*第十三章

分子發(fā)光分析法13.2.1儀器與結(jié)構(gòu)流程13.2.2熒光分析方法與應(yīng)用第二節(jié)

分子熒光分析法Molecular

luminescenceanalysis

Molecularfluorescenceanalysis

*一、儀器與結(jié)構(gòu)流程測量熒光的儀器主要由四個(gè)部分組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器系統(tǒng)、檢測器。

特殊點(diǎn)：有兩個(gè)單色器，光源與檢測器通常成直角。

基本流程圖：單色器：選擇激發(fā)光波長的第一單色器和選擇發(fā)射光(測量)波長的第二單色器。光源：燈和高壓汞燈，染料激光器(可見與紫外區(qū))。檢測器：光電倍增管。*儀

器

光

路

圖*儀器框圖該型儀器可進(jìn)行熒光、磷光和發(fā)光分析。*同步掃描技術(shù)根據(jù)激發(fā)和發(fā)射單色器在掃描過程中彼此間所保持的關(guān)系，同步掃描可分為固定波長差()和固定能量差及可變波長三種。

同步掃描技術(shù)可簡化光譜。譜帶變窄，減少光譜重疊，提高分辨率。

合適的

可減少光譜重疊。酪氨酸和色氨酸的熒光激發(fā)光譜相似，發(fā)射光譜嚴(yán)重重疊，但

<15nm的同步光譜只顯示酪氨酸特征光譜；

>60nm時(shí)，只顯示色氨酸的特征光譜，實(shí)現(xiàn)分別測定。*可獲得三維光譜圖的儀器可獲得激發(fā)光譜與發(fā)射光譜同時(shí)變化時(shí)的熒(磷)光光譜圖。*二、熒光分析方法與應(yīng)用1.特點(diǎn)（1）靈敏度高比紫外-可見分光光度法高2～4個(gè)數(shù)量級；為什么？檢出限：0.1～0.001g·mL-1相對靈敏度：0.05mol·L-1

奎寧硫酸氫鹽的硫酸溶液。（2）選擇性強(qiáng)既可依據(jù)特征發(fā)射光譜，又可根據(jù)特征吸收光譜；（3）試樣量少

缺點(diǎn)：應(yīng)用范圍小。*2.定量依據(jù)與方法(1)定量依據(jù)

熒光強(qiáng)度

If正比于吸收的光量Ia和熒光量子效率

：

If=

Ia由朗-比耳定律：Ia=I0(1-10-

lc)

If=

I0(1-10-

lc)=

I0(1-e-2.3

lc)濃度很低時(shí)，將括號項(xiàng)近似處理后：

If

=2.3

I0

lc=Kc*（2）定量方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法：配制一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度試樣，測定熒光強(qiáng)度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再在相同條件下測量未知試樣的熒光強(qiáng)度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度。比較法：在線性范圍內(nèi)，測定標(biāo)樣和試樣的熒光強(qiáng)度，比較。*3.熒光分析法的應(yīng)用(1)無機(jī)化合物的分析

與有機(jī)試劑配合物后測量；可測量約60多種元素。鈹、鋁、硼、鎵、硒、鎂、稀土常采用熒光分析法；氟、硫、鐵、銀、鈷、鎳采用熒光熄滅法測定；銅、鈹、鐵、鈷、鋨及過氧化氫采用催化熒光法測定；鉻、鈮、鈾、碲采用低溫?zé)晒夥y定；鈰、銪、銻、釩、鈾采用固體熒光法測定。(2)生物與有機(jī)化合物的分析見表。

***內(nèi)容選擇結(jié)束1