家兔小腸平滑肌實驗

小腸運動形式的觀察

主講教師：鄭衍芳王明曉技術(shù)支持：蔡仕寧遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室1離體組織灌流方法(了解)保證離體器官存活的條件：

1.溫度2.營養(yǎng)3.PH4.酸堿度5.滲透壓…..目前的離體灌流組織應(yīng)用：

1.家兔離體小腸

2.大鼠、小鼠離體子宮

3.大鼠離體動脈條

4.豚鼠離體氣管條

5.蟾蜍、蛙、大鼠離體心臟

………...實驗原理消化道平滑肌的一般生理特性：收縮遲緩：舒縮運動≥20S/次。富有伸展性：伸長可達(dá)原來長度2—3倍。緊張性：常保持一種微弱的持續(xù)收縮狀態(tài)。節(jié)律性收縮：離體后于合適環(huán)境中仍能節(jié)律性收縮。對電刺激不敏感，對化學(xué)、機械等刺激敏感。小腸平滑肌也具有上述生理特性。實驗原理和背景知識小腸運動受到神經(jīng)和體液的調(diào)節(jié)*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室4小腸的運動形式緊張性收縮分節(jié)運動蠕動移行性復(fù)合運動（MMC）體液調(diào)節(jié):胃腸激素如胃泌素、縮膽囊素、促胰液素等神經(jīng)調(diào)節(jié):實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)哺乳動物類離體小腸平滑肌的制備方法。觀察某些因素（溫度、pH值、藥物）對小腸平滑肌舒縮活動的影響。觀察哺乳動物小腸的運動形式以及神經(jīng)和某些藥物對其運動的影響。掌握消化道平滑肌的一般生理特性。*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室5實驗步驟在體實驗麻醉和固定：稱重，計算麻藥計量（4ml/kg的25%氨基甲酸乙酯），耳緣靜脈麻醉，鑒別后固定于兔臺上。腹部手術(shù)：腹部剪毛、自劍突下沿腹部正中線切開腹壁（10cm）。打開腹腔，暴露胃腸道并尋找小腸。用皮鉗夾住兩側(cè)腹壁并提起形成皮兜。觀察：①正常小腸的運動形式；②局部滴加乙酰膽堿后小腸的運動形式；③局部滴加去甲腎上腺素后小腸的運動形式。*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室8*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室9*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室10實驗方法離體實驗家兔一只，處死后迅速行腹部手術(shù)。找出胃幽門與十二指腸交界處，由此取長20—30cm的腸管，不留腸系膜。取出腸段置于室溫臺氏液中輕輕漂洗，去除當(dāng)腸內(nèi)容物，將腸管分成數(shù)段，每段長2-3cm，兩端各用系好線的蛙心夾夾住。將離體平滑肌連接于設(shè)定溫度好溫度（38℃）恒溫平滑肌槽、張立換能器（書圖7-1,p121）上。打開電腦和生物信號采集系統(tǒng)。*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室11*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室12張力換能器蛙心夾浴槽小腸段13離體小腸收縮曲線代表意義收縮曲線：---上升支舒張曲線：---下降支基線上移：緊張性升高基線下降：緊張性下降幅度增加：收縮力增強幅度減低：收縮力減弱波峰間距：代表收縮頻率實驗步驟離體實驗：觀察離體小腸平滑肌的正常波形觀察pH值對小腸平滑肌的作用：浴槽內(nèi)加1mol/LHCI溶液2-4滴，觀察平滑肌的反應(yīng)（觀察后立即沖洗和更換臺氏液）。

*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室14觀察項目離體實驗：乙酰膽堿的作用：浴槽內(nèi)加入0.001%的乙酰膽堿溶液2-4滴，觀察平滑肌的反應(yīng)（觀察后立即沖洗和更換臺氏液）。去甲腎上腺素的作用：浴槽內(nèi)加入0.001%的去甲腎上腺素溶液2-4滴，觀察平滑肌的反應(yīng)（觀察后立即沖洗和更換臺氏液）。觀察溫度的影響：分別加入室溫臺式液、25℃臺式液，觀察平滑肌的反應(yīng)。*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室15注意事項1.實驗過程中必須保證標(biāo)本的供氧(通氣)及浴槽內(nèi)臺氏液的恒溫(38℃)。2.灌流浴槽內(nèi)的液面高度應(yīng)保持恒定。3.放大器零點調(diào)好后不要再移動旋鈕，以免影響基線。上述各藥液加入的量系參考數(shù)據(jù)，效果不明顯者可以添加。4.每次實驗效果明顯后立即放掉含藥液的臺氏液，并沖洗多次，以免平滑肌出現(xiàn)不可逆反應(yīng)。5.每項處理必須有處理標(biāo)記。*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室16思考題胃腸平滑肌有哪些運動形式以及生理特性本實驗藥品對小腸平滑肌的作用效果及其機制。取腸時為什么采用擊昏家兔而不用在麻醉下進(jìn)行?要保持小腸平滑肌較好的活性，實驗過程中要注意什么？制備小腸平滑肌標(biāo)本時，為什么要取小腸上段，尤其是十二指腸段的平滑肌？*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室17實驗結(jié)果分析*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室18正常NaOHHClAchNA氯化鈣25℃實驗結(jié)果分析加入乙酰膽堿，可見收縮的幅度上升，基線抬高，頻率加快。

消化道平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生動作電位的離子基礎(chǔ)是鈣內(nèi)流，ACh--M受體結(jié)合，使鈣通道開放，使肌漿中的鈣升高，進(jìn)而激活肌纖蛋白-肌凝蛋白-ATP系統(tǒng)，使平滑肌收縮，肌張力增加。故乙酰膽堿對小腸運動有加強作用。*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室19實驗結(jié)果分析加入去甲腎上腺素可見收縮的幅度小，基線下移，頻率較慢。消化道平滑肌細(xì)胞上有αβ兩種受體，NA可作用于α受體，使肌膜及肌質(zhì)網(wǎng)上的鉀離子通道開放，鉀的外流增加，使膜發(fā)生超極化，腸肌興奮性下降，肌張力下降。同時，NA還作用于β受體，使腸肌膜細(xì)胞中的cAMP合成增加，肌膜及肌質(zhì)網(wǎng)上鈣外流增加，也使肌張力下降。

*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室20實驗結(jié)果分析加入HCl溶液可見小腸平滑肌收縮的幅度減小，基線下移，頻率較慢。可能是氫離子與鈣有競爭作用，氫離子增加，使鈣與腸肌細(xì)胞的鈣調(diào)素（Ca-M）結(jié)合少，而使腸肌細(xì)胞的收縮力下降。加入氫氧化鈉：小腸平滑肌收縮的幅度增大，基線上移。氫氧離子中和氫離子，從而削弱了氫離子與鈣離子的競爭作用，使鈣調(diào)素與鈣離子結(jié)合數(shù)量增多所至。*遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)生理機能教研室21實驗結(jié)果分析加入氯化鈣溶液可見小腸平滑肌收縮的幅度增加，基線抬高，頻率加快。

細(xì)胞外液中存在較多的鈣離子，而鈣離子則是肌肉收縮的必要條件。平滑肌細(xì)胞興奮→肌膜被激活→細(xì)胞外