福建pcr上崗證考試題及答案一、單項選擇題（每題1分，共40分。每題只有一個正確答案，請將正確選項字母填入括號內(nèi)）1.熒光定量PCR中，Ct值與起始模板量的關(guān)系是（）A.Ct值越大，起始模板量越多B.Ct值越小，起始模板量越多C.Ct值與起始模板量無關(guān)D.Ct值與起始模板量呈指數(shù)遞減答案：B2.下列哪種熒光染料屬于特異性探針法（）A.SYBRGreenⅠB.EvaGreenC.FAM標(biāo)記TaqMan探針D.溴化乙錠答案：C3.在PCR擴(kuò)增曲線中，基線期熒光信號主要來源于（）A.引物二聚體B.探針降解C.背景熒光與未擴(kuò)增模板D.酶活性答案：C4.福建省臨床PCR實驗室準(zhǔn)入技術(shù)評估要求，實驗室至少應(yīng)配備（）A.普通PCR儀與離心機(jī)B.實時熒光PCR儀與生物安全柜C.電泳儀與紫外透射儀D.恒溫金屬浴與渦旋器答案：B5.下列哪項不是PCR污染的主要來源（）A.擴(kuò)增產(chǎn)物氣溶膠B.陰性對照污染C.操作人員攜帶D.原始樣本本身答案：D6.關(guān)于UNG酶防污染體系，正確的是（）A.可降解含dU的DNAB.在延伸階段加入C.對RNA模板有效D.需95℃永久滅活答案：A7.提取呼吸道病毒RNA時，首選的裂解液成分是（）A.CTABB.異硫氰酸胍C.SDSD.NaCl答案：B8.內(nèi)標(biāo)基因在PCR中的作用是（）A.提高擴(kuò)增效率B.監(jiān)測提取與擴(kuò)增抑制C.降低背景D.替代陽性對照答案：B9.福建省PCR上崗證考核中，現(xiàn)場操作評分權(quán)重最高的是（）A.結(jié)果判讀B.加樣準(zhǔn)確性C.防污染措施D.原始記錄書寫答案：C10.下列哪項屬于PCR實驗室“三區(qū)兩緩”布局中的“三區(qū)”（）A.試劑儲存區(qū)B.樣本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：B11.實時熒光PCR儀校準(zhǔn)周期為（）A.每月一次B.每季度一次C.每半年一次D.每年一次答案：C12.下列哪種情況會導(dǎo)致假陰性結(jié)果（）A.引物二聚體B.探針淬滅C.樣本保存溫度反復(fù)凍融D.陰性對照污染答案：C13.福建省室間質(zhì)評合格分?jǐn)?shù)線為（）A.60分B.70分C.80分D.90分答案：C14.關(guān)于Taq酶熱啟動技術(shù)，錯誤的是（）A.可減少非特異擴(kuò)增B.采用抗體或化學(xué)修飾C.需在95℃激活D.會降低擴(kuò)增效率20%以上答案：D15.下列哪項不是PCR實驗記錄必填項（）A.試劑批號B.儀器校準(zhǔn)曲線C.操作人員簽名D.樣本來源身份證號答案：D16.熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值應(yīng)（）A.≥0.95B.≥0.98C.≥0.99D.≥0.90答案：B17.下列哪項屬于一級生物安全實驗室可操作的病原體（）A.結(jié)核分枝桿菌B.新型冠狀病毒培養(yǎng)C.腸道病毒71型滅活株D.SARS-CoV-2分離培養(yǎng)答案：C18.關(guān)于PCR管蓋熒光干擾，正確的處理是（）A.使用透明蓋B.使用磨砂蓋C.使用鋁箔蓋D.使用彩色蓋答案：B19.福建省PCR上崗證理論考試合格線為（）A.60分B.70分C.80分D.90分答案：B20.下列哪項不是RNA提取后立即逆轉(zhuǎn)錄的原因（）A.RNA易降解B.逆轉(zhuǎn)錄酶需低溫C.減少DNA污染D.提高靈敏度答案：B21.關(guān)于TaqMan探針設(shè)計，錯誤的是（）A.Tm值比引物高8–10℃B.避免G在5′端C.長度一般20–30bpD.可形成二聚體答案：D22.下列哪項可導(dǎo)致擴(kuò)增效率>110%（）A.引物濃度過高B.抑制劑存在C.標(biāo)準(zhǔn)品降解D.探針淬滅答案：A23.福建省PCR實驗室備案有效期為（）A.1年B.2年C.3年D.5年答案：C24.關(guān)于PCR產(chǎn)物熔解曲線，錯誤的是（）A.可區(qū)分非特異產(chǎn)物B.需使用SYBRGreenⅠC.探針法無需此步驟D.溫度升高速度越快越好答案：D25.下列哪項不是PCR實驗室個人防護(hù)裝備（）A.醫(yī)用外科口罩B.護(hù)目鏡C.正壓頭罩D.一次性鞋套答案：C26.關(guān)于PCR試劑凍干小球，優(yōu)點不包括（）A.常溫運輸B.減少加樣誤差C.延長保質(zhì)期D.提高擴(kuò)增效率答案：D27.福建省PCR上崗證實操考核時間不少于（）A.30分鐘B.60分鐘C.90分鐘D.120分鐘答案：C28.下列哪項屬于PCR實驗室“清潔走廊”功能（）A.傳遞樣本B.緩沖氣流C.存放擴(kuò)增產(chǎn)物D.清洗玻璃器皿答案：B29.關(guān)于多重PCR，錯誤的是（）A.需驗證引物間干擾B.探針熒光基團(tuán)需不同C.可提高通量D.無需優(yōu)化鎂離子濃度答案：D30.下列哪項不是PCR實驗室驗收指標(biāo)（）A.潔凈度B.壓差C.照度D.噪聲答案：D31.關(guān)于PCR試劑質(zhì)檢，錯誤的是（）A.每批做陽性對照B.每批做陰性對照C.每批做靈敏度測試D.每批做無菌測試答案：D32.下列哪項可導(dǎo)致Ct值漂移（）A.儀器校準(zhǔn)合格B.試劑批號更換C.使用同一標(biāo)準(zhǔn)品D.使用同一程序答案：B33.福建省PCR上崗證遺失后補(bǔ)發(fā)需提交（）A.單位介紹信B.身份證原件C.登報聲明D.原證書復(fù)印件答案：A34.關(guān)于PCR實驗室生物安全柜，正確的是（）A.可代替超凈臺B.需每年檢測風(fēng)速C.可正壓運行D.無需紫外燈答案：B35.下列哪項不是PCR結(jié)果判讀要素（）A.擴(kuò)增曲線形態(tài)B.Ct值C.熔解曲線D.樣本顏色答案：D36.關(guān)于PCR實驗室廢棄物，錯誤的是（）A.含擴(kuò)增產(chǎn)物的垃圾需高壓B.銳器盒防刺破C.液體廢物可用含氯消毒劑D.可混入生活垃圾答案：D37.下列哪項屬于PCR實驗室“質(zhì)量記錄”（）A.儀器說明書B.校準(zhǔn)證書C.操作SOPD.培訓(xùn)課件答案：B38.關(guān)于PCR試劑運輸，錯誤的是（）A.干冰運輸需密封B.避免陽光直射C.可常溫運輸Taq酶D.到貨立即核對批號答案：C39.下列哪項不是PCR實驗室“期間核查”對象（）A.移液器B.溫度計C.離心機(jī)轉(zhuǎn)速D.實驗室面積答案：D40.福建省PCR上崗證再教育周期為（）A.每年B.每2年C.每3年D.每5年答案：B二、多項選擇題（每題2分，共20分。每題有兩個或兩個以上正確答案，多選、少選、錯選均不得分）41.下列哪些屬于PCR實驗室“三廢”（）A.廢槍頭B.廢擴(kuò)增產(chǎn)物C.廢試劑瓶D.廢手套答案：ABD42.關(guān)于TaqMan探針淬滅基團(tuán)，可選用（）A.BHQ1B.TAMRAC.MGBD.DABCYL答案：ABD43.下列哪些情況需重新提取核酸（）A.內(nèi)標(biāo)Ct值>35B.260/280<1.5C.提取空白陽性D.樣本量<200μL答案：ABC44.福建省PCR實驗室備案材料包括（）A.實驗室平面圖B.人員一覽表C.儀器校準(zhǔn)證書D.生物安全承諾書答案：ABCD45.關(guān)于PCR防污染措施，正確的是（）A.使用dUTP+UNGB.分區(qū)操作C.負(fù)壓排風(fēng)D.紫外照射過夜答案：ABCD46.下列哪些屬于PCR實驗室“關(guān)鍵設(shè)備”（）A.實時熒光PCR儀B.生物安全柜C.高壓滅菌器D.渦旋器答案：ABC47.關(guān)于PCR標(biāo)準(zhǔn)品，正確的是（）A.需溯源B.需分裝凍存C.可反復(fù)凍融10次D.需建立臺賬答案：ABD48.下列哪些屬于PCR結(jié)果無效（）A.陽性對照陰性B.陰性對照陽性C.內(nèi)標(biāo)無擴(kuò)增D.標(biāo)準(zhǔn)曲線R2=0.985答案：ABC49.關(guān)于PCR實驗室空調(diào)系統(tǒng)，正確的是（）A.獨立循環(huán)B.可回風(fēng)C.壓差梯度10–15PaD.高效過濾答案：ACD50.福建省PCR上崗證考試違紀(jì)處理包括（）A.取消成績B.2年內(nèi)不得報考C.通報單位D.罰款答案：ABC三、判斷題（每題1分，共10分。正確打“√”，錯誤打“×”）51.PCR實驗室陽性對照可替代陽性標(biāo)準(zhǔn)品。（）答案：×52.熒光定量PCR儀需每年由計量院檢定。（）答案：√53.提取RNA時，75%乙醇用于洗滌鹽離子。（）答案：√54.福建省允許PCR實驗室兼作微生物培養(yǎng)。（）答案：×55.探針法PCR無需做熔解曲線。（）答案：√56.實時熒光PCR儀校準(zhǔn)只需校準(zhǔn)溫度。（）答案：×57.PCR實驗室記錄保存期限不少于5年。（）答案：√58.內(nèi)標(biāo)基因必須與靶基因相同長度。（）答案：×59.福建省PCR上崗證全國通用。（）答案：×60.擴(kuò)增曲線呈“S”形即可判為陽性。（）答案：×四、填空題（每空1分，共20分）61.PCR反應(yīng)五要素：________、________、________、________、________。答案：模板、引物、DNA聚合酶、dNTPs、緩沖體系62.實時熒光PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線橫坐標(biāo)為________，縱坐標(biāo)為________。答案：起始拷貝數(shù)對數(shù)、Ct值63.福建省PCR實驗室分區(qū)壓差要求：試劑準(zhǔn)備區(qū)________Pa，樣本制備區(qū)________Pa，擴(kuò)增區(qū)________Pa。答案：+5、–10、–1564.提取RNA時，260/280比值理想范圍為________，260/230比值理想范圍為________。答案：1.8–2.1、1.8–2.265.TaqMan探針5′端常用熒光基團(tuán)________，3′端常用淬滅基團(tuán)________。答案：FAM、BHQ166.PCR反應(yīng)體系優(yōu)化順序：________→________→________→________。答案：引物濃度、退火溫度、鎂離子、循環(huán)數(shù)67.福建省PCR上崗證理論考試時長________分鐘，實操考核需完成________份樣本檢測。答案：90、868.實驗室生物安全標(biāo)志顏色：生物危害________，放射性________，腐蝕性________。答案：紅色、黃色、藍(lán)色69.PCR試劑到貨后需記錄：________、________、________、________。答案：名稱、批號、數(shù)量、到貨日期70.擴(kuò)增曲線四期：________、________、________、________。答案：基線期、指數(shù)期、線性期、平臺期五、簡答題（每題10分，共30分）71.簡述PCR實驗室發(fā)生污染后的應(yīng)急處理流程。答案：1.立即終止實驗，封存相關(guān)試劑與樣本；2.報告實驗室負(fù)責(zé)人，啟動污染應(yīng)急預(yù)案；3.更換所有可疑試劑，重新進(jìn)行陰性對照；4.使用0.5–1%次氯酸鈉擦拭工作臺面、移液器、門把手；5.紫外燈照射≥2小時，必要時過夜；6.開啟空調(diào)系統(tǒng)，維持負(fù)壓30分鐘；7.對污染區(qū)域進(jìn)行三次陰性對照檢測，連續(xù)合格方可恢復(fù)實驗；8.填寫《污染處置記錄》，分析原因，制定糾正預(yù)防措施。72.闡述實時熒光PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線制備及質(zhì)控要點。答案：1.選擇國家參考品或WHO標(biāo)準(zhǔn)品，建立5–6個數(shù)量級梯度；2.每個梯度做3個復(fù)孔，減少加樣誤差；3.模板體積不超過反應(yīng)體系10%，避免抑制劑干擾；4.記錄試劑批號、儀器型號、程序版本；5.要求R2≥0.98，擴(kuò)增效率90–110%，斜率–3.58±0.2；6.每批次需包含陽性、陰性、無模板對照；7.標(biāo)準(zhǔn)品分裝凍存，避免反復(fù)凍融；8.若效率異常，依次排查引物、探針、酶活性、校準(zhǔn)情況；9.建立電子臺賬，保存原始數(shù)據(jù)≥5年；10.定期參加室間質(zhì)評，結(jié)果歸檔。73.結(jié)合福建省要求，說明PCR實驗室備案現(xiàn)場核查重點。答案：1.布局：三區(qū)兩緩、單向