ICS67

X04

DB13

河北省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB13/T5189.7—2020

天然植物提取物中危害成分檢測

第7部分：天然番茄紅中苯并[α]芘的測定

2020-06-28發(fā)布2020-07-28實(shí)施

河北省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB13/T5189.7—2020

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

DB13/T5189《天然植物提取物中危害成分的測定》共分12個(gè)部分：

——第1部分：亞硝酸鹽的測定；

——第2部分：二氧化硫的測定；

——第3部分：正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙醇5種有機(jī)溶劑殘留的測定；

——第4部分：辣椒提取物中砷、鉛、鎘、鉻、汞的測定；

——第5部分：萬壽菊提取物中對(duì)氧基苯胺的測定；

——第6部分：萬壽菊提取物中乙氧基喹啉的測定；

——第7部分：天然番茄紅中苯并[α]芘的測定；

——第8部分：辣椒提取物中蘇丹紅的測定；

——第9部分：辣椒提取物中叔丁基對(duì)苯二酚的測定；

——第10部分：辣椒紅中赭曲霉毒素A的測定；

——第11部分：葉黃素中苯的測定；

——第12部分：甜菊糖苷中鄰苯二甲酸酯的測定。

本部分為DB13/T5189的第7部分。

本標(biāo)準(zhǔn)由河北省市場監(jiān)督管理局提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司、河北省食品檢驗(yàn)研究院、石家莊海關(guān)技術(shù)中

心、清河食品藥品檢驗(yàn)所。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：連運(yùn)河、楊清山、史國華、吉桂珍、程遠(yuǎn)欣、艾連峰、張鳳霞。

I

DB13/T5189.7—2020

天然植物提取物中危害成分檢測

第7部分：天然番茄紅中苯并[α]芘的測定

1范圍

本部分規(guī)定了天然番茄紅中苯并[α]芘的高效液相色譜-熒光檢測器測定方法。

本部分適用于天然番茄紅中苯并[α]芘的測定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

3原理

試樣經(jīng)溶劑提取、凝膠滲透色譜凈化后，用反相高效液相色譜分離，熒光檢測器檢測，根據(jù)色譜

峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

4試劑或材料

警告：苯并[α]芘是一種已知的強(qiáng)致癌物質(zhì)，測定時(shí)應(yīng)特別注意安全防護(hù)。

除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

4.1試劑

4.1.1環(huán)己烷（C6H12）。

4.1.2乙酸乙酯（C4H8O2）。

4.1.3乙腈（C2H3N）：色譜純。

4.2試劑配制

環(huán)己烷—乙酸乙酯：1+1（體積比）：量取500mL環(huán)己烷與500mL乙酸乙酯混合均勻。

4.3標(biāo)準(zhǔn)品

苯并[α]芘：（C20H12，CAS:50-32-8）：純度≥99%，或具有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書。

4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1

DB13/T5189.7—2020

4.4.1苯并[α]芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1.0mg/L）：稱取苯并[α]芘標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量（精確值0.01mg），

用乙腈稀釋至濃度為1.0mg/L，4℃避光保存，有效期1年。

4.4.2苯并[α]芘標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（10.0μg/L）：取苯并[α]芘準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1.0mg/L）1.00mL，

用乙腈定容至100mL，4℃避光保存，有效期1個(gè)月。

4.4.3標(biāo)準(zhǔn)使用溶液配制：準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0mg/L）0.1mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL

至100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，充分搖勻，得到濃度為1μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、

50μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)使用液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

5儀器和設(shè)備

5.1高效液相色譜儀：配有熒光檢測器。

5.2凝膠滲透色譜凈化系統(tǒng)（GPC）。

5.3分析天平：感量為0.1mg和0.01mg。

5.4渦旋混勻器。

5.5超聲波清洗器。

5.6離心機(jī)。

5.7旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

6試驗(yàn)步驟

6.1提取

稱取樣品0.1g（精確至0.1mg）于50mL離心管中，加入環(huán)己烷—乙酸乙酯混合溶液25mL，混勻，

超聲提取10min后，離心5min，轉(zhuǎn)速5000r/min。上清液過0.45μm有機(jī)濾膜后作待凈化液。

6.2凈化

取待凈化液于GPC樣品管中，進(jìn)行GPC凈化，進(jìn)樣量5mL，收集洗脫液，于40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。

殘?jiān)?mL乙腈超聲溶解，過0.45μm有機(jī)濾膜，供液相色譜檢測。

凝膠滲透色譜凈化參考條件：

a)凝膠滲透色譜凈化系統(tǒng)；

b)凝膠柱規(guī)格400mm*25mm（內(nèi)徑）；

c)色譜柱填料Bio-BeadsS-X3（38～75μm），30g；

d)流動(dòng)相：環(huán)己烷—乙酸乙酯：1+1（體積比）；

e)流速：5mL/min；

f)收集時(shí)間：17～27min（具體時(shí)間以實(shí)際標(biāo)樣為準(zhǔn)）。

6.3測定

6.3.1色譜參考條件

色譜參考條件如下：

2

DB13/T5189.7—2020

a)色譜柱：C18，250mm×4.6mm，5μm，或性能相當(dāng)者；

b)流動(dòng)相：乙腈—水：88+12（體積比），等度洗脫；

c)柱溫：40oC；

d)激發(fā)波長：384nm，發(fā)射波長：406nm；

e)流速：1.0mL/min；

f)進(jìn)樣量：10μL。

6.3.2測定

分別檢測標(biāo)準(zhǔn)使用溶液和制備的樣品液，以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量，色譜圖見附錄A。

6.3.3空白試驗(yàn)

除不加試樣外，均按上述測定條件和步驟進(jìn)行。

7試驗(yàn)結(jié)果

試樣中苯并[α]芘含量按式（1）計(jì)算。

AcsV

X………………（1）

Ams

式中：

X—試樣中苯并[α]芘的含量，單位為微克每千克（g/kg）；

A—樣液中苯并[α]芘的色譜峰面積；

cs—標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中苯并[α]芘的濃度，單位為微克每升（μg/L）；

V—樣品的最終稀釋提交，單位為毫升（mL）；

As—標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中苯并[α]芘的色譜峰面積；

m—試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，

保留三位有效數(shù)字。

8精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

9檢出限和定量限

檢出限為10.0μg/kg，定量限為35.0μg/kg。

3

DB13/T5189.7—2020

AA

附錄A

（資料性附錄）

高效液相色譜圖

苯并[α]芘標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，如圖A.1數(shù)據(jù)文件名所示。:std-甜味2.lcd

樣品ID:std

mV

檢測器AEx:384nm,Em:406nm

250

苯并[α]芘

200

150

100

50

0

0.02.55.07.510.012.515.017.520.022.5min

圖A.1苯并[α]芘標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

樣品中的苯并[]芘檢測色譜圖，如圖A.2所示。

α數(shù)據(jù)文件名:YL3-0133-180628C.lcd

樣品ID:std011

mV

175檢測器AEx:384nm,Em:406nm

150

125

100

75