茶樹田間炭疽病抗性鑒定與評價技術(shù)規(guī)程Technicalcodeofpracticresistanceofteaanthracnose2025-11-10發(fā)布2025-12-10實施I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出。本文件起草單位：浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、浙江農(nóng)林大學(xué)、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所、浙江大本文件主要起草人：李清聲、盧秦華、王玉春、李達、任節(jié)、汪瑛琦、王新超、鄭新強、葉儉慧。1下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)NY/T2943茶樹種質(zhì)資源描述規(guī)范NY/T2943中界定的及下列術(shù)語和定義適用于本文件。害成熟葉片、形成紅褐色大型枯斑的茶樹真菌病害。茶炭疽病的癥狀、病原、病害循環(huán)、發(fā)病條件見附錄A。選取樹冠中上部成熟病葉葉片，對出現(xiàn)褐色壞死病斑葉片進行視覺表征判別。癥狀見附4.2病原菌分離與鑒定采用單孢分離法分離病斑上的真菌。用滅菌刀片刮取葉片病斑上的分生孢子盤，進行顯微鏡鏡檢。后將分生孢子懸浮液涂布到馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PotatoDextroseAgar,PDA)培養(yǎng)基上，在25℃下倒置培養(yǎng)。待長出菌落后，挑取單個菌落到新的PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，用4.2.2病原菌鑒定采用形態(tài)學(xué)(附錄A)和分子生物學(xué)分析(附錄B)相結(jié)合的方式進行鑒定。24.2.3結(jié)果判斷病原菌形態(tài)特征符合附錄A的描述、分子生物學(xué)分析(附錄B)鑒定顯示該病原菌可與模式種聚為一簇，即可判定樣本中含有茶炭疽病病原菌。5調(diào)查方法5.1調(diào)查時間每年5月至10月，同區(qū)域易感品種出現(xiàn)病癥時，進行病情調(diào)查。5.2調(diào)查方法當(dāng)茶園面積≤20畝時，以梅花形均勻選取5個取樣點，每個取樣點隨機選取一米茶行的茶樹樹冠中上部葉片20片；當(dāng)茶園面積>20畝時，每20畝設(shè)置為一個調(diào)查小區(qū)，每個小區(qū)內(nèi)以梅花形均勻選取5個取樣點，每個取樣點隨機選取一米茶行的茶樹樹冠中上部葉片20片，各小區(qū)獨立進行抗性評價。所有取樣均排除邊行及行頭、行尾2m～3m。重復(fù)3次。連片茶園種植不同品種茶樹，應(yīng)區(qū)分品種設(shè)定調(diào)查區(qū)域，并根據(jù)各品種面積按照上述方法進行調(diào)查。5.3病情分級依據(jù)茶樹葉片發(fā)病程度，進行病情分級，見表1。表1茶炭疽病病情級別與癥狀病情級別0葉片健康無病斑1210%<病斑面積占整片葉面積的≤25%345.4發(fā)病率用病葉數(shù)占調(diào)查總?cè)~數(shù)的百分率表示。計算公式見式1。5.5病情指數(shù)3T/ZJTSS036—2025評價植物病害發(fā)生程度的綜合性指標，根據(jù)調(diào)查總數(shù)、病情級別以及對應(yīng)級別的發(fā)病樣本數(shù)計算而來。計算公式見式2。DI——病情指數(shù)；n;——各級發(fā)病級別葉片數(shù)；S-——各級發(fā)病級數(shù)；N——調(diào)查總?cè)~片數(shù)；4——最高發(fā)病級別。6抗性評價方法通過間隔10天的2次調(diào)查，依據(jù)茶樹葉片病情指數(shù)最大值進行抗性評價。評價標準見表2。表2茶炭疽病抗性評價標準抗(R)中抗(MR)感(S)高感(HS)4(資料性)發(fā)生于當(dāng)年生成熟葉上。病斑從葉緣或葉尖發(fā)生，初為淺綠色病半透明狀，后病斑逐漸擴大，顏色逐漸轉(zhuǎn)為黃褐色或紅褐色，最后變期病斑正面散生細小的黑色顆粒，為病原菌的圓形、黑色，直徑71μm~143μm。分生孢子盤內(nèi)有分生孢子梗，無色，單胞，頂端著分生孢子。 3——分生孢子。5A.3病害循環(huán)茶炭疽病病原菌以菌絲體或分生孢子盤在茶樹病葉上越冬。來年春季，溫度上升到20℃,相對濕度達80%～90%時，病原菌便可產(chǎn)生分生孢子。在適宜的溫度和濕度條件下，分生孢子可通過葉片的毛狀體侵入葉片內(nèi)部，并形成菌絲在組織間蔓延，經(jīng)15天~20天產(chǎn)生新的病斑。隨后病斑經(jīng)生長發(fā)育產(chǎn)生分生孢子盤和分生孢子，借風(fēng)雨傳播，進行再侵染。A.4發(fā)病條件茶炭疽病易發(fā)生在高溫高濕的環(huán)境條件下。當(dāng)溫度在20℃~30℃范圍內(nèi)，相對濕度90%以上時，有利于分生孢子侵入。6(規(guī)范性)將分離到的病原菌接于PDA培養(yǎng)基上，倒置于培養(yǎng)箱中，25℃黑暗培養(yǎng)7天。使用滅菌后的玻片刮取培養(yǎng)基表面的菌絲，采用CTAB法或商品化的絲狀真菌DNA提取試劑盒，提取菌株的基因組DNA。以基因組DNA為模板，分別以引物對LROR/LR7和EF1-728F/EF1-986R,擴增LSU和EF基因序列(引物序列見表B.1)。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性4min;94℃變性30s,57℃(LSU)、54℃(EF)退火30s,72℃延伸45s,35個循環(huán)，72℃延伸10min,4℃保存?；蛞锩Q引物序列(5’→3')