：C21.2025版將哪種檢測(cè)列為胰島素類(lèi)似物強(qiáng)制鑒別試驗(yàn)A.圓二色譜B.紅外光譜C.拉曼光譜D.紫外二階導(dǎo)數(shù)光譜答案：A22.對(duì)融合蛋白，附錄要求每批檢測(cè)的凝血酶原激活限度為A.≤1IU/mgB.≤0.5IU/mgC.≤0.1IU/mgD.≤0.05IU/mg答案：C23.2025版新增“碳足跡”章節(jié)，要求提供A.單位劑量CO?當(dāng)量B.單位批次能耗C.單位產(chǎn)值水耗D.單位產(chǎn)量廢液量答案：A24.對(duì)寡核苷酸藥物，附錄將n-1雜質(zhì)限度設(shè)定為A.≤1.0%B.≤0.5%C.≤0.3%D.≤0.2%答案：D25.關(guān)于穩(wěn)定性研究，2025版將“加速條件”相對(duì)濕度統(tǒng)一為A.60%±5%B.65%±5%C.70%±5%D.75%±5%答案：D26.對(duì)重組疫苗，宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)首選A.ELISAB.LC-MS/MSC.WesternblotD.2D-DIGE答案：B27.2025版將哪種病毒列為昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)必檢外源病毒A.家蠶核型多角體病毒B.果蠅C病毒C.蟋蟀麻痹病毒D.斜紋夜蛾核型多角體病毒答案：D28.對(duì)脂質(zhì)體藥物，包封率測(cè)定允許的最大相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為A.±2%B.±3%C.±5%D.±10%答案：C29.2025版新增“數(shù)字水印”要求，用于A.防偽追溯B.溫度記錄C.濕度記錄D.光照記錄答案：A30.對(duì)血液制品，附錄要求每批檢測(cè)的prion蛋白為A.PrP?B.PrP??C.PrP???D.PrP???答案：B二、配伍選擇題（每題1分，共20分）A.熒光定量PCRB.數(shù)字PCRC.高通量測(cè)序D.分支DNA雜交E.環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增31.檢測(cè)mRNA疫苗加帽效率首選答案：C32.檢測(cè)AAV載體基因組拷貝數(shù)首選答案：B33.檢測(cè)慢病毒復(fù)制型病毒首選答案：A34.檢測(cè)細(xì)胞庫(kù)支原體污染首選答案：E35.檢測(cè)寡核苷酸點(diǎn)突變首選答案：CA.反相UPLCB.親水作用色譜C.陰離子交換色譜D.尺寸排阻色譜E.毛細(xì)管電泳36.測(cè)定胰島素脫酰胺雜質(zhì)答案：A37.測(cè)定單抗聚集體答案：D38.測(cè)定寡核苷酸電荷異構(gòu)體答案：E39.測(cè)定ADC藥物DAR值答案：C40.測(cè)定PEG化蛋白游離PEG答案：B三、判斷題（每題1分，共10分，正確打“√”，錯(cuò)誤打“×”）41.2025版允許使用一次性反應(yīng)袋進(jìn)行病毒清除驗(yàn)證縮小模型。答案：√42.對(duì)生物類(lèi)似藥，免疫原性比對(duì)研究可完全用體外試驗(yàn)替代。答案：×43.附錄規(guī)定所有基因治療載體必須采用無(wú)菌工藝。答案：√44.2025版將“可見(jiàn)異物”檢查由人工燈檢改為全檢。答案：×45.對(duì)高濃度制劑，允許用近紅外法替代卡爾費(fèi)休法測(cè)水分。答案：√46.2025版取消了對(duì)小牛血清的病毒檢測(cè)要求。答案：×47.對(duì)mRNA疫苗，5′-UTR序列變更需重新進(jìn)行毒理學(xué)評(píng)價(jià)。答案：√48.2025版允許用AI模型替代傳統(tǒng)穩(wěn)定性預(yù)測(cè)。答案：√49.對(duì)融合蛋白，糖基化位點(diǎn)突變可豁免臨床比對(duì)。答案：×50.2025版將“連續(xù)制造”定義為≥72小時(shí)不間斷生產(chǎn)。答案：√四、填空題（每空1分，共20分）51.2025版規(guī)定，重組蛋白制品中宿主細(xì)胞DNA殘留量以__________為參比標(biāo)準(zhǔn)，換算系數(shù)為_(kāi)_________。答案：人類(lèi)基因組，3.3pg/基因組52.對(duì)AAV載體，空殼率測(cè)定采用AEX-HPLC時(shí)，流動(dòng)相A為_(kāi)_________，B為_(kāi)_________。答案：20mmol/LTris-HClpH9.0，含1mol/LNaCl的20mmol/LTris-HClpH9.053.2025版新增“__________”術(shù)語(yǔ)，指在連續(xù)制造中實(shí)時(shí)調(diào)整關(guān)鍵工藝參數(shù)以保持產(chǎn)品質(zhì)量恒定。答案：實(shí)時(shí)放行測(cè)試（RTRT）54.對(duì)雙特異性抗體，錯(cuò)配形式檢測(cè)采用__________還原條件，以區(qū)分__________與__________。答案：輕度，?抗體，?抗體55.2025版將“__________”列為mRNA疫苗關(guān)鍵質(zhì)量屬性，要求采用__________法測(cè)定。答案：加帽效率，LC-MS56.對(duì)聚山梨酯80，氧化降解產(chǎn)物壬醛采用__________法測(cè)定，檢測(cè)波長(zhǎng)為_(kāi)_________nm。答案：SPME-GC-MS，15757.2025版規(guī)定，細(xì)胞庫(kù)遺傳穩(wěn)定性需檢測(cè)__________、__________、__________三項(xiàng)指標(biāo)。答案：核型，STR，全基因組測(cè)序58.對(duì)高濃度蛋白制劑，黏度測(cè)定采用__________法，剪切速率設(shè)定為_(kāi)_________s?1。答案：錐板流變儀，100059.2025版將“__________”列為ADC藥物強(qiáng)制檢測(cè)元素，限度為_(kāi)_________ppm。答案：銅，560.對(duì)寡核苷酸，n-x雜質(zhì)總量不得超過(guò)__________%，其中n-1不得超過(guò)__________%。答案：1.0，0.2五、簡(jiǎn)答題（每題6分，共30分）61.簡(jiǎn)述2025版附錄對(duì)“連續(xù)制造”中間體取樣策略的具體要求。答案：1.取樣點(diǎn)覆蓋所有關(guān)鍵單元操作，包括上游灌流、收獲、層析、病毒滅活、超濾等；2.頻率不低于每2小時(shí)一次，若工藝參數(shù)波動(dòng)超過(guò)±1σ，則提升至每30分鐘一次；3.每取樣點(diǎn)至少取3個(gè)平行樣，用于含量、純度、活性、微生物負(fù)荷檢測(cè)；4.建立在線PAT與離線檢測(cè)的關(guān)聯(lián)模型，R2≥0.95；5.所有樣品須保存至產(chǎn)品放行后至少3個(gè)月，以便追溯；6.若連續(xù)運(yùn)行超過(guò)7天，需每24小時(shí)增加一次全檢，確保無(wú)漂移。62.闡述2025版對(duì)mRNA疫苗模板DNA殘留控制的新策略。答案：1.限度收緊至≤1pg/劑量，比2020版降低100倍；2.采用數(shù)字PCR法，引物探針覆蓋整個(gè)質(zhì)粒骨架，避免漏檢斷裂片段；3.每批次需進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，回收率80–120%；4.引入“酶切+磁珠”兩步純化，使殘留降低至檢測(cè)限以下；5.建立工藝能力指數(shù)Cpk≥1.33，持續(xù)監(jiān)控3σ水平；6.若超出限度，啟動(dòng)偏差調(diào)查，包括RNase處理、層析柱壽命、超濾膜完整性等。63.說(shuō)明2025版對(duì)單抗電荷異質(zhì)性表征的技術(shù)細(xì)節(jié)。答案：1.強(qiáng)制采用icIEF全柱成像，pH3–10，分辨率≥0.05pH單位；2.需同步提供CEX-HPLC數(shù)據(jù)作為正交方法，兩者峰面積RSD≤5%；3.對(duì)主峰、酸性峰、堿性峰分別收集，進(jìn)行LC-MS肽圖確認(rèn)；4.建立批間一致性標(biāo)準(zhǔn)：主峰比例±3%，酸/堿峰各自±1.5%；5.若出現(xiàn)新峰，需用高分辨質(zhì)譜鑒定是否為脫酰胺、氧化、環(huán)化；6.所有圖譜需電子簽名并上傳至國(guó)家藥監(jiān)云平臺(tái)，保存≥15年。64.概述2025版對(duì)ADC藥物DAR值測(cè)定的方法學(xué)驗(yàn)證要求。答案：1.采用UV/Vis法與LC-MS法雙平臺(tái)，結(jié)果差異≤5%；2.UV法需驗(yàn)證摩爾消光系數(shù)準(zhǔn)確性，相對(duì)誤差≤2%；3.LC-MS法需覆蓋0–8DAR全范圍，線性R2≥0.995；4.精密度：重復(fù)6次，RSD≤3%；中間精密度：3人3天，RSD≤5%；5.準(zhǔn)確度：加標(biāo)回收率90–110%；6.穩(wěn)定性：樣品室溫放置24h、凍融3次、?80℃30天，偏差≤5%。65.描述2025版對(duì)基因治療載體空殼率測(cè)定的方法細(xì)節(jié)。答案：1.AEX-HPLC為首選，柱溫25℃，流速0.5mL/min，梯度0–1MNaCl，20min；2.檢測(cè)波長(zhǎng)260nm，進(jìn)樣量≥2×1011vg；3.空殼峰與實(shí)心峰分離度≥2.0，拖尾因子≤1.5；4.采用空殼與實(shí)心標(biāo)準(zhǔn)品建立校正曲線，R2≥0.998；5.每批次需穿插QC樣本，偏差≤3%；6.若結(jié)果>15%，需用冷凍電鏡復(fù)核，相差≤5%。六、計(jì)算題（每題10分，共30分）66.某mRNA疫苗劑量為50μg，模板DNA殘留測(cè)定值為0.8pg，問(wèn)是否符合2025版限度？若一批次產(chǎn)量為1×10?劑，求總DNA殘留量。答案：限度≤1pg/劑量，0.8pg＜1pg，符合；總DNA=0.8pg×1×10?=0.8mg。