DB22T22682015飼料中金剛烷胺的測定液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜法本標準規(guī)定了飼料中金剛烷胺殘留量的液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜測定方法。本標準適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補充料和添加劑預(yù)混合飼料中金剛烷胺含量的測定。本方法的檢出限為0.01mg/kg，定量限為0.03mg/kg。試樣中的金剛烷胺經(jīng)乙腈提取，固相萃取柱凈化后，采用液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜法測定，外標法定量。本標準所使用的試劑除特殊注明外，均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。乙腈、甲醇為色譜純，甲酸為優(yōu)級純。金剛烷胺標準品純度≥98.0%。固相萃取柱為C18或HLB柱，規(guī)格為200mg/6mL。2原理試樣中的金剛烷胺用乙腈提取，經(jīng)固相萃取柱凈化，去除雜質(zhì)干擾。凈化后的提取液用液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜儀進行測定，采用電噴霧離子源（ESI），在正離子模式下進行多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），通過保留時間和特征離子對進行定性分析，外標法定量。3試劑與材料3.1乙腈（CH?CN）：色譜純。3.2甲醇（CH?OH）：色譜純。3.3甲酸（HCOOH）：優(yōu)級純。3.4水：GB/T6682規(guī)定的一級水。3.50.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸，用水定容至1000mL，混勻。3.60.1%甲酸乙腈溶液：取1mL甲酸，用乙腈定容至1000mL，混勻。3.7金剛烷胺標準品（C??H??N）：純度≥98.0%。3.8金剛烷胺標準儲備液（100μg/mL）：準確稱取10.0mg金剛烷胺標準品于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。該溶液在4℃條件下可保存3個月。3.9金剛烷胺標準工作液：用甲醇將金剛烷胺標準儲備液逐級稀釋成1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的標準工作液。該溶液在4℃條件下可保存1個月。3.10固相萃取柱：C18或HLB柱，200mg/6mL，或相當(dāng)者。3.11微孔濾膜：0.22μm，有機相。4儀器與設(shè)備4.1液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：配電噴霧離子源（ESI）。4.2分析天平：感量0.0001g和0.01g。4.3渦旋混合器。4.4離心機：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。4.5氮吹儀。4.6固相萃取裝置。4.7超聲波清洗器。4.8pH計：精度±0.02。5試樣制備取代表性樣品約500g，用粉碎機粉碎，全部通過0.45mm篩網(wǎng)，混勻，裝入潔凈容器中，密封并標記，于室溫下避光保存。6分析步驟6.1提取稱取5.0g（精確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入20mL乙腈，渦旋混合2min，超聲提取15min，以4000r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中。殘渣重復(fù)提取一次，合并上清液，于40℃水浴中氮吹濃縮至近干，用5mL0.1%甲酸水溶液溶解殘渣，待凈化。6.2凈化將固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水活化，將上述提取液過柱，用5mL水淋洗，抽干。用5mL甲醇洗脫，收集洗脫液，于40℃水浴中氮吹濃縮至近干，用1.0mL0.1%甲酸乙腈溶液溶解殘渣，過0.22μm微孔濾膜，供液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜測定。6.3.1液相色譜條件a)色譜柱：C18柱，2.1mm×100mm，1.7μm，或相當(dāng)者；b)流動相：A為0.1%甲酸水溶液，B為0.1%甲酸乙腈溶液；c)梯度洗脫程序：0min時5%B，0~5min線性變化至95%B，5~7min保持95%B，7.1min回到5%B，平衡3min；d)流速：0.3mL/min；e)柱溫：30℃；f)進樣量：5μL。6.3.2質(zhì)譜條件a)離子源：電噴霧離子源（ESI）；b)掃描方式：正離子掃描；c)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；d)電噴霧電壓：5500V；e)霧化氣壓力：50psi；f)干燥氣溫度：550℃；g)干燥氣流速：10L/min；h)金剛烷胺定性離子對：m/z152.1>135.1（碰撞能量20eV）、152.1>107.1（碰撞能量35eV）；i)定量離子對：m/z152.1>135.1。6.4標準曲線的制備分別吸取適量金剛烷胺標準工作液，用0.1%甲酸乙腈溶液稀釋成濃度為1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的標準系列溶液，按6.3條件進行測定，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。6.5測定在相同條件下，對試樣溶液和標準溶液分別進行測定，根據(jù)保留時間和特征離子對定性，標準曲線法定量。7結(jié)果計算試樣中金剛烷胺的含量按式（1）計算：X=(C×V×1000)/(m×1000)（1）式中：X——試樣中金剛烷胺的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C——從標準曲線上查得的試樣溶液中金剛烷胺的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；V——試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；m——試樣