DB13T11072009乳及乳制品中4種β內(nèi)酰胺類藥物殘留量的測(cè)定方法液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了乳及乳制品中青霉素G、青霉素V、氨芐西林和阿莫西林4種β內(nèi)酰胺類藥物殘留量的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于生鮮乳、滅菌乳、調(diào)制乳、發(fā)酵乳、乳粉、煉乳和奶油等乳及乳制品中上述4種β內(nèi)酰胺類藥物殘留量的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限：青霉素G為1.0μg/kg，青霉素V為1.0μg/kg，氨芐西林為2.0μg/kg，阿莫西林為2.0μg/kg。定量限：青霉素G為3.0μg/kg，青霉素V為3.0μg/kg，氨芐西林為6.0μg/kg，阿莫西林為6.0μg/kg。原理：試樣中的β內(nèi)酰胺類藥物殘留用乙腈提取，經(jīng)正己烷除脂，OasisHLB固相萃取柱凈化，采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。試劑和材料：除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。乙腈：色譜純；甲醇：色譜純；正己烷：色譜純；甲酸：色譜純；乙酸銨：色譜純；β內(nèi)酰胺類標(biāo)準(zhǔn)品：青霉素G（純度≥95%）、青霉素V（純度≥95%）、氨芐西林（純度≥95%）、阿莫西林（純度≥95%）；OasisHLB固相萃取柱：200mg，6mL；0.22μm微孔濾膜。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：分別準(zhǔn)確稱取適量青霉素G、青霉素V、氨芐西林和阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解并定容，配制成100mg/L的單標(biāo)儲(chǔ)備溶液，于18℃避光保存。使用時(shí)，用乙腈水（10:90，v/v）稀釋成適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。儀器和設(shè)備：液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源（ESI）；分析天平：感量0.0001g和0.01g；渦旋混合器；離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min；氮吹儀；固相萃取裝置；超聲波清洗器；pH計(jì)。試樣制備與提取：稱取5.0g（精確至0.01g）均質(zhì)后的試樣于50mL離心管中，加入10mL乙腈，渦旋混合2min，超聲提取10min，以4000r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，殘?jiān)?0mL乙腈重復(fù)提取一次，合并上清液，于40℃水浴中氮吹至近干。凈化：將上述殘?jiān)?mL乙腈水（10:90，v/v）溶解，加入5mL正己烷，渦旋混合1min，以4000r/min離心5min，棄去正己烷層。將下層溶液轉(zhuǎn)移至預(yù)先用3mL甲醇和3mL水活化過(guò)的OasisHLB固相萃取柱中，用3mL水淋洗，抽干后用3mL甲醇洗脫，收集洗脫液，于40℃水浴中氮吹至近干，用1.0mL乙腈水（10:90，v/v）溶解殘?jiān)?，?jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。液相色譜條件：色譜柱：C18柱（150mm×2.1mm，3.5μm）；流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水溶液，B為乙腈；梯度洗脫程序：0min時(shí)10%B，5min時(shí)40%B，10min時(shí)60%B，15min時(shí)10%B，保持5min；流速：0.3mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。質(zhì)譜條件：離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；電噴霧電壓：5500V；霧化氣壓力：50psi；干燥氣溫度：550℃；干燥氣流速：10L/min；碰撞氣壓力：中等。4種β內(nèi)酰胺類藥物的定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、碰撞能量等參數(shù)見(jiàn)表1。表14種β內(nèi)酰胺類藥物的質(zhì)譜參數(shù)|藥物名稱|母離子(m/z)|定性離子對(duì)(m/z)|定量離子對(duì)(m/z)|碰撞能量(eV)||||||||青霉素G|335.1|335.1→160.0|335.1→160.0|20||||335.1→176.0||15||青霉素V|351.1|351.1→160.0|351.1→160.0|20||||351.1→192.0||15||氨芐西林|350.1|350.1→106.0|350.1→106.0|25||||350.1→160.0||15||阿莫西林|366.1|366.1→114.0|366.1→114.0|25||||366.1→208.0||15|結(jié)果計(jì)算：試樣中β內(nèi)酰胺類藥物殘留量按式（1）計(jì)算：X=(A×V×C)/(A?×m)式中：X——試樣中β內(nèi)酰胺類藥物殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）；A——試樣溶液中β內(nèi)酰胺類藥物的峰面積；V——試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；C——標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中β內(nèi)酰胺類藥物的濃度，單位為微克每升（μg/L）；