細(xì)胞治療基因表達(dá)檢測(cè)員崗位考試試卷及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.以下哪種技術(shù)常用于基因表達(dá)定量檢測(cè)？（）A.WesternblotB.RT-PCRC.SDSD.ELISA2.細(xì)胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基是（）A.生理鹽水B.PBSC.DMEMD.蒸餾水3.進(jìn)行基因表達(dá)檢測(cè)時(shí)，提取RNA常用的試劑是（）A.乙醇B.氯仿C.酚D.Trizol4.熒光定量PCR中，SYBRGreen染料能結(jié)合到（）A.雙鏈DNAB.單鏈DNAC.RNAD.蛋白質(zhì)5.細(xì)胞凍存時(shí)常用的保護(hù)劑是（）A.甘油B.二甲基亞砜（DMSO）C.乙醇D.丙酮6.基因表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)，常用的工具酶不包括（）A.限制性內(nèi)切酶B.DNA連接酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.蛋白酶7.檢測(cè)細(xì)胞表面抗原常用的方法是（）A.免疫熒光B.免疫組化C.蛋白質(zhì)印跡D.酶活性測(cè)定8.以下哪種細(xì)胞系常用于基因表達(dá)研究？（）A.HeLaB.NIH3T3C.293TD.以上都是9.RNA完整性數(shù)值（RIN）的范圍是（）A.0-5B.0-10C.1-10D.5-1510.進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)，常用的轉(zhuǎn)染試劑是（）A.氯化鈣B.脂質(zhì)體C.硫酸鎂D.葡萄糖二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.基因表達(dá)檢測(cè)的技術(shù)有（）A.NorthernblotB.原位雜交C.基因芯片D.蛋白質(zhì)組學(xué)2.細(xì)胞培養(yǎng)需要的條件有（）A.合適的溫度B.一定的氣體環(huán)境C.無(wú)菌條件D.合適的培養(yǎng)基3.提取DNA的方法有（）A.酚氯仿抽提法B.硅膠柱吸附法C.堿裂解法D.親和層析法4.熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)包括（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.能進(jìn)行定量分析D.操作簡(jiǎn)單快速5.細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法有（）A.化學(xué)轉(zhuǎn)染法B.電穿孔法C.病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法D.顯微注射法6.用于基因表達(dá)載體構(gòu)建的元件有（）A.啟動(dòng)子B.終止子C.多克隆位點(diǎn)D.篩選標(biāo)記基因7.檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)水平的方法有（）A.WesternblotB.ELISAC.免疫沉淀D.免疫組化8.細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的注意事項(xiàng)有（）A.凍存時(shí)緩慢降溫B.復(fù)蘇時(shí)快速解凍C.凍存液成分合適D.復(fù)蘇后及時(shí)培養(yǎng)9.基因表達(dá)調(diào)控的層次包括（）A.轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控B.轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控C.翻譯水平調(diào)控D.翻譯后水平調(diào)控10.實(shí)驗(yàn)中常用的核酸染料有（）A.溴化乙錠（EB）B.SYBRGreenC.GoldViewD.甲基綠三、判斷題（每題2分，共10題）1.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，CO?的作用是維持培養(yǎng)液的pH。（）2.RT-PCR可以直接檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)表達(dá)水平。（）3.基因表達(dá)載體只能將目的基因?qū)胝婧思?xì)胞。（）4.熒光定量PCR不需要引物。（）5.細(xì)胞凍存的溫度越低越好。（）6.提取RNA時(shí)，為防止RNA酶污染，所有操作需在冰上進(jìn)行。（）7.免疫組化可以在細(xì)胞或組織水平檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)定位。（）8.基因芯片技術(shù)只能檢測(cè)基因的表達(dá)量，不能檢測(cè)基因突變。（）9.蛋白質(zhì)印跡法中，轉(zhuǎn)膜的目的是將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相膜上。（）10.細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率與細(xì)胞類型、轉(zhuǎn)染試劑和操作方法等都有關(guān)系。（）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述RT-PCR的基本原理。2.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，如何防止污染？3.熒光定量PCR與普通PCR的區(qū)別是什么？4.簡(jiǎn)述基因表達(dá)載體構(gòu)建的主要步驟。五、討論題（每題5分，共4題）1.細(xì)胞治療中基因表達(dá)檢測(cè)的重要性體現(xiàn)在哪些方面？2.請(qǐng)討論在基因表達(dá)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，可能出現(xiàn)誤差的來(lái)源及解決方法。3.對(duì)于提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，你有哪些思路和方法？4.結(jié)合實(shí)際工作，談?wù)勅绾伪ＷC基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。答案一、單項(xiàng)選擇題1.B2.C3.D4.A5.B6.D7.A8.D9.C10.B二、多項(xiàng)選擇題1.ABC2.ABCD3.ABC4.ABCD5.ABCD6.ABCD7.ABCD8.ABCD9.ABCD10.ABC三、判斷題1.√2.×3.×4.×5.×6.√7.√8.×9.√10.√四、簡(jiǎn)答題1.RT-PCR先以RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下合成cDNA，再以cDNA為模板，利用Taq酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)特定基因表達(dá)量的檢測(cè)。2.保持操作環(huán)境無(wú)菌，如超凈臺(tái)定期消毒；培養(yǎng)液、耗材等需嚴(yán)格滅菌；操作人員遵守?zé)o菌操作規(guī)范，如戴口罩、手套等；定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體等檢測(cè)。3.熒光定量PCR能實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的量，實(shí)現(xiàn)定量分析；普通PCR只能定性判斷是否有目的產(chǎn)物，無(wú)法精確測(cè)定起始模板量。4.主要步驟：獲取目的基因；選擇合適載體；用限制性內(nèi)切酶切割目的基因和載體；用DNA連接酶連接目的基因與載體；轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞篩選陽(yáng)性克隆。五、討論題1.可監(jiān)測(cè)細(xì)胞治療效果，判斷目的基因是否正常表達(dá)；評(píng)估治療安全性，了解異常表達(dá)情況；指導(dǎo)治療方案調(diào)整，依據(jù)表達(dá)水平調(diào)整劑量等。2.誤差來(lái)源：樣本處理不當(dāng)、試劑質(zhì)量問(wèn)題、儀器誤差等。解決方法：規(guī)范樣本采集處理流程；選用可靠試劑；定期校準(zhǔn)儀器；設(shè)置多組平行實(shí)驗(yàn)等。3.優(yōu)化細(xì)胞狀態(tài)，選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞；篩選合適