醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科SOP文件全集引言醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科的標(biāo)準(zhǔn)化操作程序（SOP）是保障檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、操作規(guī)范、生物安全及質(zhì)量體系有效運(yùn)行的核心文件。一套完善的SOP體系需覆蓋標(biāo)本管理、儀器操作、檢驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)施、質(zhì)量控制、安全管理及文件管理等全流程，為臨床診療提供可靠的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)支撐。一、標(biāo)本管理SOP（一）標(biāo)本采集SOP1.采集前準(zhǔn)備患者信息核對：確認(rèn)患者姓名、性別、年齡、病歷號等信息與申請單一致，核對檢驗(yàn)項(xiàng)目特殊要求（如空腹、體位限制等）。容器與標(biāo)識：根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目選擇對應(yīng)采集容器（抗凝管、血清管、無菌尿杯等），粘貼唯一標(biāo)識條碼，確保條碼信息與申請單匹配。環(huán)境與人員：采集區(qū)域清潔消毒，操作人員佩戴手套、口罩，確認(rèn)采集工具（采血針、注射器等）在有效期內(nèi)且無破損。2.標(biāo)本采集流程靜脈血：選擇肘前/頸外等合適靜脈，75%酒精消毒皮膚（直徑≥5cm，待干后穿刺），采集量依項(xiàng)目需求（如血常規(guī)2ml、生化3-5ml）；抗凝管采集后輕混（避免劇烈振蕩），血清管靜置待凝。末梢血：適用于嬰幼兒或特殊情況，消毒指/趾端（75%酒精，待干），穿刺深度≤2mm，棄去第一滴血，采集足量血液（避免擠壓導(dǎo)致組織液混入）。尿液/體液：中段尿采集前清潔尿道口（女性）或外陰（男性），留取5-10ml于無菌容器；胸腹水、腦脊液等按無菌操作采集，記錄采集量與性狀。3.采集后處理立即核對標(biāo)本信息（條碼、申請單、標(biāo)本外觀），確認(rèn)無溶血、脂血、凝塊（血清管除外）等不合格情況。需冷藏/冷凍的標(biāo)本（如激素、病毒核酸檢測）及時轉(zhuǎn)移至對應(yīng)溫度環(huán)境，常規(guī)標(biāo)本30分鐘內(nèi)送檢（特殊項(xiàng)目依說明書）。（二）標(biāo)本接收與處理SOP1.標(biāo)本接收接收人員核對標(biāo)本標(biāo)識、申請單信息、采集時間、標(biāo)本狀態(tài)（量、外觀、溫度），填寫接收記錄（時間、接收人、標(biāo)本狀態(tài)）。對不合格標(biāo)本（如溶血、量不足、容器破損），電話通知臨床重新采集，記錄拒收原因與時間。2.標(biāo)本處理血清/血漿分離：待血清管自然凝固后（或抗凝管采集后），3000rpm離心10分鐘（依項(xiàng)目調(diào)整），分離后轉(zhuǎn)移至潔凈試管，標(biāo)記后待檢。微生物標(biāo)本：無菌操作接種培養(yǎng)基（血培養(yǎng)瓶立即送檢，痰標(biāo)本接種血平板/麥康凱平板等），記錄接種時間與培養(yǎng)基類型。分子生物標(biāo)本：加入核酸穩(wěn)定劑（如RNA標(biāo)本加RNase抑制劑），-20℃或-80℃保存（依項(xiàng)目需求）。（三）標(biāo)本保存與處置SOP1.短期保存常規(guī)生化、免疫標(biāo)本4℃保存≤72小時；微生物陽性培養(yǎng)物4℃保存≤7天；分子生物標(biāo)本-20℃保存≤1個月（長期需-80℃）。2.長期存檔需存檔的標(biāo)本（如基因檢測、疑難病例）按項(xiàng)目要求分裝，標(biāo)注存檔時間、檢測項(xiàng)目，-80℃凍存，建立存檔臺賬（標(biāo)本編號、患者信息、存檔時間）。3.標(biāo)本處置檢測后標(biāo)本按醫(yī)療廢物處理：感染性標(biāo)本高壓滅菌（121℃，30分鐘）后放入專用廢物袋，交由醫(yī)療廢物公司處置；化學(xué)性廢物（如含重金屬試劑）分類收集，交由專業(yè)機(jī)構(gòu)處理。二、儀器設(shè)備操作SOP（一）生化分析儀操作SOP（以典型品牌為例）1.開機(jī)前檢查確認(rèn)電源穩(wěn)定，試劑倉內(nèi)試劑余量充足（不足時更換并記錄批號），清洗液、校準(zhǔn)品/質(zhì)控品在有效期內(nèi)。檢查管路通暢（無漏液、氣泡），樣本針、試劑針清潔無堵塞。2.日常操作流程校準(zhǔn)與質(zhì)控：每日開機(jī)后進(jìn)行試劑定標(biāo)（新批號試劑或儀器維修后），隨后測定室內(nèi)質(zhì)控品（低、中、高值），記錄質(zhì)控結(jié)果，判斷是否在控（Westgard規(guī)則：1?s、2?s等）。樣本檢測：加載標(biāo)本（條碼掃描或手動輸入），選擇檢測項(xiàng)目，儀器自動完成加樣、反應(yīng)、讀數(shù)，過程中觀察儀器狀態(tài)（如吸樣是否正常、反應(yīng)曲線是否異常）。結(jié)果審核：自動審核結(jié)果（范圍、delta值等），異常結(jié)果（如極高/極低值、與臨床不符）需復(fù)查（重新測定標(biāo)本或換儀器驗(yàn)證），審核通過后發(fā)送至LIS系統(tǒng)。3.關(guān)機(jī)與維護(hù)執(zhí)行關(guān)機(jī)程序（自動清洗管路、樣本針、試劑針），清空廢液桶，清潔儀器表面與試劑倉。記錄當(dāng)日儀器運(yùn)行日志（檢測樣本數(shù)、故障情況、維護(hù)內(nèi)容），每周進(jìn)行深度維護(hù)（如清洗比色杯、檢查光源強(qiáng)度）。（二）血細(xì)胞分析儀操作SOP1.開機(jī)準(zhǔn)備檢查鞘液、溶血劑、質(zhì)控品余量，確認(rèn)廢液桶未滿，開機(jī)后進(jìn)行本底檢測（白細(xì)胞<100/μl，紅細(xì)胞<1000/μl為合格）。2.檢測流程質(zhì)控品測定：每日測定高、中、低值質(zhì)控品，繪制Levey-Jennings質(zhì)控圖，判斷在控后進(jìn)行樣本檢測。樣本檢測：EDTA抗凝全血充分混勻（顛倒8-10次），上機(jī)檢測，異常結(jié)果（如血小板聚集、有核紅細(xì)胞干擾）需推片鏡檢復(fù)核。3.維護(hù)與校準(zhǔn)每日清潔采樣針、廢液管路，每周進(jìn)行儀器校準(zhǔn)（使用校準(zhǔn)品調(diào)整WBC、RBC、PLT通道），每月更換鞘液過濾器。（三）微生物培養(yǎng)系統(tǒng)操作SOP（以血培養(yǎng)儀為例）1.開機(jī)與裝載開機(jī)后檢查溫度（35±1℃）、氣體濃度（需氧瓶：空氣；厭氧瓶：N?/CO?/H?混合氣體），裝載血培養(yǎng)瓶（標(biāo)注采集時間、患者信息）。2.檢測與判讀儀器每10分鐘監(jiān)測瓶內(nèi)壓力/熒光變化，陽性報警后取出培養(yǎng)瓶，轉(zhuǎn)種血平板、麥康凱平板等，記錄報警時間與瓶號。陰性瓶培養(yǎng)5天后（或依說明書）卸載，標(biāo)記為“陰性”并歸檔。3.維護(hù)每周清潔儀器傳感器，每月更換氣體鋼瓶（厭氧瓶），每季度校準(zhǔn)溫度與氣體濃度。三、檢驗(yàn)項(xiàng)目SOP（按專業(yè)分類）（一）臨床血液學(xué)檢驗(yàn)SOP1.血常規(guī)檢測標(biāo)本要求：EDTA-K?抗凝全血，采集后4小時內(nèi)檢測，避免冷藏。操作流程：儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控后，上機(jī)檢測，結(jié)果異常時推片鏡檢（觀察細(xì)胞形態(tài)、計數(shù)有核紅細(xì)胞等），與儀器結(jié)果比對后報告。2.凝血功能檢測標(biāo)本要求：枸櫞酸鈉抗凝（1:9），采集后立即離心（3000rpm，10分鐘），分離血漿2小時內(nèi)檢測。操作流程：儀器預(yù)熱（37℃），校準(zhǔn)后測定PT、APTT、FIB等，質(zhì)控品在控后檢測標(biāo)本，結(jié)果異常時復(fù)查并結(jié)合臨床。（二）臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)SOP1.肝功能檢測（ALT、AST、TBIL等）標(biāo)本要求：空腹血清，采集后2小時內(nèi)分離，避免溶血（溶血可導(dǎo)致ALT、AST假性升高）。操作流程：生化儀校準(zhǔn)、質(zhì)控后，上機(jī)檢測，結(jié)果審核時關(guān)注膽紅素與轉(zhuǎn)氨酶的關(guān)聯(lián)性（如肝細(xì)胞性黃疸時兩者均升高）。2.血糖檢測標(biāo)本要求：空腹血清或血漿（氟化鈉抗凝可抑制糖酵解），采集后30分鐘內(nèi)分離或冷藏。操作流程：葡萄糖氧化酶法檢測，質(zhì)控品涵蓋正常、糖尿病范圍，結(jié)果異常時結(jié)合糖化血紅蛋白（HbA1c）綜合判斷。（三）臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)SOP1.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）標(biāo)本要求：血清或血漿，避免反復(fù)凍融，采集后4℃保存≤24小時。操作流程：包被板平衡至室溫，加樣（標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品），37℃孵育30分鐘（依說明書）。洗板（5次，每次浸泡1分鐘），加酶結(jié)合物，孵育后再次洗板。加底物顯色（TMB或OPD），37℃避光孵育15分鐘，加終止液，酶標(biāo)儀450nm（或雙波長）讀數(shù)，計算結(jié)果（標(biāo)準(zhǔn)曲線法或單點(diǎn)定標(biāo)）。質(zhì)量控制：每次實(shí)驗(yàn)設(shè)陽性、陰性、空白對照，質(zhì)控品結(jié)果需在允許范圍內(nèi)（如OD值偏差≤15%）。2.化學(xué)發(fā)光免疫分析標(biāo)本要求：血清或血漿，采集后2小時內(nèi)檢測，避免溶血（血紅蛋白可干擾發(fā)光信號）。操作流程：儀器校準(zhǔn)后，加載標(biāo)本與試劑，自動完成孵育、洗滌、發(fā)光檢測，結(jié)果審核時關(guān)注鉤狀效應(yīng)（高濃度標(biāo)本需稀釋后重測）。（四）臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)SOP1.細(xì)菌培養(yǎng)與鑒定標(biāo)本接種：血標(biāo)本接種血培養(yǎng)瓶；痰標(biāo)本接種血平板、巧克力平板、麥康凱平板（35℃，5%CO?，18-24小時孵育）。菌落鑒定：觀察菌落形態(tài)（大小、顏色、溶血環(huán)），革蘭染色鏡檢，生化試驗(yàn)（如API鑒定條）或質(zhì)譜鑒定（MALDI-TOF），記錄鑒定結(jié)果（種屬、藥敏需求）。2.藥敏試驗(yàn)方法選擇：K-B紙片擴(kuò)散法（需氧菌）、肉湯稀釋法（厭氧菌、苛養(yǎng)菌），按CLSI標(biāo)準(zhǔn)操作。結(jié)果判讀：測量抑菌環(huán)直徑，對照CLSI折點(diǎn)判斷敏感（S）、中介（I）、耐藥（R），報告時標(biāo)注試驗(yàn)方法與折點(diǎn)版本。（五）分子生物學(xué)檢驗(yàn)SOP（以核酸擴(kuò)增為例）1.核酸提取標(biāo)本處理：血清/血漿加入核酸提取試劑（磁珠法或柱提法），室溫靜置10分鐘，按儀器操作提取核酸（DNA/RNA），洗脫后-20℃保存≤24小時。質(zhì)量控制：每次提取設(shè)陽性對照（已知陽性核酸）、陰性對照（無核酸水），提取后檢測核酸濃度與純度（A260/A280=1.8-2.0為合格）。2.PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系配制：冰上操作，依次加入引物、酶、dNTP、模板核酸，避光保存。擴(kuò)增程序：按試劑盒說明書設(shè)置溫度（變性95℃、退火55-65℃、延伸72℃）與循環(huán)數(shù)，擴(kuò)增后電泳或熒光定量檢測。質(zhì)量控制：設(shè)陽性對照（擴(kuò)增出目的條帶）、陰性對照（無條帶）、空白對照（無條帶），結(jié)果異常時復(fù)查（更換試劑、重新提取核酸）。四、質(zhì)量控制SOP（一）室內(nèi)質(zhì)量控制SOP1.質(zhì)控品選擇與管理選擇與檢測項(xiàng)目匹配的質(zhì)控品（如生化項(xiàng)目選多水平質(zhì)控品，覆蓋參考范圍），凍存質(zhì)控品按說明書復(fù)溶（避免反復(fù)凍融），開啟后4℃保存≤7天。2.質(zhì)控測定與分析每日檢測項(xiàng)目前測定質(zhì)控品（同患者標(biāo)本流程），記錄OD值/濃度值，繪制Levey-Jennings質(zhì)控圖（均值±3SD為控制限）。失控處理：出現(xiàn)失控（如1?s、2?s規(guī)則）時，立即停止檢測，排查原因（試劑失效、儀器故障、操作失誤），糾正后重新測定質(zhì)控品，在控后方可檢測患者標(biāo)本，記錄失控處理過程。3.質(zhì)控數(shù)據(jù)管理每月匯總質(zhì)控數(shù)據(jù)，計算當(dāng)月均值、SD、CV，與廠家靶值或?qū)嶒?yàn)室歷史數(shù)據(jù)比對，偏差>10%時重新確定均值與SD。（二）室間質(zhì)量評價（EQA）SOP1.EQA樣本管理接收EQA樣本后，核對樣本信息（項(xiàng)目、數(shù)量、有效期），按常規(guī)流程檢測（與患者標(biāo)本同等對待），禁止拆分、稀釋或與其他實(shí)驗(yàn)室交流結(jié)果。2.結(jié)果上報與分析檢測后按要求上報結(jié)果（時間、格式符合EQA機(jī)構(gòu)要求），收到反饋后分析成績（如PT得分、變異指數(shù)），對不合格項(xiàng)目（得分<80%）進(jìn)行原因分析（試劑、儀器、操作），制定整改措施并驗(yàn)證。（三）檢驗(yàn)前/中/后質(zhì)量控制1.檢驗(yàn)前質(zhì)量控制培訓(xùn)臨床醫(yī)護(hù)人員標(biāo)本采集規(guī)范，定期發(fā)布標(biāo)本采集手冊，統(tǒng)計不合格標(biāo)本率（目標(biāo)≤5%），對高不合格率科室進(jìn)行現(xiàn)場指導(dǎo)。2.檢驗(yàn)中質(zhì)量控制定期進(jìn)行人員比對（如兩名技師檢測同批標(biāo)本，結(jié)果偏差≤10%），儀器比對（不同儀器檢測同批標(biāo)本，偏差≤15%），確保檢測系統(tǒng)一致性。3.檢驗(yàn)后質(zhì)量控制結(jié)果審核時結(jié)合臨床信息（如患者診斷、用藥史），異常結(jié)果（如血鉀>8mmol/L）電話通知臨床并建議復(fù)查，定期統(tǒng)計檢驗(yàn)結(jié)果符合率（與金標(biāo)準(zhǔn)或臨床診斷比對）。五、安全管理SOP（一）生物安全SOP1.個人防護(hù)操作人員接觸標(biāo)本時佩戴手套、口罩、護(hù)目鏡（必要時穿防護(hù)服），手套破損或污染時立即更換，操作后洗手（七步洗手法）。2.標(biāo)本處理安全標(biāo)本離心時使用防漏離心杯，發(fā)生標(biāo)本泄漏時，用含氯消毒劑（1000mg/L）覆蓋30分鐘后清理，記錄泄漏事件。微生物操作在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，柜內(nèi)紫外燈每周照射30分鐘（使用后），定期檢測柜內(nèi)氣流（風(fēng)速0.3-0.5m/s）。3.職業(yè)暴露處理銳器傷（如針刺傷）：立即擠出傷口血液，流動水沖洗，75%酒精消毒，報告科室并評估暴露源（如HBV、HIV陽性標(biāo)本需預(yù)防性用藥）。黏膜暴露：生理鹽水沖洗眼部/口腔，報告并隨訪。（二）化學(xué)安全SOP1.試劑管理危險試劑（如強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)試劑）專柜存放（防泄漏、防明火），建立試劑臺賬（名稱、批號、有效期、儲存條件），使用時佩戴耐酸堿手套、護(hù)目鏡。2.應(yīng)急處理強(qiáng)酸灼傷：立即用大量清水沖洗（15分鐘以上），再用2%碳酸氫鈉溶液沖洗；強(qiáng)堿灼傷：清水沖洗后用1%醋酸沖洗，嚴(yán)重時送醫(yī)。有機(jī)溶劑泄漏：用沙土覆蓋，禁止明火，通風(fēng)后清理，記錄泄漏事件。（三）醫(yī)療廢物管理SOP1.分類收集感染性廢物（標(biāo)本、培養(yǎng)物、污染耗材）放入黃色醫(yī)療廢物袋，銳器（針頭、玻片）放入銳器盒，化學(xué)性廢物（含汞試劑、重金屬廢液）放入專用收集瓶。2.暫存與交接醫(yī)療廢物暫存于專用房間（防滲漏、防蚊蠅），每日由專人交接給醫(yī)療廢物公司，填寫交接記錄（重量、種類、時間），暫存時間≤48小時。六、文件管理SOP（一）SOP編制與修訂1.編制流程由科室專業(yè)人員起草（結(jié)合法規(guī)、廠家說明書、臨床需求），經(jīng)科主任、質(zhì)量主管審核，必要時邀請?jiān)焊?、臨床專家評審，批準(zhǔn)后發(fā)布實(shí)施。2.修訂觸發(fā)條件法規(guī)更新（如ISO____改版）、技術(shù)改進(jìn)（新儀器/試劑）、質(zhì)量問題（EQA不合格、