動(dòng)物源性食品中四環(huán)素類藥物的快速檢測(cè)膠體金免疫層析法國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布13.1.3一水合檸檬酸(C?H?O?·H?O)。3.1.6乙二胺四乙酸二鈉(Na?EDTA·2H?O)。3.1.8二水合磷酸二氫鈉(NaH?PO?·2H?O)。3.2.3檸檬酸溶液(0.1mol/L):稱取21.01g一水合檸檬酸(3.1.3)于500mL燒杯中，加入200mL3.2.5樣品提取液：分別量取625mL磷酸氫二鈉溶液(0.2mol/L)(3.2.2)和1000mL檸檬酸溶液24.0,再加入60.50g乙二胺四乙酸二鈉(3.1.6)充分?jǐn)嚢柚寥芙?。或使用膠體金免疫層析檢測(cè)試劑盒配套提取液。3.2.6乳品樣本稀釋液：分別稱取5.80g十二水合磷酸氫二鈉(3.1.7),0.60g二水合磷酸二氫鈉(3.1.8),8.77g氯化鈉(3.1.9)于500mL燒杯中，加入200mL水，充分?jǐn)嚢柚寥芙?，加入適量鹽酸(3.1.5)或氫氧化鈉溶液(1mol/L)(3.2.4)將pH調(diào)節(jié)至7.4,加水定容至1L?；蚴褂媚z體金免疫層析檢測(cè)試劑盒配套稀釋液。3.2.7組織樣本稀釋液：分別稱取29.01g十二水合磷酸氫二鈉(3.1.7),2.96g二水合磷酸二氫鈉(3.1.8),5.84g氯化鈉(3.1.9)于500mL燒杯中，加入200mL水，充分?jǐn)嚢柚寥芙?，加入適量氫氧化鈉溶液(1mol/L)(3.2.4)將pH調(diào)節(jié)至8.0,加水定容至1L。或使用膠體金免疫層析檢測(cè)試劑盒配套稀釋液。3.3標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)四環(huán)素類藥物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量見(jiàn)表1,純度≥95%。表1四環(huán)素類藥物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息中文名稱四環(huán)素多西環(huán)素3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1四環(huán)素類藥物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100μg/mL):分別準(zhǔn)確稱取適量四環(huán)素類藥物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(3.3)于燒杯中溶解后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用乙腈溶液(3.2.1)溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成100μg/mL的四環(huán)素類藥物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。此溶液密封后避光-20℃保存，有效期6個(gè)月。3.4.2四環(huán)素類藥物標(biāo)準(zhǔn)工作液A(1μg/mL):分別準(zhǔn)確移取四環(huán)素類藥物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(100μg/素類藥物標(biāo)準(zhǔn)工作液A。此溶液密封后避光2℃~8℃保存，有效期7d。3.4.3四環(huán)素類藥物標(biāo)準(zhǔn)工作液B(0.21μg/mL):分別準(zhǔn)確移取四環(huán)素類藥物標(biāo)準(zhǔn)工作液A(1μg/環(huán)素類藥物標(biāo)準(zhǔn)工作液B。臨用現(xiàn)配。四環(huán)素類藥物膠體金免疫層析試劑盒：金標(biāo)微孔(含膠體金標(biāo)記的特異性抗體)、試紙條及配套試劑。4儀器和設(shè)備4.1電子天平：感量為0.01g。34.5孵育器：可控溫20℃~25℃。溫度15℃~35℃。2℃~8℃條件下避光保存。吸取200μL試樣于5mL離心管中，加入800μL乳品樣本稀釋液(3.2.6),渦旋混勻30s,為待準(zhǔn)確稱取1g±0.05g試樣于10mL離心管中，加入3mL樣品提取液(3.2.5),振蕩提取2min,育器中20℃~25℃孵育3min,將試紙條下端插入到金標(biāo)微孔溶液底部，于孵育器中20℃~25℃反吸取150μL上述待測(cè)液(6.2.3)于金標(biāo)微孔中，抽吸至孔底的紫紅色顆粒20℃~25℃孵育3min,將試紙條下端插入到金標(biāo)微孔溶液底部，于孵育器中20℃~25℃反應(yīng)物標(biāo)準(zhǔn)工作液B(0.21μg/mL)(3.4.3),使試樣中四環(huán)素類藥物含量為10μg/L。按照6.2和6.3步驟與6.4.3.2乳粉：準(zhǔn)確稱取1g±0.05gA(1μg/mL)(3.4.2),使試樣中四環(huán)素類藥物含量為50μg/kg。按照類藥物標(biāo)準(zhǔn)工作液A(1μg/mL)(3.4.2),使試樣中四環(huán)素類藥物含量為100μg/kg。按照6.2和6.3步注：獲取同類基質(zhì)的空白試樣，經(jīng)參比方法驗(yàn)證無(wú)四環(huán)素類污染或四環(huán)素類含量遠(yuǎn)低于檢出限。注：也可使用膠體金讀數(shù)儀判讀，讀數(shù)儀的具體操作與判讀原則參照讀數(shù)儀的使用說(shuō)明書(shū)。干5無(wú)效陰性陽(yáng)性圖1目視判定示意圖空白試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，應(yīng)以參比方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行確證。9性能指標(biāo)靈敏度≥99%。特異性≥95%。甲烯土霉素、地美環(huán)素交叉反應(yīng)率分別為200%、10%。甲烯土霉素≤200%,地美環(huán)素≤10%,羅利環(huán)素、米諾環(huán)素≤1%,替加環(huán)素、奧瑪環(huán)素、紅霉素、慶大霉素、氯霉素、環(huán)丙沙星、磺胺二甲基嘧啶≤0.1%。假陰性率≤1%。假陽(yáng)性率≤5%。6本方法所述試劑、試劑盒信息、操作步驟及結(jié)果判定要求是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不做限定。方法使用者在使用替代試劑、試劑盒或操作步驟前，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行考察，應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)。本方法滅菌乳、巴氏殺菌乳、乳粉參比方法為GB/T22990—2008《牛奶和奶粉中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素殘留量的測(cè)定液相色譜-紫外檢測(cè)法》,豬肉、牛肉、雞肉、魚(yú)肉參比方法為GB/T21317—2007《動(dòng)物源性食品中四環(huán)素類獸藥殘留量檢測(cè)方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法