ICS65.020.30

CCSB43

43

湖南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB43/T3148—2024

家禽精液菌落總數(shù)控制技術(shù)規(guī)范

Technicalspecificationforcontroloftotalbacteriacountinpoultrysemen

2024-12-31發(fā)布2025-03-31實(shí)施

湖南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB43/T3148—2024

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語和定義.........................................................................1

4飼養(yǎng)管理...........................................................................1

5精液收集...........................................................................2

6精液外觀...........................................................................2

7含抗生素稀釋液.....................................................................2

8精液菌落總數(shù)檢測...................................................................3

附錄A（規(guī)范性）平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA）培養(yǎng)基............................................5

附錄B（資料性）精液稀釋方法示例.....................................................6

I

DB43/T3148—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。

本文件由湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。

本文件由湖南省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。

本文件起草單位：湖南省畜牧獸醫(yī)研究所、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)、湖南省獸藥飼料監(jiān)察所、長沙市動植物

疫病預(yù)防控制中心、陜西省畜牧技術(shù)推廣總站、瀏陽市農(nóng)業(yè)發(fā)展事務(wù)中心、湖南光大牧業(yè)科技有限公司。

本文件主要起草人：劉伯承、江為民、鄭姣妹、周望平、隆雪明、李安定、劉學(xué)通、朱芳賢、胡繼

偉、史芳、燕海峰、伍國強(qiáng)、朱立軍、鄧萍、李闖、陳一峰、石伍平、王慧、唐愛明、劉啟紅、楊建華。

II

DB43/T3148—2024

家禽精液菌落總數(shù)控制技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了家禽飼養(yǎng)管理、精液收集、精液外觀、含抗生素稀釋液、精液菌落總數(shù)檢測的技術(shù)要

求。

本文件適用于家禽精液菌落總數(shù)的控制與檢測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB4789.2—2022食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

GB13078飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

GB/T25886養(yǎng)雞場帶雞消毒技術(shù)要求

NY/T388畜禽場環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

NY/T471綠色食品飼料及飼料添加劑使用準(zhǔn)則

DB43/T2412雞冷凍精液制作技術(shù)規(guī)程

DB43/T2708鴨冷凍精液制作技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4飼養(yǎng)管理

飼料

4.1.1飼料衛(wèi)生應(yīng)符合GB13078的規(guī)定。

4.1.2飼料的使用應(yīng)符合NY/T471的規(guī)定。

4.1.3自配混合日糧應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，確保料槽無結(jié)塊飼料，料槽應(yīng)保持潔凈。

飲用水

水質(zhì)應(yīng)符合GB5749的規(guī)定，檢查水槽（箱）水質(zhì)并做好消毒。

環(huán)境衛(wèi)生

舍內(nèi)環(huán)境衛(wèi)生指標(biāo)應(yīng)符合NY/T388的規(guī)定。檢測畜禽舍環(huán)境衛(wèi)生并做好消毒和衛(wèi)生管理，保持通

風(fēng)。

種公禽護(hù)理

1

DB43/T3148—2024

4.4.1剪毛

從采精訓(xùn)練期開始，應(yīng)檢查和修剪種公禽泄殖腔周圍5cm～7cm區(qū)域的羽毛。具體按DB43/T2708

執(zhí)行。

4.4.2消毒

對種公禽肛門及附近的絨羽進(jìn)行清洗和消毒，先用生理鹽水沖洗肛門周圍及絨羽上的糞便并擦干，

選用刺激性小的消毒藥（如聚維酮碘）進(jìn)行擦拭消毒。

種公禽體表消毒按GB/T25886規(guī)定執(zhí)行。

5精液收集

準(zhǔn)備

采精杯、離心管（5mL、10mL）、樣品支架清洗潔凈后應(yīng)高壓蒸汽滅菌；工作服、冷藏泡沫箱應(yīng)

用紫外線消毒。雞精液稀釋液準(zhǔn)備按DB43/T2412執(zhí)行，鴨、鵝精液稀釋液準(zhǔn)備按DB43/T2708執(zhí)行。

操作要求

采精杯或離心管收集精液前后均需密封狀態(tài)；即時(shí)收集合格精液。

6精液外觀

肉眼觀察精液呈乳白色，無絮狀、血、白色尿酸鹽。顯微鏡下（100×）檢測無黑點(diǎn)狀雜質(zhì)。

7含抗生素稀釋液

含抗生素母液制備

以滅菌純凈水為溶劑，按照表1配制10倍濃度抗生素母液，分裝至10mL離心管中，-20℃條件

下儲存，使用時(shí)室溫解凍。

表1含抗生素10倍母液配制表

滅菌純凈水青霉素鉀硫酸鏈霉素

mLUU

100.01.0×1061.0×106

含抗生素精液稀釋液制備

將含抗生素母液添加至精液稀釋液中，添加比例見表2?，F(xiàn)配現(xiàn)用或-20℃條件下儲存?zhèn)溆茫褂?/p>

時(shí)室溫解凍。

2

DB43/T3148—2024

表2含抗生素精液稀釋液配制比例

品種雞鴨鵝

精液稀釋液:含抗生素母液9:119:14:1

含抗生素精液稀釋液的應(yīng)用

7.3.1人工輸精

含抗生素精液稀釋液使用時(shí)應(yīng)與精液等溫，按照精液與稀釋液1:1或1:2稀釋后輸精。

7.3.2精液冷凍保存

按照表2批量配制含抗生素精液稀釋液；使用含抗生素稀釋液按照DB43/T2412配制雞冷凍保護(hù)

液，按照DB43/T2708配制鴨、鵝冷凍保護(hù)液。-20℃條件下儲存，使用時(shí)室溫解凍。

8精液菌落總數(shù)檢測

儀器設(shè)備

高壓滅菌鍋，超凈工作臺，生化恒溫培養(yǎng)箱，恒溫水浴鍋，電子天平。

試劑與材料

移液器及吸頭（規(guī)格含100μL、200μL、1000μL），離心管，剪刀，酒精燈，75%乙醇，滅菌純

凈水，一次性無菌培養(yǎng)皿（直徑90mm），錐形瓶，菌落計(jì)數(shù)器，平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA）培養(yǎng)基按照附錄

A配制或使用商品PCA培養(yǎng)基。

試驗(yàn)步驟

8.3.1滅菌

將PCA培養(yǎng)基、吸頭、蒸餾水、離心管、剪刀進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。所需物品除待測樣品外操作前放

入超凈工作臺，紫外線消毒30min。

8.3.2樣品

無菌操作下，將含抗生素稀釋液稀釋后的鮮精轉(zhuǎn)至另一離心管中；凍精剪去細(xì)管兩端，收集至離心

管中備用。

8.3.3梯度稀釋

采用10倍稀釋法，取3個(gè)5mL離心管，每管加入900μL滅菌純凈水。用移液器吸取精液，充分

吹打均勻后吸取100μL加入第一個(gè)離心管，充分吹打均勻。從第一管中取100μL加入至第二管，注

意吸頭不應(yīng)進(jìn)入液面，更換吸頭后吹打均勻，依次操作至第三管。示例見附錄B。

8.3.4平板制作

3

DB43/T3148—2024

取100μL稀釋后的樣品分四個(gè)位點(diǎn)滴入空白平板上，加入12mL～15mLPCA培養(yǎng)基，培養(yǎng)基液

體溫度注意保持在48℃±2℃，每個(gè)稀釋度制作兩個(gè)平板，同時(shí)取100μL滅菌純凈水制做兩個(gè)平板

作為陰性對照，并在每個(gè)平板背面做好標(biāo)記。

8.3.5培養(yǎng)

待瓊脂凝固后，將平板倒置，37℃±1℃恒溫培養(yǎng)48h±2h。

菌落計(jì)數(shù)

按GB4789.2—2022中6.3規(guī)定執(zhí)行。

菌落取值與計(jì)算

按GB4789.2—2022中7.1和7.2規(guī)定執(zhí)行。

菌落總數(shù)

精液菌落總數(shù)指標(biāo)見表3。

表3精液菌落總數(shù)指標(biāo)

雞鴨鵝

項(xiàng)目

CFU/mLCFU/mLCFU/mL

鮮精≤1500≤1500≤1500

凍精≤1000≤800≤800

4

DB43/T3148—2024

A

A

附錄A

（規(guī)范性）

平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA）培養(yǎng)基

A.1平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基成分

平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基成分見表A.1。

表A.1平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基成分

成分劑量

胰蛋白胨5.0g

酵母浸膏2.5g

葡萄糖1.0g

瓊脂