第一章基因工程【教材解讀】1.工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生①基因工程的概念：是指狹義的遺傳工程；廣義的遺傳工程泛指把一種生物的（細(xì)胞核、染色體脫氧核糖核酸等）移到中去，并使這種遺傳物質(zhì)所帶的在中表達(dá)。②基因工程的核心是，其變異原理是。③限制性核酸內(nèi)切酶：主要是從細(xì)菌中分離純化出來的；【拓展：限制酶對(duì)細(xì)菌有保護(hù)作用，某些入侵的噬菌體可因而不能在細(xì)菌中繁殖，“限制”由此而得名，限制酶不能切開細(xì)菌自身的，這是因?yàn)榈南汆堰屎桶奏ぜ谆艿奖Ｗo(hù)的緣故】是能夠和DNA分子內(nèi)一小段的酶，因此具有性?！窘馕觯鹤R(shí)別特定的和切點(diǎn)；切割切點(diǎn)處兩個(gè)核苷酸之間的】④如：以下四種限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別的序列分別是GGATCC、、AAGCTT、AGATCT，識(shí)別的切點(diǎn)（又稱切割位點(diǎn)）G和G之間、之間、之間、A和G之間，能在切點(diǎn)上兩個(gè)核苷酸之間切斷DNA，如下圖所示。⑤如果利用不同的處理DNA分子，就能把DNA分子切割成許多，限制酶的切割方式分為兩種方式：如：EcoRⅠ切割位置是交錯(cuò)的，可以形成（虛線框內(nèi)的結(jié)構(gòu)），為與其他核苷酸序列互補(bǔ)連接奠定基礎(chǔ)；而SmaⅠ切割位置是平齊的，形成的是?！咀⒁猓翰煌南拗泼缸R(shí)別不同的序列，但有時(shí)形成的粘性末端可以發(fā)生互補(bǔ)；如下圖：a酶識(shí)別的序列是，切點(diǎn)是之間；而b酶識(shí)別的序列ACGT，切點(diǎn)A的另一側(cè)堿基不固定；兩種限制酶形成的粘性末端的堿基可以互補(bǔ)】⑥D(zhuǎn)NA連接酶：將具有的2個(gè)DNA片段連接在一起（形成鍵），所形成的DNA分子稱為分子。因此，DNA連接酶可以將和連接在一起，如下圖?！咀⒁猓篋NA連接酶能夠封閉DNA雙螺旋骨架上的切口而不能封閉缺口，如下圖所示】⑦載體：質(zhì)粒常作為基因的使用，質(zhì)粒是能夠自主復(fù)制的分子，在細(xì)菌中以獨(dú)立于擬核之外的方式存在，最常用的是的質(zhì)粒，這種質(zhì)粒常含有抗生素抗性基因，例如：四環(huán)素的抗性基因。其他載體有λ噬菌體、動(dòng)物病毒和植物病毒?！咀鳛檩d體具備的條件：①是DNA分子，這樣才能與結(jié)合到一起；②能夠自我復(fù)制；③能進(jìn)入，并在受體細(xì)胞中正常生存；④最好能表達(dá)特殊性狀的基因（即為基因），便于檢測是否轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞】2.基因工程的基本原理：是讓人們感興趣的基因（即）在中穩(wěn)定和高效地；為了實(shí)現(xiàn)這個(gè)目標(biāo)，通常要有多種、、載體和等基因要素。3.基因工程的基本操作步驟①獲得：即獲得我們所需要的基因；獲得目的基因通常有兩種方法：a.目的基因的序列是已知的，可以用目的基因或用（PCR）擴(kuò)增目的基因；b.目的基因的核苷酸序列是未知的，我們就建立一個(gè)包括目的基因在內(nèi)的，從基因文庫中找到我們想要的?！窘庾x：例如某生物具有我們想要的性狀，也就說明該生物體內(nèi)含有控制這個(gè)性狀的基因，但又不確定是哪個(gè)基因，此時(shí)，就把該生物的所有基因收集在一起，建立基因文庫，然后從中篩選出我們想要的基因，即目的基因】②形成（核心步驟）：通常是用的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割和（如質(zhì)粒），就會(huì)在和的兩端形成，然后用將目的基因和連接在一起，形成重組DNA分子。③將重組DNA分子導(dǎo)入：用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑿纬傻霓D(zhuǎn)移到合適的中。常用的受體細(xì)胞有、枯草桿菌、和等。如用質(zhì)粒作載體，宿主細(xì)胞應(yīng)選擇，用處理大腸桿菌，增加大腸桿菌的通透性（稱為細(xì)胞），使含有目的基因的進(jìn)入大腸桿菌宿主細(xì)胞?！就卣梗喝缡荏w細(xì)胞是動(dòng)物細(xì)胞，常用導(dǎo)入受體細(xì)胞；如受體細(xì)胞是植物細(xì)胞，常用導(dǎo)入受體細(xì)胞。如果以病毒為載體，采用病毒侵染動(dòng)植物細(xì)胞的方法】【用CaCl2處理細(xì)菌，會(huì)改變其某些生理狀態(tài)。取CaCl2處理過的農(nóng)桿菌與重組質(zhì)粒在離心管內(nèi)進(jìn)行混合等操作，使重組質(zhì)粒進(jìn)入農(nóng)桿菌，完成實(shí)驗(yàn)。在離心管中加入液體培養(yǎng)基，置于搖床慢速培養(yǎng)一段時(shí)間，其目的是，從而表達(dá)卡那霉素抗性基因，并大量增殖】④篩選含有的受體細(xì)胞：并不是所有細(xì)胞都接納了，因此需要篩選含有的受體細(xì)胞。例如，質(zhì)粒上有如四環(huán)素的抗性基因（用作），所以含有這種的受體細(xì)胞就能夠在有的培養(yǎng)基中生長，而沒有接納的細(xì)胞在這種培養(yǎng)基中生長。這樣就能篩選出含有的受體細(xì)胞。經(jīng)過培養(yǎng)，能和質(zhì)粒一起在宿主細(xì)胞內(nèi)大量擴(kuò)增。⑤目的基因的表達(dá)：目的基因在中表達(dá)，能產(chǎn)生人們需要的，如轉(zhuǎn)入了人胰島素原基因的大腸桿菌，可以合成人，經(jīng)進(jìn)一步的后可獲得具有的胰島素?！咀⒁猓捍竽c桿菌細(xì)胞內(nèi)不存在和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，不能得到具有生物活性的胰島素】第二章克隆技術(shù)1.克?。壕褪侵赶担豢寺〖夹g(shù)：是指從眾多的或中通過無性繁殖和選擇獲得或的操作技術(shù)。2.胚胎細(xì)胞克隆嚴(yán)格意義上的動(dòng)物個(gè)體克??；3.克隆的基本條件：①具有包含物種的細(xì)胞核的活細(xì)胞；②能有效調(diào)控發(fā)育的細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)（如去核卵的細(xì)胞質(zhì)）；③完成胚胎發(fā)育的必要的環(huán)境條件。4.植物的克?、僦参锟寺〖夹g(shù)基礎(chǔ)是；植物克隆技術(shù)的理論基礎(chǔ)是；②植物細(xì)胞全能性體現(xiàn)：植物體的每個(gè)活細(xì)胞，即使是已經(jīng)和的細(xì)胞，都保持了恢復(fù)到的能力，都具有的全能性。需要指出的是，由于不同或同種植物的個(gè)體之間的差異，細(xì)胞的全能性的大不相同?！救苄员容^：受精卵＞早期胚胎細(xì)胞＞生殖細(xì)胞＞體細(xì)胞；植物細(xì)胞＞動(dòng)物細(xì)胞】③植物組織培養(yǎng)：植物組織培養(yǎng)就是在和人工控制的條件下，將的植物器官、組織、細(xì)胞培養(yǎng)在人工配制的上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生、生芽，最終形成?！竟腆w培養(yǎng)基有利于誘導(dǎo)愈傷組織，而液體培養(yǎng)基有利于細(xì)胞和胚狀體增殖】④植物組織培養(yǎng)（愈傷組織培養(yǎng)法）過程：a.配制含有適當(dāng)和的含0.7%—1%瓊脂的培養(yǎng)基，倒在滅菌試管中凝固成；b.從消毒的或葉上切取一些小組織塊；c.將組織塊放在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，獲得（創(chuàng)傷組織）；d.以適當(dāng)配比的和誘導(dǎo)愈傷組織，直到再生出?！罡畹闹仓晗嗨疲趧?chuàng)傷表面形成一種由的活的薄壁細(xì)胞團(tuán)組成的【該過程稱為，即已經(jīng)的植物細(xì)胞，經(jīng)過誘導(dǎo)重新恢復(fù)了，產(chǎn)生的過程】，通過調(diào)節(jié)營養(yǎng)物質(zhì)和生長調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)配比，可以從這種誘導(dǎo)出芽和根的【該過程稱為】，并可由此再生出新的植株。⑤培養(yǎng)基的成分：水、無機(jī)鹽、（如蔗糖或甘露醇）、含N物質(zhì)（如氨基酸、維生素）、（0.7%—1%，起支持作用）、（細(xì)胞分裂素、生長素）。⑥植物細(xì)胞培養(yǎng)（液體懸浮培養(yǎng)法）過程：將含有愈傷組織培養(yǎng)物的試管放在上，通過可以分散成，這種細(xì)胞質(zhì)、而，這是的特征，在適宜的培養(yǎng)基中，這種單細(xì)胞可發(fā)育成，繼續(xù)發(fā)育，可以形成植株?！灸康模菏峭ㄟ^大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)以獲得人類所需的細(xì)胞次級(jí)代謝產(chǎn)物】【解析：處于適當(dāng)?shù)囊后w培養(yǎng)條件的，經(jīng)過培養(yǎng)基中成分的，可發(fā)生類似受精卵經(jīng)過卵裂、、和形態(tài)建成而發(fā)育成的過程，即從單細(xì)胞依次到、球形胚、和胚狀體，最后再生出的植株；有些植物可以在的基礎(chǔ)上直接發(fā)育出】⑦植物原生質(zhì)體的獲得方法：在0.5～0.6mol/L的溶液環(huán)境（較高滲透壓）下用酶和酶混合液處理根尖、葉片、組織或細(xì)胞，將消化除去，獲得球形的（細(xì)胞中有代謝活性的原生質(zhì)部分，包括質(zhì)膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核）。⑧如何實(shí)現(xiàn)器官發(fā)生和形態(tài)建成：主要通過配比進(jìn)行調(diào)控；誘導(dǎo)芽的分化：細(xì)胞分裂素＞生長素；誘導(dǎo)根的分化：生長素（吲哚乙酸）＞細(xì)胞分裂素⑨植物細(xì)胞工程：培養(yǎng)植物細(xì)胞（包括原生質(zhì)體），借助方法，將（DNA）導(dǎo)入受體細(xì)胞（包括原生質(zhì)體受體）中，或通過、等將不同來源的遺傳物質(zhì)重新組合，再通過對(duì)這些或進(jìn)行培養(yǎng)，獲得具有的新植株?！窘馕觯褐匦陆M合的3種方法：基因工程、細(xì)胞融合、顯微注射】⑩長期培養(yǎng)中，培養(yǎng)物的胚胎發(fā)生和器官形成能力下降的可能原因：a.、細(xì)胞核變異或產(chǎn)生等，而且其結(jié)果是的；b.細(xì)胞或組織中激素，或細(xì)胞外源生長物質(zhì)的發(fā)生改變；c.隨著時(shí)間推移，由于其他各種原因產(chǎn)生了缺乏的細(xì)胞系。⑾應(yīng)用：在培養(yǎng)基中加入不同濃度的NaCl或病原體的毒蛋白，誘發(fā)和篩選了或突變體；在培養(yǎng)基中加入不同濃度的賴氨酸類似物，能夠篩選出的突變體。5.細(xì)胞克?、賱?dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是和；②動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：將動(dòng)物體內(nèi)的一部分取出，經(jīng)過消化或消化，使其分散成；然后，在的培養(yǎng)條件下，使這些細(xì)胞得以生存，并保持生長、（繁殖）乃至和有規(guī)律的衰老、死亡等生命活動(dòng)?！窘佑|抑制：是將\t"/item/%E6%8E%A5%E8%A7%A6%E6%8A%91%E5%88%B6/_blank"多細(xì)胞生物的細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)時(shí)，分散貼壁生長的細(xì)胞一旦相互匯合接觸，即停止移動(dòng)和生長的現(xiàn)象。細(xì)胞增殖到一定程度，也就是互相挨在一起的時(shí)候，\t"/item/%E6%8E%A5%E8%A7%A6%E6%8A%91%E5%88%B6/_blank"糖蛋白識(shí)別了這種信息，就會(huì)使細(xì)胞停止繁殖】【貼壁生長：在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)貼附于培養(yǎng)（瓶）器皿壁上，細(xì)胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展，然后開始\t"/item/%E8%B4%B4%E5%A3%81%E5%9F%B9%E5%85%BB/_blank"有絲分裂，并很快進(jìn)入\t"/item/%E8%B4%B4%E5%A3%81%E5%9F%B9%E5%85%BB/_blank"對(duì)數(shù)生長期，一般數(shù)天后就鋪滿培養(yǎng)表面，并形成致密的細(xì)胞單層】③動(dòng)物組織培養(yǎng)：動(dòng)物組織在及人工條件下維持特性。動(dòng)物組織培養(yǎng)過程中可以伴隨著。④綜合細(xì)胞培養(yǎng)和組織培養(yǎng)的含義和規(guī)律，兩者在一定程度上可看作是同義語，因此可將它們統(tǒng)稱為（組培），用以代表各種生物體結(jié)構(gòu)成分的。⑤原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：從機(jī)體取出組織或細(xì)胞后立即進(jìn)行培養(yǎng)（即），當(dāng)細(xì)胞從移植物中生長遷移出來，形成并以后，接著進(jìn)行（即將原代培養(yǎng)細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移或移植到另一個(gè)培養(yǎng)瓶）?！旧L暈：是指組織塊接種進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)5～6天后，在顯微鏡下觀察，可見到有細(xì)胞從組織塊周邊生長，呈放射狀排列】⑥懸浮培養(yǎng)法：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）→剪碎→用酶或酶處理分散成→制成→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶（瓶）中進(jìn)行→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用或酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)。⑦細(xì)胞系、細(xì)胞株a.細(xì)胞系：指可的細(xì)胞。如果不進(jìn)行分離培養(yǎng)，到一定時(shí)期培養(yǎng)的細(xì)胞就會(huì)因和引起營養(yǎng)枯竭，正常生長，這就是必須傳代的原因。原代培養(yǎng)物在首次傳代時(shí)就成為，能連續(xù)培養(yǎng)下去的細(xì)胞系稱為，不能連續(xù)培養(yǎng)下去的細(xì)胞系稱為。二倍體細(xì)胞通常為，連續(xù)細(xì)胞系被認(rèn)為是發(fā)生了的細(xì)胞系，大多數(shù)具有核型。有的連續(xù)細(xì)胞系是，具有；有的連續(xù)細(xì)胞系獲得了，但保留現(xiàn)象，不致癌?！井愺w致瘤性解析：惡性腫瘤之所以很難完全清除易復(fù)發(fā)，一個(gè)重要原因是腫瘤細(xì)胞來源于自身細(xì)胞，不能被自身免疫系統(tǒng)識(shí)別清除，而異體醫(yī)源性種植（如器官移植）來源于異體細(xì)胞，很難不被自身免疫系統(tǒng)識(shí)別清除，所以來自異體的腫瘤細(xì)胞一般不會(huì)導(dǎo)致腫瘤，但有少數(shù)腫瘤細(xì)胞移植后可使異體導(dǎo)致腫瘤，即異體致瘤性】?！井惐扼w核型解析：某種生物完整的一套染色體稱為該種生物的一個(gè)染色體組；具有不成套染色體組的細(xì)胞或個(gè)體稱為異倍體，異倍體具有的核型即為異倍體核型，類似非整體變異】b.細(xì)胞株：通過一定的方法，從或細(xì)胞系中獲得的具有的細(xì)胞系。細(xì)胞株一般具有恒定的、同功酶類型、和生化特性等?？蓚鞔螖?shù)有限的細(xì)胞株稱為，可連續(xù)多次傳代的細(xì)胞株稱為。⑧克隆培養(yǎng)法：把從群體中分離出來培養(yǎng)，使之繁衍成一個(gè)新的的技術(shù)，叫克隆培養(yǎng)法或。未經(jīng)克隆化的細(xì)胞系具有【遺傳物質(zhì)及性狀的差異】，經(jīng)過克隆以后的細(xì)胞的后裔細(xì)胞群，來源于一個(gè)共同的，所以稱為（克隆）。細(xì)胞克隆的均一，相似，便于研究。a.細(xì)胞克隆的最基本要求：保證所建成的克隆來源于。b.適合于克隆的細(xì)胞：對(duì)培養(yǎng)環(huán)境有和具有的細(xì)胞；和克隆起來有實(shí)際困難；相反，、轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或系等比較容易克隆，單細(xì)胞與群體細(xì)胞相比，更容易克隆。c.提高細(xì)胞克隆形成率的措施：選擇適宜的培養(yǎng)基、添加（）、以（如經(jīng)射線照射本身失去增殖能力的小鼠成纖維細(xì)胞）、（胰島素等）刺激、使用培養(yǎng)箱等。【成纖維細(xì)胞，也稱為纖維母細(xì)胞，是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，這種細(xì)胞具有的功能，如合成和分泌膠原纖維、\t"/item/%E6%88%90%E7%BA%A4%E7%BB%B4%E7%BB%86%E8%83%9E/_blank"彈性纖維、網(wǎng)狀纖維及有機(jī)基質(zhì)，對(duì)其他細(xì)胞起了的作用】d.細(xì)胞克隆的主要用途之一：從普通細(xì)胞系中分離出缺乏的細(xì)胞系。例如：研究缺少某種的細(xì)胞，根據(jù)該細(xì)胞所缺失的功能，即可發(fā)現(xiàn)正常細(xì)胞中的功能。6.細(xì)胞融合與細(xì)胞雜交①.細(xì)胞工程是細(xì)胞水平上的生物工程，其主要的技術(shù)手段是和。②.細(xì)胞融合：是指兩個(gè)或多個(gè)不同的細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的現(xiàn)象。植物細(xì)胞的可以相互融合，動(dòng)物細(xì)胞在一定的物質(zhì)（如滅活的、等）介導(dǎo)下可以相互融合。技術(shù)是在低壓交流電場中擊穿，導(dǎo)致融通，是效率很高的新型細(xì)胞融合技術(shù)。③.基因型不同的細(xì)胞間的融合稱為，由于細(xì)胞雜交中容易丟失，利用雜交細(xì)胞檢測特定丟失與產(chǎn)物（蛋白質(zhì)）減少的對(duì)應(yīng)關(guān)系可以進(jìn)行【例如人—鼠雜交細(xì)胞，由于1號(hào)染色體丟失導(dǎo)致尿苷單磷酸激酶活性喪失，可知該基因在上】。④.雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體制備過程⑤.雜交瘤技術(shù)解決了抗血清的問題，利用仙臺(tái)病毒使經(jīng)羊細(xì)胞的小鼠細(xì)胞與細(xì)胞融合，經(jīng)篩選獲得了針對(duì)羊紅細(xì)胞的抗體。【脾細(xì)胞：從供體獲取的\t"/item/%E8%84%BE%E7%BB%86%E8%83%9E/_blank"脾臟，通過機(jī)械的方法或其他方法將脾組織搗碎制成游離的脾細(xì)胞保存于等滲\t"/item/%E8%84%BE%E7%BB%86%E8%83%9E/_blank"鹽水中即形成，其中含有大量的和巨噬細(xì)胞，\t"/item/%E8%84%BE%E7%BB%86%E8%83%9E/_blank"脾臟是機(jī)體和的中心】⑥.雜交瘤技術(shù)制備單抗的基本方法：a.用外界刺激動(dòng)物（如小鼠），使其發(fā)生反應(yīng)，使B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生；b.利用仙臺(tái)病毒或聚乙二醇等作，使經(jīng)免疫的動(dòng)物的細(xì)胞（或脾細(xì)胞）與可以無限傳代的細(xì)胞融合；c.經(jīng)過篩選、克隆培養(yǎng)，獲得來自細(xì)胞的既能產(chǎn)生、又能的雜交瘤細(xì)胞克隆。⑦a.單克隆抗體的制備運(yùn)用和技術(shù)；b.兩次篩選的目的：第一次篩選是在細(xì)胞融合后選出細(xì)胞；第二次篩選是對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)后選出能的細(xì)胞群，繼續(xù)培養(yǎng)；c.雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：可以從特異抗原成分比例極少的中獲得。特異性，靈敏度；7.動(dòng)物的克隆繁殖①受精卵的第一次卵裂所得到的2個(gè)分裂球，每一個(gè)都可以發(fā)育為，所以第一次卵裂后喪失，隨著胚胎發(fā)育的繼續(xù)，有的細(xì)胞不再具有發(fā)育為的能力，只具有分化出的潛能，這樣的細(xì)胞叫，例如：多能造血干細(xì)胞；有的細(xì)胞只能分化為，如單能造血干細(xì)胞；另外，低等動(dòng)物細(xì)胞的全能性一般體現(xiàn)；癌細(xì)胞仍能逆轉(zhuǎn)為；無論是分化還是癌化，變化的都是，基因組成的可以保留。②動(dòng)物難以克隆的根本原因：細(xì)胞分化使得細(xì)胞發(fā)生了基因的，有的基因，有的基因；動(dòng)物的體細(xì)胞均已發(fā)生了，基因組中的基因的，不能像受精卵那樣發(fā)揮細(xì)胞的，以此為起點(diǎn)進(jìn)行動(dòng)物克隆，難度很大。③哺乳動(dòng)物的卵細(xì)胞體積，核移植需要借助精密的和高效率的。④體細(xì)胞克隆成功證明了：高度分化細(xì)胞經(jīng)過一定技術(shù)處理，也可以回復(fù)到類似時(shí)期的功能；在胚胎和個(gè)體發(fā)育中，細(xì)胞質(zhì)具有（包括異源的細(xì)胞核）發(fā)育的作用。⑤克隆羊成功的部分原因：重組卵細(xì)胞最初分裂時(shí)雖然復(fù)制了，但基因的并未開始；同時(shí)，供體核DNA開始丟失來源于乳腺細(xì)胞的，而正是這些最初阻止了核基因的；在重組卵細(xì)胞開始第次分裂時(shí)，原乳腺細(xì)胞的便全部被卵細(xì)胞質(zhì)中的替換了，因此核DNA被，胚細(xì)胞開始表達(dá)的基因，進(jìn)而調(diào)控在代孕母子宮中的進(jìn)一步。因此，羅斯林研究所的科研人員采用融合技術(shù)，選擇分裂次時(shí)的細(xì)胞進(jìn)行移植。第三章胚胎工程1.動(dòng)物有胚胎發(fā)育是指發(fā)育成的過程；2.成熟的精卵融合成為受精卵的過程稱為受精；受精大體包括、精子附著于卵膜、等過程。同種動(dòng)物精子、卵細(xì)胞表面有識(shí)別的蛋白，這是同種動(dòng)物精卵才能結(jié)合的原因之一。3.胚胎發(fā)育的過程：受精卵→（包括包括2細(xì)胞期、4細(xì)胞期、8細(xì)胞、16細(xì)胞期、32細(xì)胞期）→→原腸胚期→幼體；4.卵裂期：受精卵不斷進(jìn)行細(xì)胞分裂即，卵裂產(chǎn)生的細(xì)胞團(tuán)稱，隨著卵裂球細(xì)胞數(shù)目的增加，細(xì)胞逐漸，當(dāng)卵裂球含個(gè)細(xì)胞時(shí)，其中的每一個(gè)細(xì)胞都具有，即均可以發(fā)育成一個(gè)完整的個(gè)體。5.囊胚：又稱為，是中空的，囊胚外表為一層扁平細(xì)胞，稱，可發(fā)育成胚胎的附屬結(jié)構(gòu)或如。囊胚內(nèi)部的細(xì)胞團(tuán)不斷增殖分化，將發(fā)育成完整的；內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞為，是一種的細(xì)胞（核型），具有性，能分化出成體動(dòng)物的所有。6.原腸胚：有三個(gè)胚層，具有。原腸胚的內(nèi)、中、外三個(gè)胚層逐漸分化形成各種。胚胎工程胚胎工程通常指各種胚胎操作技術(shù)。胚胎工程的研究對(duì)象主要限定于動(dòng)物，特別是。研究的重點(diǎn)內(nèi)容有：、、、胚胎分割、等。2.體外受精和胚胎體外培養(yǎng)：①體外受精就是采集雌性動(dòng)物的和雄性動(dòng)物的，使其在中受精。②培養(yǎng)過程：a.將成熟的精子放入中培養(yǎng)，使精子達(dá)到【注意：獲得具有完成受精的能力】狀態(tài)，這樣才能穿入到內(nèi)部；b.采集卵母細(xì)胞的和培養(yǎng)：首先從卵巢中獲得的細(xì)胞，最常用的方法是卵巢經(jīng)處理【用促性腺激素處理卵巢】后，使其確定卵泡的位置，插入吸取，取出細(xì)胞，在體外經(jīng)人工培養(yǎng)，促進(jìn)其；c.的精子和培養(yǎng)的卵細(xì)胞在體外合適的環(huán)境下，完成受精；d.胚胎的體外培養(yǎng)：受精后形成的受精卵需經(jīng)，才能完成植入或著床，通常移植的最適宜時(shí)期是發(fā)育到的胚胎，如；e.經(jīng)分娩產(chǎn)仔就得到“試管動(dòng)物”。③由于胚胎不同發(fā)育時(shí)期的需求不同，進(jìn)行胚胎體外培養(yǎng)時(shí)，必須配置含有一系列含有的培養(yǎng)液，用以培養(yǎng)的胚胎；目前尚無從受精卵到新生兒的技術(shù)，所以，為胚胎工程中獲得后代的唯一方法。3.胚胎移植的基本過程：一頭母畜（供體）發(fā)情排卵并經(jīng)后，在一定時(shí)間內(nèi)從其生殖器官中（和）取出，然后把它們分別移植到另外一頭與供體排卵、但的母畜（受體）的相應(yīng)部位（或），這個(gè)來自供體的胚胎能夠在受體的子宮、并繼續(xù)生長發(fā)育，最后產(chǎn)下的后代。4.胚胎分割①是指借助技術(shù)將（囊胚之前）切割成幾等份（如2等份、4等份等），再移植到發(fā)育，產(chǎn)生后代的技術(shù)。胚胎分割可胚胎數(shù)量，是一種快速繁殖良種畜的方法。②胚胎分割基本過程：將發(fā)育良好的移入含的培養(yǎng)皿中；在下用或分割胚胎，或用等方法將中的細(xì)胞分開；分割的胚胎或細(xì)胞給受體，或在體外培養(yǎng)到階段再移植到受體內(nèi)，著床發(fā)育產(chǎn)仔。5.胚胎干細(xì)胞：當(dāng)受精卵分裂發(fā)育成（）時(shí)，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞為（簡稱ES細(xì)胞），是一種的細(xì)胞，具有和二核型。①培養(yǎng)關(guān)鍵：需要一種能，但的培養(yǎng)體系。②培養(yǎng)過程：在培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞時(shí)，首先要在底部制備一層細(xì)胞，稱為【一般是細(xì)胞，因?yàn)榧?xì)胞可以分泌一些能的物質(zhì)，滿足干細(xì)胞生長的同時(shí)的條件】，然后將干細(xì)胞接種在上；把胚胎放在中繼續(xù)培養(yǎng)，直到內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，然后用或機(jī)械剝離內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，再把它用成細(xì)胞，置于新鮮培養(yǎng)液中培養(yǎng)。6.胚胎干細(xì)胞核移植：①是指將胚胎干細(xì)胞核移植到去核的中，經(jīng)過、、后直接由受體完成克隆動(dòng)物（并非嚴(yán)格意義上的克?。┑募夹g(shù)。②胚胎干細(xì)胞核移植需要的技術(shù)流程：→→胚胎移植。③胚胎干細(xì)胞可以進(jìn)行基因敲除，獲得動(dòng)物，如用基因敲除手段可以獲得適合人體移植的豬器官，排斥反應(yīng)；人體的胚胎干細(xì)胞可以轉(zhuǎn)變?yōu)槿梭w的任何一種和，利用這一特性可以培育用于的細(xì)胞、組織或器官。第五章生態(tài)工程1.生態(tài)工程原理：；生態(tài)工程學(xué)的研究對(duì)象：復(fù)合生態(tài)系統(tǒng)；2.生態(tài)工程主要類型：①的生態(tài)工程：城市生活垃圾進(jìn)行、化、化處理，如將生活垃圾中有機(jī)部分、人畜的糞便等轉(zhuǎn)化為；農(nóng)村地區(qū)發(fā)展養(yǎng)殖業(yè)，將農(nóng)作物秸桿“”，利用禽畜糞便與作物秸桿培養(yǎng)后再培養(yǎng)蚯蚓，蚓糞殘?jiān)僮鳛榉柿?，既了田間燒草給環(huán)境帶來的污染，又增加了產(chǎn)值。②處理與應(yīng)用的生態(tài)工程：干旱和半干旱地區(qū)開展雨水和地表水的，在廣大農(nóng)業(yè)區(qū)域?qū)嵤┘夹g(shù)，城市、工業(yè)節(jié)水系統(tǒng)的開發(fā)等屬于的生態(tài)工程；糖廠用廢棄的糖蜜制，造紙廠利用廢液回收、等物質(zhì)，屠宰場利用廢血提取生產(chǎn)、等，這些都是工業(yè)廢水、生活污水等實(shí)施、回收、、再循環(huán)的措施，屬于生態(tài)工程。③山區(qū)小流域的生態(tài)工程：在治理恢復(fù)小流域生態(tài)環(huán)境的基礎(chǔ)上，利用小流域自然資源，將、、與發(fā)展草業(yè)、、結(jié)合起來。④系統(tǒng)利用的生態(tài)工程：a.農(nóng)作物秸桿、生活垃圾等處理，利用作為清潔可再生的能源；b.開發(fā)利用、風(fēng)能等；c.優(yōu)點(diǎn)：能夠?yàn)槿鐣?huì)提供、、的能源服務(wù)。3.生態(tài)工程在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用：