浙江省pcr上崗證考試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題1分，共40分。每題只有一個(gè)正確答案，請(qǐng)將正確選項(xiàng)的字母填在括號(hào)內(nèi)）1.PCR技術(shù)中，TaqDNA聚合酶的最適反應(yīng)溫度約為（）A.37℃??B.55℃??C.72℃??D.95℃答案：C2.在實(shí)時(shí)熒光PCR中，Ct值指的是（）A.循環(huán)閾值??B.臨界溫度??C.熒光強(qiáng)度??D.擴(kuò)增效率答案：A3.下列哪項(xiàng)不是PCR反應(yīng)體系的必需組分（）A.引物??B.dNTPs??C.模板DNA??D.瓊脂糖答案：D4.關(guān)于PCR引物設(shè)計(jì)，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A.引物長(zhǎng)度一般為18-25bp??B.GC含量應(yīng)在40%-60%之間??C.引物之間應(yīng)避免形成二聚體??D.引物3'端可以含有多個(gè)連續(xù)的G或C答案：D5.在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，退火溫度一般設(shè)定為（）A.低于引物Tm值2-5℃??B.高于引物Tm值5℃??C.等于引物Tm值??D.與延伸溫度相同答案：A6.實(shí)時(shí)熒光PCR中，SYBRGreenI的作用機(jī)制是（）A.與引物結(jié)合??B.與雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出熒光??C.與單鏈DNA結(jié)合??D.與Taq酶結(jié)合答案：B7.下列哪種污染最容易導(dǎo)致PCR假陽(yáng)性結(jié)果（）A.試劑污染??B.模板污染??C.擴(kuò)增產(chǎn)物污染??D.引物污染答案：C8.PCR實(shí)驗(yàn)中，UNG酶的主要作用是（）A.降解引物二聚體??B.降解dUTP摻入的擴(kuò)增產(chǎn)物??C.提高擴(kuò)增效率??D.降解模板DNA答案：B9.在PCR實(shí)驗(yàn)中，若出現(xiàn)非特異性條帶，最可能的原因是（）A.退火溫度過(guò)高??B.引物特異性差??C.模板濃度過(guò)低??D.延伸時(shí)間過(guò)短答案：B10.實(shí)時(shí)熒光PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線中，斜率與擴(kuò)增效率的關(guān)系為（）A.斜率=-3.32，效率=100%??B.斜率=-3.32，效率=90%??C.斜率=-3.32，效率=110%??D.斜率=-3.32，效率=80%答案：A11.下列哪項(xiàng)不是PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)的基本原則（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)??B.樣本制備區(qū)??C.擴(kuò)增區(qū)??D.結(jié)果分析區(qū)與擴(kuò)增區(qū)可合并答案：D12.PCR反應(yīng)體系中，Mg2?濃度過(guò)高可能導(dǎo)致（）A.擴(kuò)增效率降低??B.非特異性擴(kuò)增增加??C.引物二聚體減少??D.模板降解答案：B13.關(guān)于PCR產(chǎn)物電泳，下列說(shuō)法正確的是（）A.溴化乙錠可提前加入凝膠中??B.電泳緩沖液可用自來(lái)水代替??C.電壓越高分辨率越高??D.上樣量越多條帶越清晰答案：A14.實(shí)時(shí)熒光PCR中，內(nèi)參基因的作用是（）A.提高擴(kuò)增效率??B.校正樣本間差異??C.替代目標(biāo)基因??D.降低背景熒光答案：B15.PCR實(shí)驗(yàn)中，若陰性對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)，首先應(yīng)（）A.重新設(shè)計(jì)引物??B.檢查是否存在污染??C.降低退火溫度??D.增加循環(huán)數(shù)答案：B16.下列哪種方法可有效去除PCR產(chǎn)物污染（）A.紫外線照射??B.高溫滅菌??C.酒精擦拭??D.更換手套答案：A17.PCR引物Tm值計(jì)算最常用的方法是（）A.2(A+T)+4(G+C)??B.4(A+T)+2(G+C)??C.(A+T)/(G+C)??D.經(jīng)驗(yàn)值法答案：A18.實(shí)時(shí)熒光PCR中，ROX染料的作用是（）A.報(bào)告熒光??B.被動(dòng)參比染料??C.淬滅熒光??D.替代SYBRGreen答案：B19.PCR實(shí)驗(yàn)中，模板DNA濃度過(guò)高可能導(dǎo)致（）A.擴(kuò)增效率提高??B.抑制PCR反應(yīng)??C.引物二聚體減少??D.非特異性條帶消失答案：B20.下列哪項(xiàng)不是PCR實(shí)驗(yàn)室生物安全要求（）A.穿戴防護(hù)服??B.戴雙層手套??C.實(shí)驗(yàn)后開(kāi)窗通風(fēng)即可??D.使用帶濾芯槍頭答案：C21.PCR產(chǎn)物測(cè)序前純化的主要目的是（）A.去除引物二聚體??B.去除dNTPs和引物??C.提高模板濃度??D.增加片段長(zhǎng)度答案：B22.實(shí)時(shí)熒光PCR中，熔解曲線分析的主要作用是（）A.判斷擴(kuò)增效率??B.識(shí)別非特異性產(chǎn)物??C.計(jì)算模板濃度??D.優(yōu)化退火溫度答案：B23.PCR實(shí)驗(yàn)中，若陽(yáng)性對(duì)照未擴(kuò)增，最可能的原因是（）A.引物濃度過(guò)高??B.Taq酶失活??C.退火溫度過(guò)高??D.模板降解答案：B24.下列哪種情況不會(huì)導(dǎo)致PCR假陰性（）A.模板降解??B.引物設(shè)計(jì)錯(cuò)誤??C.退火溫度過(guò)低??D.Taq酶失活答案：C25.PCR實(shí)驗(yàn)中，使用熱啟動(dòng)Taq酶的主要目的是（）A.提高擴(kuò)增效率??B.減少非特異性擴(kuò)增??C.降低引物二聚體??D.縮短反應(yīng)時(shí)間答案：B26.實(shí)時(shí)熒光PCR中，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值應(yīng)滿足（）A.>0.95??B.>0.85??C.>0.75??D.>0.99答案：A27.PCR實(shí)驗(yàn)中，若出現(xiàn)引物二聚體，應(yīng)優(yōu)先采取的措施是（）A.提高退火溫度??B.降低引物濃度??C.減少循環(huán)數(shù)??D.重新設(shè)計(jì)引物答案：D28.下列哪項(xiàng)不是PCR實(shí)驗(yàn)室記錄內(nèi)容（）A.試劑批號(hào)??B.操作人員簽名??C.實(shí)驗(yàn)?zāi)康??D.個(gè)人身份證號(hào)碼答案：D29.PCR實(shí)驗(yàn)中，使用UDG防污染系統(tǒng)的前提是（）A.dATP替代dTTP??B.dUTP替代dTTP??C.dCTP替代dGTP??D.dGTP替代dCTP答案：B30.實(shí)時(shí)熒光PCR中，若標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率為-3.8，則擴(kuò)增效率約為（）A.83%??B.93%??C.100%??D.110%答案：A31.PCR實(shí)驗(yàn)中，若模板為RNA，需首先進(jìn)行（）A.逆轉(zhuǎn)錄??B.限制性酶切??C.連接反應(yīng)??D.磷酸化答案：A32.下列哪種方法不能用于PCR產(chǎn)物定量（）A.瓊脂糖凝膠電泳??B.實(shí)時(shí)熒光PCR??C.Nanodrop分光光度計(jì)??D.紫外透射儀目測(cè)答案：D33.PCR實(shí)驗(yàn)室中，生物安全柜的主要作用是（）A.防止樣本污染??B.保護(hù)操作人員??C.提高擴(kuò)增效率??D.降低背景熒光答案：B34.PCR實(shí)驗(yàn)中，若出現(xiàn)多條非特異性條帶，應(yīng)優(yōu)先調(diào)整（）A.延伸時(shí)間??B.退火溫度??C.模板濃度??D.dNTP濃度答案：B35.實(shí)時(shí)熒光PCR中，若內(nèi)參基因Ct值波動(dòng)大，說(shuō)明（）A.擴(kuò)增效率高??B.樣本質(zhì)量差異大??C.引物特異性好??D.標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確答案：B36.PCR實(shí)驗(yàn)中，使用8聯(lián)管排槍的主要優(yōu)點(diǎn)是（）A.提高特異性??B.減少操作誤差??C.降低背景熒光??D.提高退火溫度答案：B37.PCR實(shí)驗(yàn)中，若模板為糞便樣本，應(yīng)優(yōu)先選擇（）A.酚氯仿抽提??B.商業(yè)糞便DNA提取試劑盒??C.煮沸裂解法??D.直接PCR答案：B38.實(shí)時(shí)熒光PCR中，若陰性對(duì)照出現(xiàn)熒光信號(hào)，應(yīng)首先（）A.更換引物??B.更換MasterMix??C.檢查操作污染??D.降低循環(huán)數(shù)答案：C39.PCR實(shí)驗(yàn)中，若擴(kuò)增產(chǎn)物用于克隆，應(yīng)優(yōu)先選擇（）A.Taq酶??B.高保真酶??C.逆轉(zhuǎn)錄酶??D.限制性內(nèi)切酶答案：B40.PCR實(shí)驗(yàn)室中，紫外線照射的最佳波長(zhǎng)為（）A.254nm??B.300nm??C.365nm??D.可見(jiàn)光答案：A二、判斷題（每題1分，共20分。正確打“√”，錯(cuò)誤打“×”）41.PCR反應(yīng)體系中，引物濃度越高越好。（）答案：×42.實(shí)時(shí)熒光PCR中，Ct值越小表示模板初始量越多。（）答案：√43.PCR實(shí)驗(yàn)室三區(qū)可共用同一臺(tái)離心機(jī)。（）答案：×44.使用UNG酶可完全避免PCR污染。（）答案：×45.PCR產(chǎn)物電泳時(shí)，Marker需與樣本同時(shí)上樣。（）答案：√46.實(shí)時(shí)熒光PCR中，熔解曲線峰單一說(shuō)明無(wú)非特異性擴(kuò)增。（）答案：√47.PCR實(shí)驗(yàn)中，模板DNA可反復(fù)凍融多次不影響結(jié)果。（）答案：×48.引物二聚體可通過(guò)熔解曲線識(shí)別。（）答案：√49.PCR實(shí)驗(yàn)室中，手套可戴可不帶。（）答案：×50.實(shí)時(shí)熒光PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值低于0.9仍可接受。（）答案：×51.PCR實(shí)驗(yàn)中，退火溫度可高于引物Tm值5℃。（）答案：×52.使用熱啟動(dòng)酶可減少非特異性擴(kuò)增。（）答案：√53.PCR產(chǎn)物可直接用于測(cè)序無(wú)需純化。（）答案：×54.實(shí)時(shí)熒光PCR中，內(nèi)參基因可用于校正加樣誤差。（）答案：√55.PCR實(shí)驗(yàn)室中，移液器需定期校準(zhǔn)。（）答案：√56.模板DNA濃度越低越易獲得特異性擴(kuò)增。（）答案：×57.PCR實(shí)驗(yàn)中，可使用同一支槍頭連續(xù)加樣。（）答案：×58.實(shí)時(shí)熒光PCR中，ROX染料為必須組分。（）答案：×59.PCR實(shí)驗(yàn)中，陰性對(duì)照應(yīng)包含除模板外所有組分。（）答案：√60.PCR產(chǎn)物電泳后需立即拍照防止條帶擴(kuò)散。（）答案：√三、填空題（每空1分，共20分）61.PCR反應(yīng)三步循環(huán)為：________、________、________。答案：變性、退火、延伸62.實(shí)時(shí)熒光PCR中，Ct值的全稱是________。答案：Cyclethreshold63.引物設(shè)計(jì)時(shí)，GC含量一般控制在________%。答案：40-6064.PCR實(shí)驗(yàn)室三區(qū)為：________、________、________。答案：試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)65.實(shí)時(shí)熒光PCR中，標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率為-3.32時(shí)，擴(kuò)增效率為_(kāi)_______%。答案：10066.PCR反應(yīng)體系中，Mg2?濃度一般為_(kāi)_______mM。答案：1.5-2.567.實(shí)時(shí)熒光PCR中，SYBRGreenI與________結(jié)合發(fā)出熒光。答案：雙鏈DNA68.PCR產(chǎn)物污染常用________nm紫外線照射降解。答案：25469.實(shí)時(shí)熒光PCR中，熔解曲線橫坐標(biāo)為_(kāi)_______，縱坐標(biāo)為_(kāi)_______。答案：溫度，熒光變化率70.PCR實(shí)驗(yàn)中，UNG酶可降解含________的擴(kuò)增產(chǎn)物。答案：dUTP四、簡(jiǎn)答題（每題10分，共20分）71.簡(jiǎn)述PCR實(shí)驗(yàn)室防止污染的主要措施。答案：（1）嚴(yán)格分區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)物理隔離；（2）單向流動(dòng)：人員、物品、空氣單向流動(dòng)，避免交叉；（3）使用帶濾芯槍頭：防止氣溶膠污染；（4）定期紫外線照射：254nm照射工作臺(tái)、儀器表面；（5）UNG防污染系統(tǒng)：使用dUTP替代dTTP，UNG酶降解既往產(chǎn)物；（6）陰性對(duì)照：每批次設(shè)置陰性對(duì)照，及時(shí)發(fā)現(xiàn)污染；（7）定期更換手套、實(shí)驗(yàn)服：避免攜帶污染；（8）專用耗材：各區(qū)耗材固定，不得交叉使用；（9）實(shí)驗(yàn)記錄完整：追溯污染源頭；（10）定期培訓(xùn)：強(qiáng)化操作人員防污染意識(shí)。72.簡(jiǎn)述實(shí)時(shí)熒光PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備步驟及注意事項(xiàng)。答案：步驟：（1）選擇高濃度標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定濃度并換算為拷貝數(shù)；（2）10倍梯度稀釋，至少5個(gè)梯度，覆蓋待測(cè)范圍；（3）每個(gè)梯度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，加入相同MasterMix與引物；（4）同一批次運(yùn)行，記錄Ct值；（5）以Log濃度為橫坐標(biāo)，Ct值為縱坐標(biāo)繪制曲