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團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/BDAS005-2025北京鮮牛奶Beijingfreshmilk布 2025-12-26施北市業(yè)會(huì) 發(fā)布前 言GB/T1.1-20201北京艾萊發(fā)喜食品有限公司、北京三元燕山食品有限公司。本文件主要起草人：陳歷俊、林莉、呂曉蓮、張國(guó)鈺、郭剛、何小唐、白薩茹拉、金越、賈舸、牛曉冉、喬為倉(cāng)、胡聚峰、劉豐、張毅、周京生。該文件為首次發(fā)布。北京鮮牛奶本文件適用于北京鮮牛奶的生產(chǎn)和銷(xiāo)售。規(guī)范性引用文件（）GB2761食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量GB2762食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中污染物限量GB4789.2食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定GB5009.5食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定GB5009.6食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中脂肪的測(cè)定GB5009.299食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中乳鐵蛋白的測(cè)定GB7718食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品標(biāo)簽通則GB19301食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)生乳GB19645食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)巴氏殺菌乳GB28050食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品營(yíng)養(yǎng)標(biāo)簽通則GB29921食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品中致病菌限量GB31605食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品冷鏈物流衛(wèi)生規(guī)范NY/T800生鮮牛乳中體細(xì)胞的測(cè)定方法NY/T3799生乳及其制品中堿性磷酸酶活性的測(cè)定發(fā)光法《企業(yè)生產(chǎn)乳制品許可條件審查細(xì)則》術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。72（頭1GB表1 北京鮮奶生牛乳生物體細(xì)限量項(xiàng)目限量檢驗(yàn)方法菌總數(shù)/（CFU/mL） ≤2.0×104GB4789.2體胞/（個(gè)/mL） ≤2.5×105NY/T800應(yīng)采用72產(chǎn)品要求感官要求感官要求應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2感官要求項(xiàng)目要求檢驗(yàn)方法色澤呈乳白色或微黃色。取適量試樣置于50mL燒杯滋味、氣味具有乳固有的香味、口感新鮮、微甜。中，在自然光下觀察色澤和組織狀態(tài)。聞其氣味，用溫組織狀態(tài)呈均勻一致液體，無(wú)凝塊、無(wú)沉淀、無(wú)正常視力可見(jiàn)異物。開(kāi)水漱口，品嘗滋味。質(zhì)量指標(biāo)脂肪、蛋白質(zhì)、乳鐵蛋白、免疫球蛋白、乳過(guò)氧化物酶應(yīng)符合表3的規(guī)定，其它理化指標(biāo)應(yīng)符合GB19645的規(guī)定。表3質(zhì)量指標(biāo)項(xiàng)目脂肪/（g/100g） ≥指標(biāo)3.8檢測(cè)方法GB5009.6蛋白質(zhì)/（g/100g） ≥3.3GB5009.5乳鐵蛋白/（mg/L） ≥40GB5009.299免疫球蛋白/（mg/L） ≥200附錄A乳過(guò)氧化物酶/（U/L） ≥2000附錄B安全指標(biāo)污染物限量污染物限量應(yīng)符合GB2762的規(guī)定。真菌毒素限量真菌毒素限量應(yīng)符合GB2761的規(guī)定。微生物限量致病菌限量應(yīng)符合GB29921的規(guī)定。微生物限量還應(yīng)符合GB19645標(biāo)簽標(biāo)識(shí)應(yīng)符合GB7718、GB28050、GB19645和相關(guān)規(guī)定。冷鏈物流過(guò)程應(yīng)符合GB31605的相關(guān)規(guī)定。附 錄 A（）免疫球蛋白（IgG）的測(cè)定范圍本方法規(guī)定了巴氏殺菌乳中免疫球蛋白IgG的高效液相色譜測(cè)定方法。本方法適用于巴氏殺菌乳中免疫球蛋白IgG含量的測(cè)定。原理樣品經(jīng)離心去脂肪后，利用等電點(diǎn)沉淀酪蛋白，采用親和柱分離，在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白IgG與配基結(jié)合，在鹽酸甘氨酸緩沖液條件下洗脫免疫球蛋白IgG，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)于280nm處檢測(cè)，外標(biāo)法定量。試劑和材料除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)室用水應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。試劑無(wú)水磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。磷酸二氫鉀（KH2PO4）。甘氨酸。鹽酸（HCl）：濃度≥36%。試劑配制鹽酸溶液（6mol/L）：取500mL鹽酸加水定容至1000mL，混勻。0.05mol/L磷酸鹽緩沖液（pH=6.5）：稱取無(wú)水磷酸氫二鈉5.6765g，磷酸二氫鉀4.6478g，加水定容至1000mL，混勻。0.05mol/L甘氨酸鹽酸緩沖液（pH=2.5）：稱取甘氨酸3.7535g，加800mL水溶解，再加入6mol/L鹽酸4.75mL，用水定容至1000mL，混勻。標(biāo)準(zhǔn)品免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥95%）。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)品10mg（精確至0.1mg），加10mL水溶解，溶液濃度為1000μg/mL，放置4℃密封貯藏，保存期3個(gè)月。免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)工作液：吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用磷酸鹽緩沖液稀釋至免疫球蛋白IgG濃度為50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。儀器和設(shè)備高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器和梯度洗脫裝置。電子天平：感量為0.1mg。冷凍離心機(jī)：4℃，轉(zhuǎn)速≥10000r/min。pH計(jì)：精度為0.01。渦旋儀。分析步驟樣品前處理試樣制備取適量有代表性的樣品，將樣品搖勻后儲(chǔ)存于容器中作為試樣，于0℃~4℃保存，備用。試樣提取吸取2.5mL試樣置于離心管中，加入2.5mL磷酸鹽緩沖液溶解稀釋?zhuān)瑴u旋混勻，在4℃條件下8000r/min離心20min，吸取3mL上清液，置于另一離心管中。用乙酸調(diào)節(jié)pH至4.6，使用磷酸鹽緩沖液定容至5mL，混勻，在4℃條件下8000r/min離心20min，將上清液通過(guò)0.22μm尼龍濾膜過(guò)濾，收集濾液于進(jìn)樣瓶中，待高效液相色譜儀測(cè)定。儀器參考條件色譜柱：HiTrapproteinGHP1mL親和柱。親和柱先用5倍柱體積的重蒸餾水或去離子水洗柱，再用10倍柱體積的流動(dòng)相A平衡柱，進(jìn)樣，按照洗脫程序進(jìn)行洗脫。流速：0.4mL/min。柱溫：25℃。檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。進(jìn)樣量：20μL。流動(dòng)相：A：0.05mol/L磷酸鹽緩沖液（pH=6.5）；B：0.05mol/L甘氨酸鹽酸緩沖液（pH=2.5），洗脫梯度見(jiàn)表A.1。表A.1流動(dòng)相梯度洗脫參考程序表時(shí)間/minA/%B/%0.0010004.5010005.50010015.00010015.50100028.001000標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液分別注入高效液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液中免疫球蛋白IgG的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。免疫球蛋白IgGA.1。試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中，得到峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣中免疫球蛋白IgG的濃度。分析結(jié)果的表述樣品中免疫球蛋白IgG含量按公式（1）計(jì)算：X?q×V1×V3 (1)V×V2式中：X——試樣中免疫球蛋白IgG的含量，單位為微克每毫升（μg/mL）；ρ——根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算得到的試樣溶液中免疫球蛋白IgG的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——試樣體積，單位為毫升（mL）；V1——試樣稀釋后體積，單位為毫升（mL）；V2——吸取上清液體積，單位為毫升（mL）；V3——定容液體積，單位為毫升（mL）；計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后兩位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。其他在當(dāng)取樣量為2.5mL，定容體積為5mL，進(jìn)樣量為20μL時(shí)，檢出限為30μg/mL，定量限為90μg/mL。圖A.1免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)溶液（200μg/mL）液相色譜圖附 錄 B（）乳過(guò)氧化物酶（LPO）的測(cè)定（活性檢測(cè)試劑盒法）范圍本方法適用于快速定量檢測(cè)生鮮乳、巴氏殺菌乳、高溫滅菌乳中乳過(guò)氧化物酶的活性。原理該試劑盒以酶促反應(yīng)為基礎(chǔ)。將樣品或者標(biāo)準(zhǔn)品加入微孔板中，隨后加入底物，樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的LPO將LPO450nmLPO試劑和材料試劑盒提供試劑標(biāo)品稀釋液，12mL。LPO底物液，12mL。終止液，12mL。A（20×），40mL。B（20×），40mL。試劑配制AB1:1:18體積比進(jìn)行稀釋?zhuān)?份樣本濃縮提取試劑A（20×、試劑B（20×）加18份去離子水，用于樣本提取。2~8℃12個(gè)月，無(wú)需現(xiàn)用現(xiàn)配。試劑盒提供標(biāo)準(zhǔn)品乳過(guò)氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)品，0.6mL，12000U/L。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制乳過(guò)氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)系列稀釋溶液的配制：準(zhǔn)確移取乳過(guò)氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)溶液，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液定容，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的標(biāo)品濃度為0U/L，配制成濃度分別為600U/L、300U/L、150U/L、75U/L、37.5U/L和0U/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。材料離心管，1.5mL。離心管，50mL。1#去離子水儀器和設(shè)備450nm/630nm濾光片的酶標(biāo)儀。渦旋儀。離心機(jī)，≥4000r/min。恒溫培養(yǎng)箱（37℃）。移液槍?zhuān)?00μL~1000μL。多通道移液器，30μL~300μL。微孔板，96T。分析步驟樣品前處理5mL50mL離心管中，恢復(fù)至室溫。5mL樣本提取液，振蕩混勻。4000r/min5min。用濾紙過(guò)濾上清液，收集濾液待測(cè)。1:1-1:101:20-1:80的比例稀釋?zhuān)邷匕褪蠚⒕楹统邷販缇椴唤ㄗh稀釋。稀釋倍數(shù)=2（提取稀釋倍數(shù)）×提取后樣品的稀釋倍數(shù)檢測(cè)方法雙平行：建議對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品及待檢樣品的檢測(cè)均進(jìn)行雙平行檢測(cè)。記錄：取相應(yīng)數(shù)量的微孔置于微孔架上，記錄標(biāo)準(zhǔn)品和樣品位置。加標(biāo)準(zhǔn)品/100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，注意更換槍頭。50μLLPO底物，在水平面輕輕振蕩混勻，加蓋蓋板膜，在37℃恒溫培養(yǎng)箱中避光孵育10min。測(cè)定：向每個(gè)微孔中加入50μL終止液，在水平面輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于nm（45060nm5mnOD標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作及結(jié)果分析利用專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行樣本的準(zhǔn)確、快速分析。選擇4參數(shù)方法（4P）構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出稀釋后樣本中LPO活性，再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即