2025年中國(guó)生物蘭州生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司招聘筆試歷年?？键c(diǎn)試題專(zhuān)練附帶答案詳解（第1套）一、單項(xiàng)選擇題下列各題只有一個(gè)正確答案，請(qǐng)選出最恰當(dāng)?shù)倪x項(xiàng)（共30題）1、在蛋白質(zhì)電泳中，決定蛋白質(zhì)遷移速率的主要因素是：

A．蛋白質(zhì)的電荷數(shù)量

B．蛋白質(zhì)的分子大小

C．緩沖液的pH值

D．蛋白質(zhì)的形狀與電荷的綜合影響2、下列哪種酶常用于PCR反應(yīng)中以耐受高溫環(huán)境？

A．DNA連接酶

B．逆轉(zhuǎn)錄酶

C．TaqDNA聚合酶

D．限制性?xún)?nèi)切酶3、在微生物培養(yǎng)中，高壓蒸汽滅菌的標(biāo)準(zhǔn)條件通常是：

A．100℃，30分鐘

B．121℃，15-20分鐘

C．160℃，2小時(shí)

D．75℃，10分鐘4、ELISA檢測(cè)中，常用于檢測(cè)抗體的方法是：

A．直接法

B．競(jìng)爭(zhēng)法

C．雙抗體夾心法

D．間接法5、下列關(guān)于質(zhì)粒的描述，錯(cuò)誤的是：

A．質(zhì)粒是環(huán)狀雙鏈DNA分子

B．質(zhì)?？瑟?dú)立于染色體進(jìn)行復(fù)制

C．質(zhì)粒是細(xì)菌生存所必需的遺傳物質(zhì)

D．質(zhì)粒常攜帶抗生素抗性基因6、在蛋白質(zhì)電泳中，SDS的主要作用機(jī)制是使蛋白質(zhì)分子帶上均勻的負(fù)電荷，從而按照什么進(jìn)行分離？A．蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)

B．蛋白質(zhì)的形狀

C．蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量

D．蛋白質(zhì)的溶解度7、下列哪種酶常用于PCR反應(yīng)中以擴(kuò)增特定DNA片段？A．DNA連接酶

B．逆轉(zhuǎn)錄酶

C．TaqDNA聚合酶

D．限制性?xún)?nèi)切酶8、在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，防止微生物污染最常用的抗生素是？A．青霉素和鏈霉素

B．慶大霉素和紅霉素

C．四環(huán)素和氯霉素

D．頭孢唑林和萬(wàn)古霉素9、下列哪種方法最適合用于測(cè)定溶液中蛋白質(zhì)的濃度？A．瓊脂糖凝膠電泳

B．紫外分光光度法（280nm）

C．PCR擴(kuò)增

D．高效液相色譜（HPLC）10、單克隆抗體是由哪種細(xì)胞產(chǎn)生的？A．B淋巴細(xì)胞

B．T淋巴細(xì)胞

C．雜交瘤細(xì)胞

D．漿細(xì)胞11、在重組DNA技術(shù)中，用于連接目的基因與載體DNA的酶是：A．限制性?xún)?nèi)切酶

B．DNA聚合酶

C．DNA連接酶

D．逆轉(zhuǎn)錄酶12、下列哪種細(xì)胞器是真核細(xì)胞中蛋白質(zhì)合成的主要場(chǎng)所？A．高爾基體

B．線粒體

C．核糖體

D．溶酶體13、在ELISA檢測(cè)中，常用的標(biāo)記酶是：A．堿性磷酸酶

B．過(guò)氧化氫酶

C．溶菌酶

D．淀粉酶14、下列哪種培養(yǎng)基常用于細(xì)菌的分離與純培養(yǎng)？A．液體培養(yǎng)基

B．半固體培養(yǎng)基

C．固體培養(yǎng)基

D．選擇培養(yǎng)基15、在PCR反應(yīng)中，退火溫度主要取決于：A．模板DNA長(zhǎng)度

B．引物的GC含量和長(zhǎng)度

C．Taq酶活性

D．循環(huán)次數(shù)16、在蛋白質(zhì)電泳中，SDS的主要作用機(jī)制是使蛋白質(zhì)分子按什么分離？A.電荷大小B.形狀差異C.分子質(zhì)量D.等電點(diǎn)17、下列哪種酶常用于PCR反應(yīng)中以耐受高溫環(huán)境？A.DNA連接酶B.逆轉(zhuǎn)錄酶C.TaqDNA聚合酶D.限制性?xún)?nèi)切酶18、在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，常用于防止細(xì)菌污染的抗生素是？A.青霉素-鏈霉素雙抗B.放線菌素DC.秋水仙素D.嘌呤霉素19、下列哪種方法最適合用于檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的表達(dá)水平？A.RT-PCRB.WesternblotC.瓊脂糖凝膠電泳D.ELISA20、單克隆抗體的制備主要依賴(lài)于哪類(lèi)細(xì)胞的融合？A.B細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞B.T細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞C.B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞D.巨噬細(xì)胞與脾細(xì)胞21、在蛋白質(zhì)電泳中，SDS的主要作用機(jī)制是使蛋白質(zhì)分子按照何種特性進(jìn)行分離？A．等電點(diǎn)

B．形狀

C．分子質(zhì)量

D．電荷密度22、下列哪種酶常用于PCR反應(yīng)中的DNA擴(kuò)增？A．DNA連接酶

B．逆轉(zhuǎn)錄酶

C．TaqDNA聚合酶

D．限制性?xún)?nèi)切酶23、在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，防止微生物污染最常用的抗生素是？A．青霉素和鏈霉素

B．慶大霉素和紅霉素

C．四環(huán)素和氯霉素

D．卡那霉素和萬(wàn)古霉素24、ELISA實(shí)驗(yàn)中，用于檢測(cè)未知抗原的最常用方法是？A．間接法

B．競(jìng)爭(zhēng)法

C．夾心法

D．直接法25、下列哪種物質(zhì)是常用的蛋白濃度測(cè)定方法——BCA法的關(guān)鍵試劑？A．考馬斯亮藍(lán)G-250

B．雙縮脲試劑

C．二喹啉甲酸

D．酚試劑26、在重組DNA技術(shù)中，常用于連接目的基因與載體DNA的酶是？A.限制性?xún)?nèi)切酶B.DNA聚合酶C.DNA連接酶D.RNA聚合酶27、在蛋白質(zhì)電泳中，SDS主要用于測(cè)定蛋白質(zhì)的哪項(xiàng)特性？A.等電點(diǎn)B.三維結(jié)構(gòu)C.分子量D.生物活性28、下列哪種方法最適合用于檢測(cè)特定DNA序列的存在？A.WesternblotB.ELISAC.SouthernblotD.Northernblot29、在微生物培養(yǎng)中，高壓蒸汽滅菌的常用條件是？A.60℃維持1小時(shí)B.100℃維持30分鐘C.121℃維持15-20分鐘D.160℃維持2小時(shí)30、下列哪種細(xì)胞器是真核細(xì)胞中蛋白質(zhì)糖基化的主要場(chǎng)所？A.線粒體B.核糖體C.高爾基體D.溶酶體二、多項(xiàng)選擇題下列各題有多個(gè)正確答案，請(qǐng)選出所有正確選項(xiàng)（共15題）31、在蛋白質(zhì)電泳實(shí)驗(yàn)中，影響蛋白質(zhì)遷移率的主要因素包括哪些？A．蛋白質(zhì)的分子大小

B．蛋白質(zhì)的電荷數(shù)量

C．電泳緩沖液的pH值

D．電場(chǎng)強(qiáng)度32、下列關(guān)于PCR技術(shù)的描述，正確的是哪些？A．需要耐高溫的DNA聚合酶

B．引物通常是單鏈DNA片段

C．變性步驟使雙鏈DNA解旋為單鏈

D．延伸過(guò)程在72℃左右進(jìn)行33、下列哪些屬于微生物培養(yǎng)中的無(wú)菌操作措施？A．使用前對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌

B．在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行接種操作

C．培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌后立即倒入平板

D．實(shí)驗(yàn)前后用酒精擦拭工作臺(tái)面34、下列關(guān)于單克隆抗體的敘述，正確的是哪些？A．由單一B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生

B．具有高度特異性和均一性

C．可通過(guò)雜交瘤技術(shù)制備

D．能識(shí)別多個(gè)不同抗原表位35、在酶動(dòng)力學(xué)研究中，影響酶促反應(yīng)速率的因素包括哪些？A．底物濃度

B．酶濃度

C．溫度

D．抑制劑的存在36、在重組蛋白藥物的生產(chǎn)過(guò)程中，常用的宿主細(xì)胞系統(tǒng)包括哪些？A.大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)B.酵母表達(dá)系統(tǒng)C.哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)D.昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)37、下列關(guān)于單克隆抗體制備的描述，正確的是哪些？A.雜交瘤技術(shù)是制備單克隆抗體的經(jīng)典方法B.B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞C.HAT培養(yǎng)基用于篩選未融合的親本細(xì)胞D.單克隆抗體具有高度特異性和均一性38、在生物制品質(zhì)量控制中，常用的理化檢定項(xiàng)目包括哪些？A.蛋白質(zhì)含量測(cè)定B.純度分析（如SDS）C.殘余宿主DNA檢測(cè)D.無(wú)菌檢查39、以下哪些技術(shù)可用于基因克隆中的目的基因獲??？A.PCR擴(kuò)增法B.基因文庫(kù)篩選C.化學(xué)合成法D.Westernblotting40、在疫苗研發(fā)中，佐劑的作用機(jī)制包括哪些？A.增強(qiáng)抗原的免疫原性B.延長(zhǎng)抗原在體內(nèi)的釋放時(shí)間C.促進(jìn)抗原提呈細(xì)胞的活化D.直接殺滅病原微生物41、在蛋白質(zhì)純化過(guò)程中，下列哪些方法主要依據(jù)分子大小差異進(jìn)行分離？A．凝膠過(guò)濾層析

B．離子交換層析

C．透析

D．SDS電泳42、下列關(guān)于PCR技術(shù)的描述，哪些是正確的？A．需要耐高溫的DNA聚合酶

B．變性步驟通常在95℃左右進(jìn)行

C．引物為雙鏈DNA片段

D．?dāng)U增產(chǎn)物可通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)43、在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，下列哪些措施有助于防止微生物污染？A．使用超凈工作臺(tái)進(jìn)行無(wú)菌操作

B．在培養(yǎng)基中添加抗生素

C．定期在普通室溫下敞口觀察細(xì)胞狀態(tài)

D．對(duì)培養(yǎng)器皿進(jìn)行高壓蒸汽滅菌44、以下哪些技術(shù)可用于檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的表達(dá)水平？A．Westernblot

B．RT-qPCR

C．ELISA

D．流式細(xì)胞術(shù)45、下列關(guān)于單克隆抗體的制備過(guò)程，哪些描述是正確的？A．使用抗原免疫小鼠以激活B淋巴細(xì)胞

B．骨髓瘤細(xì)胞具有無(wú)限增殖能力

C．雜交瘤細(xì)胞由B細(xì)胞與T細(xì)胞融合形成

D．可通過(guò)HAT培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞三、判斷題判斷下列說(shuō)法是否正確（共10題）46、在蛋白質(zhì)電泳過(guò)程中，SDS能使蛋白質(zhì)變性并帶上負(fù)電荷，其遷移率主要取決于分子大小。A.正確B.錯(cuò)誤47、PCR反應(yīng)中，退火溫度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致引物無(wú)法與模板結(jié)合，從而降低擴(kuò)增效率。A.正確B.錯(cuò)誤48、革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁含有較厚的肽聚糖層和外膜結(jié)構(gòu)。A.正確B.錯(cuò)誤49、酶的最適pH值是酶的固有特性，不會(huì)因底物濃度變化而改變。A.正確B.錯(cuò)誤50、在微生物培養(yǎng)中，高壓蒸汽滅菌法適用于所有耐熱物品的滅菌，包括培養(yǎng)基和金屬器械。A.正確B.錯(cuò)誤51、在蛋白質(zhì)電泳過(guò)程中，分子量越大的蛋白質(zhì)在凝膠中遷移速度越快。A.正確B.錯(cuò)誤52、PCR反應(yīng)中，退火溫度過(guò)高可能導(dǎo)致引物無(wú)法與模板DNA結(jié)合，從而影響擴(kuò)增效率。A.正確B.錯(cuò)誤53、革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁含有較厚的肽聚糖層和外膜結(jié)構(gòu)。A.正確B.錯(cuò)誤54、酶的最適pH是指酶活性最高時(shí)所對(duì)應(yīng)的pH值，不同酶的最適pH可能不同。A.正確B.錯(cuò)誤55、在微生物培養(yǎng)中，高壓蒸汽滅菌法通常采用121℃、15–20分鐘的條件。A.正確B.錯(cuò)誤

參考答案及解析1.【參考答案】D【解析】蛋白質(zhì)在電泳中的遷移速率受分子大小、電荷數(shù)量和分子形狀共同影響。雖然分子量小或電荷多會(huì)加快遷移，但實(shí)際遷移行為是三者綜合作用的結(jié)果。例如，球狀蛋白比纖維狀蛋白遷移更快。因此，最準(zhǔn)確答案為D，強(qiáng)調(diào)綜合影響。2.【參考答案】C【解析】PCR反應(yīng)需在高溫下進(jìn)行變性、退火和延伸，因此必須使用耐熱的DNA聚合酶。Taq酶來(lái)源于水生嗜熱菌，能在95℃以上保持活性，是PCR中最常用的酶。其他酶如連接酶、逆轉(zhuǎn)錄酶和限制酶均不耐高溫，無(wú)法勝任PCR全過(guò)程。3.【參考答案】B【解析】高壓蒸汽滅菌利用高溫高壓飽和蒸汽殺滅所有微生物，包括芽孢。標(biāo)準(zhǔn)條件為121℃、103.4kPa（約15psi）下維持15-20分鐘，可有效滅菌。100℃為常壓沸水，無(wú)法殺滅芽孢；160℃用于干熱滅菌；75℃屬巴氏消毒，均不符合徹底滅菌要求。4.【參考答案】D【解析】間接ELISA用于檢測(cè)樣本中的抗體。其原理是將抗原包被在固相載體上，加入待測(cè)抗體與之結(jié)合，再用酶標(biāo)二抗識(shí)別并顯色。該法靈敏度高，廣泛用于血清抗體檢測(cè)。雙抗體夾心法用于檢測(cè)抗原，直接法較少用，競(jìng)爭(zhēng)法則適用于小分子抗原檢測(cè)。5.【參考答案】C【解析】質(zhì)粒是存在于細(xì)菌中的小型環(huán)狀雙鏈DNA，能自主復(fù)制，常用于基因工程載體。其攜帶的基因如抗生素抗性基因有助于篩選，但并非細(xì)菌生存所必需。在無(wú)選擇壓力下，細(xì)菌可丟失質(zhì)粒仍正常生長(zhǎng)，因此C項(xiàng)錯(cuò)誤。6.【參考答案】C【解析】SDS（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）中，SDS是一種陰離子去垢劑，能破壞蛋白質(zhì)的非共價(jià)鍵，使其變性并結(jié)合大量負(fù)電荷。由于SDS結(jié)合量與蛋白質(zhì)分子量成正比，電荷密度趨于一致，電泳遷移率主要取決于分子大小，因此按分子質(zhì)量分離。等電點(diǎn)影響等電聚焦，形狀和溶解度在此體系中影響極小。7.【參考答案】C【解析】PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）依賴(lài)耐熱的DNA聚合酶，在高溫下仍具活性。TaqDNA聚合酶源自水生嗜熱菌，能在PCR變性溫度（約95℃）下保持穩(wěn)定，連續(xù)催化DNA鏈延伸。DNA連接酶用于連接DNA片段，逆轉(zhuǎn)錄酶用于RNA反轉(zhuǎn)錄，限制性?xún)?nèi)切酶用于DNA切割，均不參與PCR擴(kuò)增的核心合成過(guò)程。8.【參考答案】A【解析】青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成，鏈霉素抑制蛋白質(zhì)合成，兩者聯(lián)用可有效防控革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌污染，是細(xì)胞培養(yǎng)中最常見(jiàn)的抗生素組合。其他抗生素雖具抗菌性，但因細(xì)胞毒性、穩(wěn)定性或廣譜性不足，較少用于常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)體系。9.【參考答案】B【解析】蛋白質(zhì)在280nm處的吸光度主要來(lái)自色氨酸和酪氨酸殘基，紫外分光光度法操作簡(jiǎn)便、快速，適用于粗略定量。瓊脂糖凝膠電泳主要用于核酸分離；PCR用于DNA擴(kuò)增；HPLC雖可定量但設(shè)備復(fù)雜、成本高，常用于純度分析而非常規(guī)濃度測(cè)定。10.【參考答案】C【解析】單克隆抗體由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生，該細(xì)胞由B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合而成，兼具抗體分泌能力和無(wú)限增殖特性。B細(xì)胞或漿細(xì)胞雖能產(chǎn)生抗體，但無(wú)法長(zhǎng)期體外培養(yǎng)；T細(xì)胞不產(chǎn)生抗體。雜交瘤技術(shù)是單克隆抗體制備的核心，確?？贵w的高度特異性和均一性。11.【參考答案】C【解析】DNA連接酶能催化兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，實(shí)現(xiàn)目的基因與載體的共價(jià)連接，是基因工程中構(gòu)建重組DNA分子的關(guān)鍵酶。限制性?xún)?nèi)切酶用于切割DNA產(chǎn)生黏性末端或平末端；DNA聚合酶用于DNA復(fù)制；逆轉(zhuǎn)錄酶用于以RNA為模板合成cDNA。因此正確答案為C。12.【參考答案】C【解析】核糖體是細(xì)胞內(nèi)負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)合成的細(xì)胞器，游離核糖體合成胞內(nèi)蛋白，附著于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核糖體合成分泌蛋白和膜蛋白。高爾基體參與蛋白質(zhì)的修飾、分選與運(yùn)輸；線粒體是能量代謝場(chǎng)所；溶酶體含有水解酶，參與降解作用。因此，蛋白質(zhì)合成的直接場(chǎng)所是核糖體，答案為C。13.【參考答案】A【解析】ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）常使用堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶作為標(biāo)記酶，用于催化底物顯色反應(yīng)，從而檢測(cè)抗原或抗體的存在。堿性磷酸酶應(yīng)用廣泛，靈敏度高。過(guò)氧化氫酶是清除過(guò)氧化氫的酶，不用于標(biāo)記；溶菌酶和淀粉酶分別參與細(xì)菌裂解和糖類(lèi)水解，非免疫檢測(cè)常用酶。故正確答案為A。14.【參考答案】C【解析】固體培養(yǎng)基因含有瓊脂，可形成菌落，便于分離和觀察單個(gè)微生物菌落，是細(xì)菌分離純化的首選。液體培養(yǎng)基用于擴(kuò)增菌體，半固體用于觀察運(yùn)動(dòng)性，選擇培養(yǎng)基用于篩選特定微生物。雖然選擇培養(yǎng)基也可用于分離，但“常用于”分離純培養(yǎng)的仍是固體培養(yǎng)基，故答案為C。15.【參考答案】B【解析】PCR退火溫度由引物的堿基組成決定，特別是GC含量（G-C間有三個(gè)氫鍵，更穩(wěn)定）和引物長(zhǎng)度，直接影響引物與模板的結(jié)合特異性。溫度過(guò)高導(dǎo)致結(jié)合失敗，過(guò)低則引起非特異性結(jié)合。模板長(zhǎng)度、酶活性和循環(huán)次數(shù)影響擴(kuò)增效率，但不決定退火溫度設(shè)定。因此，正確答案為B。16.【參考答案】C【解析】SDS（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）中，SDS是一種陰離子去垢劑，能破壞蛋白質(zhì)的非共價(jià)鍵結(jié)構(gòu)，使其變性并均勻帶上負(fù)電荷，消除電荷差異。同時(shí)，β-巰基乙醇可斷裂二硫鍵，使蛋白質(zhì)完全解聚。此時(shí)，蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的遷移率主要取決于其分子質(zhì)量大小，與原有電荷和形狀無(wú)關(guān)。因此，該技術(shù)按分子質(zhì)量進(jìn)行分離，是測(cè)定蛋白質(zhì)亞基分子量的常用方法。17.【參考答案】C【解析】PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）需經(jīng)歷高溫變性、退火和延伸三個(gè)步驟，其中延伸溫度約為72℃，而變性溫度可達(dá)95℃以上。普通DNA聚合酶在高溫下易失活，而TaqDNA聚合酶來(lái)源于嗜熱菌Thermusaquaticus，具有良好的熱穩(wěn)定性，能在反復(fù)高溫循環(huán)中保持活性，因此被廣泛應(yīng)用于PCR反應(yīng)。其他酶如DNA連接酶用于連接DNA片段，逆轉(zhuǎn)錄酶用于RNA反轉(zhuǎn)錄，限制性?xún)?nèi)切酶用于DNA切割，均不適用于高溫延伸過(guò)程。18.【參考答案】A【解析】在體外細(xì)胞培養(yǎng)中，為防止細(xì)菌污染，常在培養(yǎng)基中添加青霉素和鏈霉素的混合制劑（雙抗）。青霉素干擾細(xì)菌細(xì)胞壁合成，鏈霉素抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，兩者對(duì)細(xì)菌有廣譜抑制作用，但對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞影響較小。而放線菌素D、秋水仙素和嘌呤霉素屬于細(xì)胞毒性試劑，常用于篩選或抑制細(xì)胞增殖，不用于常規(guī)防污染。因此，青霉素-鏈霉素是細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的抗生素組合。19.【參考答案】B【解析】Westernblot（蛋白質(zhì)免疫印跡）可特異性檢測(cè)目標(biāo)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，通過(guò)SDS分離蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)膜后利用特異性抗體結(jié)合目標(biāo)蛋白，再通過(guò)顯色或化學(xué)發(fā)光檢測(cè)信號(hào)，兼具定性和半定量功能。RT-PCR用于檢測(cè)mRNA水平，反映基因轉(zhuǎn)錄情況，而非蛋白表達(dá)。瓊脂糖凝膠電泳主要用于DNA或RNA分離。ELISA也可檢測(cè)蛋白質(zhì)，但通常用于體液中可溶性蛋白的定量，特異性依賴(lài)抗體質(zhì)量。綜合來(lái)看，Westernblot是實(shí)驗(yàn)室最常用的蛋白表達(dá)檢測(cè)方法。20.【參考答案】C【解析】單克隆抗體制備采用雜交瘤技術(shù)，將能產(chǎn)生特異性抗體的B細(xì)胞（通常來(lái)自免疫小鼠的脾臟）與具有無(wú)限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合，形成雜交瘤細(xì)胞。該細(xì)胞既保留了B細(xì)胞分泌特異性抗體的能力，又具備骨髓瘤細(xì)胞的無(wú)限增殖特性，可長(zhǎng)期穩(wěn)定生產(chǎn)單一抗體。T細(xì)胞不分泌抗體，巨噬細(xì)胞與脾細(xì)胞融合非常規(guī)方法。因此，B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合是制備單克隆抗體的核心步驟。21.【參考答案】C【解析】SDS即十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，SDS是一種陰離子去垢劑，能破壞蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)并均勻地結(jié)合到蛋白質(zhì)上，使其帶負(fù)電荷且電荷量與分子量成正比，同時(shí)使蛋白質(zhì)變性成桿狀結(jié)構(gòu)。因此，電泳遷移率主要取決于分子質(zhì)量大小，與原有電荷和形狀無(wú)關(guān)，實(shí)現(xiàn)按分子質(zhì)量分離。該技術(shù)廣泛用于蛋白質(zhì)純度鑒定和分子量測(cè)定。22.【參考答案】C【解析】PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）需要耐高溫的DNA聚合酶，以在反復(fù)加熱變性過(guò)程中保持活性。TaqDNA聚合酶是從水生嗜熱菌Thermusaquaticus中分離的耐熱酶，能在72℃左右高效催化DNA鏈的延伸，是PCR技術(shù)的核心組分。其他酶如DNA連接酶用于連接DNA片段，逆轉(zhuǎn)錄酶用于RNA反轉(zhuǎn)錄，限制性?xún)?nèi)切酶用于DNA切割，均不適用于PCR擴(kuò)增。23.【參考答案】A【解析】青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成，鏈霉素抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，兩者聯(lián)合使用可有效抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和部分革蘭氏陰性菌，是細(xì)胞培養(yǎng)中預(yù)防細(xì)菌污染的常用組合。其他抗生素雖也有抗菌作用，但因細(xì)胞毒性較強(qiáng)或廣譜性不足，較少用于常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)體系。無(wú)菌操作仍是根本，抗生素僅為輔助手段。24.【參考答案】C【解析】夾心ELISA適用于檢測(cè)具有多個(gè)抗原表位的較大分子抗原。其原理是利用兩種特異性抗體（捕獲抗體與檢測(cè)抗體）分別結(jié)合抗原的不同位點(diǎn)，形成“抗體-抗原-抗體”夾心結(jié)構(gòu)，具有高特異性和靈敏度。間接法主要用于檢測(cè)抗體，直接法靈敏度低，競(jìng)爭(zhēng)法適用于小分子抗原。因此，檢測(cè)未知抗原首選夾心法。25.【參考答案】C【解析】BCA法（二喹啉甲酸法）基于蛋白質(zhì)在堿性條件下將Cu2?還原為Cu?，后者與BCA（二喹啉甲酸）形成紫色絡(luò)合物，其吸光度與蛋白濃度成正比。該方法靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)，優(yōu)于傳統(tǒng)的Lowry法和Bradford法?？捡R斯亮藍(lán)是Bradford法的染料，酚試劑用于Lowry法，雙縮脲試劑用于測(cè)定肽鍵，但靈敏度較低。26.【參考答案】C【解析】DNA連接酶是重組DNA技術(shù)中的關(guān)鍵工具酶，能夠催化兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，實(shí)現(xiàn)目的基因與載體的共價(jià)連接。限制性?xún)?nèi)切酶用于切割DNA產(chǎn)生粘性末端或平末端，DNA聚合酶主要用于DNA復(fù)制，如PCR擴(kuò)增，而RNA聚合酶參與轉(zhuǎn)錄過(guò)程。因此，在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，DNA連接酶不可或缺。27.【參考答案】C【解析】SDS（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）通過(guò)SDS使蛋白質(zhì)變性并均勻帶負(fù)電，消除電荷差異，使遷移率主要取決于分子大小。因此可用于估算蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量。等電點(diǎn)通過(guò)等電聚焦測(cè)定，三維結(jié)構(gòu)需X射線晶體學(xué)或NMR，生物活性需功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。28.【參考答案】C【解析】Southernblot用于檢測(cè)特定DNA序列，通過(guò)凝膠電泳分離DNA，轉(zhuǎn)膜后用標(biāo)記探針雜交。Westernblot檢測(cè)蛋白質(zhì)，ELISA用于抗原或抗體檢測(cè)，Northernblot用于RNA分析。因此，檢測(cè)DNA序列應(yīng)選Southernblot，具有高特異性和靈敏度。29.【參考答案】C【解析】高壓蒸汽滅菌法利用高溫高壓飽和蒸汽殺滅所有微生物包括芽孢，標(biāo)準(zhǔn)條件為121℃、103kPa（約15psi）下維持15-20分鐘。60℃為巴氏消毒溫度，100℃無(wú)法殺滅芽孢，160℃干熱滅菌用于耐高溫但不耐濕物品。因此液體培養(yǎng)基等常用高壓蒸汽在121℃處理。30.【參考答案】C【解析】蛋白質(zhì)的糖基化修飾主要在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)起始，隨后在高爾基體中進(jìn)一步加工和修飾，如寡糖鏈的剪切與添加，是分泌蛋白和膜蛋白成熟的關(guān)鍵步驟。線粒體參與能量代謝，核糖體合成多肽鏈，溶酶體含水解酶用于降解。因此，高爾基體是糖基化修飾的主要完成場(chǎng)所。31.【參考答案】ABCD【解析】蛋白質(zhì)在電泳中的遷移率受多種因素影響：分子量越小，遷移越快（A正確）；所帶凈電荷越多，受電場(chǎng)力作用越強(qiáng)，遷移越快（B正確）；緩沖液pH影響蛋白質(zhì)的解離狀態(tài)，從而改變其電荷量（C正確）；電場(chǎng)強(qiáng)度越高，帶電粒子遷移速度越快（D正確）。因此，四項(xiàng)均為影響因素。32.【參考答案】ABCD【解析】PCR擴(kuò)增需使用TaqDNA聚合酶等耐高溫酶（A正確）；引物為人工合成的單鏈DNA，用于特異性結(jié)合模板（B正確）；變性通過(guò)高溫（約95℃）使雙鏈DNA解離（C正確）；延伸時(shí)Taq酶在72℃附近活性最高，合成新鏈（D正確）。四項(xiàng)均符合PCR基本原理。33.【參考答案】ABD【解析】接種環(huán)需火焰滅菌（A正確）；超凈臺(tái)提供無(wú)菌環(huán)境（B正確）；酒精擦拭可減少污染（D正確）；但培養(yǎng)基滅菌后需冷卻至約50℃再倒平板，防止冷凝水過(guò)多或燙傷（C錯(cuò)誤）。故選ABD。34.【參考答案】ABC【解析】單克隆抗體由單一雜交瘤細(xì)胞克隆產(chǎn)生，來(lái)源單一（A正確）；只針對(duì)特定抗原表位，特異性強(qiáng)、成分均一（B正確）；常用B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的雜交瘤技術(shù)制備（C正確）；但僅識(shí)別單一抗原表位，D項(xiàng)錯(cuò)誤。因此選ABC。35.【參考答案】ABCD【解析】底物濃度影響反應(yīng)速率，符合米氏方程（A正確）；酶濃度越高，反應(yīng)速率越快（B正確）；溫度通過(guò)影響酶活性改變反應(yīng)速率，過(guò)高則失活（C正確）；抑制劑可降低酶活性（D正確）。四項(xiàng)均為關(guān)鍵影響因素，故全選。36.【參考答案】ABCD【解析】重組蛋白藥物生產(chǎn)中，大腸桿菌系統(tǒng)成本低、周期短，適用于結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的蛋白；酵母系統(tǒng)具備一定的翻譯后修飾能力，適合中等復(fù)雜蛋白；哺乳動(dòng)物細(xì)胞（如CHO細(xì)胞）能完成復(fù)雜修飾，常用于抗體類(lèi)藥物；昆蟲(chóng)細(xì)胞結(jié)合桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，適用于需要部分修飾的復(fù)雜蛋白。四種系統(tǒng)各有優(yōu)勢(shì)，廣泛應(yīng)用于生物制藥領(lǐng)域。37.【參考答案】ABD【解析】單克隆抗體制備采用B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的雜交瘤技術(shù)，HAT培養(yǎng)基用于篩選融合成功的雜交瘤細(xì)胞，而非未融合細(xì)胞（未融合的B細(xì)胞無(wú)法增殖，骨髓瘤細(xì)胞因缺乏HGPRT被清除）。雜交瘤細(xì)胞可無(wú)限增殖并分泌特異性抗體，確?？贵w的高度特異性和均一性，廣泛應(yīng)用于診斷與治療。38.【參考答案】ABC【解析】理化檢定包括蛋白質(zhì)含量（如BCA法）、純度（SDS、HPLC）、分子量、等電點(diǎn)及殘余雜質(zhì)（如宿主DNA、蛋白）檢測(cè)。無(wú)菌檢查屬于生物學(xué)檢定范疇，用于檢測(cè)微生物污染。理化檢定確保產(chǎn)品結(jié)構(gòu)正確、純度達(dá)標(biāo)，是生物制品質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。39.【參考答案】ABC【解析】PCR可從模板DNA中擴(kuò)增特定基因片段；基因文庫(kù)（基因組或cDNA文庫(kù)）可用于篩選未知序列的目的基因；化學(xué)合成法適用于已知序列的短基因合成。Westernblotting用于蛋白質(zhì)檢測(cè)，不能用于基因獲取，屬于蛋白水平分析技術(shù)，不參與克隆的初始基因獲取步驟。40.【參考答案】ABC【解析】佐劑通過(guò)增強(qiáng)免疫應(yīng)答提高疫苗效果：可形成抗原儲(chǔ)存庫(kù)，延緩釋放；激活樹(shù)突狀細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞，促進(jìn)T/B細(xì)胞應(yīng)答；刺激免疫信號(hào)通路（如TLR），增強(qiáng)抗原免疫原性。佐劑本身無(wú)直接殺菌作用，不等同于抗生素或消毒劑，其核心功能是免疫增強(qiáng)。41.【參考答案】A、C、D【解析】凝膠過(guò)濾層析利用多孔凝膠顆粒，小分子進(jìn)入孔內(nèi)、大分子先流出，實(shí)現(xiàn)按分子大小分離；透析通過(guò)半透膜使小分子溶質(zhì)擴(kuò)散到膜外，保留大分子蛋白質(zhì)，也基于分子大??；SDS中蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中按分子量大小在凝膠中遷移速率不同而分離。離子交換層析則依據(jù)蛋白質(zhì)表面電荷性質(zhì)，與分子大小無(wú)直接關(guān)系，故不選B。42.【參考答案】A、B、D【解析】PCR依賴(lài)耐高溫的TaqDNA聚合酶，避免每次循環(huán)重新加酶；變性通過(guò)高溫（約95℃）使雙鏈DNA解鏈；引物是人工合成的單鏈寡核苷酸，用于特異性結(jié)合模板兩端，故C錯(cuò)誤；擴(kuò)增后的DNA片段常用瓊脂糖凝膠電泳按大小分離并檢測(cè)，D正確。43.【參考答案】A、B、D【解析】超凈工作臺(tái)提供無(wú)菌操作環(huán)境，有效減少空氣微生物污染；抗生素可抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，但不能替代無(wú)菌操作；敞口操作會(huì)引入微生物，且室溫不利于細(xì)胞維持，C錯(cuò)誤；所有接觸培養(yǎng)物的器皿必須經(jīng)高壓滅菌，確保無(wú)菌，D正確。44.【參考答案】A、C、D【解析】Westernblot通過(guò)特異性抗體檢測(cè)目標(biāo)蛋白的表達(dá)量和分子量；ELISA定量分析溶液中特定蛋白濃度；流式細(xì)胞術(shù)可檢測(cè)細(xì)胞表面或內(nèi)部蛋白表達(dá)水平，并實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞分析。RT-qPCR用于檢測(cè)mRNA水平，反映基因轉(zhuǎn)錄活性，而非直接測(cè)定蛋白質(zhì)表達(dá)，故B不選。45.【參考答案】A、B、D【解析】單克隆抗體制備中，小鼠經(jīng)抗原免疫后，脾臟B細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體；骨髓瘤細(xì)胞可無(wú)限分裂，提供永生性；B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，而非T細(xì)胞，故C錯(cuò)誤；HAT培養(yǎng)基可選擇性殺死未融合的骨髓瘤細(xì)胞，僅雜交瘤細(xì)胞存活，實(shí)現(xiàn)有效篩選。46.【參考答案】A【解析】SDS（十二烷基硫酸鈉）是一種陰離子去垢劑，可破壞蛋白質(zhì)的非共價(jià)鍵結(jié)構(gòu)，使其變性并均勻包裹負(fù)電荷，消除電荷差異對(duì)遷移的影響。此時(shí)，蛋白質(zhì)在凝膠中的遷移速率僅與其分子量大小有關(guān)，分子越小遷移越快。該原理是SDS電泳的基礎(chǔ)，廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)分子量測(cè)定。47.【參考答案】A【解析】PCR退火階段依賴(lài)引物與模板DNA的特異性結(jié)合。若退火溫度過(guò)高，引物與模板的互補(bǔ)區(qū)域難以形成穩(wěn)定氫鍵，導(dǎo)致結(jié)合失敗，擴(kuò)增產(chǎn)物減少甚至無(wú)產(chǎn)物。適宜退火溫度通常比引物Tm值低3-5℃，需通過(guò)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，以平衡特異性與擴(kuò)增效率。48.【參考答案】B【解析】革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁由厚肽聚糖層和磷壁酸組成，但無(wú)外膜；而革蘭氏陰性菌才具有薄肽聚糖層和外膜結(jié)構(gòu)。外膜含脂多糖（LPS），是內(nèi)毒素的主要來(lái)源。此差異是革蘭染色反應(yīng)不同的主要原因，也是抗生素靶向設(shè)計(jì)的重要依據(jù)。49.【參考答案】A【解析】酶的最適pH由其空間結(jié)構(gòu)和活性中心氨基酸殘基的電離狀態(tài)決定，屬于酶本身的理化特性。雖然底物濃度影響反應(yīng)速率，但不改變酶對(duì)pH的依賴(lài)性。不同酶最適pH不同，如胃蛋白酶約為1.8，胰蛋白酶約為8.0，偏離最適pH會(huì)導(dǎo)致酶活性下降甚至失活。50.【參考答案】A【解析】高壓蒸汽滅菌（通常121℃、15-20分鐘）利用高溫飽和蒸汽殺死所有微生物及孢子，適用于耐高溫高濕的物品，如玻璃器皿、金屬器械、生理鹽水和多數(shù)培養(yǎng)基。但對(duì)熱敏感物質(zhì)（如某些抗生素、血清）需采用過(guò)濾除菌等替代方法，避免成分破壞。51.【參考答案】B【解析】在SDS電泳中，蛋白質(zhì)的遷移速率主要與其分子量成反比。SDS使蛋白質(zhì)帶負(fù)電且形狀接近桿狀，分子量越小的蛋白質(zhì)越容易通過(guò)凝膠孔隙，遷移越快；分子量大的則遷移較慢。因此該說(shuō)法錯(cuò)誤。52.【參考答案】A【解析】退火溫度決定引物與模板DNA的特異性結(jié)合。溫度過(guò)高會(huì)使引物無(wú)法穩(wěn)定結(jié)合模板，導(dǎo)致擴(kuò)增失敗或產(chǎn)量下降；過(guò)低則可能引發(fā)非特異性結(jié)合。通常退火溫度設(shè)定為引物Tm值減去3–5℃，需精確優(yōu)化。53.【參考答案】B【解析】革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁肽聚糖層厚，但無(wú)外膜；外膜是革蘭氏陰性菌的特征結(jié)構(gòu)，位于肽聚糖層之外。陽(yáng)性菌含有大量磷壁酸，而陰性菌則有脂多糖。因此“含有外膜”說(shuō)法錯(cuò)誤。54.【參考答案】A【解析】酶的活性受pH影響顯著，最適pH是其催化效率最高的環(huán)境pH。例如胃蛋白酶最適pH約為2，胰蛋白酶約為8。pH偏離最適值會(huì)影響酶空間結(jié)構(gòu)或電荷分布，導(dǎo)致活性下降甚至失活。55.【參考答案】A【解析】高壓蒸汽滅菌利用高溫飽和蒸汽殺滅所有微生物，包括芽孢。121℃下維持15–20分鐘是最常用且有效的條件，可確保徹底滅菌。此法適用于耐熱物品如培養(yǎng)基、玻璃器皿等。

2025年中國(guó)生物蘭州生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司招聘筆試歷年常考點(diǎn)試題專(zhuān)練附帶答案詳解（第2套）一、單項(xiàng)選擇題下列各題只有一個(gè)正確答案，請(qǐng)選出最恰當(dāng)?shù)倪x項(xiàng)（共30題）1、在蛋白質(zhì)電泳中，SDS的主要作用機(jī)制是什么？A.依據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)進(jìn)行分離B.依據(jù)蛋白質(zhì)的分子大小進(jìn)行分離C.依據(jù)蛋白質(zhì)的電荷分布進(jìn)行分離D.依據(jù)蛋白質(zhì)的疏水性進(jìn)行分離2、下列哪種酶常用于PCR反應(yīng)中的DNA合成？A.DNA連接酶B.逆轉(zhuǎn)錄酶C.TaqDNA聚合酶D.限制性?xún)?nèi)切酶3、在細(xì)胞培養(yǎng)中，防止微生物污染最常用的抗生素是？A.青霉素和鏈霉素B.紅霉素和克林霉素C.四環(huán)素和萬(wàn)古霉素D.氯霉素和慶大霉素4、ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的固相載體是？A.瓊脂糖凝膠B.聚苯乙烯微孔板C.硝酸纖維素膜D.玻璃載片5、下列哪種方法最適合用于測(cè)定DNA濃度？A.Lowry法B.考馬斯亮藍(lán)法C.紫外分光光度法D.BCA法6、在重組DNA技術(shù)中，用于連接DNA片段的酶是：A.DNA聚合酶B.限制性?xún)?nèi)切酶C.DNA連接酶D.RNA聚合酶7、下列哪種細(xì)胞器是蛋白質(zhì)合成的主要場(chǎng)所？A.高爾基體B.線粒體C.核糖體D.溶酶體8、在ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的酶標(biāo)記物是：A.過(guò)氧化氫酶B.堿性磷酸酶C.淀粉酶D.脂肪酶9、下列哪種培養(yǎng)基常用于分離和培養(yǎng)真菌？A.LB培養(yǎng)基B.SS培養(yǎng)基C.沙保弱培養(yǎng)基D.血瓊脂培養(yǎng)基10、PCR反應(yīng)中，退火溫度主要取決于：A.模板DNA長(zhǎng)度B.引物的GC含量和長(zhǎng)度C.Taq酶活性D.循環(huán)次數(shù)11、在重組DNA技術(shù)中，最常用的載體之一是質(zhì)粒。下列關(guān)于質(zhì)粒的描述，錯(cuò)誤的是：A．質(zhì)粒是雙鏈環(huán)狀DNA分子

B．質(zhì)粒能獨(dú)立于染色體外進(jìn)行自我復(fù)制

C．質(zhì)粒通常攜帶抗生素抗性基因作為篩選標(biāo)記

D．質(zhì)粒只能在原核細(xì)胞中存在和表達(dá)12、在蛋白質(zhì)電泳中，SDS主要用于測(cè)定蛋白質(zhì)的什么性質(zhì)？A．等電點(diǎn)

B．空間構(gòu)象

C．相對(duì)分子質(zhì)量

D．電荷分布13、下列哪種酶常用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）中的擴(kuò)增反應(yīng)？A．逆轉(zhuǎn)錄酶

B．DNA連接酶

C．熱穩(wěn)定DNA聚合酶

D．限制性?xún)?nèi)切酶14、在單克隆抗體制備過(guò)程中，哪一種細(xì)胞融合技術(shù)最為關(guān)鍵？A．B細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合

B．T細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合

C．B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合

D．巨噬細(xì)胞與脾細(xì)胞融合15、下列關(guān)于ELISA實(shí)驗(yàn)的描述，正確的是：A．ELISA只能檢測(cè)抗原，不能檢測(cè)抗體

B．實(shí)驗(yàn)中常用的酶標(biāo)記物是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）

C．ELISA結(jié)果必須通過(guò)熒光顯微鏡觀察

D．該技術(shù)不適用于血清樣本檢測(cè)16、在蛋白質(zhì)電泳中，SDS主要用于分離蛋白質(zhì)的依據(jù)是下列哪一項(xiàng)？A．蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)

B．蛋白質(zhì)的電荷密度

C．蛋白質(zhì)的分子大小

D．蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象17、下列哪種酶在PCR擴(kuò)增過(guò)程中起關(guān)鍵作用？A．DNA連接酶

B．逆轉(zhuǎn)錄酶

C．TaqDNA聚合酶

D．限制性?xún)?nèi)切酶18、在微生物培養(yǎng)中，高壓蒸汽滅菌的標(biāo)準(zhǔn)條件通常是？A．60℃，30分鐘

B．100℃，20分鐘

C．121℃，15-20分鐘

D．160℃，2小時(shí)19、下列哪種方法最適合用于檢測(cè)特定抗原與抗體的結(jié)合反應(yīng)？A．PCR技術(shù)

B．WesternBlot

C．瓊脂糖凝膠電泳

D．質(zhì)譜分析20、在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，防止細(xì)菌污染最常用的抗生素是？A．鏈霉素和青霉素

B．慶大霉素和利福平

C．紅霉素和四環(huán)素

D．卡那霉素和萬(wàn)古霉素21、在蛋白質(zhì)電泳中，SDS的主要作用機(jī)制是使蛋白質(zhì)分子按照何種特性進(jìn)行分離？A．等電點(diǎn)

B．形狀

C．分子質(zhì)量

D．電荷數(shù)量22、下列哪種酶常用于PCR反應(yīng)中以耐受高溫環(huán)境？A．DNA連接酶

B．限制性?xún)?nèi)切酶

C．TaqDNA聚合酶

D．逆轉(zhuǎn)錄酶23、在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，防止微生物污染最常用的抗生素是？A．青霉素和鏈霉素

B．慶大霉素和紅霉素

C．四環(huán)素和卡那霉素

D．氯霉素和萬(wàn)古霉素24、ELISA實(shí)驗(yàn)中，用于檢測(cè)未知抗原最常用的方法是？A．間接法

B．競(jìng)爭(zhēng)法

C．雙抗體夾心法

D．直接法25、下列哪項(xiàng)不是影響酶促反應(yīng)速率的因素？A．底物濃度

B．酶濃度

C．pH值

D．光照強(qiáng)度26、在蛋白質(zhì)電泳中，SDS的主要作用原理是什么？A.利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)差異進(jìn)行分離B.依據(jù)蛋白質(zhì)分子大小在電場(chǎng)中遷移率不同進(jìn)行分離C.通過(guò)蛋白質(zhì)與特定配體的親和性分離D.根據(jù)蛋白質(zhì)的疏水性差異進(jìn)行分離27、下列哪種酶常用于PCR反應(yīng)中擴(kuò)增DNA片段？A.DNA連接酶B.逆轉(zhuǎn)錄酶C.TaqDNA聚合酶D.限制性?xún)?nèi)切酶28、在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，防止微生物污染最常用的抗生素是？A.青霉素和鏈霉素B.紅霉素和萬(wàn)古霉素C.氯霉素和四環(huán)素D.慶大霉素和利福平29、以下關(guān)于單克隆抗體的敘述，正確的是？A.由多個(gè)B細(xì)胞克隆共同產(chǎn)生B.能識(shí)別多種不同抗原表位C.具有高度特異性和均一性D.通常通過(guò)多肽直接免疫動(dòng)物獲得30、在ELISA實(shí)驗(yàn)中，辣根過(guò)氧化物酶（HRP）常作為標(biāo)記酶，其常用底物是？A.吖啶酯B.AMPPDC.魯米諾D.TMB（四甲基聯(lián)苯胺）二、多項(xiàng)選擇題下列各題有多個(gè)正確答案，請(qǐng)選出所有正確選項(xiàng)（共15題）31、在重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)中，原核表達(dá)系統(tǒng)常以大腸桿菌為主，其優(yōu)點(diǎn)包括哪些？A.表達(dá)水平高，成本低B.可進(jìn)行復(fù)雜的翻譯后修飾C.遺傳背景清晰，操作簡(jiǎn)便D.適合表達(dá)真核來(lái)源的膜蛋白32、以下關(guān)于PCR技術(shù)的描述，正確的是哪些？A.TaqDNA聚合酶最適作用溫度約為72℃B.引物長(zhǎng)度通常為15–30個(gè)堿基C.變性步驟一般在55℃左右進(jìn)行D.延伸時(shí)間取決于模板長(zhǎng)度33、在蛋白質(zhì)純化過(guò)程中，常用的層析技術(shù)包括哪些？A.凝膠過(guò)濾層析B.離子交換層析C.親和層析D.聚丙烯酰胺凝膠電泳34、關(guān)于單克隆抗體的制備，以下說(shuō)法正確的是哪些？A.由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生B.具有高度特異性C.通過(guò)雜交瘤技術(shù)獲得D.可識(shí)別多個(gè)抗原表位35、微生物培養(yǎng)中，影響發(fā)酵過(guò)程的主要因素包括哪些？A.溫度B.pH值C.溶解氧濃度D.培養(yǎng)基透明度36、在蛋白質(zhì)純化過(guò)程中，以下哪些層析技術(shù)是基于分子表面電荷差異進(jìn)行分離的？A.離子交換層析B.凝膠過(guò)濾層析C.疏水相互作用層析D.親和層析E.反相層析37、以下關(guān)于PCR技術(shù)的描述，哪些是正確的？A.需要耐熱的DNA聚合酶B.引物為雙鏈DNA片段C.變性步驟通常在94–98℃進(jìn)行D.可用于基因克隆和突變檢測(cè)E.擴(kuò)增產(chǎn)物量呈線性增長(zhǎng)38、下列哪些因素會(huì)影響酶促反應(yīng)速率？A.底物濃度B.酶濃度C.pH值D.抑制劑存在E.反應(yīng)容器材質(zhì)39、在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，以下哪些操作有助于防止微生物污染？A.使用超凈工作臺(tái)進(jìn)行操作B.添加抗生素至培養(yǎng)基C.定期在培養(yǎng)基中加入血清D.對(duì)培養(yǎng)器具進(jìn)行高壓滅菌E.頻繁打開(kāi)培養(yǎng)瓶觀察細(xì)胞狀態(tài)40、下列關(guān)于單克隆抗體的制備過(guò)程，哪些步驟是必需的？A.免疫動(dòng)物以獲得B淋巴細(xì)胞B.將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合C.在HAT培養(yǎng)基中篩選雜交瘤細(xì)胞D.進(jìn)行有限稀釋克隆化E.使用PCR鑒定抗體基因序列41、在基因工程中，常用的載體應(yīng)具備的基本特征包括哪些？A.具有多個(gè)限制性?xún)?nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)B.能夠在宿主細(xì)胞中自主復(fù)制C.攜帶易于篩選的標(biāo)記基因D.具有較高的分子量以增強(qiáng)穩(wěn)定性42、下列關(guān)于單克隆抗體的制備過(guò)程的描述，正確的是？A.使用B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合B.雜交瘤細(xì)胞具有無(wú)限增殖和分泌特異性抗體的能力C.篩選過(guò)程中常用HAT培養(yǎng)基選擇融合成功的細(xì)胞D.單克隆抗體可由普通血清直接提取獲得43、在蛋白質(zhì)電泳中，SDS的主要作用和特點(diǎn)包括？A.依據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)進(jìn)行分離B.使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷并按分子量大小分離C.加入SDS破壞蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)D.可用于測(cè)定蛋白質(zhì)純度和分子量44、下列哪些因素會(huì)影響PCR擴(kuò)增的特異性和效率？A.引物設(shè)計(jì)的特異性與長(zhǎng)度B.退火溫度的設(shè)置C.模板DNA的純度和濃度D.TaqDNA聚合酶的來(lái)源45、在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，防止微生物污染的措施包括？A.使用超凈工作臺(tái)進(jìn)行無(wú)菌操作B.培養(yǎng)基中添加抗生素C.定期對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行清潔和消毒D.提高培養(yǎng)液中血清濃度三、判斷題判斷下列說(shuō)法是否正確（共10題）46、在蛋白質(zhì)電泳過(guò)程中，分子量越大的蛋白質(zhì)在凝膠中遷移速度越快。A.正確B.錯(cuò)誤47、PCR反應(yīng)中，退火溫度過(guò)高可能導(dǎo)致引物無(wú)法與模板DNA結(jié)合，從而降低擴(kuò)增效率。A.正確B.錯(cuò)誤48、革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁含有較厚的肽聚糖層和外膜結(jié)構(gòu)。A.正確B.錯(cuò)誤49、酶促反應(yīng)的最適pH值是酶的固有特性，不會(huì)因底物濃度變化而改變。A.正確B.錯(cuò)誤50、在微生物培養(yǎng)中，高壓蒸汽滅菌法適用于所有熱敏感性物質(zhì)的滅菌處理。A.正確B.錯(cuò)誤51、在PCR反應(yīng)中，退火溫度過(guò)高可能導(dǎo)致引物無(wú)法與模板DNA結(jié)合，從而影響擴(kuò)增效率。A.正確B.錯(cuò)誤52、單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，具有高度特異性和均一性。A.正確B.錯(cuò)誤53、在蛋白質(zhì)電泳中，SDS主要根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)進(jìn)行分離。A.正確B.錯(cuò)誤54、限制性?xún)?nèi)切酶能夠識(shí)別雙鏈DNA中的特定序列，并在識(shí)別位點(diǎn)內(nèi)或附近進(jìn)行切割。A.正確B.錯(cuò)誤55、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，抗生素的常規(guī)添加可有效防止所有類(lèi)型的污染。A.正確B.錯(cuò)誤

參考答案及解析1.【參考答案】B【解析】SDS（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）通過(guò)SDS使蛋白質(zhì)變性并均勻帶上負(fù)電荷，消除電荷差異，使遷移率僅與分子量相關(guān)。蛋白質(zhì)在凝膠中按分子大小分離，小分子遷移快，大分子遷移慢，因此可用于測(cè)定蛋白質(zhì)分子量。該方法廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)純度和分子量分析。2.【參考答案】C【解析】PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）依賴(lài)耐熱的DNA聚合酶在高溫下合成新DNA鏈。TaqDNA聚合酶來(lái)源于嗜熱菌，能在PCR變性高溫（約95℃）下保持活性，是PCR最常用的酶。其他酶如DNA連接酶用于連接DNA片段，限制酶用于切割DNA，逆轉(zhuǎn)錄酶用于RNA反轉(zhuǎn)錄，均不適用于常規(guī)PCR擴(kuò)增。3.【參考答案】A【解析】青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成，鏈霉素抑制蛋白質(zhì)合成，兩者聯(lián)合使用可有效抑制革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌，是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的雙抗組合。其他抗生素雖具抗菌活性，但因細(xì)胞毒性或譜系限制，較少用于常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)。無(wú)菌操作仍是防止污染的核心，抗生素僅為輔助手段。4.【參考答案】B【解析】ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）通常使用聚苯乙烯微孔板作為固相載體，因其表面可非特異性吸附蛋白質(zhì)（如抗原或抗體），結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，適合高通量檢測(cè)。硝酸纖維素膜多用于Westernblot，瓊脂糖用于電泳，玻璃載片用于免疫熒光，均不適用于標(biāo)準(zhǔn)ELISA操作流程。5.【參考答案】C【解析】紫外分光光度法通過(guò)測(cè)定DNA在260nm處的吸光度，利用換算公式（1OD260≈50μg/mL雙鏈DNA）快速計(jì)算濃度。Lowry、BCA和考馬斯亮藍(lán)法用于蛋白質(zhì)定量，不適用于DNA。該方法簡(jiǎn)便快捷，但需注意RNA或蛋白質(zhì)污染可能干擾結(jié)果，需結(jié)合A260/A280比值評(píng)估純度。6.【參考答案】C【解析】DNA連接酶在重組DNA技術(shù)中起關(guān)鍵作用，能催化兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，從而實(shí)現(xiàn)DNA的連接。DNA聚合酶主要用于DNA復(fù)制過(guò)程中合成新鏈；限制性?xún)?nèi)切酶用于切割特定序列的DNA，產(chǎn)生黏性末端或平末端；RNA聚合酶參與轉(zhuǎn)錄過(guò)程，合成RNA。因此，正確連接DNA片段的酶是DNA連接酶。7.【參考答案】C【解析】核糖體是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成的直接場(chǎng)所，存在于原核和真核細(xì)胞中，可游離于細(xì)胞質(zhì)或附著于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上。高爾基體負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)的加工、分揀和分泌；線粒體是細(xì)胞能量代謝中心，主要進(jìn)行有氧呼吸；溶酶體含有水解酶，參與細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)降解。因此，蛋白質(zhì)合成的起始與延伸均在核糖體上完成。8.【參考答案】B【解析】ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）常使用堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶作為標(biāo)記酶，用于與抗體結(jié)合后催化底物顯色。堿性磷酸酶在特定pH下催化底物產(chǎn)生顏色變化，便于定量檢測(cè)抗原或抗體。過(guò)氧化氫酶、淀粉酶和脂肪酶不常用于免疫檢測(cè)標(biāo)記，因其缺乏特異性或信號(hào)放大能力弱。因此，堿性磷酸酶是常用且有效的標(biāo)記酶之一。9.【參考答案】C【解析】沙保弱培養(yǎng)基（SabouraudAgar）是一種選擇性培養(yǎng)基，含有較低pH（約5.6）和較高葡萄糖濃度，有利于真菌生長(zhǎng)而抑制多數(shù)細(xì)菌。LB培養(yǎng)基用于細(xì)菌培養(yǎng)；SS培養(yǎng)基用于腸道致病菌分離；血瓊脂培養(yǎng)基用于需氧和厭氧菌的培養(yǎng)。因此，分離真菌首選沙保弱培養(yǎng)基。10.【參考答案】B【解析】PCR退火溫度由引物的堿基序列決定，尤其與GC含量和長(zhǎng)度密切相關(guān)。GC堿基對(duì)形成三個(gè)氫鍵，比AT更穩(wěn)定，因此GC含量越高，退火溫度越高。通常退火溫度設(shè)定為引物Tm值減去5℃左右。模板長(zhǎng)度、Taq酶活性和循環(huán)次數(shù)影響擴(kuò)增效率，但不決定退火溫度設(shè)定。合理設(shè)計(jì)引物并計(jì)算Tm值是確保PCR特異性的關(guān)鍵。11.【參考答案】D【解析】質(zhì)粒是廣泛存在于原核和部分真核細(xì)胞（如酵母）中的小型雙鏈環(huán)狀DNA分子，可在宿主細(xì)胞內(nèi)自主復(fù)制。常見(jiàn)的克隆質(zhì)粒攜帶抗生素抗性基因，便于后續(xù)篩選陽(yáng)性克隆。雖然質(zhì)粒在大腸桿菌等原核系統(tǒng)中應(yīng)用廣泛，但經(jīng)過(guò)改造的穿梭質(zhì)粒可在原核和真核細(xì)胞中復(fù)制與表達(dá)，因此D項(xiàng)“只能在原核細(xì)胞中存在和表達(dá)”說(shuō)法錯(cuò)誤，故選D。12.【參考答案】C【解析】SDS（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）通過(guò)SDS使蛋白質(zhì)變性并均勻帶上負(fù)電荷，消除電荷差異對(duì)遷移率的影響，此時(shí)蛋白質(zhì)的遷移速率主要取決于其分子大小。因此該方法可用于估算蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量。等電點(diǎn)測(cè)定通常使用等電聚焦電泳，空間構(gòu)象分析則需非變性電泳或圓二色譜等技術(shù)，故正確答案為C。13.【參考答案】C【解析】實(shí)時(shí)熒光定量PCR依賴(lài)于在高溫下仍保持活性的DNA聚合酶，如Taq酶，以完成反復(fù)的變性、退火和延伸循環(huán)。該酶具備熱穩(wěn)定性，是PCR擴(kuò)增的核心組分。逆轉(zhuǎn)錄酶用于將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，通常在RT-qPCR的第一步使用；DNA連接酶用于連接DNA片段；限制性?xún)?nèi)切酶用于DNA切割，均不參與PCR擴(kuò)增過(guò)程。因此正確答案為C。14.【參考答案】C【解析】單克隆抗體制備采用雜交瘤技術(shù)，其核心是將能產(chǎn)生特異性抗體的B細(xì)胞（通常來(lái)自免疫小鼠脾臟）與具有無(wú)限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合，形成雜交瘤細(xì)胞。這種細(xì)胞既可持續(xù)增殖，又能分泌單一抗體。T細(xì)胞不分泌抗體，巨噬細(xì)胞和脾細(xì)胞融合無(wú)實(shí)際意義。因此，正確答案為C。15.【參考答案】B【解析】ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）是一種高靈敏度的免疫檢測(cè)技術(shù)，可用于檢測(cè)抗原或抗體。實(shí)驗(yàn)中常用辣根過(guò)氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記抗體或抗原，通過(guò)底物顯色反應(yīng)進(jìn)行定量分析，無(wú)需熒光顯微鏡。ELISA廣泛應(yīng)用于血清、血漿等生物樣本檢測(cè)，具有高通量和操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。因此，只有B項(xiàng)描述準(zhǔn)確，答案為B。16.【參考答案】C【解析】SDS（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）通過(guò)SDS使蛋白質(zhì)變性并均勻帶上負(fù)電荷，消除電荷差異的影響，此時(shí)蛋白質(zhì)在凝膠中的遷移速率主要取決于其分子量大小，分子越小遷移越快。因此，該技術(shù)依據(jù)分子大小進(jìn)行分離，C正確。等電點(diǎn)和電荷密度在等電聚焦或天然電泳中起主導(dǎo)作用，空間構(gòu)象在變性條件下被破壞，不參與分離。17.【參考答案】C【解析】PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）依賴(lài)耐高溫的DNA聚合酶，在高溫下合成新DNA鏈。TaqDNA聚合酶來(lái)源于嗜熱菌，能耐受PCR變性步驟的高溫（約95℃），在退火和延伸階段催化dNTP聚合，是PCR的核心酶。DNA連接酶用于連接DNA片段，逆轉(zhuǎn)錄酶用于RNA反轉(zhuǎn)錄，限制酶用于DNA切割，均不參與常規(guī)PCR擴(kuò)增過(guò)程。18.【參考答案】C【解析】高壓蒸汽滅菌利用高溫高壓飽和蒸汽殺滅所有微生物，包括芽孢。標(biāo)準(zhǔn)條件為121℃、103.4kPa（15psi）下維持15-20分鐘，可有效滅菌。60℃為巴氏消毒溫度，不能徹底滅菌；100℃為常壓沸水，無(wú)法殺滅芽孢；160℃干熱滅菌用于耐高溫但不耐濕的物品，如玻璃器皿，不適用于常規(guī)培養(yǎng)基滅菌。19.【參考答案】B【解析】WesternBlot（蛋白質(zhì)免疫印跡）結(jié)合了SDS的分離能力和抗原-抗體特異性結(jié)合的檢測(cè)原理，可用于檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的存在。其流程包括蛋白分離、轉(zhuǎn)膜、封閉、一抗結(jié)合、二抗標(biāo)記及顯色，特異性強(qiáng)。PCR用于核酸擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠用于核酸分離，質(zhì)譜用于分子量測(cè)定和結(jié)構(gòu)分析，均不直接檢測(cè)抗原抗體反應(yīng)。20.【參考答案】A【解析】青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成，鏈霉素抑制蛋白質(zhì)合成，兩者聯(lián)合使用可廣譜抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和部分革蘭氏陰性菌，是細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的抗生素組合。其他選項(xiàng)中抗生素雖具抗菌活性，但因毒性大、干擾細(xì)胞代謝或易產(chǎn)生耐藥性，較少用于常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)。無(wú)菌操作仍是防污染的核心，抗生素為輔助手段。21.【參考答案】C【解析】SDS（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）通過(guò)SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合，使蛋白質(zhì)帶上均勻的負(fù)電荷并變性為線性結(jié)構(gòu)，從而消除電荷和形狀差異，僅依據(jù)分子質(zhì)量大小進(jìn)行分離。分子量較小的蛋白質(zhì)遷移較快，反之則較慢，因此分離基礎(chǔ)是分子質(zhì)量。該技術(shù)廣泛用于蛋白質(zhì)純度鑒定和分子量測(cè)定。22.【參考答案】C【解析】PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）需經(jīng)歷高溫變性步驟，因此必須使用耐熱的DNA聚合酶。TaqDNA聚合酶來(lái)源于嗜熱菌Thermusaquaticus，可在95℃以上保持活性，適用于反復(fù)加熱冷卻的循環(huán)過(guò)程。其他酶如DNA連接酶用于連接DNA片段，限制酶用于切割，逆轉(zhuǎn)錄酶用于RNA反轉(zhuǎn)錄，均不適用于常規(guī)PCR擴(kuò)增。23.【參考答案】A【解析】青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成，鏈霉素抑制蛋白質(zhì)合成，二者聯(lián)合使用可有效抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌，是細(xì)胞培養(yǎng)中最常見(jiàn)的抗生素組合。其他抗生素雖具抗菌活性，但因細(xì)胞毒性或譜系局限，較少用于常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)。無(wú)菌操作仍是核心，抗生素僅作為輔助手段。24.【參考答案】C【解析】雙抗體夾心法適用于檢測(cè)大分子抗原，先用包被抗體固定抗原，再用酶標(biāo)檢測(cè)抗體識(shí)別，形成“抗體-抗原-抗體”復(fù)合物，特異性強(qiáng)、靈敏度高。間接法用于檢測(cè)抗體，直接法靈敏度低，競(jìng)爭(zhēng)法適用于小分子抗原。因此，檢測(cè)未知抗原首選雙抗體夾心法，廣泛應(yīng)用于臨床和科研。25.【參考答案】D【解析】酶促反應(yīng)速率受多種因素影響，包括底物濃度（符合米氏方程）、酶濃度（正比關(guān)系）、pH值（影響酶活性中心構(gòu)象）、溫度和抑制劑等。光照強(qiáng)度主要影響光合作用相關(guān)酶，對(duì)大多數(shù)非光依賴(lài)性酶無(wú)直接影響，故不屬于普遍影響因素。在常規(guī)生化反應(yīng)中，光照不作為關(guān)鍵調(diào)控參數(shù)。26.【參考答案】B【解析】SDS（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）是一種常用的蛋白質(zhì)分離技術(shù)。SDS是一種陰離子去污劑，能破壞蛋白質(zhì)的非共價(jià)結(jié)構(gòu)并使其變性，同時(shí)與蛋白質(zhì)結(jié)合賦予其大量負(fù)電荷，使電荷差異對(duì)遷移率影響最小化。此時(shí)，蛋白質(zhì)在凝膠中的遷移速率主要取決于其分子量大小，分子越小遷移越快。因此，該方法依據(jù)分子大小實(shí)現(xiàn)高效分離，廣泛用于蛋白質(zhì)純度鑒定和分子量測(cè)定。27.【參考答案】C【解析】PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是一種體外擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)，其核心酶是TaqDNA聚合酶。該酶來(lái)源于嗜熱細(xì)菌Thermusaquaticus，具有耐高溫特性，能在PCR循環(huán)中的高溫變性步驟后仍保持活性。它以單鏈DNA為模板，在引物引導(dǎo)下合成新的互補(bǔ)鏈，實(shí)現(xiàn)DNA的指數(shù)級(jí)擴(kuò)增。其他酶如DNA連接酶用于連接DNA片段，限制酶用于切割DNA，逆轉(zhuǎn)錄酶用于RNA反轉(zhuǎn)錄，均不直接參與常規(guī)PCR擴(kuò)增。28.【參考答案】A【解析】在哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中，為防止細(xì)菌污染，常在培養(yǎng)基中添加青霉素和鏈霉素雙抗溶液。青霉素作用于細(xì)菌細(xì)胞壁合成，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌有效；鏈霉素抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，主要針對(duì)革蘭陰性菌。兩者聯(lián)用可廣譜抑制常見(jiàn)污染菌，且在常規(guī)濃度下對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞毒性較小。其他抗生素雖也有抗菌作用，但因細(xì)胞毒性或干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果較少用于常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)。無(wú)菌操作仍是防控污染的根本措施。29.【參考答案】C【解析】單克隆抗體是由單一雜交瘤細(xì)胞克隆產(chǎn)生的抗體，來(lái)源于一個(gè)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成的雜交瘤。因其源自單一克隆，故具有高度特異性（僅識(shí)別抗原單一表位）和結(jié)構(gòu)均一性，是免疫檢測(cè)、靶向治療的重要工具。多克隆抗體才是由多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生，識(shí)別多個(gè)表位。單克隆抗體制備需通過(guò)抗原免疫動(dòng)物、細(xì)胞融合、篩選克隆等步驟，并非直接由多肽免疫獲得，但多肽可作為抗原使用。30.【參考答案】D【解析】ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）中，HRP是最常用的標(biāo)記酶之一，其催化底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，便于檢測(cè)。TMB（四甲基聯(lián)苯胺）是HRP的常用顯色底物，反應(yīng)后呈藍(lán)色，加入終止液變?yōu)辄S色，可在450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度。該反應(yīng)靈敏、穩(wěn)定，適用于常規(guī)ELISA檢測(cè)。吖啶酯和AMPPD多用于化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，魯米諾也用于發(fā)光體系，但非ELISA比色法常規(guī)選擇。TMB因其安全性和顯色效果成為主流底物。31.【參考答案】A、C【解析】大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)具有表達(dá)效率高、培養(yǎng)成本低、遺傳操作成熟等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于重組蛋白的快速生產(chǎn)。但其缺乏真核細(xì)胞的翻譯后修飾能力（如糖基化），且對(duì)復(fù)雜結(jié)構(gòu)蛋白（如需正確折疊的膜蛋白）表達(dá)效果較差，易形成包涵體。因此B、D錯(cuò)誤。A、C為該系統(tǒng)的核心優(yōu)勢(shì)。32.【參考答案】A、B、D【解析】PCR變性通常在94–95℃進(jìn)行，使DNA雙鏈解離；退火溫度約55–65℃，與引物Tm值相關(guān)；延伸在72℃由Taq酶催化。引物長(zhǎng)度15–30bp可保證特異性與穩(wěn)定性。延伸時(shí)間按1kb/min估算。故C錯(cuò)誤，其余正確。33.【參考答案】A、B、C【解析】凝膠過(guò)濾依據(jù)分子大小分離，離子交換利用電荷差異，親和層析基于特異性結(jié)合（如His標(biāo)簽與鎳柱），均為層析技術(shù)。聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）是檢測(cè)或分離手段，不屬于層析范疇，故D不選。34.【參考答案】A、B、C【解析】單克隆抗體由單一雜交瘤細(xì)胞克隆分泌，識(shí)別同一抗原表位，特異性強(qiáng)。雜交瘤技術(shù)融合B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)無(wú)限增殖與抗體分泌。多克隆抗體才識(shí)別多個(gè)表位，故D錯(cuò)誤。35.【參考答案】A、B、C【解析】溫度影響酶活性，pH影響細(xì)胞膜穩(wěn)定性與代謝途徑，溶解氧對(duì)好氧菌至關(guān)重要。三者均為關(guān)鍵控制參數(shù)。培養(yǎng)基透明度非直接控制因素，不影響代謝本質(zhì)，僅可能干擾光照相關(guān)培養(yǎng)，故D不選。36.【參考答案】A【解析】離子交換層析利用蛋白質(zhì)表面所帶電荷不同，在帶相反電荷的