中華人民共和國司法部司法鑒定管理局發(fā)布SF/ZJD0105005—2015前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4相關(guān)參數(shù)計算方法 5檢驗程序 46鑒定意見 57鑒定文書 58特別說明 5SF/ZJD0105005—2015I本技術(shù)規(guī)范按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本技術(shù)規(guī)范由司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所和中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院共同提出。本技術(shù)規(guī)范由司法部司法鑒定管理局歸口。本技術(shù)規(guī)范起草單位:司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所、中山大學(xué)、四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院。本技術(shù)規(guī)范主要起草人：李成濤、呂德堅、侯一平、孫宏鈺、李莉。本技術(shù)規(guī)范為首次發(fā)布。SF/ZJD0105005—2015本技術(shù)規(guī)范運用法醫(yī)物證學(xué)、遺傳學(xué)和統(tǒng)計學(xué)等學(xué)科的理論和技術(shù)，結(jié)合法醫(yī)物證鑒定的實踐經(jīng)驗而制訂，為生物學(xué)祖孫關(guān)系鑒定提供科學(xué)依據(jù)和統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。SF/ZJD0105005—20151生物學(xué)祖孫關(guān)系鑒定規(guī)范本技術(shù)規(guī)范規(guī)定了法庭科學(xué)DNA實驗室進(jìn)行生物學(xué)祖孫關(guān)系鑒定的內(nèi)容及結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)。本技術(shù)規(guī)范適用于在生母參與情形下鑒定祖父母與孩子的祖孫關(guān)系，其他情形的祖孫關(guān)系鑒定，本技術(shù)規(guī)范不適用。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本技術(shù)規(guī)范的應(yīng)用是不可少的。凡是標(biāo)注日期的引用文件，僅標(biāo)注日期的版本適用于本技術(shù)規(guī)范。凡是不標(biāo)注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本技術(shù)規(guī)范。GA/T382－2014法庭科學(xué)DNA實驗室規(guī)范GA/T383－2014法庭科學(xué)DNA實驗室檢驗規(guī)范GA/T965法庭科學(xué)DNA親子鑒定規(guī)范SF/ZJD0105001親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范司發(fā)通[2007]71號司法鑒定文書規(guī)范3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本技術(shù)規(guī)范。3.1祖孫關(guān)系鑒定KinshipAnalysisofGrandparent(s)andGrandchildren祖孫關(guān)系鑒定是通過對人類遺傳標(biāo)記的檢測，根據(jù)遺傳規(guī)律分析，對有爭議的祖父母與被檢孩子之間是否存在生物學(xué)祖孫關(guān)系進(jìn)行鑒定。依據(jù)參照親緣個體的多少，祖孫關(guān)系鑒定至少包括以下幾種情形：生母、祖父、祖母同時參與下被檢孩子與祖父、祖母間的祖孫關(guān)系鑒定；生母、祖父（或祖母）參與情形下被檢孩子與祖父（或祖母）間的祖孫關(guān)系鑒定；祖父、祖母同時參與情形下被檢孩子與祖父、祖母間的祖孫關(guān)系鑒定；祖父（或祖母）與被檢孩子間的祖孫關(guān)系鑒定。本規(guī)范中的祖孫關(guān)系鑒定特指生母、祖父、祖母同時參與鑒定下被檢孩子與祖父、祖母間的祖孫關(guān)系鑒定，該對爭議祖父母，要么雙方都與孩子存在祖孫關(guān)系，要么都不是孩子的祖父或者祖母。3.2平均非祖父母排除率MeanPowerofRandomGrandparentsExcluded，RGE是指通過檢測一個或多個遺傳標(biāo)記能將群體中隨機(jī)一對夫婦排除為孩子祖父母的能力。3.3祖孫關(guān)系指數(shù)Grandparentindex,GI祖孫關(guān)系指數(shù)為親權(quán)指數(shù)的一種，是生物學(xué)祖孫關(guān)系鑒定中判斷遺傳證據(jù)強(qiáng)度的指標(biāo)。是指爭議祖父母與孫子(女)之間存在祖孫關(guān)系時其遺傳表型出現(xiàn)的機(jī)率與爭議祖父母與孫子(女)為無關(guān)個體時其遺傳表型出現(xiàn)的機(jī)率之比值。4相關(guān)參數(shù)計算方法SF/ZJD0105005—201524.1共顯性遺傳標(biāo)記平均非祖父母排除率（生母參與情形下）的計算式中：RGE——p1、p2、…、pn——為有n個等位基因共顯性遺傳標(biāo)記系統(tǒng)的等位基因頻率。4.2祖孫關(guān)系指數(shù)的計算在計算某一STR基因座上的祖孫關(guān)系指數(shù)時，首先應(yīng)依據(jù)遺傳學(xué)原理，參照被檢孩子及其生母的基因型，推斷出被檢孩子在該基因座上的生父基因。當(dāng)被檢孩子與生母基因型相同（此時無法確定孩子生父基因）時，則被檢孩子的兩種等位基因均有生父基因的可能。當(dāng)被檢孩子與生母在該基因座不吻合遺傳規(guī)律、考慮存在生母等位基因突變的情形時，首先應(yīng)考慮生母最可能的突變基因，進(jìn)而確定生父基因，如生母基因型為（7/8），被檢孩子為（9/10），則應(yīng)確定等位基因10為生父基因，若生母基因型為（8/8）或（7/8），被檢孩子為（9/9），則應(yīng)按生父基因為等位基因9處理。若生母基因型為（9/9）或（6/9），被檢孩子為（8/10），則應(yīng)按生父基因為等位基因不能確定處理（即8和10均有可能為生父基因）。通常不考慮被檢孩子生母基因與生父基因同時突變的可能。當(dāng)生母與被檢孩子間不吻合遺傳規(guī)律的基因座個數(shù)超過1個時，則建議依據(jù)《SF/ZJD0105001親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》先確認(rèn)生母與被檢孩子間的生物學(xué)母子關(guān)系。在確定生父基因后，建議采用本地區(qū)的等位基因頻率，依據(jù)4.2.1或4.2.2中給出的方法計算出每一個基因座相應(yīng)的祖孫關(guān)系指數(shù)，并按4.3中的方法依據(jù)乘法規(guī)則要求基因座間連鎖平衡計算得到累積祖孫關(guān)系指數(shù)。4.2.1無突變情形下祖孫關(guān)系指數(shù)的計算此處的無突變情形是指被檢孩子的生父基因與被檢祖父、祖母間吻合遺傳規(guī)律，不考慮突變的可能。在無突變情形下，依據(jù)《SF/ZJD0105001親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》3.7中的親權(quán)指數(shù)的通用計算公式，祖孫關(guān)系指數(shù)的計算方法可簡言為：被檢孩子生父等位基因來自于被檢祖父、祖母的概率與生父等位基因的人群等位基因頻率的比值。當(dāng)被檢孩子的兩個等位基因均有生父等位基因可能時，生父等位基因的人群等位基因頻率為這兩個等位基因的人群頻率之和。表1舉例說明了無突變情形下不同基因型組合時祖孫關(guān)系指數(shù)的計算方法。4.2.2突變情形下祖孫關(guān)系指數(shù)的計算此處的突變情形是指被檢孩子的生父基因與被檢祖父、祖母間不吻合遺傳規(guī)律，考慮突變的可能。設(shè)男性STR基因座的平均一步突變率為μ,則女性STR基因座的平均一步突變率為μ/3.5，由于這一平均突變率既包含了步數(shù)增加的突變概率，又包含了步數(shù)減少的突變概率，而對于特定的基因型組合而言，其突變方向只能有一種，因此在進(jìn)行突變情形下的祖孫關(guān)系指數(shù)計算時，男性和女性的突變率分別按0.5μ和μ/7計算。若考慮被檢孩子可能的生父基因與被檢祖父或祖母間存在一步突變的可能，則在4.2.1中所給出的祖孫關(guān)系指數(shù)計算方法中，分母依然為所有生父基因的人群概率（或之和），分子為每一生父基因的突變來源概率與相應(yīng)突變概率之積的總和，其中突變來源概率為相應(yīng)的突變來源數(shù)占祖父母所能提供的等位基因個數(shù)之比。SF/ZJD0105005—20153舉例說明如下：設(shè)生母基因型為12/14，被檢孩子為基因為12/14，祖父基因型為13/13，祖母基因型為13/15。在計算這一特定的基因型組合情形下的祖孫關(guān)系指數(shù)時，由于生父基因不能確定，故分母為等位基因12和等位基因14的人群中概率之和。計算分子時應(yīng)考慮1）當(dāng)生父基因為12時，其來源于祖父的突變來源概率為2/4=0.5，相應(yīng)的突變概率為0.5μ；其來源于祖母的突變來源概率為1/4＝0.25，相應(yīng)的突變概率為μ/72）當(dāng)生父基因為14時，其來源于祖父的突變來源概率為2/4＝0.5，相應(yīng)的突變概率為0.5μ；其來源于祖母的突變來源概率為2/4＝0.5，相應(yīng)的突變概率為μ/7；因此，在這一特定基因型組合情形下，分子為：0.5×0.5μ+0.25×μ/7+0.5×0.5μ+0.5×μ/7＝0.5μ+0.75×μ/7。當(dāng)生父基因不能確定時，若一種生父基因存在突變可能，而另一種生父基因吻合遺傳規(guī)律時，則在分子計算時兩種可能性均應(yīng)納入計算。表2舉例說明了突變情形下部分基因型組合時祖孫關(guān)系指數(shù)的計算方法。表1無突變情形下部分基因型組合時祖孫關(guān)系指數(shù)的計算方法（舉例）P1/pP0.75/pP0.5/pP0.5/pP0.25/p表2突變情形下部分基因組合時祖孫親緣關(guān)系指數(shù)的計算方法（舉例）(0.5+0.5×0.5μ+0.5×μ/7)/(p13+p14)(0.5×0.5μ+0.5×μ/7)/(p13+p1SF/ZJD0105005—20154(0.5×0.5μ+0.5×μ/7)/(p13+p1(0.25×0.5μ+0.25×μ/7)/(p13+p14)(0.25×0.5μ)/(p13+p14)(0.25×μ/7)/(p13+p14)4.3累積祖孫關(guān)系指數(shù)的計算方法式中：CGI——GI1、GIn——5檢驗程序5.1采樣要求采樣要求參照SF/ZJD0105001中的要求。5.2DNA提取和保存檢材的DNA提取和保存見GA/T383-2014和SF/ZJD0105001。5.3DNA定量分析按照中華人民共和國公共安全行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GA/T382-2014和GA/T383-2014的要求進(jìn)行。5.4PCR擴(kuò)增與分型5.4.1基因座5.4.1.1在進(jìn)行生物學(xué)祖孫關(guān)系鑒定時，目前親緣關(guān)系鑒定常用的19個常染色體STR基因座（vWA、TPOX、PentaE、PentaD、D2S1338、D19S433、D12S391、D6S1043）為本規(guī)范推薦檢測的基因座。5.4.1.2鼓勵在上述19個STR基因座基礎(chǔ)上增加更多的、經(jīng)過驗證的、與上述19個STR基因座不存在連鎖和連鎖不平衡的其它常染色體STR基因座，以提高檢測系統(tǒng)效能。5.4.1.3當(dāng)被檢孩子為男性時，可考慮對爭議祖父與孩子補充檢驗Y-STR基因座（如DYS456、DYS389I、DYS390、DYS389II、DYS458、DYS19、DYS385a/b、DYS393、DYS391、DYS439、DYS635、DYS392、YGATAH4、DYS437、DYS438、DYS448等當(dāng)被檢孩子為女性時，可考慮對爭議祖母與孩子補充檢驗DXS7423、DXS8377、DXS8378、DXS9895、DXS9898、DXS10101、DXS10134、DXS10135、DXS100745.4.2PCR擴(kuò)增SF/ZJD0105005—20155建議選用商品化的試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在常染色體STR基因座分型中，至少應(yīng)該包含5.4.1.1中所規(guī)定的19個常用STR基因座的分型結(jié)果。每批檢驗均應(yīng)有陽性對照樣本（已知濃度和基因型的對照品DNA和/或以前檢驗過的、已知基因型的樣本）以及不含人基因組DNA的陰性對照樣本。PCR擴(kuò)增體系與溫度循環(huán)參數(shù)均按試劑盒的操作說明書進(jìn)行。5.4.3PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測與結(jié)果判讀使用遺傳分析儀，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析，使用等位基因分型參照物(Ladder)來對樣本分型，步驟方法按照儀器操作手冊。6鑒定意見6.1鑒定意見是依據(jù)DNA分型結(jié)果，對被檢孩子與祖父母間否存在生物學(xué)祖孫關(guān)系作出的判斷。6.2實驗使用的遺傳標(biāo)記平均非祖父母排除率應(yīng)不小于0.9999。平均非祖父母排除率的計算見4.1。6.3為了避免潛在突變影響，任何情況下都不能僅根據(jù)一個遺傳標(biāo)記不符合遺傳規(guī)律就作出排除意見。6.4任何情況下都不能為了獲得較高的祖孫關(guān)系指數(shù)，將檢測到的不符合遺傳規(guī)律的遺傳標(biāo)記刪除。6.5在滿足6.2~6.4的條件下，累積祖孫關(guān)系指數(shù)大于10000時，支持被檢測夫婦是孩子生物學(xué)祖父母的假設(shè)。6.6在滿足6.2~6.4的條件下，累積祖孫關(guān)系指數(shù)小于0.0001，支持被檢測夫婦不是孩子生物學(xué)祖父母的假設(shè)。6.7在不能滿足6.5或6.6的指標(biāo)時，應(yīng)通過增加檢測的遺傳標(biāo)記來達(dá)到要求。否則，建議無法作出鑒定意見。7鑒定文書生物學(xué)祖孫關(guān)系鑒定文書的格式要求參照《司法鑒定文書規(guī)范》(司發(fā)通[2007]71號)。8特別說明8.1本規(guī)范僅適用于生母、祖父、祖母同時參與情形下，祖父母與被檢孩子間的生物學(xué)祖孫關(guān)系鑒定，這一鑒定的檢驗假設(shè)包括以下兩種相互對立的兩種假設(shè)關(guān)系：爭議的祖父母與被檢孩子為無關(guān)個體；爭議的祖父母與被檢孩子間存在生物學(xué)祖孫關(guān)系。若不能確定生母與被檢孩子間的生物學(xué)母子關(guān)系，則本規(guī)范不適用。8.2對于3.1中定義的其它情形下的生物學(xué)祖孫關(guān)系鑒定，將依據(jù)后續(xù)的研究結(jié)果給出相應(yīng)的實施規(guī)范，這些后續(xù)補充的實施規(guī)范將作為本規(guī)范的附件使用或在新版本的規(guī)范中發(fā)布。8.3依據(jù)當(dāng)前對親子關(guān)系鑒定的研究結(jié)果，常染色體及性染色體STR基因座在減數(shù)分裂過程中的平均突變率(μ)相似，μ≈0.2%。由于STR突變中一步突變占90%以上，二步或更多步的突變所占的比例很少(<10%)，根據(jù)逐步突變模型，可以認(rèn)為STR的平均一步突變率約為0.2%，平均二步突變率約為0.2%0.1，不同步數(shù)的平均突變率見《SF/ZJD0105001司法鑒定技術(shù)規(guī)范—親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》。在祖孫關(guān)系指數(shù)計算過程中，仍建議對祖孫間STR基因座的平均一步突變率以0.2%計算。雖然祖孫間經(jīng)過了兩次減數(shù)分裂，但兩次減數(shù)分裂均突變的可能性很小，不需分別考慮由祖父母到生父、生父到孩子兩次減數(shù)分裂過程中均突變的可能，可根據(jù)祖孫等位基因之間的步數(shù)判別突變的等位基因，步數(shù)最小者才考慮突變。祖母與孫子/女間的平均一步突變率按0.2%的3.5分之一計算。一般也不考慮祖父和祖母同時突變的可能性。SF/ZJD0105005—201568.4對于補充檢驗的Y-STR或X-STR檢測結(jié)果，建議僅對Y或X染色體特殊的遺傳規(guī)律進(jìn)行描述性分析，判斷是否符合同一父系（被檢孩子為男性時）或是否符合祖母與孫女（被檢孩子為女性時）的遺傳規(guī)律。不推薦僅依據(jù)補充檢驗的Y-STR或X-STR基因