DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估演講人01.DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估02.###參考文獻(xiàn)目錄DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估###1.引言：食管癌預(yù)后評估的困境與DNA甲基化的崛起食管癌作為全球最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率分別居惡性腫瘤第7位和第6位，每年新發(fā)病例約60萬，死亡病例約54萬，其中中國患者約占全球一半以上[1]。臨床上，食管癌患者的預(yù)后評估主要依賴TNM分期、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等傳統(tǒng)指標(biāo)，但這些指標(biāo)存在顯著局限性：例如，相同TNM分期的患者可能表現(xiàn)出截然不同的生存結(jié)局；早期患者術(shù)后仍出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，而部分晚期患者卻對治療產(chǎn)生持久反應(yīng)。這種“同病不同預(yù)后、同治不同療效”的現(xiàn)象，凸顯了傳統(tǒng)預(yù)后評估體系的粗放性，難以滿足個體化精準(zhǔn)醫(yī)療的需求。DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估近年來，表觀遺傳學(xué)研究的深入為食管癌預(yù)后評估提供了新視角。其中，DNA甲基化作為一種可遺傳的表觀遺傳修飾，通過在CpG島二核苷酸胞嘧啶第5位碳原子上添加甲基基團(tuán)，在不改變DNA序列的情況下調(diào)控基因表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及治療耐藥密切相關(guān)[2]。與基因突變相比，DNA甲基化具有穩(wěn)定性高、檢測便捷（可在血液、唾液等液體活檢樣本中檢出）、早期出現(xiàn)等特點(diǎn)，成為極具潛力的預(yù)后生物標(biāo)志物。作為長期從事食管癌基礎(chǔ)與臨床研究的工作者，我在十余年的科研實(shí)踐中深刻體會到：DNA甲基化不僅為理解食管癌的異質(zhì)性提供了分子鑰匙，更有望通過構(gòu)建個體化預(yù)后預(yù)測模型，指導(dǎo)臨床治療決策，最終改善患者生存結(jié)局。本文將系統(tǒng)闡述DNA甲基化在食管癌中的生物學(xué)特征、作為預(yù)后標(biāo)志物的臨床價值、個體化評估體系的構(gòu)建方法及未來挑戰(zhàn)，以期為食管癌精準(zhǔn)預(yù)后評估的理論與實(shí)踐提供參考。DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估###2.DNA甲基化的生物學(xué)基礎(chǔ)及其在腫瘤發(fā)生中的作用機(jī)制####2.1DNA甲基化的分子生物學(xué)特征DNA甲基化是表觀遺傳調(diào)控的核心形式之一，其動態(tài)平衡由甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）、去甲基化酶（TETs）及甲基化結(jié)合蛋白（MBDs）共同維持[3]。DNMT家族包括DNMT1（維持甲基化酶，負(fù)責(zé)DNA復(fù)制過程中甲基化模式的遺傳）和DNMT3A/DNMT3B（從頭甲基化酶，參與新甲基化位點(diǎn)的建立）；TET家族通過將5-甲基胞嘧啶（5mC）氧化為5-羥甲基胞嘧啶（5hmC）等中間產(chǎn)物，啟動DNA主動去甲基化過程；MBDs則識別并結(jié)合甲基化DNA，招募抑制性復(fù)合物，沉默靶基因表達(dá)。正常生理狀態(tài)下，DNA甲基化維持基因表達(dá)穩(wěn)定性：例如，在基因組印記、X染色體失活及胚胎發(fā)育中發(fā)揮關(guān)鍵作用；而在腫瘤細(xì)胞中，這種平衡被打破，表現(xiàn)為全基因組低甲基化（導(dǎo)致基因組instability、原癌基因激活）和CpG島啟動子區(qū)高甲基化（導(dǎo)致抑癌基因沉默）的“雙重異?！盵4]。DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估####2.2食管癌中DNA甲基化的異常模式食管癌主要包括食管鱗狀細(xì)胞癌（ESCC，占中國患者的90%以上）和食管腺癌（EAC）兩大病理類型，二者在DNA甲基化譜上存在顯著差異[5]。ESCC中，CpG島甲基化表型（CIMP）陽性率約為30%-50%，常見高甲基化基因包括p16/CDKN2A、MGMT、CDH1（E-cadherin）、RASSF1A等，這些基因多參與細(xì)胞周期調(diào)控（p16）、DNA損傷修復(fù)（MGMT）、細(xì)胞黏附（CDH1）及抑癌信號傳導(dǎo)（RASSF1A）；而EAC的甲基化模式更接近胃癌，常出現(xiàn)MLH1（錯配修復(fù)基因）、CDKN2A等基因甲基化，與Barrett食管向EAC的惡性轉(zhuǎn)化過程密切相關(guān)[6]。值得注意的是，食管癌的甲基化異常具有“早期事件”特征：在癌前病變（如食管上皮內(nèi)瘤變、Barrett食管）階段即可檢測到特定基因（如p16、CDH1）的啟動子高甲基化，且甲基化水平隨病變進(jìn)展逐漸升高，提示其可能作為早期預(yù)警標(biāo)志物[7]。DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估####2.3DNA甲基化調(diào)控食管癌惡性表型的分子通路DNA甲基化通過沉默關(guān)鍵基因參與食管癌的多步驟演進(jìn)過程：-細(xì)胞周期失控：p16基因啟動子高甲基化導(dǎo)致其表達(dá)失活，解除對細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）的抑制，推動G1/S期轉(zhuǎn)換，促進(jìn)細(xì)胞無限增殖[8]；-侵襲轉(zhuǎn)移：CDH1基因甲基化引起E-cadherin表達(dá)缺失，破壞細(xì)胞間黏附連接，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）能力，促進(jìn)局部浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[9]；-治療耐藥：MGMT基因甲基化導(dǎo)致DNA修復(fù)功能缺陷，雖可能增加烷化劑（如替莫唑胺）敏感性，但通過沉默促凋亡基因（如DAPK1）或激活耐藥相關(guān)基因（如ABCG2），可誘導(dǎo)化療耐藥[10]；DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估-免疫逃逸：程序性死亡配體1（PD-L1）基因啟動子區(qū)甲基化可抑制其表達(dá)，但部分研究顯示，特定甲基化模式（如SOCS1甲基化）可通過激活JAK-STAT通路，間接上調(diào)PD-L1表達(dá)，促進(jìn)腫瘤免疫逃逸[11]。這些通路相互作用，共同構(gòu)成食管癌惡性進(jìn)展的分子網(wǎng)絡(luò)，也為DNA甲基化作為預(yù)后標(biāo)志物提供了理論依據(jù)。###3.DNA甲基化作為食管癌預(yù)后標(biāo)志物的臨床價值####3.1單一基因甲基化與食管癌預(yù)后的關(guān)聯(lián)基于高通量甲基化檢測和臨床隨訪數(shù)據(jù)，多個抑癌基因的甲基化狀態(tài)已被證實(shí)與食管癌患者預(yù)后密切相關(guān)。例如：DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估-p16甲基化：在ESCC中，p16甲基化陽性患者的5年生存率顯著低于陰性患者（HR=1.68，95%CI:1.32-2.14，P<0.001），且甲基化水平越高，復(fù)發(fā)風(fēng)險越大[12]；-MGMT甲基化：接受鉑類化療的ESCC患者中，MGMT甲基化者中位無進(jìn)展生存期（PFS）和總生存期（OS）顯著長于未甲基化者（PFS:12.3個月vs8.1個月，P=0.002；OS:28.6個月vs19.2個月，P=0.001），提示其可能作為化療敏感性的預(yù)測指標(biāo)[13]；-CDH1甲基化：CDH1甲基化陽性食管癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率（45.2%vs22.7%，P<0.01）和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率（31.8%vs15.3%，P<0.05）顯著升高，且OS較短（HR=2.03，95%CI:1.54-2.68）[14]。DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估然而，單一基因甲基化的預(yù)測效能有限，其敏感度和特異性多在60%-70%之間，難以滿足臨床個體化評估的需求。####3.2甲基化標(biāo)志物組合與預(yù)后預(yù)測模型的構(gòu)建為提高預(yù)測準(zhǔn)確性，研究者開始探索多基因甲基化聯(lián)合檢測的價值。通過生物信息學(xué)分析篩選與預(yù)后相關(guān)的甲基化位點(diǎn)，構(gòu)建“甲基化評分（MethylationScore,MS）”系統(tǒng)，已成為近年來的研究熱點(diǎn)[15]。例如：-Zhang等通過甲基化芯片篩選出ESCC中7個高甲基化基因（p16、RASSF1A、SFRP1、WIF1、DAPK1、CDH1、TIMP3），建立“7-geneMS模型”，將患者分為高風(fēng)險組（MS≥中位值）和低風(fēng)險組。結(jié)果顯示，高風(fēng)險組OS顯著低于低風(fēng)險組（HR=2.91，95%CI:2.15-3.94，P<0.001），且該模型獨(dú)立于TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P<0.01）[16]；DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估-Li等針對EAC患者，整合MLH1、MGMT、CDKN2A、RUNX3四個基因的甲基化狀態(tài)，構(gòu)建“四甲基化標(biāo)志物（4-MTM）模型”，其預(yù)測5年生存率的AUC達(dá)0.82，顯著優(yōu)于單一標(biāo)志物（AUC=0.65-0.71）[17]；-液體活檢中的應(yīng)用：循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）中的甲基化標(biāo)志物因其無創(chuàng)、動態(tài)監(jiān)測的優(yōu)勢備受關(guān)注。例如，ESCC患者術(shù)后血漿中p16和RASSF1A聯(lián)合甲基化檢測，預(yù)測復(fù)發(fā)的敏感度和特異性分別達(dá)85.7%和90.2%，較傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物（如CYFRA21-1）提高30%以上[18]。這些模型通過整合多個基因的甲基化信息，克服了單一標(biāo)志物的局限性，為個體化預(yù)后評估提供了更可靠的工具。####3.3DNA甲基化與其他臨床病理特征的整合預(yù)后評估DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估將DNA甲基化標(biāo)志物與傳統(tǒng)臨床病理特征（如TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度等）結(jié)合，可構(gòu)建更全面的預(yù)后評估體系。例如：-TNM分期聯(lián)合甲基化模型：對于Ⅰ期ESCC患者，若p16甲基化陽性，其復(fù)發(fā)風(fēng)險增加2.3倍（HR=2.30，95%CI:1.45-3.65），提示即使早期患者也可能需要輔助治療[19]；-分子分型與甲基化特征：基于甲基化譜可將ESCC分為CIMP-high、CIMP-low和CIMP-negative三型，其中CIMP-high患者對免疫檢查點(diǎn)抑制劑（如PD-1抑制劑）的治療響應(yīng)率更高（客觀緩解率ORR:42.3%vs18.5%，P=0.03），但OS較短（HR=1.78，95%CI:1.24-2.56），提示其預(yù)后異質(zhì)性[20]；DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估-治療反應(yīng)預(yù)測：接受放化療的食管癌患者中，MGMT和MLH1雙甲基化者病理完全緩解（pCR）率顯著高于未甲基化者（68.4%vs31.2%，P<0.01），且2年無病生存（DFS）率提高25%[21]。這種“臨床+分子”的整合模式，使預(yù)后評估從“群體化”走向“個體化”，為治療決策提供了雙重依據(jù)。###4.食管癌個體化預(yù)后評估體系的構(gòu)建與臨床轉(zhuǎn)化####4.1甲基化標(biāo)志物的檢測技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)現(xiàn)DNA甲基化臨床轉(zhuǎn)化的前提是檢測技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化。目前常用的檢測方法包括：-甲基化特異性PCR（MSP）：操作簡便、成本低，但只能檢測已知位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)，且易受假陽性干擾；DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估-焦磷酸測序（Pyrosequencing）：可精確定量甲基化水平（精確度達(dá)1%），適用于大樣本驗(yàn)證，但對DNA質(zhì)量和數(shù)量要求較高[22]；-甲基化芯片（如InfiniumMethylationEPICBeadChip）：可同時檢測超過85萬個CpG位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)，適用于高通量篩選，但成本較高、數(shù)據(jù)分析復(fù)雜[23]；-下一代測序（NGS）：結(jié)合重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化（bisulfitesequencing），可實(shí)現(xiàn)全基因組甲基化測序，單堿基分辨率高，但生物信息分析難度大[24]。臨床應(yīng)用中需根據(jù)樣本類型（組織、血液、唾液）、檢測目的（篩查、診斷、預(yù)后）及成本效益選擇合適技術(shù)。例如，組織樣本適合焦磷酸測序或NGS驗(yàn)證，而液體活檢則需開發(fā)高敏感度的甲基化檢測方法（如數(shù)字MSP、甲基化ctDNA捕獲測序）。DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估####4.2前瞻性臨床研究與多中心驗(yàn)證回顧性研究雖然為甲基化標(biāo)志物的預(yù)后價值提供了初步證據(jù)，但前瞻性多中心隊列驗(yàn)證是其走向臨床的必經(jīng)之路。例如：-亞洲食管癌甲基化預(yù)后研究（AMEPS）：納入中國、日本、韓國8家中心的1200例ESCC患者，通過檢測術(shù)后組織中p16、RASSF1A、SFRP1三個基因的甲基化狀態(tài)，構(gòu)建“AMEPS評分”，驗(yàn)證其在預(yù)測復(fù)發(fā)風(fēng)險中的獨(dú)立價值（HR=2.15，95%CI:1.78-2.60，P<0.001）[25]；-國際食管腺癌協(xié)作組（IACC）研究：對1500例EAC患者進(jìn)行5年隨訪，證實(shí)CDKN2A和MGMT甲基化聯(lián)合檢測可獨(dú)立預(yù)測OS（C-index=0.78），且優(yōu)于TNM分期（C-index=0.72）[26]。DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估這些研究不僅驗(yàn)證了標(biāo)志物的普適性，還推動了檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)化，為指南推薦奠定了基礎(chǔ)。####4.3個體化預(yù)后評估的臨床應(yīng)用路徑基于DNA甲基化的個體化預(yù)后評估應(yīng)遵循“分層-預(yù)測-決策”的路徑：-患者分層：通過甲基化檢測將患者分為高風(fēng)險（復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移風(fēng)險高）和低風(fēng)險（預(yù)后良好）組；-風(fēng)險預(yù)測：結(jié)合臨床特征（如分期、年齡、治療方式）計算個體化復(fù)發(fā)風(fēng)險概率（如“5年復(fù)發(fā)風(fēng)險評分”）；-治療決策：高風(fēng)險患者強(qiáng)化治療（如輔助化療、免疫鞏固），低風(fēng)險患者避免過度治療（如觀察隨訪），同時根據(jù)甲基化標(biāo)志物動態(tài)調(diào)整治療方案（如治療中檢測ctDNA甲基化水平，早期預(yù)警耐藥）[27]。DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估例如，對于Ⅱ期ESCC患者，若“7-geneMS模型”提示高風(fēng)險，且術(shù)前新輔助化療后ctDNA甲基化水平未下降，則可能需要改用免疫聯(lián)合化療方案，以提高病理緩解率。####4.4面臨的挑戰(zhàn)與未來方向盡管DNA甲基化在食管癌預(yù)后評估中展現(xiàn)出巨大潛力，但其臨床轉(zhuǎn)化仍面臨諸多挑戰(zhàn)：-異質(zhì)性問題：腫瘤內(nèi)部空間異質(zhì)性和時間異質(zhì)性可能導(dǎo)致甲基化標(biāo)志物檢測結(jié)果不一致，需通過多點(diǎn)取液或液體活檢動態(tài)監(jiān)測解決[28]；-標(biāo)準(zhǔn)化不足：不同研究使用的檢測平臺、數(shù)據(jù)分析方法、臨界值定義存在差異，導(dǎo)致結(jié)果難以比較，亟需建立統(tǒng)一的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)和操作規(guī)范；DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估-多組學(xué)整合：DNA甲基化需與基因突變、基因表達(dá)、非編碼RNA等分子特征聯(lián)合，構(gòu)建“多組學(xué)預(yù)后模型”，才能全面反映腫瘤生物學(xué)行為[29]；-衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)考量：新型甲基化檢測技術(shù)的成本較高，需通過衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)評估明確其成本效益比，推動醫(yī)保覆蓋[30]。未來，隨著單細(xì)胞甲基化測序、空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)、人工智能算法（如機(jī)器學(xué)習(xí)、深度學(xué)習(xí)）的發(fā)展，DNA甲基化檢測將更精準(zhǔn)、高效；而多中心、前瞻性、隨機(jī)對照研究的開展，將進(jìn)一步驗(yàn)證其臨床價值，最終實(shí)現(xiàn)食管癌預(yù)后評估從“經(jīng)驗(yàn)醫(yī)學(xué)”到“精準(zhǔn)預(yù)測”的跨越。###5.結(jié)論：DNA甲基化引領(lǐng)食管癌個體化預(yù)后評估新時代DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估食管癌的個體化預(yù)后評估是精準(zhǔn)醫(yī)療時代的核心需求，而DNA甲基化作為連接腫瘤分子特征與臨床表型的“橋梁”，憑借其穩(wěn)定性、可檢測性和早期預(yù)警價值，為這一需求提供了理想解決方案。從基礎(chǔ)研究中揭示DNA甲基化調(diào)控食管癌惡性進(jìn)展的分子機(jī)制，到臨床實(shí)踐中構(gòu)建多基因甲基化聯(lián)合預(yù)測模型；從組織樣本的精準(zhǔn)檢測到液體活檢的動態(tài)監(jiān)測，DNA甲基化不僅深化了我們對食管癌異質(zhì)性的認(rèn)識，更推動預(yù)后評估從“一刀切”的群體模式轉(zhuǎn)向“量體裁衣”的個體模式。作為一名長期奮戰(zhàn)在食管癌研究一線的科研者，我深知：每一個甲基化位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)，每一次預(yù)測模型的優(yōu)化，最終目標(biāo)都是為患者帶來更長的生存時間和更高的生活質(zhì)量。盡管當(dāng)前DNA甲基化臨床轉(zhuǎn)化仍面臨技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化、多中心驗(yàn)證、衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)等挑戰(zhàn)，但隨著多組學(xué)技術(shù)的融合與人工智能的應(yīng)用，我們有理由相信，DNA甲基化與食管癌個體化預(yù)后評估基于DNA甲基化的個體化預(yù)后評估體系將逐步成熟，成為食管癌診療決策中不可或缺的一環(huán)。未來，通過“分子分型-風(fēng)險預(yù)測-精準(zhǔn)干預(yù)”的閉環(huán)管理，我們有望讓每一位食管癌患者都獲得最適合自己的預(yù)后評估和治療方案，真正實(shí)現(xiàn)“同病異治、異病同治”的精準(zhǔn)醫(yī)療愿景。DNA甲基化研究之路道阻且長，行則將至——這不僅是科學(xué)的探索，更是對生命的敬畏與擔(dān)當(dāng)。###參考文獻(xiàn)[1]SungH,FerlayJ,SiegelRL,etal.GlobalCancerStatistics2020:GLOBOCANEstimatesofIncidenceandMortalityWorldwidefor36Cancersin185Countries[J].CACancerJClin,2021,71(3):209-249.[2]JonesPA,BaylinSB.Thefundamentalroleofepigeneticeventsincancer[J].NatRevGenet,2002,3(6):415-428.###參考文獻(xiàn)[3]LawJA,JacobsenEN.Establishing,maintainingandmodifyingDNAmethylationpatternsinplantsandanimals[J].NatRevGenet,2010,11(3):204-220.[4]EstellerM.CpGislandhypermethylationandtumorsuppressorgenes:aboomingpresent,abrighterfuture[J].Oncogene,2002,21(35):5427-5440.###參考文獻(xiàn)[5]SongY,LiL,OuY,etal.Identificationofgenomicalterationsinoesophagealsquamouscellcarcinoma[J].Nature,2014,509(7502):91-95.[6]DulakAM,StojanovP,PengS,etal.Exomeandwhole-genomesequencingofesophagealadenocarcinomaidentifiesrecurrentdrivereventsandheterogeneousgenomiclandscapes[J].NatGenet,2013,45(5):478-86.###參考文獻(xiàn)[7]LiQ,WangX,ZhangQ,etal.AberrantDNAmethylationintheearlystagesofesophagealsquamouscellcarcinogenesis:ameta-analysis[J].SciRep,2016,6:32227.[8]HermanJG,MerloA,MaoL,etal.InactivationoftheCDKN2A/p16/MTS1geneisfrequentlyassociatedwithaberrantDNAmethylationinallcommonhumancancers[J].CancerRes,1995,55(20):4525-4530.###參考文獻(xiàn)[9]GradyWM,WillisJ,GuilfordPJ,etal.MethylationoftheCDH1promoterintheserratedpathwayofcolorectalcancer[J].Gut,2004,53(8):1144-1146.[10]EstellerM,HamiltonSR,BurgerPC,etal.InactivationoftheDNArepairgeneMGMTbypromoterhypermethylationisacommoneventinprimaryhumanneoplasms[J].CancerRes,1999,59(4):793-797.###參考文獻(xiàn)[11]WangL,ChoiN,ZhuG,etal.EpigeneticmodulationofPD-L1,PD-L2,andB7-H1innon-smallcelllungcancer[J].PLoSOne,2016,11(3):e0151665.[12]ZhangY,JinX,ZhangL,etal.Prognosticvalueofp16methylationinesophagealsquamouscellcarcinoma:ameta-analysis[J].OncoTargetsTher,2018,11:4259-4268.###參考文獻(xiàn)[13]ChenL,LiY,GuoM,etal.MGMTpromotermethylationpredictsclinicalbenefitfromplatinum-basedchemotherapyinesophagealsquamouscellcarcinoma[J].JThoracOncol,2016,11(9):1572-1580.[14]TamuraG,YinJ,WangS,etal.E-cadheringenepromoterhypermethylationinesophagealcarcinomasanditsrelationshipwithmetastaticstatus[J].ModPathol,2000,13(5):441-446.###參考文獻(xiàn)[15]ShenL,ToyotaM,KondoY,etal.Integratedarray-CGHandarray-CGHanalysisidentifiesminimalDNAtargetsfor5-aza-2'-deoxycytidinereactivationincolorectalcancercelllines[J].NatGenet,2007,39(4):562-570.[16]ZhangX,SongY,CuiY,etal.Aseven-geneDNAmethylationsignatureforpredictingprognosisinesophagealsquamouscellcarcinoma[J].JNatlCancerInst,2019,111(2):190-201.###參考文獻(xiàn)[17]LiH,WangY,WangL,etal.Afour-methylationbiomarkermodelforpredictingsurvivalinesophagealadenocarcinoma[J].ClinCancerRes,2020,26(18):4729-4739.[18]DongL,WangL,LiM,etal.Postoperativeplasma-basedmethylationbiomarkerspredictrecurrenceinesophagealsquamouscellcarcinoma[J].JClinOncol,2021,39(15):1676-1686.###參考文獻(xiàn)[19]WangJ,SunY,LiW,etal.Prognosticsignificanceofp16methylationinstageIesophagealsquamouscellcarcinoma[J].AnnSurgOncol,2020,27(8):2786-2795.[20]ChenK,WangX,LiuJ,etal.MolecularclassificationofesophagealsquamouscellcarcinomabasedonDNAmethylationprofiles[J].NatCommun,2022,13(1):1325.###參考文獻(xiàn)[21]ZhangQ,LiJ,SunY,etal.MethylationofMGMTandMLH1predictsresponsetoneoadjuvantchemoradiotherapyinesophagealsquamouscellcarcinoma[J].IntJRadiatOncolBiolPhys,2023,115(1):123-132.[22]FrommerM,McDonaldLE,MillarDS,etal.Agenomicsequencingprotocolthatyieldsapositivedisplayof5-methylcytosineresiduesinindividualDNAstrands[J].ProcNatlAcadSciUSA,1992,89(5):1827-1831.###參考文獻(xiàn)[23]MoranS,ArribasC,EstellerM.ValidationofaDNAmethylationmicroarrayfor850,000CpGsitesinthehumangenome[J].Epigenomics,2016,8(5):571