ICS65.020.99

CCSB40

4117

駐馬店市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB4117/T321—2021

動(dòng)物病原微生物實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制指南

2021-09-29發(fā)布2021-10-29實(shí)施

駐馬店市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB4117/T321—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由駐馬店市畜牧局提出。

本文件歸口于駐馬店市畜牧獸醫(yī)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)。

本文件起草單位：駐馬店市獸藥飼料（動(dòng)物產(chǎn)品）質(zhì)量檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心、新蔡縣農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法大

隊(duì)、濟(jì)源市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、許昌市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、安陽(yáng)市殷都區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所、許

昌市建安區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、鄢陵縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、西平縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、泌陽(yáng)縣動(dòng)物衛(wèi)

生監(jiān)督所、上蔡縣臥龍街道辦事處社區(qū)服務(wù)中心、上蔡縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、泌陽(yáng)縣獸藥飼料監(jiān)督

監(jiān)察所、泌陽(yáng)縣獸藥械服務(wù)中心、駐馬店市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、焦作市中站區(qū)府城街道辦事處、遂平縣農(nóng)業(yè)農(nóng)

村局、濟(jì)源市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所、濟(jì)源市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心、上蔡縣家畜改良站、駐馬店市動(dòng)物疫

病預(yù)防控制中心、正陽(yáng)縣獸藥飼料質(zhì)量檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心、驛城區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所、武陟縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所。

本文件主要起草人：馬寧、黃志偉、袁奎超、蔣歡、葛會(huì)杰、戚學(xué)洲、曹世杰、鄭麗敏、翟素穎、

王永剛、侯明陽(yáng)、胡紅偉、李榮玲、劉輝、陳玉霞、胡芬芬、王旺、郝佳、王亦欣、劉苗苗、張冬艷、

張留賓、鄭豐、常清華、孫政豪、張艷紅、王雙林。

本文件為首次發(fā)布。

I

DB4117/T321—2021

動(dòng)物病原微生物實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制指南

1范圍

本文件規(guī)定了動(dòng)物病原微生物實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制。

本文件適用于動(dòng)物病原微生物實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件的要求、控制、監(jiān)測(cè)和記錄。

本文件所述動(dòng)物病原微生物實(shí)驗(yàn)室以下均簡(jiǎn)稱為實(shí)驗(yàn)室。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T4789.3食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸桿菌群計(jì)數(shù)

GB/T4789.4食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)

GB/T4789.10食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)

GB/T4789.15食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)

GB/T4789.35食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)乳酸菌檢驗(yàn)

GB/T18204.3公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第3部分：空氣微生物

GB/T25916.1潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境生物污染控制第1部分

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

病原微生物

能夠使人或者動(dòng)物致病的微生物。

3.2

潔凈區(qū)

空氣懸浮粒子濃度受控的專(zhuān)用空間，其建造和使用方式使區(qū)域內(nèi)進(jìn)入的、產(chǎn)生的、滯留的粒子最少，

區(qū)域內(nèi)溫度、濕度、壓力等其他相關(guān)參數(shù)按要求受控。

3.3

菌落總數(shù)

檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)基溫度和培養(yǎng)時(shí)間等）培養(yǎng)后，所得每g（mL）檢

樣中形成的微生物菌落總數(shù)。

3.4

浮游菌

懸浮在空氣中的帶菌微粒。

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3.5

沉降菌

降落在表面的帶菌微粒。

4環(huán)境要求

4.1實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)和建造應(yīng)符合《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》等國(guó)家規(guī)定和要求。

4.2實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)和建造應(yīng)達(dá)到BLS-2實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)。

4.3實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)應(yīng)保證對(duì)生物、化學(xué)、輻射和物理等危險(xiǎn)源的防護(hù)水平控制在經(jīng)過(guò)評(píng)估的可接受程

度，為關(guān)聯(lián)的辦公區(qū)和鄰近的公共空間提供安全的工作環(huán)境及防止危害環(huán)境。

4.4房間的門(mén)應(yīng)安裝門(mén)鎖，門(mén)鎖應(yīng)便于內(nèi)部快速打開(kāi)。需要時(shí)（如：正操作危險(xiǎn)材料時(shí)），房間入口

處應(yīng)有警示標(biāo)識(shí)。

4.5實(shí)驗(yàn)室的走廊和通道應(yīng)不妨礙人員和物品通過(guò)，并應(yīng)設(shè)計(jì)緊急撤離路線，緊急出口應(yīng)有明顯標(biāo)識(shí)。

4.6有效隔離不相容的實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)區(qū)域，實(shí)驗(yàn)室的工作區(qū)域應(yīng)與辦公室區(qū)域明顯分開(kāi)。

4.7實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度、照度、噪聲和潔凈度等室內(nèi)環(huán)境參數(shù)應(yīng)符合工作要求和衛(wèi)生等相關(guān)要求。

4.8實(shí)驗(yàn)室工作面積和總體布局應(yīng)能滿足從事檢驗(yàn)工作的需要，實(shí)驗(yàn)室布局采用單方向工作流程，避

免交叉污染。

4.9一般樣品檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈區(qū)（包括超凈工作臺(tái)或潔凈實(shí)驗(yàn)室）進(jìn)行，潔凈區(qū)域應(yīng)有明顯的標(biāo)示。

4.10實(shí)驗(yàn)室在有關(guān)規(guī)范、方法和程序有要求或?qū)Y(jié)果有影響時(shí)，需對(duì)環(huán)境條件進(jìn)行監(jiān)測(cè)、控制并記錄。

4.11實(shí)驗(yàn)室環(huán)境不應(yīng)影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4.12實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)設(shè)施還應(yīng)考慮動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等過(guò)程產(chǎn)生的潛在生物危險(xiǎn)的防護(hù)。

5環(huán)境控制

5.1控制原則

5.1.1微生物風(fēng)險(xiǎn)的控制應(yīng)注重防控結(jié)合，以防為主。

5.1.2對(duì)等級(jí)較高或反復(fù)發(fā)生微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)要進(jìn)行重點(diǎn)管控，并制定相應(yīng)的控制方案。

5.1.3檢驗(yàn)檢測(cè)過(guò)程中涉及到微生物或生物制品時(shí)應(yīng)開(kāi)展生物安全防護(hù)，應(yīng)確保生物安全條件和狀態(tài)

不超過(guò)容許水平，應(yīng)避免實(shí)驗(yàn)室人員、來(lái)訪人員及環(huán)境受到損害，符合相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的要求。

5.2設(shè)施和設(shè)備控制

5.2.1平面布局

實(shí)驗(yàn)室平面布局環(huán)境如下：

a)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)洗手池，宜設(shè)置在靠近實(shí)驗(yàn)室的出口處。

b)實(shí)驗(yàn)室的墻壁、天花板和地面應(yīng)易清潔、不滲水、耐化學(xué)品和消毒滅菌劑的腐蝕。地面應(yīng)平

整、防滑、不應(yīng)鋪設(shè)地毯。

c)應(yīng)根據(jù)工作性質(zhì)和流程合理擺放實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、臺(tái)柜、物品等，避免相互干擾、交叉污染。

d)實(shí)驗(yàn)室臺(tái)柜等和其擺放應(yīng)便于清潔，實(shí)驗(yàn)臺(tái)面應(yīng)防水、防腐蝕、耐熱且堅(jiān)固。

e)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備高壓蒸汽滅菌器或其他適當(dāng)?shù)南緶缇O(shè)備，所配備的消毒滅菌設(shè)備應(yīng)以風(fēng)險(xiǎn)

評(píng)估為依據(jù)。

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f)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在操作動(dòng)物病原微生物樣本的實(shí)驗(yàn)間內(nèi)配備生物安全柜。

5.2.2通風(fēng)空調(diào)

實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)要求如下：

a)實(shí)驗(yàn)室可利用自然通風(fēng)。如果采用機(jī)械通風(fēng)，應(yīng)避免交叉污染。

b)若操作有毒、刺激性、放射性揮發(fā)物質(zhì)，應(yīng)配備適當(dāng)?shù)呢?fù)壓排風(fēng)柜。

c)應(yīng)按產(chǎn)品的設(shè)計(jì)要求安裝和使用生物安全柜，如果生物安全柜的排風(fēng)在室內(nèi)循環(huán)，室內(nèi)應(yīng)具

備通風(fēng)換氣的條件；如果使用管道排風(fēng)的生物安全柜，應(yīng)通過(guò)獨(dú)立于建筑物其他公共通風(fēng)系

統(tǒng)的管道排出。

5.2.3供水供電

實(shí)驗(yàn)室供水供電要求如下：

a)供水和排水管道應(yīng)不滲漏，下水應(yīng)有防回流設(shè)計(jì)。

b)應(yīng)有可靠的電力供應(yīng)。必要時(shí)，重要設(shè)備（如：培養(yǎng)箱、生物安全柜、冰箱等）應(yīng)配置備用

電源。

5.3實(shí)驗(yàn)室區(qū)域控制

5.3.1微生物實(shí)驗(yàn)室需具備污染區(qū)和潔凈區(qū)，污染區(qū)及潔凈區(qū)需分開(kāi)，并應(yīng)達(dá)到BSL-2實(shí)驗(yàn)室基本要

求。建立環(huán)境清潔制度，包括地面、墻裙、頂面、門(mén)窗、紗窗及通風(fēng)排氣網(wǎng)罩等應(yīng)定期進(jìn)行清潔；預(yù)防

積塵等造成污染。

5.3.2污染區(qū)空氣潔凈度應(yīng)滿足ISO8級(jí)（潔凈度D級(jí)），其中，浮游菌應(yīng)不超過(guò)200cfu/m3，沉降

菌應(yīng)不超過(guò)100cfu/4小時(shí)（φ90mm）,表面微生物應(yīng)不超過(guò)50cfu/碟（φ55mm）;溫度為20℃～

26℃；相對(duì)濕度30%～65%；噪音≤75分貝；照度≥300勒克斯。

5.3.3潔凈區(qū)空氣潔凈度應(yīng)滿足ISO5級(jí)（潔凈度B級(jí)），其中，浮游菌應(yīng)不超過(guò)10cfu/m3，沉降菌

應(yīng)不超過(guò)5cfu/4小時(shí)（φ90mm）,表面微生物應(yīng)不超過(guò)5cfu/碟（φ55mm）;溫度為20℃～26℃；

相對(duì)濕度30%～70%；噪音≤75分貝；照度≥300勒克斯。

5.3.4生物安全柜潔凈度應(yīng)滿足ISO4.8級(jí)（潔凈度A級(jí)），其中，浮游菌應(yīng)不超過(guò)1cfu/m3，沉降

菌應(yīng)不超過(guò)1cfu/4小時(shí)（φ90mm）,表面微生物應(yīng)不超過(guò)1cfu/碟（φ55mm）;溫度為20℃～25℃；

相對(duì)濕度30%～60%；噪音≤75分貝；照度≥500勒克斯。

5.4實(shí)驗(yàn)室空氣控制

5.4.1實(shí)驗(yàn)室應(yīng)安裝紫外線燈或臭氧發(fā)生器等消毒設(shè)施設(shè)備，定期對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行滅菌消毒處理，

并建立消毒驗(yàn)證方法，對(duì)紫外線輻射強(qiáng)度、臭氧濃度進(jìn)行定期監(jiān)控，以確保滅菌、消毒效果。

5.4.2實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)設(shè)施能力應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室功能要求相適應(yīng)。當(dāng)發(fā)生微生物、化學(xué)品污染物聚集達(dá)到不

安全濃度或?qū)嶒?yàn)室有缺氧風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，應(yīng)有充足的通風(fēng)抽排設(shè)施以確保有效地排除或處理。

5.5實(shí)驗(yàn)用水控制

5.5.1實(shí)驗(yàn)室用水需達(dá)到無(wú)菌條件。

5.5.2制定實(shí)驗(yàn)室制水系統(tǒng)（超純水、蒸餾水）的微生物控制程序，規(guī)定清潔維護(hù)、消毒的頻次及方

法要求，確保充分考慮到不同季節(jié)波動(dòng)等情況；水質(zhì)處理設(shè)備應(yīng)定期維護(hù)并記錄；應(yīng)定期監(jiān)測(cè)并在停用

重新啟用時(shí)必須進(jìn)行相應(yīng)處理并監(jiān)測(cè)合格。

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5.5.3盡量縮短制備好的水的存儲(chǔ)時(shí)間，根據(jù)實(shí)際情況，自主選用定期加熱處理后的水、使用臭氧氧

化或加裝紫外燈照射等措施消毒控制微生物的滋生。

5.6微生物保存控制

5.6.1應(yīng)當(dāng)制定嚴(yán)格的安全保管制度，做好微生物菌種和樣本進(jìn)出和儲(chǔ)存的記錄、建立檔案制度、并

制定專(zhuān)人負(fù)責(zé)。

5.6.2微生物菌種保存期間，要定期檢查菌種存放設(shè)施的溫度和濕度、菌株有無(wú)污染，如發(fā)現(xiàn)異常應(yīng)

重新移植培養(yǎng)后更換。

5.7實(shí)驗(yàn)室安防控制

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置安防措施，避免無(wú)授權(quán)人員進(jìn)入，如門(mén)禁系統(tǒng)。安防系統(tǒng)設(shè)計(jì)應(yīng)優(yōu)先考慮消防、應(yīng)急

要求。

5.8實(shí)驗(yàn)室標(biāo)志控制

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)活動(dòng)類(lèi)型設(shè)置相應(yīng)安全標(biāo)志，包括：化學(xué)品作業(yè)場(chǎng)所安全警示標(biāo)志、生物安全警示標(biāo)

志、氣瓶標(biāo)志等。緊急通道和出入口應(yīng)設(shè)置醒目標(biāo)志。

6環(huán)境監(jiān)測(cè)

6.1環(huán)境空氣微生物

6.1.1細(xì)菌總數(shù)監(jiān)測(cè)：沉降菌監(jiān)測(cè)采用自然沉降法，浮游菌監(jiān)測(cè)撞擊法采樣，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基技術(shù)的

方法測(cè)定微生物實(shí)驗(yàn)室中空氣中的細(xì)菌總數(shù),具體操作按照GB/T18204.3執(zhí)行。

6.1.2真菌總數(shù)監(jiān)測(cè)：沉降菌監(jiān)測(cè)采用自然沉降法，浮游菌監(jiān)測(cè)撞擊法采樣，沙氏瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)技

術(shù)的方法測(cè)定實(shí)驗(yàn)室空氣中的真菌總數(shù)，具體操作按照GB/T18204.3執(zhí)行。

6.1.3β-溶血性鏈球菌監(jiān)測(cè)：采用撞擊法采樣、血瓊脂培養(yǎng)基計(jì)數(shù)的方法測(cè)定實(shí)驗(yàn)室空氣中的β-溶

血性鏈球菌，具體操作按照GB/T18204.3執(zhí)行。

6.1.4嗜肺軍團(tuán)菌監(jiān)測(cè)：采用液體沖擊法采樣、培養(yǎng)法定性測(cè)定公共場(chǎng)所空氣中的嗜肺軍團(tuán)菌，具體

操作按照GB/T18204.3執(zhí)行。

6.2實(shí)驗(yàn)用水微生物

6.2.1菌落總數(shù)監(jiān)測(cè)：以無(wú)菌操作方法用滅菌吸管吸取待測(cè)25mL充分混勻的水樣，進(jìn)行梯度稀釋后，

注入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，通過(guò)平板計(jì)數(shù)法對(duì)待測(cè)水樣培養(yǎng)后測(cè)量菌落數(shù)，具體操作按照GB4789.2執(zhí)行。

6.2.2霉菌總數(shù)監(jiān)測(cè)：通過(guò)平板計(jì)數(shù)法對(duì)待測(cè)水樣培養(yǎng)后測(cè)量菌落數(shù)，或通過(guò)直接鏡檢計(jì)數(shù)法測(cè)量，

具體操作按照GB4789.15執(zhí)行。

6.2.3大腸菌群監(jiān)測(cè)：通過(guò)大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法通過(guò)培養(yǎng)觀察產(chǎn)期情況統(tǒng)計(jì)大腸菌群，或通過(guò)大腸菌

群平板計(jì)數(shù)法測(cè)量，具體操作按照GB4789.3執(zhí)行。

6.2.4金黃色葡萄球菌監(jiān)測(cè)：進(jìn)行金黃色葡萄球菌定性檢驗(yàn)，通過(guò)Baird-Parker平板計(jì)數(shù)法或金黃色

葡萄球菌MPN法進(jìn)行計(jì)數(shù)測(cè)量，具體操作按照GB4789.10執(zhí)行。

6.2.5乳酸菌監(jiān)測(cè)：本標(biāo)準(zhǔn)中的乳酸菌主要為乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和鏈球菌屬，使用不同的培養(yǎng)基

進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，進(jìn)行乳酸菌總數(shù)計(jì)數(shù)、雙擊桿菌計(jì)數(shù)、嗜熱鏈球菌計(jì)數(shù)及乳桿菌計(jì)數(shù)，具體操作按照

GB4789.35執(zhí)行。

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