《達(dá)烏里秦艽種子檢驗(yàn)規(guī)程》編制說明工作簡(jiǎn)況立項(xiàng)情況2025年10月內(nèi)蒙古蒙草草業(yè)科技有限公司向內(nèi)蒙古標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)提出《達(dá)烏里秦艽種子檢驗(yàn)規(guī)程》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)申請(qǐng)。2025年11月，內(nèi)蒙古標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)“關(guān)于下達(dá)2025年第10批2項(xiàng)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目的通知”（內(nèi)標(biāo)協(xié)(2025)040號(hào)），批準(zhǔn)《達(dá)烏里龍膽種苗質(zhì)量分級(jí)》立項(xiàng)。提出單位：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)歸口單位：內(nèi)蒙古標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)起草單位：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)、內(nèi)蒙古蒙草草業(yè)科技有限公司、蒙草生態(tài)環(huán)境（集團(tuán)）股份有限公司、內(nèi)蒙古億赫本草生物科技有限公司、武川縣匯德興業(yè)林業(yè)生態(tài)開發(fā)有限公司。起草人：花梅、林世紀(jì)、王俊杰、張曉明、李曉杰、張躍華、高若凡、高守輿、劉思泱、孟興業(yè)。制定標(biāo)準(zhǔn)的目的和意義種子質(zhì)量檢驗(yàn)是對(duì)種子生理、遺傳、健康、純度等質(zhì)量特性進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法和程序。種子質(zhì)量檢驗(yàn)的目標(biāo)是確保種子達(dá)到或超過某一最低標(biāo)準(zhǔn)，在質(zhì)量檢驗(yàn)的環(huán)節(jié)中保證了種子可靠良好的繁殖能力，保障了從業(yè)人員對(duì)生產(chǎn)、加工、收售環(huán)節(jié)中對(duì)種子質(zhì)量的把控。達(dá)烏里秦艽（GentianadahuricaFischer）又名小秦艽、達(dá)烏里龍膽，為龍膽科（Gentianaceae)龍膽屬（Gentiana）多年生草本植物，多生長(zhǎng)與向陽山坡、田邊、路旁、河灘、水溝旁等。作為中藥秦艽的基原植物，收載于《中國(guó)藥典》2015年版，以其干燥根入藥，具有祛風(fēng)濕、退虛熱、止痛的功效。《蒙藥正典》《藏藥志》等經(jīng)典著作中收載，其干燥花分別作為蒙藥“呼和—珠勒根—其木格”和藏藥“吉解那保”，具有清熱解毒、止咳祛痰的功效，主治肺熱咳嗽、咽喉熱、咽喉腫痛、毒熱、瘟熱等。隨著對(duì)達(dá)烏里秦艽的化學(xué)成分和藥理效應(yīng)的深入研究，其使用量逐步上升，導(dǎo)致野生資源被過度開采，大部分藥材以采收后直接進(jìn)行加工炮制或干燥處理，這使得其野生資源處于非常危險(xiǎn)的狀態(tài)，遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求。現(xiàn)階段，關(guān)于龍膽科植物的研究主要聚焦于其化學(xué)成分和藥用價(jià)值。研究表明不同地區(qū)的秦艽種子在凈度、含水量、發(fā)芽率和千粒重等方面有明顯的差異。達(dá)烏里秦艽的種子體積小，不能有效地儲(chǔ)存養(yǎng)分，自然環(huán)境下的萌發(fā)率相對(duì)較低，因此對(duì)野生種質(zhì)進(jìn)行保護(hù)與開發(fā)迫在眉睫。制定《達(dá)烏里秦艽種子檢驗(yàn)規(guī)程》的目的是規(guī)范達(dá)烏里秦艽種植企業(yè)的種源質(zhì)量控制和規(guī)范種子生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品質(zhì)量控制，提高企業(yè)生產(chǎn)效益和質(zhì)量監(jiān)督水平，提高藥材產(chǎn)量，降低生產(chǎn)成本、強(qiáng)化藥材和種子產(chǎn)品的質(zhì)量控制等諸多方面具有重要的實(shí)際意義。本標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施后對(duì)全國(guó)從事達(dá)烏里秦艽種植企業(yè)的種源質(zhì)量控制、從事達(dá)烏里秦艽種子生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品質(zhì)量控制以及市場(chǎng)流通的種子質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督具有指導(dǎo)和規(guī)范作用，對(duì)促進(jìn)達(dá)烏里秦艽藥材規(guī)范化生產(chǎn)和產(chǎn)業(yè)發(fā)展，提高藥材產(chǎn)量和質(zhì)量，推動(dòng)達(dá)烏里秦艽藥材基地建設(shè)等多方面具有重要作用。編制過程（一）分工情況內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)接到立項(xiàng)批準(zhǔn)后，組建了專門工作組，明確了負(fù)責(zé)人和業(yè)務(wù)能力強(qiáng)、工作責(zé)任心強(qiáng)的參編人員組成課題組，進(jìn)行指標(biāo)驗(yàn)證及標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容編制，開展起草標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)稿的工作。表1標(biāo)準(zhǔn)參與編寫人員及其所做的工作姓名工作單位職稱主要工作內(nèi)容花梅內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)中級(jí)項(xiàng)目主持人，負(fù)責(zé)項(xiàng)目統(tǒng)籌。林世紀(jì)內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)其他起草人，負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)編寫和修訂。王俊杰內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)教授主要起草人，負(fù)責(zé)項(xiàng)目制定統(tǒng)籌協(xié)調(diào)。張曉明內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)中級(jí)主要起草人，負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)編寫、驗(yàn)證和修訂。李曉杰內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)中級(jí)起草人，參與標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)驗(yàn)證張躍華內(nèi)蒙古蒙草草業(yè)科技有限公司畜牧師主要起草人，負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)編寫、驗(yàn)證和修訂。高若凡內(nèi)蒙古蒙草草業(yè)科技有限公司助理工程師起草負(fù)責(zé)人，負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)編寫、驗(yàn)證和修訂、起草等全過程。高守輿內(nèi)蒙古蒙草草業(yè)科技有限公司其他主要參加人，參與方案設(shè)計(jì)、標(biāo)準(zhǔn)編寫、指標(biāo)驗(yàn)證和修訂劉思泱蒙草生態(tài)環(huán)境（集團(tuán)）股份有限公司中級(jí)起草人，參與標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)驗(yàn)證孟興業(yè)武川縣匯德興業(yè)林業(yè)生態(tài)開發(fā)有限公司其他主要參加人，參與標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)驗(yàn)證起草階段內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)和內(nèi)蒙古蒙草草業(yè)科技有限公司根據(jù)達(dá)烏里秦艽植物生長(zhǎng)實(shí)際情況，對(duì)龍膽科種子檢驗(yàn)的主要技術(shù)參數(shù)進(jìn)行充分調(diào)查研究、綜合分析和反復(fù)驗(yàn)證，召開標(biāo)準(zhǔn)編制部署會(huì)，由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)、內(nèi)蒙古蒙草草業(yè)科技有限公司等標(biāo)準(zhǔn)起草組成員合作完成編寫工作，進(jìn)行了必要的文字修改并判定標(biāo)準(zhǔn)的具體內(nèi)容。邀請(qǐng)了有關(guān)專家進(jìn)行了審稿和咨詢，形成了本標(biāo)準(zhǔn)的預(yù)審定稿。2025年10月提出《達(dá)烏里秦艽種苗質(zhì)量分級(jí)》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制定申請(qǐng)，編寫形成標(biāo)準(zhǔn)草案，報(bào)送內(nèi)蒙古標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)，立項(xiàng)評(píng)審會(huì)通過立項(xiàng)。征求意見階段2025年11月，編制單位按照立項(xiàng)審查的意見進(jìn)行了修改，形成了《達(dá)烏里秦艽種子檢驗(yàn)規(guī)程》征求意見稿，報(bào)送內(nèi)蒙古標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)進(jìn)行網(wǎng)上公示征求意見。送審階段2025年X月，編制組征求了相關(guān)領(lǐng)域內(nèi)XXX、XXX、XXX等X家單位的X位專家的意見和建議。編制組按照專家們的意見，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿進(jìn)行了進(jìn)一步修改。編制組共收到X條修改意見，其中X條予以采納，X條未采納，完成征求意見稿的修改，形成送審稿。報(bào)批階段2025年XX月XX日，由內(nèi)蒙古標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)組織召開《達(dá)烏里秦艽種子檢驗(yàn)規(guī)程》地方標(biāo)準(zhǔn)審查會(huì)，審查委員會(huì)聽取標(biāo)準(zhǔn)起草組介紹標(biāo)準(zhǔn)編制說明，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)文本逐條審查，并形成會(huì)議紀(jì)要。工作組認(rèn)真聽取審查意見，仔細(xì)整理會(huì)議紀(jì)要和修改意見，完善送審材料，形成報(bào)批稿，報(bào)送內(nèi)蒙古標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)審批發(fā)布。四、制定標(biāo)準(zhǔn)的原則和依據(jù)，與現(xiàn)行法律、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系（一）原則和依據(jù)(1)科學(xué)性原則本標(biāo)準(zhǔn)的制定是在大量試驗(yàn)研究和技術(shù)集成的基礎(chǔ)上完成，并且本文件的編寫內(nèi)容與格式嚴(yán)格按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)注重檢驗(yàn)指標(biāo)、檢驗(yàn)方法、評(píng)價(jià)方法等技術(shù)方法以及名詞術(shù)語使用和操作規(guī)程描述的科學(xué)性。(2)實(shí)用性原則本標(biāo)準(zhǔn)的制定充分考慮了種子檢驗(yàn)的可操作性，注重每項(xiàng)檢驗(yàn)指標(biāo)和操作規(guī)程的實(shí)用性以及檢驗(yàn)方法的針對(duì)性，力求專業(yè)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)和企業(yè)質(zhì)檢部門使用本標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)用性。(3)先進(jìn)性原則本標(biāo)準(zhǔn)的制定充分考慮了達(dá)烏里秦艽種子的生產(chǎn)現(xiàn)狀和技術(shù)水平的發(fā)展趨勢(shì)，注重技術(shù)手段的先進(jìn)性和標(biāo)準(zhǔn)的引導(dǎo)和指引作用，積極推薦應(yīng)用現(xiàn)代技術(shù)，力求標(biāo)準(zhǔn)具有前瞻性。2、編制依據(jù)依托內(nèi)蒙古科技計(jì)劃項(xiàng)目《珍惜瀕危藥材小秦艽人工繁育關(guān)鍵技術(shù)研究與示范》和課題《小秦艽野生栽培馴化及種子繁育關(guān)鍵技術(shù)研究》進(jìn)行種子檢驗(yàn)試驗(yàn)，參照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》、《牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程》（GB/T

2930.1-2001）、《中華人民共和國(guó)藥典》指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)指標(biāo)編制。與現(xiàn)行法律、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系本標(biāo)準(zhǔn)制定符合《中華人民共和國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化法》《地方標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》等相關(guān)法律、法規(guī)、政策的規(guī)定，屬于內(nèi)蒙古地區(qū)首次提出制定，不存在與相關(guān)法律法規(guī)相抵觸之處，也不與其他標(biāo)準(zhǔn)相沖突。本標(biāo)準(zhǔn)制定屬于首次提出制定，不存在與其他標(biāo)準(zhǔn)相沖突，經(jīng)全國(guó)標(biāo)準(zhǔn)信息公共服務(wù)平臺(tái)檢索，目前國(guó)內(nèi)外均無達(dá)烏里秦艽種子檢驗(yàn)規(guī)程。檢索詞序號(hào)標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)標(biāo)準(zhǔn)名稱出處龍膽種子檢驗(yàn)1T/CACM1056.15-2017中藥材種子種苗滇龍膽種子中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)2DB23/T1447-2011龍膽種子質(zhì)量分級(jí)及檢驗(yàn)規(guī)程黑龍江龍膽種子質(zhì)量1DB21/T3925.2-2024道地藥材種子質(zhì)量分級(jí)第2部分：龍膽遼寧2DB53/T378-2012滇龍膽種子和種苗質(zhì)量要求云南秦艽種子規(guī)程1T/YGIIA021-2023維西秦艽種子種苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)云南2DB62/T4193-2020秦艽種子繁育技術(shù)規(guī)程甘肅3DB53/T539-2013粗莖秦艽種子種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程云南五、主要條款的說明，主要技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、試驗(yàn)驗(yàn)證的論述（一）主要條款說明《達(dá)烏里秦艽種子檢驗(yàn)規(guī)程》共包括四章。第一章規(guī)定了該技術(shù)的適用范圍；第二章對(duì)規(guī)范性引用文件做了說明；第三章對(duì)該技術(shù)的術(shù)語進(jìn)行了定義；第四章檢驗(yàn)方法。（二）主要技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、試驗(yàn)論證的論述1材料與方法1.1材料達(dá)烏里秦艽（GentianadahuricaFischer）種子于2022年秋季采自內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市武川縣大青山種植基地，于4℃冰箱儲(chǔ)藏保存。1.2方法1.2.1扦樣參照《牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程扦樣》（GB/T2930.1-2001）中規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)化方法，對(duì)送檢樣品及試驗(yàn)樣品的質(zhì)量要求進(jìn)行科學(xué)測(cè)定與準(zhǔn)確確定。凈度分析試驗(yàn)的種子樣本量應(yīng)確保不少于2500粒。為確保分析結(jié)果的可靠性，送檢樣品的總質(zhì)量需達(dá)到凈度分析所需樣本量的10倍以上，采用規(guī)范的四分法進(jìn)行樣品分取。1.2.2凈度分析參照《牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程凈度分析》（GB/T2930.2-2001）中關(guān)于凈度分析的具體規(guī)定，針對(duì)達(dá)烏里秦艽種子的凈度分析，需要先去除摻雜其中的雜質(zhì)成分以及其他植物種子，再測(cè)定凈種子所占比例。1.2.3真實(shí)性檢驗(yàn)隨機(jī)數(shù)取種子100粒，測(cè)量記錄其大小、形狀、種皮顏色、斑紋及附屬物，重復(fù)3次。1.2.4重量測(cè)定參照《牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程重量測(cè)定》（GB/T2930.9-2001）運(yùn)用百粒計(jì)數(shù)法、五百粒計(jì)數(shù)法以及千粒計(jì)數(shù)法這三種不同方式開展測(cè)定工作。1.2.5含水量測(cè)定參照《牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程水分含量的測(cè)定》（GB/T2930.8-2001），采用高恒溫（130±2）℃烘干法和低恒溫（105±2）℃烘干法對(duì)種子所含水分量展開測(cè)定。1.2.6生活力測(cè)定測(cè)定方法的選擇測(cè)定生活力時(shí)，選擇紅墨水法、氯化三苯基四氮唑（TTC）法、溴麝香草酚藍(lán)（BTB）法以及紙上熒光法。TTC染色觀測(cè)方法、溫度、時(shí)間和濃度的確定取一定數(shù)量的達(dá)烏里秦艽凈種子經(jīng)水浸處理使其充分吸水膨脹后，選取50粒種子采用10%次氯酸鈉溶液進(jìn)行2min脫色處理，隨后用蒸餾水反復(fù)沖洗3～4次；另取50粒種子，用解剖刀沿著胚的中軸線將其縱向剖切成兩半；再選取50粒種子，將它們置于沸水浴中處理5min，以此消除種子的生活力，作為對(duì)照樣本，每組試驗(yàn)均設(shè)置4次重復(fù)。在室溫條件下黑暗染色24h，選出最適的觀察方式。將經(jīng)最佳觀察條件處理的種子分別置于20℃、30℃、35℃和40℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，黑暗染色，每隔1h觀察一次，直到被染色的種子數(shù)變化很小或者不再變化為止，篩選確定適宜的染色溫度條件及時(shí)間參數(shù)，通過比較0.5%和1%兩種濃度的TTC溶液染色效果，以確定達(dá)烏里秦艽種子染色的最適試劑濃度。有生活力種子判定標(biāo)準(zhǔn)：染色結(jié)束，取出種子用清水沖洗，在保持種子濕潤(rùn)的條件下，觀察切面，全部染色最大面積從胚根尖端量起1/3胚根的種子為有生活力的種子，其它均為無生活力的種子。1.2.7發(fā)芽前打破休眠處理的選擇選取達(dá)烏里秦艽凈種子，用75%乙醇進(jìn)行發(fā)芽前消毒處理2min，蒸餾水沖洗3次后，進(jìn)行不同處理。浸種處理不同浸種時(shí)間：浸種時(shí)間分別設(shè)置為0h、12h、24h、48h、60h、72h、84h，共七個(gè)處理。流水處理不同流水沖洗時(shí)間：分別設(shè)置沖洗時(shí)間為6h、12h、24h、36h、48h，共5個(gè)處理。激素處理赤霉素(GA3)溶液：分別用濃度為100、200、300、400、500、600ppm的赤霉素(GA3)溶液浸種2h、12h、24h，共18個(gè)處理。吲哚乙酸（IAA）溶液：分別用濃度為2mg/L、4mg/L、6mg/L、8mg/L、10mg/L的吲哚乙酸（IAA）溶液浸種24h，共5個(gè)處理。α-萘乙酸（NAA）溶液：分別用濃度為10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L的α-萘乙酸（NAA）溶液浸種24h，共5個(gè)處理。取出種子，將不同處理后的種子播入鋪有雙層濾紙的培養(yǎng)皿，每皿100粒，四次重復(fù)，在20℃、12h光照、12h黑暗的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中進(jìn)行發(fā)芽，種子萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)為胚根長(zhǎng)度大于或等于種子的一半。每天觀察記錄種子萌發(fā)情況。冷層積處理選取達(dá)烏里秦艽凈種子，用無紡布濾袋裝好，分別用濕度為0%、5%、10%、15%、20%的河沙進(jìn)行處理（種子上下河沙厚度均為5cm），置于圓口塑料花缽(直徑12.5cm，高20cm)內(nèi)，后將花缽放于4℃進(jìn)行冷層積處理，從第10d開始取種，每隔10d取一次，持續(xù)觀測(cè)60d，編號(hào)如表所示。取出種子，將不同處理后的種子播入鋪有雙層濾紙的培養(yǎng)皿，每皿100粒，四次重復(fù)，在20℃、12h光照、12h黑暗的恒溫恒濕培養(yǎng)。表1冷層積處理編號(hào)濕度/%時(shí)間/dC1020C2030C3040C4050C5060C6520C7530C8540C9550C10560C111020C121030C131040C141050C151060C161520C171530C181540C191550C2015601.2.8發(fā)芽實(shí)驗(yàn)選取100粒凈種子，先用75%乙醇消毒2min，經(jīng)蒸餾水漂洗3次后，均勻擺放在鋪有雙層濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)。將培養(yǎng)皿移入恒溫培養(yǎng)箱，每日補(bǔ)充水分維持濾紙濕潤(rùn)度，并定時(shí)觀察記錄發(fā)芽情況計(jì)算發(fā)芽率。適宜發(fā)芽溫度的確定選取達(dá)烏里秦艽凈種子，進(jìn)行消毒及發(fā)芽前破除休眠處理，設(shè)置15℃、20℃、25℃、30℃恒溫處理及15～25℃變溫處理，將種子播入盛有雙層濾紙的培養(yǎng)皿中，保證每皿有100粒種子，設(shè)置四次重復(fù)。自種子置入培養(yǎng)箱起，經(jīng)過24h后開始觀測(cè)發(fā)芽數(shù)，持續(xù)記錄至發(fā)芽終止，當(dāng)連續(xù)3d無新增發(fā)芽時(shí)結(jié)束試驗(yàn)，最終確定最適發(fā)芽溫度。適宜發(fā)芽床的確定選取達(dá)烏里秦艽凈種子，進(jìn)行消毒及發(fā)芽前破除休眠處理，設(shè)置紙上、紙間、沙上和沙間四個(gè)處理，將種子播入不同發(fā)芽床的培養(yǎng)皿中，每皿100粒，20℃培養(yǎng)，四次重復(fù)，自種子置入培養(yǎng)箱后24h起，開始觀測(cè)發(fā)芽數(shù)，持續(xù)記錄至發(fā)芽終止，當(dāng)連續(xù)3d無新增發(fā)芽時(shí)結(jié)束試驗(yàn)，最終確定最適發(fā)芽床。適宜發(fā)芽光照的確定選取達(dá)烏里秦艽凈種子，進(jìn)行消毒及發(fā)芽前破除休眠處理，設(shè)置12h光照和12h黑暗交替、24h光照和24h黑暗處理，將供試種子以每皿100粒均勻點(diǎn)播于雙層濾紙培養(yǎng)皿中，置于20℃恒溫條件下培養(yǎng)，共設(shè)置四次重復(fù)，自種子置入培養(yǎng)箱后24h起，開始觀測(cè)發(fā)芽數(shù)，持續(xù)記錄至發(fā)芽終止，當(dāng)連續(xù)3d無新增發(fā)芽時(shí)結(jié)束試驗(yàn)，最終確定最適發(fā)芽光照。發(fā)芽計(jì)數(shù)時(shí)間確定最適萌發(fā)條件處理下，當(dāng)發(fā)芽種子均已發(fā)育形成具備穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的幼苗形態(tài)，此時(shí)便于準(zhǔn)確區(qū)分與鑒定正常幼苗及異常幼苗的時(shí)刻，應(yīng)設(shè)定為發(fā)芽試驗(yàn)的初始計(jì)數(shù)時(shí)間節(jié)點(diǎn)；當(dāng)發(fā)芽率達(dá)到最大值，且之后連續(xù)3d都沒新種子發(fā)芽，這個(gè)時(shí)間就是終止計(jì)數(shù)時(shí)間。2結(jié)果分析2.1真實(shí)性檢驗(yàn)達(dá)烏里秦艽種子如圖1所示，形狀為矩圓形或狹矩形，種皮表面呈現(xiàn)光澤，呈現(xiàn)條紋狀的細(xì)網(wǎng)紋飾，呈現(xiàn)出清晰的網(wǎng)眼結(jié)構(gòu)，該網(wǎng)紋結(jié)構(gòu)凸起成脊且構(gòu)成網(wǎng)紋狀；相應(yīng)的種臍則位于種子基部的尖端處，圓形凹陷，斷面呈現(xiàn)出網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，邊緣不規(guī)則、中央微凸，同時(shí)還伴有腦狀的物塊突起，顏色主要分為綠色、淺褐色和深褐色3種顏色，長(zhǎng)度范圍為1.3327～1.3870mm，寬度范圍為0.5370～0.5563mm，厚度范圍為0.4490～0.5077mm。圖SEQ圖\*ARABIC1達(dá)烏里秦艽種子形態(tài)2.2扦樣依據(jù)《牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程扦樣》（GB/T2930.1-2001）的規(guī)定，應(yīng)執(zhí)行相應(yīng)規(guī)定，送檢樣品的最小重量應(yīng)滿足含有不少于2500粒種子的條件，以保證凈度檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。達(dá)烏里秦艽種子的千粒重測(cè)定值為0.2058～0.2087g，因此2500粒種子約重0.52～0.56g之間。為保證有足夠的凈種子，凈度分析一份全試樣的最小重量確定為1g，或者一份半試樣最小重量確定為0.5g；送檢樣品的重量應(yīng)超過凈度分析量的10倍以上，送驗(yàn)樣品的最小重量確定為20g。2.3凈度分析試驗(yàn)所用種子經(jīng)篩選分離后，樣品中仍存在多種雜質(zhì)及異種植物種子，主要包括植物殘?bào)w（如枝葉、花瓣）、土壤顆粒、砂石以及發(fā)育不良的敗育種子等。其他種子雖與達(dá)烏里秦艽種子大小近似，但可以從形態(tài)和顏色可以輕易鑒別。凈度分析結(jié)果表明，達(dá)烏里秦艽種子的平均純凈度為78.91%，各重復(fù)樣本間的變異系數(shù)低于5%，證實(shí)該檢測(cè)方法可靠有效，分析結(jié)果見表2。表2達(dá)烏里秦艽種子凈度分析樣本原樣品重/g凈種子重/g其他種子重/g雜質(zhì)重/g分析后樣品重/g增失/%凈度/%L12.00131.58590.09540.22551.90684.7%79.24%L22.00111.57830.10240.22791.90864.6%78.87%L32.00121.57340.09770.23451.90564.8%78.62%2.4重量測(cè)定三種不同的方法測(cè)定達(dá)烏里秦艽重量結(jié)果表明，三種方法測(cè)定后的結(jié)果均有效且不存在顯著性差異（P＜0.05）。達(dá)烏里秦艽種子的重量測(cè)定優(yōu)先采用千粒法，該方法表現(xiàn)出最小的變異系數(shù)和最優(yōu)的穩(wěn)定性。從測(cè)定結(jié)果可以得出，達(dá)烏里秦艽種子平均千粒重在0.1870g～0.2252g之間（見表3）。表3三種方法測(cè)定達(dá)烏里秦艽種子千粒重結(jié)果比較方法千粒重(g)變異系數(shù)(CV)5%顯著水平百粒法0.20780.0134a五百粒法0.21350.0121a千粒法0.20760.0076a注：小寫字母代表指標(biāo)的顯著性（P＜0.05）。2.5含水量測(cè)定達(dá)烏里秦艽種子在不同烘干條件下表現(xiàn)出類似的失水模式，初期脫水速率顯著加快，一定時(shí)間后進(jìn)入緩慢失水，最后水分變化基本趨于穩(wěn)定。如圖2所示，兩種恒溫烘干方式的水分喪失趨勢(shì)基本一致，3h后含水量測(cè)定結(jié)果差異不顯著。綜合分析表明，高恒溫處理僅需1.5h即可完成種子烘干，且水分喪失量保持穩(wěn)定。因此，采用1.5h高恒溫烘干作為達(dá)烏里秦艽種子含水量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)方法。圖2兩種方法測(cè)定達(dá)烏里秦艽種子的含水量2.6生活力測(cè)定四種檢測(cè)生活力方法的結(jié)果顯示，無論是紅墨水染色法還是紙上熒光染色法，其測(cè)得的種子生活力數(shù)值均顯著低于20℃標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)結(jié)果，說明這兩種染色方法對(duì)達(dá)烏里秦艽種子生活力的評(píng)估存在一定局限性。BTB染色法和TTC染色法的生活力水平高于其種子常規(guī)發(fā)芽率，而TTC染色法與其他方法結(jié)果差異顯著（P<0.05），且TTC染色法，方便操作，結(jié)果清晰易觀察，綜合分析，TTC染色法可以作為達(dá)烏里秦艽種子活力檢測(cè)的最優(yōu)選擇（見表4）。達(dá)烏里秦艽種子在最優(yōu)染色條件（40℃，6h）下，采用0.1%、0.5%和1%三種TTC濃度處理時(shí)，染色效果與種子活力表現(xiàn)存在顯著差異。由表4可見，種子活力隨TTC濃度升高而增強(qiáng)，其中1%和0.5%處理組的測(cè)定值顯著高于0.1%組（P<0.05）。綜合分析表明，1%TTC溶液最適合用于達(dá)烏里秦艽種子的活力檢測(cè)。綜合達(dá)烏里秦艽種子TTC染色法的觀測(cè)方式、溫度、時(shí)間和染色液濃度的結(jié)果，研究最終確定，達(dá)烏里秦艽種子TTC法檢測(cè)的最優(yōu)參數(shù)組合包括：40℃染色溫度、6h處理時(shí)間以及1%TTC濃度。表4不同方法測(cè)定達(dá)烏里秦艽種子生活力比較方法發(fā)芽率（%）生活力（%）5%顯著水平TTC染色法——94.00aBTB染色法——89.67b紅墨水法——45.22d紙上熒光法——18.34e20℃常規(guī)發(fā)芽68.25——c2.7達(dá)烏里秦艽種子休眠特性及萌發(fā)前處理研究2.7.1種子自然吸漲動(dòng)態(tài)達(dá)烏里秦艽種子的吸水過程隨時(shí)間變化呈現(xiàn)出明顯的階段性規(guī)律，如圖3所示。首先是快速吸水期，發(fā)生在前4小時(shí)內(nèi)。在此期間，種子吸水率迅速上升，至第4小時(shí)，吸水率已達(dá)到68.54%。這一階段，種子主要依靠吸脹力進(jìn)行水分吸收。第二階段是緩慢吸水期，從4小時(shí)持續(xù)至8小時(shí)。在這個(gè)階段，種子的吸水率上升速度明顯放緩，逐漸趨向于飽和狀態(tài)。最后是吸水停滯期，發(fā)生在8小時(shí)之后。此時(shí)，達(dá)烏里秦艽種子的吸水率基本保持不變，說明種子已經(jīng)達(dá)到了其最大吸水能力，即吸水飽和。從整個(gè)吸水過程來看，達(dá)烏里秦艽種子表現(xiàn)出良好的透水性，不存在吸水障礙。這表明吸水不是限制其萌發(fā)的因素之一。這一發(fā)現(xiàn)對(duì)于理解達(dá)烏里秦艽種子的萌發(fā)機(jī)制以及優(yōu)化其萌發(fā)條件具有重要意義。圖3達(dá)烏里龍膽種子的自然吸水率2.7.2種子自然萌發(fā)對(duì)未經(jīng)任何處理的達(dá)烏里秦艽種子在20℃紙上發(fā)芽，發(fā)芽率如REF_Ref23099\h圖4所示，在置床后第8天露白，第9天少量發(fā)芽，到第13天發(fā)芽數(shù)大幅增加，發(fā)芽率大約在27%左右。試驗(yàn)第19天時(shí)，發(fā)芽率達(dá)到最大值達(dá)到60.3%，且19天后再無新種子發(fā)芽。種子發(fā)芽率與前期試驗(yàn)中種子活力結(jié)果有較大差異，故懷疑種子存在一定的休眠情況。圖4達(dá)烏里龍膽種子的自然萌發(fā)動(dòng)態(tài)2.7.3發(fā)芽前打破休眠處理浸種對(duì)達(dá)烏里秦艽種子萌發(fā)的影響如圖5所示。當(dāng)浸種時(shí)間為24h時(shí)，發(fā)芽率最高，為86.75%，較對(duì)照提高23.25%與其他浸種時(shí)間差異顯著（P＞0.05）。因此，浸種24h是此方法中提高達(dá)烏里秦艽種子發(fā)芽率最佳處理。圖5不同浸種時(shí)間對(duì)達(dá)烏里秦艽種子發(fā)芽率的影響流水沖洗對(duì)種子萌發(fā)的影響達(dá)烏里秦艽種子經(jīng)流水沖洗后萌發(fā)有明顯促進(jìn)作用，如REF_Ref24562\h表5所示。不同流水沖洗時(shí)間均能有效提前萌發(fā)開始時(shí)間，縮短萌發(fā)歷期。在流水沖洗12h條件下，發(fā)芽率最高，達(dá)到88%，與其他沖洗時(shí)間的發(fā)芽率沒有顯著差異（P＞0.05），且所有處理?xiàng)l件下發(fā)芽率均高于達(dá)烏里秦艽種子自然萌發(fā)率。從發(fā)芽勢(shì)來看，隨著沖洗時(shí)間的增加，發(fā)芽勢(shì)逐漸上升。達(dá)烏里秦艽種子在不同流水沖洗時(shí)間處理下顯示相同的發(fā)芽規(guī)律，且在生產(chǎn)實(shí)踐當(dāng)中，長(zhǎng)時(shí)間流水沖洗會(huì)導(dǎo)致一定資源浪費(fèi)。綜合考慮，流水沖洗12h為此處理中提高達(dá)烏里秦艽種子萌發(fā)指標(biāo)的最佳處理。表5流水沖洗時(shí)間對(duì)達(dá)烏里秦艽種子萌發(fā)的影響處理萌發(fā)開始時(shí)間/d歷期/d發(fā)芽率/%發(fā)芽勢(shì)/%發(fā)芽指數(shù)流水6h5.75±0.50a17.50±0.58a83.25±4.20a50.00±4.97b8.49±0.44b流水12h5.50±0.58a18.00±0.00a88.00±5.60a50.75±4.86b9.03±0.7ab流水24h5.50±0.58a18.00±0.00a87.75±0.96a49.75±5.50b8.95±0.36ab流水36h5.25±0.50a17.75±0.50a86.50±3.32a61.50±2.52a9.66±0.31a流水48h5.25±0.96a17.75±0.50a85.75±3.41a60.75±2.37a9.67±0.38a植物激素對(duì)達(dá)烏里秦艽種子萌發(fā)的影響采用不同濃度的GA3，在6h，12h，24h的時(shí)間下的達(dá)烏里秦艽種子發(fā)芽率如REF_Ref25121\h表6所示：采用不同濃度及不同浸種時(shí)間處理的發(fā)芽率較不處理的發(fā)芽率均有不同程度的提高，其中500mg/L的GA3溶液浸種24h的發(fā)芽率最高，為90.75%，與其他濃度及時(shí)間處理相比差異顯著（P＜0.05），因此本試驗(yàn)認(rèn)為使用500mg/L的GA3溶液24h可有效破除達(dá)烏里秦艽種子休眠。表6不同赤霉素處理對(duì)達(dá)烏里秦艽種子發(fā)芽率的影響處理發(fā)芽率/%2h12h24h100mg/L82.75±2.99e83.50±2.08de88.25±2.06abcd200mg/L83.00±2.16e84.00±1.83cde87.75±0.50abcd300mg/L86.50±1.29abcde84.00±2.16cde86.50±2.65abcde400mg/L88.75±3.403abc84.50±2.65cde88.25±0.50abcd500mg/L89.25±4.11ab87.25±2.87abcde90.75±5.38a600mg/L86.25±4.92abcde86.00±1.83bcde88.00±1.63abcd達(dá)烏里秦艽種子經(jīng)過不同濃度IAA溶液處理后發(fā)芽率明顯高于不處理，但溶液濃度不同，處理效果也不同，如REF_Ref25467\h圖6所示，試驗(yàn)結(jié)果表明，6mg/L處理的發(fā)芽率最高，為87%，與2mg/L、4mg/L處理的結(jié)果無顯著差異（P＞0.05），與其余幾個(gè)處理差異顯著（P＜0.05）。10mg/L處理的發(fā)芽率最低，為77.75%。經(jīng)不同濃度IAA溶液處理后達(dá)烏里秦艽種子發(fā)芽率隨IAA濃度增高呈先升高后降低的趨勢(shì)。因此6mg/L吲哚乙酸溶液是此方法中提高種子萌發(fā)指標(biāo)的最適浸種濃度。圖6不同IAA濃度對(duì)達(dá)烏里秦艽種子發(fā)芽率的影響不同濃度的NAA浸種后的達(dá)烏里秦艽種子萌發(fā)結(jié)果不同。如REF_Ref26123\h圖7所示，試驗(yàn)結(jié)果表明，10mg/L處理的發(fā)芽率到達(dá)最高，為82.5%，與其余幾個(gè)處理差異顯著（P＜0.05）。當(dāng)溶液濃度超過30mg/L后，其發(fā)芽率均低于不處理種子的自然發(fā)芽率。不同濃度的NAA處理，隨NAA濃度增高，發(fā)芽率呈低濃度促進(jìn)，高濃度抑制趨勢(shì)。因此10mg/L的NAA溶液是該方法中提高種子萌發(fā)指標(biāo)的最適濃度。圖7不同NAA濃度對(duì)達(dá)烏里秦艽種子發(fā)芽率的影響冷層積方法對(duì)達(dá)烏里秦艽種子萌發(fā)的影響達(dá)烏里秦艽種子在不同濕度，4℃恒溫條件下，層積不同天數(shù)后，發(fā)芽指標(biāo)如REF_Ref26319\h表7所示，在不同的濕砂處理?xiàng)l件下，萌發(fā)開始時(shí)間、歷期、發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽指數(shù)均表現(xiàn)出一定的差異。從萌發(fā)開始時(shí)間來看，不同濕度的處理下，隨著處理時(shí)間的增加，均有遞減的趨勢(shì)，C15、C20的萌發(fā)開始時(shí)間最早，為2.75d，與其余處理差異顯著（P＜0.05）。從歷期來看，同濕度的不同時(shí)間處理間趨勢(shì)較為平穩(wěn)，但不同濕度的差異顯著，隨濕度的增加，歷期呈遞減趨勢(shì)。C15處理下歷期最短，為12.25d。從發(fā)芽率來看，各處理下種子發(fā)芽率均高于不處理種子，但干砂處理下發(fā)芽率整體低于其他處理。C18處理下發(fā)芽率最高，達(dá)到93%，與其他處理差異顯著（P＜0.05）。發(fā)芽勢(shì)存在顯著差異，C15處理的發(fā)芽勢(shì)最高，為73.68%，C2處理的發(fā)芽勢(shì)最低，為30.75%。發(fā)芽指數(shù)存在顯著差異，C15處理發(fā)芽指數(shù)最高，為11.24，與C6處理的結(jié)果無顯著差異（P＞0.05），與其他處理差異顯著（P＜0.05）。綜合考慮，C15處理是冷層積提高達(dá)烏里秦艽種子萌發(fā)指標(biāo)的最佳處理。表7冷層積處理對(duì)達(dá)烏里秦艽種子萌發(fā)的影響處理萌發(fā)開始時(shí)間/d歷期/d發(fā)芽率/%發(fā)芽勢(shì)/%發(fā)芽指數(shù)C17.00±0.00a21.00±1.63a79.50±6.66g37.00±8.29gh6.85±0.74fC26.50±1.00ab21.00±0.00a85.50±5.07cdefg30.75±7.50h6.89±0.48fC36.00±0.00b19.00±0.816b80.50±1.730fg36.50±14.89gh5.11±1.07gC47.00±0.00a20.00±0.00ab84.75±6.18defg35.25±2.06gh5.01±0.55gC57.00±0.00a19.00±0.00b83.22±1.92efg45.53±3.67fg5.39±0.70gC65.00±0.00cd15.75±1.71cd89.50±5.20abcde51.50±6.564def11.07±0.91aC75.00±0.00cd14.0±0.00efg90.75±2.22abcd64.50±6.56abc9.17±0.93cdeC84.00±0.0e15.00±0.00de89.50±0.58abcde62.50±2.52bc9.23±0.43cdeC95.00±0.00cd14.75±0.50de91.79±1.69abc50.06±3.96ef8.81±0.89deC104.50±0.58de14.25±0.96ef91.50±5.00abc63.25±5.50abc9.73±1.12bcdC115.00±0.00cd16.50±0.58c89.00±1.41abcde44.25±5.80fg10.60±0.33abC125.00±0.00cd13.00±0.00gh89.00±5.35abcde63.25±9.36abc9.02±1.14deC134.25±0.50e13.00±0.00gh90.50±1.29abcd60.50±5.20bcd8.98±0.74deC144.00±0.00e14.00±0.00efg88.75±0.96abcde59.00±2.45bcde9.35±0.64cdeC152.75±0.96f12.25±0.96h92.40±7.59ab73.68±7.71a11.24±0.81aC165.25±0.50c16.75±0.50c90.25±4.35abcd45.50±5.80fg10.73±0.723abC175.00±0.00cd13.00±0.00gh86.20±1.79bcdef54.29±5.00cdef8.17±0.49eC184.5±0.577de13.00±0.00gh93.00±1.41a64.75±6.80abc9.78±0.54bcdC194.00±0.00e13.25±0.50fgh89.75±2.75abcd66.25±3.30ab10.04±0.87abcdC202.75±0.957f12.50±1.00h92.64±1.52ab68.85±2.80ab10.36±0.62abc2.8發(fā)芽實(shí)驗(yàn)2.8.1萌發(fā)溫度的確定經(jīng)過清水浸泡24h的萌發(fā)前處理后，達(dá)烏里秦艽種子在不同溫度下的發(fā)芽率呈現(xiàn)出顯著差異。如圖8所示，在發(fā)芽溫度設(shè)定為20℃的條件下，種子的發(fā)芽率達(dá)到峰值，為88.25%。經(jīng)過分析，該結(jié)果與其他溫度條件下的發(fā)芽率存在顯著性差異（P＜0.05）。盡管在20±5℃的溫度范圍內(nèi)，達(dá)烏里秦艽種子均能正常發(fā)芽，但只有在20℃時(shí)，出苗情況相對(duì)整齊，幼苗生長(zhǎng)健壯?；诎l(fā)芽率和出苗整齊性的綜合評(píng)估，20℃被確定為達(dá)烏里秦艽種子萌發(fā)的最佳溫度條件。圖8不同溫度對(duì)達(dá)烏里秦艽種子發(fā)芽率的影響2.8.2發(fā)芽床的確定經(jīng)過清水浸泡24h并在20℃的條件下，達(dá)烏里秦艽種子在不同發(fā)芽床下的發(fā)芽效果呈現(xiàn)出顯著差異，結(jié)果如表8所示。在不同發(fā)芽基質(zhì)比較中，沙上培養(yǎng)的種子表現(xiàn)出最優(yōu)的萌發(fā)性能，發(fā)芽率達(dá)91%，該結(jié)果與沙間處理存在顯著差異（P＜0.05），而與紙上和紙間培養(yǎng)方式差異不顯著（P＞0.05）。盡管達(dá)烏里秦艽種子在不同發(fā)芽床處理下展現(xiàn)出相似的發(fā)芽規(guī)律，但在沙上和沙間處理中，種子的發(fā)芽過程相對(duì)緩慢，這為實(shí)際操作帶來了一定的不便。因此，無論從發(fā)芽率還是操作簡(jiǎn)便性考慮，紙上發(fā)芽床都最適合用