ICS65.020.01

CCSB39

22

吉林省地方標準

DB22/T3312—2021

柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

CodeofpracticeforspawnproductionofCordycepsmilitarisinAntheraeapernyi

2021-11-26發(fā)布2021-12-15實施

吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布

DB22/T3312—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的

規(guī)定起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。

本文件由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：吉林省蠶業(yè)科學(xué)研究院。

本文件主要起草人：周影、李森、朱興友、祝長杰、王芹、劉娟。

I

DB22/T3312—2021

柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件確立了柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)的程序，規(guī)定了生產(chǎn)條件、菌種來源、母種生產(chǎn)、液體菌種

生產(chǎn)、包裝、貯存和運輸階段的操作指示，描述了生產(chǎn)記錄等追溯方法。

本文件適用于柞蠶蛹蟲草母種和液體菌種（栽培種）的生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用

文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）

適用于本文件。

GB/T12728—2006食用菌術(shù)語

NY/T528—2010食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

GB/T12728—2006界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

柞蠶蛹蟲草northcordyceps

蛹蟲草菌（Cordycepsmilitaris（L.exFr.）Link）寄生于柞蠶蛹上形成的子實體與蛹的復(fù)

合體。

3.2

母種stockculture

經(jīng)組織分離獲得的具有結(jié)實性的蛹蟲草菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物。

[來源：GB/T12728—2006，2.5.7，有修改]

3.3

出草growingfruitingbody

菌絲在柞蠶蛹體內(nèi)生長至表面形成原基，由原基發(fā)育成子實體的過程。

3.4

僵化fossilization

柞蠶蛹接種蛹蟲草菌種后，蛹體變僵硬的狀態(tài)。

3.5

液體菌種liquidspanw

母種接種于液體培養(yǎng)基擴繁而來的純菌絲體栽培種。

3.6

菌絲轉(zhuǎn)色myceliumchangecolour

在有光條件下，菌絲由白色轉(zhuǎn)為橙黃或橙色。

3.7

氣生菌絲aerialhypha

生長在培養(yǎng)基表面空間的菌絲。

1

DB22/T3312—2021

[來源：GB/T12728—2006，2.2.7]

4柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)程序的構(gòu)成

柞蠶蛹蟲草菌種的生產(chǎn)程序包括5個階段。程序流程圖如圖1所示。

1生產(chǎn)條件（見5.1）

2菌種來源（見5.2）

3母種生產(chǎn)（見5.3）

4液體菌種生產(chǎn)（見5.4）

5包裝貯存運輸（見6）

圖1柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)程序

5生產(chǎn)技術(shù)

5.1生產(chǎn)條件

5.1.1場地環(huán)境要求

場地環(huán)境應(yīng)符合NY/T528—2010中4.2的規(guī)定。

5.1.2廠房設(shè)置

應(yīng)設(shè)有原料準備室、洗刷室、滅菌間、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、菌種檢驗室、菌種貯存室和

出草試驗室等，并合理布局。

5.1.3設(shè)施設(shè)備

設(shè)施設(shè)備應(yīng)符合NY/T528—2010中4.4的規(guī)定。

5.2菌種來源

5.2.1應(yīng)使用種性清楚或者是經(jīng)過農(nóng)作物品種審定委員會登記的蛹蟲草菌種。

5.2.2母種在擴繁之前應(yīng)進行出草試驗，性狀穩(wěn)定的方可投入生產(chǎn)使用,出草試驗設(shè)3次重復(fù)，每次

重復(fù)至少接種2kg優(yōu)質(zhì)柞蠶蛹。

5.2.3接種柞蠶蛹后，僵化率和出草率應(yīng)在70%以上，培養(yǎng)40d～45d時，子實體長度應(yīng)在4cm～

8cm之間，且直立、整齊、多且密、橙黃。

5.3母種生產(chǎn)

2

DB22/T3312—2021

5.3.1試管擴繁

5.3.1.1培養(yǎng)基配制

配方及配制方法見附錄A.1。

5.3.1.2分裝

配制好的培養(yǎng)基分裝至18mm×180mm或20mm×200mm的玻璃試管中，分裝量為試管長度

的四分之一；試管口保持干凈，塞入棉塞，并用牛皮紙包扎。

5.3.1.3滅菌

將分裝好的試管直立置于高壓蒸汽滅菌鍋，121℃維持30min，當(dāng)溫度降至80℃～90℃

時，滅菌鍋放氣閥無蒸汽排出時，方可開啟鍋蓋，取出試管。

5.3.1.4冷卻

趁熱將試管的一端斜放在1cm厚的木條上擺出斜面，斜面的長度為試管長度的三分之二，斜

面頂端距棉塞的距離為4cm～5cm，進行冷卻、凝固。

5.3.1.5接種

無菌條件下，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種耙切取3mm～5mm×3mm～5mm的一塊母種迅速

轉(zhuǎn)接于待接試管斜面培養(yǎng)基中央，接種后塞好棉塞。

5.3.1.6培養(yǎng)

在（22±2）℃條件下避光培養(yǎng)7d～10d，菌絲長滿斜面后見光培養(yǎng)，菌絲轉(zhuǎn)色后保藏于4℃

冰箱中。

5.3.1.7檢驗

接種后第3d、第6d和菌絲體長滿培養(yǎng)基后逐個進行檢驗，挑出未活、污染和生長不良的

培養(yǎng)物，質(zhì)量應(yīng)符合表1的要求。

表1試管擴繁要求

項目要求檢驗方法

容器完整、潔凈、無破損、無裂紋

肉眼觀察

棉塞干燥、潔凈，松緊適中，透氣

培養(yǎng)基灌入量試管總?cè)莘e的四分之一

斜面長度頂端距棉塞4cm～5cm測量

菌絲生長量長滿斜面

潔白、粗壯、濃密、絨毛狀氣生菌絲，見光后菌絲24h內(nèi)變?yōu)槿庋塾^察

菌種正面外觀

橙黃或橙色，均勻、無角變，無原基，表面無分泌物，無雜菌

斜面背面外觀培養(yǎng)基無干縮，氣生菌絲與基質(zhì)結(jié)合部位呈黃色，均勻，無暗斑

菌絲形態(tài)生長5d～7d，菌絲粗壯、挺立，無空泡，分生孢子飽滿、密集顯微鏡下觀察

5.3.2三角瓶擴繁

3

DB22/T3312—2021

5.3.2.1培養(yǎng)基配制

配方及配制方法見附錄A.1。

5.3.2.2分裝

將配制好的培養(yǎng)基分裝于150mL無色耐高溫玻璃三角瓶中，每瓶分裝量為40mL，瓶口保持

干凈，塞好棉塞，并用牛皮紙包扎，培養(yǎng)基上表面距棉塞5cm～5.5cm。

5.3.2.3滅菌

分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋，121℃維持30min，當(dāng)溫度降至80℃～90℃時，滅菌鍋放

氣閥無蒸汽排出時，方可開啟鍋蓋，取出三角瓶。

5.3.2.4冷卻

趁熱擺放于潔凈臺面上進行冷卻、凝固。

5.3.2.5接種

無菌條件下，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種耙切取3mm～5mm×3mm～5mm大小的菌塊置于

培養(yǎng)基上，每管試管擴接40瓶～50瓶三角瓶。

5.3.2.6培養(yǎng)

在（22±2）℃條件下避光培養(yǎng)8d～11d，菌絲長滿后見光培養(yǎng)，菌絲轉(zhuǎn)色后保藏于4℃冰

箱中。

5.3.2.7檢驗

接種后第3d、第7d和菌絲體長滿培養(yǎng)基后逐個進行檢驗，挑出未活、污染和生長不良的

培養(yǎng)物，質(zhì)量應(yīng)符合表2的要求。

表2三角瓶擴繁要求

項目要求檢驗方法

容器完整、潔凈、無破損、無裂紋

肉眼觀察

棉塞干燥、潔凈，松緊適中，透氣

培養(yǎng)基灌入量40mL

測量

培養(yǎng)基上表面距棉塞的距離5cm～5.5cm

菌絲生長量長滿容器

潔白、粗壯、濃密、絨毛狀氣生菌絲，見光后菌絲24h內(nèi)變?yōu)槌?/p>

肉眼觀察

菌種外觀黃或橙色，均勻、無角變，無原基，無子實體，表面無分泌物，

無雜菌

菌絲形態(tài)生長5d～7d，菌絲粗壯、挺立，無空泡，分生孢子飽滿、密集顯微鏡下觀察

5.4液體菌種生產(chǎn)

5.4.1液體培養(yǎng)基配制

配方及配制方法見附錄A.2。

4

DB22/T3312—2021

5.4.2分裝

將液體培養(yǎng)基分裝至500mL無色耐高溫玻璃三角瓶中，每瓶分裝量為200mL，并加入20

?！?5粒玻璃珠，瓶口保持干凈，瓶塞選用無棉塑料蓋，培養(yǎng)基上表面距離瓶口14cm～15cm。

5.4.3滅菌

分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋，121℃維持30min，當(dāng)溫度降至80℃～90℃時，滅菌鍋放

氣閥無蒸汽排出時，方可開啟鍋蓋。

5.4.4冷卻

將液體培養(yǎng)基擺放于潔凈臺面上，待冷卻至30℃以下進行接種。

5.4.5接種

無菌條件下，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種耙切取4塊～6塊大小為3mm～5mm×3mm～5mm

的母種接種于液體培養(yǎng)基中，每個三角瓶擴接10瓶～15瓶的液體菌種。

5.4.6培養(yǎng)

置于（22±2）℃條件下避光靜止培養(yǎng)24h后，在150r/min、(22±2）℃條件下，避光

震蕩培養(yǎng)96h，液體菌種應(yīng)隨制隨用。

5.4.7檢驗

每天對液體菌種逐個檢驗，挑出未萌發(fā)、渾濁和生長不良的培養(yǎng)物，液體菌種質(zhì)量應(yīng)符合表3

的要求。

表3液體菌種要求

項目要求檢驗方法

容器完整、潔凈、無破損、無裂紋

肉眼觀察

無棉塑料蓋干燥、潔凈，松緊適中，透氣

培養(yǎng)基灌入量200mL

測量

培養(yǎng)基上表面距瓶口的距離14cm～15cm

菌絲生長時間96h記錄

菌液外觀菌絲絮狀或球狀（0.5mm～2mm）的澄清懸濁液肉眼觀察

雜菌無雜菌顯微鏡下觀察

6包裝、貯存、運輸

6.1包裝

6.1.1每管或瓶均應(yīng)有標識，注明廠名、級別、菌號、生產(chǎn)日期。

6.1.2每管或瓶用防震撞的材料進行包裝，注意間隔，以防破損，外包裝選用抗擠壓包裝材料。

6.1.3包裝箱應(yīng)標明向上放置、防潮、防凍、防日曬、防震撞的圖案。

6.2貯存

5

DB22/T3312—2021

母種在4℃～10℃貯存不超過60d，液體菌種不宜貯存。

6.3運輸

運輸不得擠壓，碰撞，在4℃～25℃條件下運輸。

7記錄與檔案

7.1記錄母種、液體菌種生產(chǎn)過程中菌種來源、僵化