摘要目的：針對(duì)大黃-黃芪配伍中總黃酮的提取效率提升需求，采用超聲波輔助提取技術(shù)，以乙醇濃度、提取時(shí)長(zhǎng)、循環(huán)次數(shù)及物料溶劑比為關(guān)鍵參數(shù)，開(kāi)展多因素協(xié)同優(yōu)化研究，旨在確定各工藝參數(shù)的最優(yōu)匹配方案。方法：采用紫外分光光度法建立總黃酮定量分析方法，以蘆丁為對(duì)照品完成方法學(xué)驗(yàn)證，涵蓋日內(nèi)精密度（RSD）、6h穩(wěn)定性、重復(fù)性（n=6）及回收率等指標(biāo)。采用單因素法系統(tǒng)研究乙醇體積分?jǐn)?shù)（50%-80%）、浸提時(shí)長(zhǎng)（0.5-2h）、提取頻次（1-4次）及固液比（1:5-1:20）的獨(dú)立效應(yīng)，結(jié)合四因素三水平正交設(shè)計(jì)（L?(3?)）篩選最優(yōu)工藝組合。結(jié)果：方法學(xué)考察結(jié)果表明，分析體系的日內(nèi)精密度、供試品穩(wěn)定性及方法重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中RSD均控制在0.2%以內(nèi)，樣品回收率測(cè)定值達(dá)90.2%（RSD=1.31%）。工藝參數(shù)影響排序?yàn)樘崛r(shí)間＞提取次數(shù)＞固液比＞乙醇濃度。驗(yàn)證獲得最佳工藝條件為60%乙醇、固液比1:5、提取1h并重復(fù)3次，黃酮得率達(dá)10.54%。經(jīng)平行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)（n=3）確認(rèn)，該工藝參數(shù)組合具有良好重現(xiàn)性。結(jié)論：本研究通過(guò)多因素正交設(shè)計(jì)優(yōu)化，構(gòu)建了大黃-黃芪藥對(duì)黃酮類成分的高效超聲輔助提取工藝，關(guān)鍵參數(shù)穩(wěn)定可控且提取效能顯著，為復(fù)方中藥活性成分的標(biāo)準(zhǔn)化提取及工業(yè)化開(kāi)發(fā)提供了可靠的技術(shù)路徑。關(guān)鍵詞：大黃；黃芪；總黃酮提??；正交設(shè)計(jì)；提取工藝優(yōu)化

ABSTRACTObjective:Inresponsetothedemandforimprovingtheextractionefficiencyoftotalflavonoidsinthecompatibilityofrhubarbandastragalus,theultrasonic-assistedextractiontechnologywasadopted.Withethanolconcentration,extractionduration,cyclenumberandmaterial-to-solventratioaskeyparameters,amulti-factorcollaborativeoptimizationstudywasconductedtodeterminetheoptimalmatchingschemeofeachprocessparameter..Methods:Aquantitativeanalysismethodfortotalflavonoidswasestablishedbyultravioletspectrophotometry,andrutinwasusedasthereferencesubstancetocompletethemethodologicalvalidation,coveringintra-dayprecision(RSD),6-hourstability,repeatability(n=6),andrecoveryrate.Theindependenteffectsofethanolvolumefraction(50%-80%),extractiontime(0.5-2h),extractionfrequency(1-4times),andsolid-liquidratio(1:5-1:20)weresystematicallystudiedbythesingle-factormethod.Theoptimalprocesscombinationwasscreenedbythefour-factorthree-levelorthogonaldesign(L?(3?)).Results:TheresultsofthemethodologicalinvestigationindicatedthattheRSDsoftheintra-dayprecision,thestabilityofthetestsamplesandtherepeatabilityofthemethodwereallcontrolledwithin0.2%.Therecoveryrateofthesampleswasmeasuredtobe90.2%(RSD=1.31%).Therankingoftheinfluenceofprocessparameterswasextractiontime>extractiontimes>solid-liquidratio>ethanolconcentration.Theoptimalprocessconditionsobtainedthroughvalidationwere60%ethanol,asolid-liquidratioof1:5,extractionfor1hourandrepeated3times,withaflavonoidyieldof10.54%.Parallelverificationexperiments(n=3)confirmedthatthiscombinationofprocessparametershadgoodreproducibility.Conclusion:Inthisstudy,throughmulti-factororthogonaldesignoptimization,anefficientultrasound-assistedextractionprocessforflavonoidcomponentsofrhubarb-Astragalusmembranaceuswasconstructed.Thekeyparameterswerestableandcontrollable,andtheextractionefficiencywassignificant,providingareliabletechnicalpathforthestandardizedextractionandindustrialdevelopmentofactivecomponentsincompoundtraditionalChinesemedicines.KeyWords:DaHuang;HuangQi;Extractionoftotalflavonoids;OrthogonalDesign;ExtractionProcessOptimization綜述近年來(lái)，在當(dāng)前社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展與疾病譜系演變背景下，心腦血管疾病、代謝異常綜合征及惡性腫瘤等慢性病的患病率持續(xù)攀升。在這一健康挑戰(zhàn)中，中醫(yī)藥的防治優(yōu)勢(shì)逐步得到重視REF_Ref10349\r\h[1]。大黃來(lái)源于蓼科掌葉大黃（RheumpalmatumL.）、唐古特大黃（R.tanguticumMaxim.exBalf.）或藥用大黃（R.officinaleBaill.）的干燥根莖，性味苦寒，主歸脾、胃、大腸等經(jīng)，具有瀉下攻積、清熱瀉火等功效REF_Ref10558\r\h[2]；黃芪則取自豆科蒙古黃芪（Astragalusmembranaceusvar.mongholicus）或膜莢黃芪（A.membranaceus）的干燥根REF_Ref10852\r\h[3]，性甘微溫，歸肺脾二經(jīng)，以益氣固表、升陽(yáng)舉陷為功效特點(diǎn)REF_Ref10829\r\h[4]。臨床上兩藥配伍主要應(yīng)用于REF_Ref11835\r\h[5]慢性腎?。ㄈ缒I功能不全）、糖尿病并發(fā)癥（如周圍神經(jīng)病變）及心血管疾?。ㄈ绺哐獕汉喜⒋x紊亂）的輔助治療。1.1國(guó)內(nèi)外研究動(dòng)態(tài)自20世紀(jì)末以來(lái)，隨著現(xiàn)代提取技術(shù)與分析手段的持續(xù)進(jìn)步，中藥活性成分的提取工藝研究受到廣泛關(guān)注REF_Ref10349\r\h[1]。在傳統(tǒng)浸泡、回流提取等方法的基礎(chǔ)上，國(guó)內(nèi)外學(xué)者相繼引入了超聲輔助提?。║AE）、微波輔助提?。∕AE）以及超臨界流體提?。⊿FE）等現(xiàn)代技術(shù)REF_Ref12067\r\h[6]，應(yīng)用于天然產(chǎn)物活性成分的提取研究中。機(jī)理研究證實(shí)REF_Ref10071\r\h[7]，超聲輔助提取技術(shù)利用高頻機(jī)械振蕩與空化現(xiàn)象產(chǎn)生的協(xié)同作用，能夠有效增強(qiáng)溶媒對(duì)植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)的滲透性能，從而加速目標(biāo)組分的溶出速率，這不僅提升提取效率，還能縮短工藝時(shí)間、減少溶劑消耗，在中藥提取領(lǐng)域展現(xiàn)出顯著優(yōu)勢(shì)。正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是通過(guò)正交表安排實(shí)驗(yàn)，使各因素的各水平在試驗(yàn)中均勻搭配、相互獨(dú)立，從而以最少的實(shí)驗(yàn)次數(shù)分析各因素對(duì)結(jié)果的影響，并確定最優(yōu)組合REF_Ref12305\r\h[8]。相關(guān)研究指出，正交試驗(yàn)可有效篩選出影響提取率的關(guān)鍵參數(shù)，如溶劑濃度、提取時(shí)間及料液比等REF_Ref12406\r\h[9]，從而構(gòu)建穩(wěn)定、高效的提取流程。在多項(xiàng)文獻(xiàn)報(bào)道中，正交設(shè)計(jì)不僅顯著提高了黃酮類等活性成分的得率，也為中藥產(chǎn)品質(zhì)量控制與工藝穩(wěn)定性提供了技術(shù)保障REF_Ref12305\r\h[8]。1.2本選題的創(chuàng)新性和研究意義1.2.1創(chuàng)新性1.2.1.1方法學(xué)驗(yàn)證的系統(tǒng)性本研究在工藝優(yōu)化前，系統(tǒng)開(kāi)展了總黃酮含量測(cè)定方法的建立和方法學(xué)考察工作，結(jié)果表明：儀器精密度、方法穩(wěn)定性、重復(fù)性和加樣回收率指標(biāo)均符合要求，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)建立了可信的分析基礎(chǔ)REF_Ref12847\r\h[10]。1.2.1.2多因素正交設(shè)計(jì)的應(yīng)用針對(duì)大黃與黃芪配伍提取工藝中的復(fù)雜變量關(guān)系，本研究采用四因素三水平法構(gòu)建正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過(guò)系統(tǒng)分析了乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間、提取次數(shù)和料液比對(duì)總黃酮得率的影響規(guī)律REF_Ref12906\r\h[11]，不僅量化了單一參數(shù)的獨(dú)立作用，還解析了多因子間的協(xié)同效應(yīng)，顯著提升了工藝優(yōu)化效率。1.2.1.3最優(yōu)工藝參數(shù)的驗(yàn)證基于正交試驗(yàn)結(jié)果，該研究通過(guò)多批次驗(yàn)證試驗(yàn)確定了穩(wěn)定可控的最優(yōu)工藝參數(shù)組合。該成果不僅闡明了大黃-黃芪配伍提取的關(guān)鍵控制要素，更為中藥制劑產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)制定提供了重要技術(shù)支撐。1.2.2研究意義本研究系統(tǒng)優(yōu)化了大黃-黃芪復(fù)方組合中提取總黃酮的工藝過(guò)程，通過(guò)多因素正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)探究各工藝參數(shù)對(duì)黃酮提取率的影響規(guī)律，確定了最佳工藝參數(shù)組合。研究建立了標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程，顯著提升了活性成分的提取效率，為中藥復(fù)方制劑的工業(yè)化生產(chǎn)提供了可量化、可復(fù)制的技術(shù)依據(jù)。研究成果不僅有助于推動(dòng)中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的優(yōu)化與升級(jí)，所獲得的高純度總黃酮組分亦為開(kāi)發(fā)用于糖尿病、腎病等慢性疾病防治的中藥新產(chǎn)品提供了關(guān)鍵原料支持，對(duì)傳統(tǒng)中醫(yī)藥現(xiàn)代化的發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和應(yīng)用價(jià)值REF_Ref13125\r\h[12]。2實(shí)驗(yàn)內(nèi)容2.1儀器與材料2.1.1藥物與試劑大黃（批號(hào)：230601，重慶國(guó)乘堂制藥有限公司），黃芪（批號(hào)：241202，江蘇宜草生物科技有限公司），經(jīng)鑒定符合《中國(guó)藥典》2020版相關(guān)要求；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98%，批號(hào)：81L02，由河南省萬(wàn)佳首化生物科技有限公司提供）；無(wú)水乙醇，亞硝酸鈉，硝酸鋁及氫氧化鈉等試劑均為分析純規(guī)格，采購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。2.1.2實(shí)驗(yàn)儀器UV-1280型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司制造）；ATX124型精密電子天平（日本島津公司）；KM-600DE型超聲處理設(shè)備（昆山美美超聲儀器公司）；L500型臺(tái)式離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)公司）。所有儀器設(shè)備均經(jīng)計(jì)量校準(zhǔn)且在有效使用期內(nèi)。2.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.2.1大黃-黃芪黃酮的提取方法2.2.1.1供試品溶液與空白對(duì)照溶液的制備精密稱取大黃-黃芪（1:1）混合藥粉6.00g，置250mL錐形瓶中，加入適量乙醇溶液。采用超聲波輔助提取技術(shù)（工作頻率50kHz）處理樣品后，所得提取混合體系在4000r/min轉(zhuǎn)速條件下進(jìn)行離心分離操作（持續(xù)5min），取上清液即得供試品溶液。參考上述方法同步制備空白對(duì)照溶液用于后續(xù)檢測(cè)校正。2.2.1.2建立蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確稱量10.0mg蘆丁對(duì)照品（精確至0.1mg），定量轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，采用60%（v/v）乙醇溶液溶解并定容至刻度，獲得1.0mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。采用梯度稀釋法分別移取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8及1.0mL儲(chǔ)備液，使用同濃度乙醇溶液稀釋至10mL，制得0.1-1.0mg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)工作液REF_Ref13651\r\h[13]。顯色反應(yīng)體系構(gòu)建流程為：精確移取1.0mL各濃度標(biāo)準(zhǔn)液至10mL具塞試管中，依次加入1.0mL60%乙醇（空白校正）、0.5mL5%（m/v）亞硝酸鈉溶液，渦旋混合后靜置反應(yīng)5min；繼而加入0.5mL10%（m/v）硝酸鋁溶液，振蕩混勻后二次靜置5min；最終加入4.0mL4%（m/v）氫氧化鈉溶液，充分混勻后避光顯色15min。以同步制備的未加顯色劑混合液作為參比，于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定各反應(yīng)體系的吸光值REF_Ref13690\r\h[14]。經(jīng)線性回歸分析顯示（REF_Ref21544\h圖1），蘆丁濃度（X，mg/mL）與吸光值（Y）的定量模型為Y=1.6882X+0.1182（R2=0.9964），在0.1-1.0mg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性響應(yīng)（R2>0.99），滿足痕量組分定量檢測(cè)要求。圖SEQ圖\*ARABIC1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線2.2.1.3總黃酮含量的測(cè)定準(zhǔn)確吸取1mL大黃-黃芪藥對(duì)提取液至容量瓶中,用60%乙醇(v/v)定容至25mL,混合均勻后按照“REF_Ref196160214\n\h2.2.1.2”項(xiàng)下方法測(cè)量其吸光度，并計(jì)算黃酮的得率REF_Ref14121\r\h[15]（Y）。其中：C表示通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方程得到的提取液黃酮濃度（mg/mL），N表示提取液的稀釋倍數(shù)，V表示提取液總體積（mL），M表示原料初始質(zhì)量（g）。2.2.2方法學(xué)試驗(yàn)考察2.2.2.1精密度試驗(yàn)精密稱量2.84mg蘆丁對(duì)照品，采用無(wú)水乙醇溶解并定量轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中定容，參照“REF_Ref196160214\n\h2.2.1.2”項(xiàng)下方法連續(xù)測(cè)定6次吸光度，結(jié)果顯示吸光值均值為0.4789，其RSD=0.154%，證明該分析儀器精密度良好。2.2.2.2重復(fù)性試驗(yàn)精確稱量6份平行樣品（每份6.00g，藥材基質(zhì)配比1:1），參照“REF_Ref196160402\n\h2.2.1.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，吸取1mL用無(wú)水乙醇定容至25mL，基于“REF_Ref196160214\n\h2.2.1.2”項(xiàng)下檢測(cè)方法進(jìn)行吸光度測(cè)定并計(jì)算含量（mg/g）。結(jié)果顯示平均吸光度為0.3919，黃酮含量平均值為33.76mg/g，RSD=0.074%<1%，表明該方法滿足復(fù)雜基質(zhì)樣品定量分析的重復(fù)性要求。2.2.2.3穩(wěn)定性考察精密稱量6份平行樣品（每份6.00g，藥材基質(zhì)配比1:1），參照“REF_Ref196160402\n\h2.2.1.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，吸取1mL用無(wú)水乙醇定容至25mL，基于“REF_Ref196160214\n\h2.2.1.2”項(xiàng)下檢測(cè)方法，分別于0、30min、1h、2h、4h、6h測(cè)定吸光度，得平均值為0.3762，計(jì)算其RSD=2.57%，表明溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定性良好，但需注意提取液冷藏保存為佳，防止降解影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果REF_Ref15081\r\h[16]。2.2.2.4加樣回收率考察精密稱量已知黃酮含量的藥材基質(zhì)樣品六份（藥材基質(zhì)配比1:1），定量添加等量蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液后，參照“REF_Ref196160214\n\h2.2.1.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，用無(wú)水乙醇定容至25mL。每份取1mL，基于“REF_Ref196160214\n\h2.2.1.2”項(xiàng)下檢測(cè)方法測(cè)定吸光度。以未加標(biāo)樣品的本底吸光值作為參比，計(jì)算加樣回收率REF_Ref15195\r\h[17]。結(jié)果顯示，加標(biāo)組吸光度平均值為0.4196，經(jīng)計(jì)算得加樣回收率為90.2%，RSD=1.31%<1.5%，確證本檢測(cè)體系具有良好的測(cè)定準(zhǔn)確性，能夠有效控制復(fù)雜基質(zhì)中目標(biāo)成分的定量誤差。2.2.3單因素試驗(yàn)2.2.3.1乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)黃酮得率的影響采用1:5（g/mL）的固定料液比，設(shè)定0.5小時(shí)提取時(shí)長(zhǎng)和2次提取次數(shù)，系統(tǒng)探究了不同體積分?jǐn)?shù)乙醇溶媒（50%、60%、70%、80%）對(duì)該復(fù)方藥材中黃酮類成分溶出特性的影響規(guī)律。實(shí)驗(yàn)結(jié)果（見(jiàn)REF_Ref16834\h圖2）顯示，黃酮提取率與醇溶液濃度呈現(xiàn)非線性相關(guān)性：當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)由50%逐步提升至70%時(shí)，黃酮溶出量呈顯著增長(zhǎng)趨勢(shì)（當(dāng)70%時(shí)，溶出量達(dá)到最大值）；繼續(xù)提高至80%時(shí)得率反而下降。峰值時(shí)黃酮組分與溶劑的極性匹配度最佳，符合"相似相溶"原理。值得注意的是，當(dāng)乙醇濃度超過(guò)70%后，提取液色澤明顯加深，推測(cè)是高濃度乙醇溶解了更多色素及非目標(biāo)成分所致REF_Ref15525\r\h[18]REF_Ref16328\r\h[19]。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇70%作為最佳乙醇濃度參數(shù)。圖SEQ圖\*ARABIC2乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)黃酮得率的影響2.2.3.2提取時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響在70%乙醇濃度、1:5料液比和2次提取的固定條件下，設(shè)置0.5、1.0、1.5、2.0小時(shí)四個(gè)時(shí)間梯度，探究提取時(shí)間與黃酮得率的相關(guān)性。由REF_Ref2534\h圖3可知黃酮得率隨時(shí)間變化呈現(xiàn)類似典型拋物線特征，1小時(shí)提取時(shí)獲得最高得率4.84%。延長(zhǎng)提取時(shí)間反而導(dǎo)致得率下降，這可能是由于：熱不穩(wěn)定性黃酮類物質(zhì)發(fā)生降解；長(zhǎng)時(shí)間超聲處理引發(fā)成分氧化?；诖?，確定1小時(shí)為最優(yōu)提取時(shí)長(zhǎng)。圖SEQ圖\*ARABIC3提取時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響2.2.3.3提取次數(shù)對(duì)黃酮得率的影響保持70%乙醇濃度、1:5料液比和0.5小時(shí)提取時(shí)間的基準(zhǔn)參數(shù)，實(shí)驗(yàn)通過(guò)設(shè)置1-4次梯度參數(shù)，探究提取次數(shù)對(duì)目標(biāo)成分提取率間的影響關(guān)系。通過(guò)REF_Ref2573\h圖4可看出，隨著提取次數(shù)增加，黃酮得率可持續(xù)提高，這是因?yàn)榻?jīng)過(guò)反復(fù)的提取，藥對(duì)中的黃酮成分不斷溶出在溶劑中，使黃酮得到大量提取，得率增加。但從工業(yè)化生產(chǎn)角度綜合考慮：三次以上提取的得率增幅趨緩；溶劑消耗和設(shè)備占用成本倍增。權(quán)衡效益與成本后，選擇2次提取作為最佳方案。圖SEQ圖\*ARABIC4提取次數(shù)對(duì)黃酮得率的影響2.2.3.4料液比對(duì)黃酮得率的影響在固定乙醇體積分?jǐn)?shù)（70%）、提取時(shí)長(zhǎng)（0.5h）及提取輪次（2次）的優(yōu)化工藝參數(shù)體系下，設(shè)計(jì)四個(gè)梯度固液比參數(shù)（1:5～1:20，g/mL），解析溶劑用量對(duì)成分提取的調(diào)控作用。結(jié)果見(jiàn)REF_Ref32568\h圖5，在1:5至1:10范圍內(nèi)，得率與溶劑用量呈正相關(guān)。但超過(guò)1:10后出現(xiàn)反效現(xiàn)象，這是由于當(dāng)溶劑含量占比較小時(shí)，藥對(duì)中的黃酮不能完全溶出；隨著溶劑量增多，過(guò)量的乙醇破壞黃酮的部分結(jié)構(gòu)，雜質(zhì)的溶出量也會(huì)增多REF_Ref16848\r\h[20]。因此1:10被確定為最經(jīng)濟(jì)的料液比參數(shù)。圖SEQ圖\*ARABIC5料液比對(duì)黃酮得率的影響2.2.4正交優(yōu)化試驗(yàn)及最優(yōu)組合驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)2.2.4.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果基于單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)篩選出對(duì)黃酮提取效率具有顯著影響的四個(gè)關(guān)鍵參數(shù)：乙醇體積分?jǐn)?shù)（A）、提取時(shí)長(zhǎng)（B）、提取輪次（C）和固液比（D）。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，每個(gè)考察因素設(shè)置三個(gè)梯度水平（見(jiàn)REF_Ref196216911\h表1），通過(guò)L9(3^4)正交表安排實(shí)驗(yàn)方案，系統(tǒng)優(yōu)化總黃酮的最佳提取工藝條件REF_Ref16848\r\h[20]。-1、0、1水平：A分別為60%、70%和80%；B分別為0.5、1和1.5h；C分別為1、2和3次；D分別為1:5、1:10和1:15（g:ml）。表SEQ表\*ARABIC1正交試驗(yàn)的因素與水平水平（A）乙醇濃度/%（B）提取時(shí)間/h（C）提取次數(shù)/次（D）料液比/(g:ml)1600.511:5270121:103801.531:15表SEQ表\*ARABIC2正交試驗(yàn)結(jié)果與分析試驗(yàn)號(hào)ABCD黃酮得率（%）111113.06212225.27313337.22421231.865223110.54623122.99731322.26832132.82933214.66k15.182.392.966.09k25.136.213.933.51k33.254.966.673.97極差R1.933.823.712.58基于正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)的極差解析結(jié)果（REF_Ref16988\h表2）可以明確看出，各工藝參數(shù)對(duì)黃酮提取效率的調(diào)控作用存在顯著性差異，其中提取時(shí)間（B）的對(duì)得率的貢獻(xiàn)度最為突出，其后依次為提取次數(shù)（C）、料液比（D），而乙醇濃度（A）的影響權(quán)重最低。正交試驗(yàn)確定的優(yōu)化工藝條件組合為A?B?C?D?，具體表現(xiàn)為60%乙醇濃度、1小時(shí)提取時(shí)間、3次提取次數(shù)以及1:5的料液比。2.2.4.2驗(yàn)證試驗(yàn)在正交實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取最優(yōu)參數(shù)組合（乙醇濃度60%、提取時(shí)間1小時(shí)、提取次數(shù)3次、料液比1:5），重復(fù)進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)（n=3），并與對(duì)照組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較，驗(yàn)證優(yōu)化結(jié)果的穩(wěn)定性REF_Ref17448\r\h[21]。表SEQ表\*ARABIC3驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果次數(shù)吸光度（A）黃酮得率（%）10.930411.0320.924210.9430.82879.66平均值0.894810.54以篩選的最優(yōu)組合進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)（見(jiàn)REF_Ref195109859\h表3），提取大黃-黃芪藥對(duì)中的總黃酮，平均黃酮得率為10.54%，高于正交表中其他組合的提取結(jié)果，具一定的可行性。因此確定A?B?C?D?為大黃-黃芪藥對(duì)黃酮提取工藝的最優(yōu)組合。2.3討論與小結(jié)方法學(xué)部分的系統(tǒng)評(píng)估涵蓋精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性與回收率等核心指標(biāo)，均符合《中國(guó)藥典》2020年版“9101分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”要求，確保了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的真實(shí)性與結(jié)論的科學(xué)性REF_Ref18053\r\h[22]，為后續(xù)研究奠定了可靠的分析基礎(chǔ)。相較于傳統(tǒng)回流法（文獻(xiàn)報(bào)道REF_Ref10969\r\h[23]黃酮得率5%~8%），優(yōu)化后的超聲輔助工藝（得率10.54%）顯著提升了提取效率，其優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在：時(shí)間成本降低：1小時(shí)提取周期較常規(guī)2~3小時(shí)縮短50%以上；溶劑消耗減少：料液比1:5（g/mL）較傳統(tǒng)1:10~1:15節(jié)約溶劑50%~67%，符合綠色提取理念。此外，本研究的一大亮點(diǎn)在于采用超聲輔助提取工藝，不僅節(jié)約溶劑用量、縮短提取時(shí)間REF_Ref19058\r\h[24]，同時(shí)具備操作簡(jiǎn)便、成本可控等優(yōu)勢(shì)，適合在中藥制劑生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。所篩選的參數(shù)組合既滿足實(shí)驗(yàn)效果的最大化，也兼顧了工藝的可持續(xù)性和工業(yè)放大的可行性，符合當(dāng)前中藥現(xiàn)代化發(fā)展的總體方向。后續(xù)研究可圍繞工藝放大驗(yàn)證與成分特異性分析展開(kāi)，推動(dòng)該技術(shù)從實(shí)驗(yàn)室向?qū)嶋H生產(chǎn)的轉(zhuǎn)化。參考文獻(xiàn)熊皓舒,田埂,劉朋,等.中藥生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量控制關(guān)鍵技術(shù)研究進(jìn)展[J].中草藥,2020,51(16):4331–4337.程穎.大黃蒽醌代謝產(chǎn)物及單體成分對(duì)人結(jié)腸細(xì)胞潛在毒性作用的研究[D].西北大學(xué),2021.陳學(xué)艷,魏文芝,張敏娟,等.UPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方龍膽碳酸氫鈉片中10種大黃蒽醌類成分及土大黃苷的含量[J].中國(guó)藥房,2023,34(21):2595-2600.楊斐然.基于絡(luò)病理論探討消瘤平移方維持治療晚期肺腺癌的臨床療效及其相關(guān)調(diào)控機(jī)制研究[D].山東中