主要內(nèi)容降鈣素原PCT生物特性、發(fā)展歷史降鈣素原PCT檢測(cè)原理降鈣素原PCT的溯源性PCT的生物學(xué)特點(diǎn)血清降鈣素(CT)的前肽物質(zhì)分子量：14.5kDa由116個(gè)氨基酸組成的糖蛋白質(zhì)無(wú)激素活性11號(hào)染色體上的單拷貝基因轉(zhuǎn)錄甲狀腺濾泡細(xì)胞降鈣素原前體內(nèi)源多肽酶降鈣素原PCT降鈣素分解細(xì)胞內(nèi)特殊蛋白酶正常情況下在細(xì)菌感染/膿毒血癥狀態(tài)下，PCT在各個(gè)組織、器官大量形成并釋放進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)

PCT

降鈣素原PCT正常情況下,主要局限于甲狀腺和肺的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞表達(dá)并裂解成降鈣素膿毒血癥及促炎癥細(xì)胞因子可誘導(dǎo)全身各種組織多種類(lèi)型細(xì)胞表達(dá)和釋放PCT

PCT的生物學(xué)特點(diǎn)快速：感染開(kāi)始后3小時(shí)即可測(cè)得，6-12小時(shí)后達(dá)到峰值峰值最高可達(dá)1000ng/ml半衰期:接近24hrs幾乎不受腎功能狀態(tài)影響正常情況下，是降鈣素的前體健康人血液中濃度非常低，<0.05ng/ml。當(dāng)細(xì)菌感染時(shí)，PCT可生成并釋放入血液循環(huán)PCT發(fā)現(xiàn)歷史

1983年1993年1994年在葡萄球菌中毒性休克的低鈣血癥機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)PCT，首次將PCT與膿毒癥和炎癥狀態(tài)聯(lián)系起來(lái)首次將PCT水平與細(xì)菌感染與指導(dǎo)抗生素使用聯(lián)系在健康受試者中注射內(nèi)毒素，發(fā)現(xiàn)PCT的動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)1993年，發(fā)表在Lancet的關(guān)于PCT在兒童膿毒癥及感染患者的首項(xiàng)前瞻性研究79名疑似感染兒童：無(wú)感染：PCT＜0.1ng/ml重度感染：PCT6-56ng/ml無(wú)全身表現(xiàn)的局部感染和病毒感染：PCT0.3-1.5ng/ml重度感染者抗生素治療后PCT水平下降首次將PCT與細(xì)菌性感染及指導(dǎo)抗生素治療聯(lián)系起來(lái)1994年：在健康受試者中注射內(nèi)毒素，發(fā)現(xiàn)PCT的動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)在一次內(nèi)毒素刺激的人體試驗(yàn)中PCT的動(dòng)力學(xué)變化快速、高特異性的增長(zhǎng)在膿毒癥情況下，3-6小時(shí)即可檢測(cè)到其水平的增長(zhǎng)快速衰減半衰期約20-24小時(shí)，可以快速反映治療效果血漿濃度時(shí)間(小時(shí))PCTCRPIL-6TNF-αIL-10DandonaP,etal.JClinEndocrinolMetab.1994;79(6):1605-8主要內(nèi)容降鈣素原PCT發(fā)展歷史、生物特性降鈣素原PCT的檢測(cè)原理降鈣素原PCT的溯源性ECL檢測(cè)原理：電化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)

ElectroChemiLuminescence(ECL)cobase601立式型結(jié)合

Ruthenium

結(jié)合磁珠轉(zhuǎn)移至電極;標(biāo)記后免疫復(fù)合物與游離組分分離施加電壓?jiǎn)?dòng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)信號(hào)檢測(cè)ECL檢測(cè)原理

免疫復(fù)合物的形成第一抗體標(biāo)記生物素（與微磁珠結(jié)合）第二抗體標(biāo)記Ruthenium（產(chǎn)生光信號(hào)）兩種抗體皆能與靶抗原特異性結(jié)合免疫復(fù)合物抗體抗原生物素Ruthenium抗體ECL檢測(cè)原理

生物素－鏈霉親和素特異性親和作用

磁珠生物素鏈霉親和素抗原抗體ECL檢測(cè)原理

磁珠-提高反應(yīng)靈敏度磁珠形成的免疫復(fù)合物轉(zhuǎn)移至測(cè)量池開(kāi)始ECL反應(yīng)生物素與鏈霉素特異性親和作用反應(yīng)體系中待測(cè)抗原可最大限度地與磁珠結(jié)合提高檢測(cè)反應(yīng)的靈敏度ECL檢測(cè)原理

光電倍增管檢測(cè)光信號(hào)系統(tǒng)優(yōu)勢(shì)

光信號(hào)產(chǎn)生迅速ECL信號(hào)強(qiáng)度(‘000counts)00.51.01.5時(shí)間(秒)電壓作為反應(yīng)的啟動(dòng)開(kāi)關(guān)能有效地保證發(fā)光反應(yīng)穩(wěn)定而可控地進(jìn)行150456030750.4.81.21.62.0電壓(V)ECL電壓羅氏cobase601開(kāi)展項(xiàng)目心肌標(biāo)志物：超敏TNT、肌紅蛋白、NT-proBNP、肌酸激酶同工酶膿毒血癥：IL-6、PCT腫瘤標(biāo)志物：腫瘤相關(guān)抗原72－4、非小細(xì)胞肺癌相關(guān)抗原21－1骨標(biāo)志：甲狀旁腺素、骨鈣素、25-羥基維生素D3、總I型膠原氨基端延長(zhǎng)肽、β－膠原特殊序列甲狀腺功能：促甲狀腺受體抗體激素：促腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)醇、人生長(zhǎng)激素、雌二醇、促卵泡成熟激素、黃體生成激素、孕酮、催乳素主要內(nèi)容狀降鈣素原PCT發(fā)展歷史、生物特性降鈣素原PCT的檢測(cè)原理降鈣素原PCT的溯源性解決溯源性是臨床檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵ISO/IEC17025的質(zhì)量體系中就提出對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的三點(diǎn)要求：ISO/IEC17025:2005-5-15《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》溯源鏈上端測(cè)量結(jié)果可以在計(jì)量上可追溯至國(guó)際單位制（SI）的被測(cè)量

如電解質(zhì)，代謝物，甾體激素及一些甲狀腺激素測(cè)量結(jié)果不能在計(jì)量上可追溯至國(guó)際單位制（SI）的被測(cè)量可用的國(guó)際約定的參考測(cè)量程序國(guó)際約定校準(zhǔn)物質(zhì)有有如糖化血紅蛋白有無(wú)如凝血因子無(wú)有如蛋白激素，某些抗體和腫瘤標(biāo)志物無(wú)無(wú)如某些腫瘤標(biāo)志物等，共300中組分，PCT也是其中之一制造商自行建立“自用”測(cè)量程序和標(biāo)準(zhǔn)品，為產(chǎn)品校準(zhǔn)品定值

PCT的溯源性19

19.馮仁豐.降鈣素原的標(biāo)準(zhǔn)化.《臨床實(shí)驗(yàn)室》,第8卷，2014年第10期，46-47PCT的溯源性不同產(chǎn)品之間的“可追溯性”ISO17511指出：

在相同的計(jì)量水平下，測(cè)量相同量的兩個(gè)測(cè)量程序的測(cè)量結(jié)果具相關(guān)性，但這樣的水平相關(guān)性不提供計(jì)量可追溯性

相關(guān)系數(shù)盡管接近1，比對(duì)間還存在著“顯著差異”，不能說(shuō)明結(jié)果一致，在y=ax+b中會(huì)存在“斜率小于1，顯著截距”等情況。不同品牌產(chǎn)品應(yīng)該通過(guò)大量臨床試驗(yàn)，建立自身的限值與B·R·A·H·M·SPCT比對(duì)的相關(guān)性并不代表具有溯源性B·R·A·H·M·SPCTTM的雙抗分別識(shí)別PCT肽鏈的兩個(gè)部位

雙位點(diǎn)結(jié)合相比單位點(diǎn)結(jié)合大大降低了假陽(yáng)性率，檢測(cè)結(jié)果更精準(zhǔn)

標(biāo)記物單克隆抗抗鈣抑肽抗體單克隆抗降鈣素抗體鈣抑肽降鈣素降鈣素鈣抑肽B·R·A·H·M·SPCT采用相同的Cutoff值中國(guó)現(xiàn)有的B·R·A·H·M·SPCT?

梅里埃PCT20PCT-Q21羅氏PCT22PCT-LIA23ElecsysBRAHMSPCT產(chǎn)品性能參數(shù)參數(shù)ElecsysBRAHMSPCT規(guī)格100test/盒樣本類(lèi)型血清，肝素鋰或K3-EDTA抗凝的血漿樣本量30μL檢測(cè)時(shí)間18分鐘檢測(cè)范圍0.02-100ng/ml分析靈敏度≤0.02ng/ml功能靈敏度≤0.06ng/ml稀釋批內(nèi)變異<0.01ng/ml7-9%<1.0ng/ml2%>10ng/ml1-2%批間變異<0.01ng/ml9-16%<1.0ng/ml3-4%>10ng/ml3-4%所需樣本量少寬廣的檢測(cè)范圍檢測(cè)時(shí)間短極佳的批內(nèi)和批間的精密度適用于所有羅氏免疫分析平臺(tái)，且結(jié)果一致性高ElecsysBRAHMSPCT

健康人的Cut-Off值=0.05ng/mL95%percentile0.046ng/mln

=

492目前所有的PCT均溯源至BRAHMSPCTLIA，均采用一致的cut-off值ElecsysBRAHMSPCTCut-off值ElecsysBRAHMSPCT(ng/ml)PCTng/mlSIRS膿毒癥重度膿毒癥臨床意義<0.563255排除膿毒癥≥0.532461120.5-2灰區(qū)病例數(shù)9671117_____<28855182-0.5灰區(qū)≥271699確診膿毒癥PCT水平Cut-off=0.5ng/mlCut-off=2ng/ml敏感度特異性敏感度特異性SIRSvs膿毒癥65%66%23%93%SIRSvs重度膿毒癥9