提能訓(xùn)練練案41微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用A組一、選擇題1．(2024·遼寧省實(shí)驗(yàn)中學(xué)五模)關(guān)于微生物的培養(yǎng)，下列敘述錯(cuò)誤的是()A．由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物B．消毒的對(duì)象有操作的空間、操作者的衣著和手、培養(yǎng)基C．純培養(yǎng)可采用平板劃線法或稀釋涂布平板法，有時(shí)還需要借助選擇性培養(yǎng)基D．平板劃線法不能用于微生物的計(jì)數(shù)，稀釋涂布平板法可用于統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目答案：B解析：在微生物培養(yǎng)過(guò)程中，由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，A正確；培養(yǎng)微生物時(shí)，其培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行滅菌，B錯(cuò)誤；純培養(yǎng)可采用平板劃線法或稀釋涂布平板法，有時(shí)還需要借助選擇性培養(yǎng)基，以達(dá)到分離純化的目的，C正確；由于平板劃線法前期劃線部分菌液濃度過(guò)高，菌落聚集，無(wú)法計(jì)數(shù)，D正確。2．(2025·山東生物規(guī)范訓(xùn)練)下列有關(guān)平板劃線操作的敘述，不正確的是()A．第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物B．每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種C．在第二次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于菌液D．劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)能及時(shí)殺死接種環(huán)上的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者答案：C解析：接種前先要用火焰灼燒接種環(huán)，目的是避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物，A正確；每次劃線結(jié)束，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，B正確；在第二區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上一次劃線的末端，C錯(cuò)誤；劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者，D正確。3．(2024·華中師大附中測(cè)試)由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程就是純培養(yǎng)。下列關(guān)于酵母菌純培養(yǎng)的敘述錯(cuò)誤的是()A．酵母菌的純培養(yǎng)包括配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)等步驟B．配制好的培養(yǎng)基和倒平板用的培養(yǎng)皿均要采用高壓蒸汽滅菌C．如果采用平板劃線法接種酵母菌，接種環(huán)在接種前后均要進(jìn)行灼燒滅菌D．如果接種的培養(yǎng)基有不同形態(tài)的菌落，可能是接種的菌種不純答案：B解析：酵母菌的純培養(yǎng)，包括配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)等步驟，尤其注意防止雜菌污染，A正確；培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)皿要采用干熱滅菌，B錯(cuò)誤；如果采用平板劃線法接種酵母菌，接種環(huán)在接種前后均要進(jìn)行灼燒滅菌，接種前滅菌可以防止雜菌污染，實(shí)驗(yàn)完成后接種工具滅菌，以免污染環(huán)境，C正確；未接種的培養(yǎng)基如果有菌落，說(shuō)明培養(yǎng)基被雜菌污染，接種的培養(yǎng)基有不同形態(tài)的菌落，可能是接種的菌種不純或操作不規(guī)范等導(dǎo)致的，D正確。4．(2025·遼寧省朝陽(yáng)市期末試題)下列關(guān)于土壤中尿素分解菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是()A．判斷培養(yǎng)基滅菌是否徹底，可將未接種的以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基置于與實(shí)驗(yàn)組相同條件下培養(yǎng)B．判斷培養(yǎng)基是否具有篩選作用，可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基與實(shí)驗(yàn)組相同處理最終對(duì)比菌落數(shù)C．培養(yǎng)過(guò)程中可每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果D．測(cè)定土壤中尿素分解菌的數(shù)量和土壤中細(xì)菌的數(shù)量應(yīng)選用相同的稀釋倍數(shù)答案：D解析：若要判斷培養(yǎng)基滅菌是否徹底，可將未接種的培養(yǎng)基置于與實(shí)驗(yàn)組相同條件下培養(yǎng)，觀察未接種的培養(yǎng)基上是否會(huì)出現(xiàn)菌落，A正確；若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需設(shè)置接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對(duì)照，若牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)明顯大于選擇培養(yǎng)基的菌落數(shù)目，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些細(xì)菌菌落，B正確；該實(shí)驗(yàn)每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，并以菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，C正確；測(cè)定土壤中尿素分解菌的數(shù)量和土壤中細(xì)菌的數(shù)量應(yīng)選用不同的稀釋倍數(shù)，土壤中細(xì)菌含量多，因而涂布平板時(shí)，細(xì)菌稀釋液的稀釋倍數(shù)應(yīng)較高，D錯(cuò)誤。5．(2024·豫湘名校聯(lián)考四模)大腸桿菌在人和動(dòng)物腸道中普遍存在，常以其在水中的含量作為評(píng)價(jià)水質(zhì)的指標(biāo)之一。某研究機(jī)構(gòu)將已知體積的水過(guò)濾后，將濾膜放在伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在該培養(yǎng)基上大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)深紫色，并有金屬光澤，可以根據(jù)培養(yǎng)基上深紫色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。下列敘述正確的是()A．伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基從功能上看，屬于選擇培養(yǎng)基B．取1mL水樣加入10mL無(wú)菌水，可制備稀釋倍數(shù)為10的稀釋液C．與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)結(jié)果相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)目較少D．放置濾膜的平板上有43個(gè)菌落，同時(shí)培養(yǎng)的空白滅菌平板上有1個(gè)菌落，則菌落的計(jì)數(shù)結(jié)果為42個(gè)答案：C解析：在伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)深紫色，可根據(jù)這一特性對(duì)大腸桿菌菌落進(jìn)行鑒定，故伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基從功能上看，屬于鑒別培養(yǎng)基，A錯(cuò)誤；取1mL水樣加入9mL無(wú)菌水，可制備稀釋倍數(shù)為10的稀釋液，B錯(cuò)誤；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)結(jié)果相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)目較少，因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，C正確；若同時(shí)培養(yǎng)的空白滅菌平板上出現(xiàn)菌落，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不徹底或者被污染了，實(shí)驗(yàn)應(yīng)該重做，D錯(cuò)誤。6．(2024·山東濰坊昌樂(lè)二中三模)我國(guó)科學(xué)家從北極分離、鑒定出了一種耐冷細(xì)菌，過(guò)程如下：①接種在人造海水中，15℃條件下振蕩培養(yǎng)3h；②梯度稀釋后將樣品涂布在TYS培養(yǎng)基中，15℃條件下培養(yǎng)7d；③挑取生長(zhǎng)菌落，進(jìn)行劃線，15℃條件下培養(yǎng)；④選擇不同形態(tài)的菌落進(jìn)行培養(yǎng)、鑒定和保藏。下列敘述錯(cuò)誤的是A．過(guò)程①中的振蕩培養(yǎng)可以提高培養(yǎng)液中的溶氧量B．過(guò)程②中的TYS培養(yǎng)基滅菌前需將pH調(diào)至酸性C．過(guò)程②③使用的接種器具均需灼燒并冷卻后接種D．涂布后再次劃線培養(yǎng)的目的是進(jìn)一步純化所得菌種答案：B解析：過(guò)程①中的振蕩培養(yǎng)，能使人造海水與氧氣充分接觸，提高溶解氧的供應(yīng)量，A正確；過(guò)程②中的TYS培養(yǎng)基滅菌前需將pH調(diào)至酸性，會(huì)破壞該細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，應(yīng)將pH調(diào)至中性或弱堿性，B錯(cuò)誤；過(guò)程②③使用的接種器具均需灼燒，是防止雜菌污染，冷卻后操作是避免接種器具因溫度太高殺死菌種，C正確；涂布平板法獲得單菌落，但為避免雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度，會(huì)在涂布后再次劃線培養(yǎng)，以保證可以進(jìn)一步得到純化的菌種，D正確。7．(2024·遼寧省教研教改聯(lián)合體調(diào)研考試)為宣傳正確佩戴口罩可降低呼吸道傳染疾病的風(fēng)險(xiǎn)，菏澤某中學(xué)的同學(xué)們進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基置于距正確佩戴口罩的實(shí)驗(yàn)者口部前方50cm處，然后對(duì)著培養(yǎng)基講話1min或咳嗽2次，再進(jìn)行微生物培養(yǎng)和計(jì)數(shù)，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．接種前要判斷固體培養(yǎng)基是否被污染，不用接種無(wú)菌水培養(yǎng)檢測(cè)B．實(shí)驗(yàn)中還應(yīng)設(shè)置不戴口罩直接講話或咳嗽進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對(duì)照C．實(shí)驗(yàn)者對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行處理后，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2D．培養(yǎng)結(jié)束后可根據(jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征確定微生物的數(shù)量答案：D解析：要驗(yàn)證培養(yǎng)基是否被污染，應(yīng)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適當(dāng)時(shí)間，觀察是否有菌落產(chǎn)生，A正確；該實(shí)驗(yàn)中的實(shí)驗(yàn)組是正確佩戴口罩的實(shí)驗(yàn)者口部前方50cm處，然后對(duì)著培養(yǎng)基講話1min或咳嗽2次，為了確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，還應(yīng)設(shè)置不戴口罩直接講話或咳嗽進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對(duì)照，B正確；本實(shí)驗(yàn)是為了確定正確佩戴口罩可降低呼吸道傳染疾病的風(fēng)險(xiǎn)，而人體的溫度約為37℃，因此應(yīng)設(shè)置與人體相同的溫度，即在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2天，C正確；由于不同微生物的菌落特征不同，因此培養(yǎng)結(jié)束后可根據(jù)菌落的形狀、大小、色澤等特征確定微生物種類，但不能確定微生物數(shù)量，二、非選擇題8．(2025·福建三校聯(lián)考)甘肅某地由于TNT(主要成分為2,4－二硝基甲苯磺酸鹽)紅水蒸發(fā)池滲漏，對(duì)土壤造成嚴(yán)重污染，威脅到黃河上游的水質(zhì)安全。因此，TNT紅水污染土壤修復(fù)是目前亟待解決的環(huán)境問(wèn)題。某實(shí)驗(yàn)小組欲通過(guò)生物修復(fù)分離有效降解2,4－二硝基甲苯磺酸鹽的菌株，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)LB培養(yǎng)基的制備：取胰蛋白胨、NaCl和酵母提取物溶于蒸餾水中，此過(guò)程中胰蛋白胨提供的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是____________，用NaOH調(diào)節(jié)pH至7.2，常用______________在121℃條件下滅菌15分鐘。若要獲得本研究所用的固體培養(yǎng)基，需在上述培養(yǎng)基中加入________(2)菌株分離與鑒定：取____________________________土壤放入裝有100mL無(wú)菌LB液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，在30℃和120rpm的恒溫?fù)u床上振蕩24小時(shí)。取1mL培養(yǎng)液，采用______________(3)該實(shí)驗(yàn)小組欲進(jìn)一步探究菌株對(duì)2,4－二硝基甲苯磺酸鹽的降解能力，請(qǐng)幫助設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，寫出實(shí)驗(yàn)思路：___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。答案：(1)碳源和氮源高壓蒸汽滅菌鍋瓊脂(2)甘肅某TNT紅水污染場(chǎng)地污染稀釋涂布平板(3)取人工配制的一定濃度的2,4－二硝基甲苯磺酸鹽(TNT)溶液加入錐形瓶中，之后再在錐形瓶中加入一定量的純化菌液，每隔一定時(shí)間取樣，測(cè)定2,4－二硝基甲苯磺酸鹽濃度解析：(1)胰蛋白胨既可以提供碳源，也可以提供氮源，故LB培養(yǎng)基的制備：取胰蛋白胨、NaCl和酵母提取物溶于蒸餾水中，此過(guò)程中胰蛋白胨提供的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是碳源和氮源；用NaOH調(diào)節(jié)pH至7.2，在121℃條件下用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌15(2)自然界中目的菌株的篩選依據(jù)：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找，本實(shí)驗(yàn)要分離有效降解2,4－二硝基甲苯磺酸鹽的菌株，因此取甘肅某TNT紅水污染場(chǎng)地污染土壤。放入裝有100mL無(wú)菌LB液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，在30℃和120rpm的恒溫?fù)u床上振蕩24小時(shí)。分離純化菌株的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，根據(jù)題意，取1mL(3)要分析菌株對(duì)2,4－二硝基甲苯磺酸鹽的降解能力，可以取人工配制的一定濃度的2,4－二硝基甲苯磺酸鹽(TNT)溶液加入錐形瓶中，之后再在錐形瓶中加入一定量的純化菌液，每隔一定時(shí)間取樣，測(cè)定2,4－二硝基甲苯磺酸鹽濃度。B組一、選擇題1．(2025·高中生物規(guī)范訓(xùn)練)如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5，下列操作方法正確的是()A．操作前要將接種環(huán)放在火焰旁滅菌B．劃線操作須在火焰上進(jìn)行C．在5區(qū)域中才有可能得到所需菌落D．在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌答案：D解析：進(jìn)行平板劃線操作之前，將接種環(huán)在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒滅菌，A錯(cuò)誤；平板劃線操作應(yīng)在火焰旁進(jìn)行，不能在火焰上進(jìn)行，B錯(cuò)誤；由題圖可知，5區(qū)域是最后一個(gè)區(qū)域，有可能在5區(qū)域獲得所需要的菌落，在4區(qū)域也有可能得到所需要的菌落，C錯(cuò)誤；在1、2、3、4區(qū)域中劃線前都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌，保證每次劃線的菌種來(lái)自上一區(qū)域的末端，1區(qū)域劃線前對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌目的是防止雜菌污染，5區(qū)域劃線后進(jìn)行灼燒滅菌是防止污染環(huán)境及操作者，D正確。2．(2024·湖北黃岡中學(xué)四模)微生物培養(yǎng)過(guò)程中要使用無(wú)菌技術(shù)，且要對(duì)微生物進(jìn)行純化培養(yǎng)。下列有關(guān)敘述正確的是()A．利用生物或其代謝物除去環(huán)境中部分微生物的方法屬于消毒B．培養(yǎng)基的滅菌既可用濕熱滅菌法也可用干熱滅菌法C．稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)時(shí)用臺(tái)盼藍(lán)染色更準(zhǔn)確D．平板劃線法純化細(xì)菌時(shí)必需對(duì)樣品液進(jìn)行多倍稀釋答案：A解析：利用生物或其代謝物除去環(huán)境中部分微生物的方法屬于生物消毒法，A正確；培養(yǎng)基滅菌為了保存水分和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不被破壞，只能用濕熱滅菌法，B錯(cuò)誤；稀釋涂布平板法是根據(jù)菌落數(shù)來(lái)統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)，而臺(tái)盼藍(lán)染色是統(tǒng)計(jì)活細(xì)胞的數(shù)目，二者不相關(guān)，C錯(cuò)誤；平板劃線法純化細(xì)菌本身就是通過(guò)多次劃線來(lái)進(jìn)行逐步稀釋，不需要先行稀釋，D錯(cuò)誤。3．(2024·湖北省黃岡中學(xué)二模)測(cè)定水樣是否符合飲用水的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，常用濾膜法測(cè)定大腸桿菌的總數(shù)。大腸桿菌在含有伊紅—亞甲藍(lán)的固體培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落呈深紫色。濾膜法測(cè)定大腸桿菌數(shù)目的流程如下：用濾膜過(guò)濾待測(cè)水樣或其稀釋液→水樣或稀釋液中的細(xì)菌留在濾膜上→將濾膜轉(zhuǎn)移到伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂平板上培養(yǎng)→統(tǒng)計(jì)濾膜上菌落數(shù)目。下圖為將待測(cè)水樣稀釋10倍后取100mL稀釋液時(shí)的測(cè)定結(jié)果。相關(guān)敘述正確的是()A．伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基B．圖中1L待測(cè)水樣中含大腸桿菌約1700個(gè)C．為減小誤差，應(yīng)對(duì)所有實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)并取平均值D．為防止雜菌污染，過(guò)濾裝置和培養(yǎng)基使用前需干熱滅菌答案：B解析：伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基，A錯(cuò)誤；識(shí)圖分析可知，圖中濾膜上菌落數(shù)目為17個(gè)，該圖為將待測(cè)水樣稀釋10倍后取100mL稀釋液時(shí)的測(cè)定結(jié)果，因此1L待測(cè)水樣中含大腸桿菌約17÷0.1×10＝1700個(gè)，B正確；為減小誤差，一般需對(duì)實(shí)驗(yàn)組菌落數(shù)為30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)并取平均值，C錯(cuò)誤；培養(yǎng)基應(yīng)濕熱滅菌，常采用高壓蒸汽滅菌法，D錯(cuò)誤。4．(2024·東北三省三校第二次聯(lián)考)將大腸桿菌培養(yǎng)在含有葡萄糖的培養(yǎng)液中，在時(shí)間0時(shí)，將含大腸桿菌的培養(yǎng)液均分為四組，處理見下表。混勻處理6小時(shí)后，將經(jīng)不同處理的培養(yǎng)液分別涂布在四組不同的平板上，每組涂12個(gè)，在37℃下培養(yǎng)24組別組1組2組3組4培養(yǎng)液處理只有葡萄糖葡萄糖＋物質(zhì)A葡萄糖＋物質(zhì)B葡萄糖＋物質(zhì)A＋物質(zhì)B平板的菌落平均數(shù)長(zhǎng)滿菌落2±24±123±3下列有關(guān)說(shuō)法，正確的是()A．研究物質(zhì)A和B對(duì)大腸桿菌的共同作用時(shí)，組1是對(duì)照組，2、3、4組為實(shí)驗(yàn)組B．物質(zhì)A和物質(zhì)B均能抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)，且物質(zhì)B的抑制作用強(qiáng)于物質(zhì)AC．物質(zhì)A與物質(zhì)B同時(shí)存在時(shí)，有些原來(lái)不能存活的大腸桿菌存活下來(lái)D．可在培養(yǎng)液(基)中加入酚紅試劑鑒別大腸桿菌答案：C解析：研究物質(zhì)A和B對(duì)大腸桿菌的共同作用時(shí)，組1、2、3均為對(duì)照組，組4為實(shí)驗(yàn)組，A錯(cuò)誤；組2、組3與組1對(duì)比可知，物質(zhì)A和物質(zhì)B均能抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)，且作用相當(dāng)，甚至物質(zhì)A的抑制作用稍強(qiáng)于物質(zhì)B，B錯(cuò)誤；組4與組2、組3對(duì)比可知，當(dāng)物質(zhì)A與物質(zhì)B同時(shí)存在時(shí)，菌落要比物質(zhì)A、物質(zhì)B單獨(dú)存在要多，說(shuō)明當(dāng)物質(zhì)A與物質(zhì)B同時(shí)存在時(shí)，有些原來(lái)不能存活的大腸桿菌存活下來(lái)，C正確；鑒別大腸桿菌可使用的試劑是伊紅—亞甲藍(lán)試劑，D錯(cuò)誤。5．(2025·安徽省合肥一中期末測(cè)試)某生物活動(dòng)小組為探究當(dāng)?shù)剞r(nóng)田土壤中尿素分解菌的數(shù)量，按隨機(jī)取樣、系列梯度稀釋、涂布平板、培養(yǎng)、計(jì)數(shù)等步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如圖所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：6號(hào)試管涂布的三個(gè)平板的菌落數(shù)分別為550、501、688,7號(hào)試管涂布的三個(gè)平板的菌落數(shù)分別為58、73、97,8號(hào)試管涂布的三個(gè)平板的菌落數(shù)分別為8、15、28。下列相關(guān)敘述正確的是()A．瓊脂培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基B．接種時(shí)要對(duì)操作者雙手進(jìn)行滅菌C．對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)可采用稀釋涂布平板法D．10g土壤樣品中約含有7.6×1010個(gè)尿素分解菌答案：C解析：瓊脂可作為凝固劑，含瓊脂的培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，A錯(cuò)誤；接種時(shí)要對(duì)操作者雙手進(jìn)行消毒，B錯(cuò)誤；當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，所以在對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)可采用稀釋涂布平板法，C正確；由于平板計(jì)數(shù)的適宜值在30～300之間，所以應(yīng)選擇7號(hào)試管涂布的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其平均菌落數(shù)為(58＋73＋97)/3＝76，據(jù)題圖可知，10g土壤樣品經(jīng)梯度稀釋至7號(hào)試管，稀釋度為108倍，而不是107倍，因?yàn)樵阱F形瓶中已經(jīng)稀釋10倍，所以利用公式計(jì)算每克土壤樣品中的菌落數(shù)：(76÷0.1)×108＝7.6×1010，但要特別注意，此時(shí)求出的是1g土壤中的微生物數(shù)量，所以該10g土壤樣品中含有分解尿素細(xì)菌的數(shù)目是7.6×1010×10＝7.6×1011個(gè)，D錯(cuò)誤。6．(2024·大連市適應(yīng)性考試)野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，賴氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變菌株由于發(fā)生基因突變只能在添加了賴氨酸的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。下圖是以野生型菌株為材料，誘變、純化賴氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變菌株的部分流程，數(shù)字代表培養(yǎng)基，A、B、C表示操作步驟。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．紫外線照射可提高突變率，獲得更多的突變菌株B．B步驟采用了稀釋涂布平板法在②培養(yǎng)基上接種C．③培養(yǎng)基中不需要添加賴氨酸，不需要提供氮源D．挑?、芘囵B(yǎng)基中菌落甲進(jìn)行純化培養(yǎng)可獲得所需突變菌株答案：C解析：紫外線作為物理誘變因素，用其照射可提高突變率，獲得更多的突變菌株，A正確；根據(jù)圖②中菌落分布均勻可知，B步驟采用了稀釋涂布平板法在②培養(yǎng)基上接種，B正確；圖中①②④為完全培養(yǎng)基，需添加賴氨酸，③為基本培養(yǎng)基，不能添加賴氨酸，但由于野生型菌株其他含氮物質(zhì)的合成也需要氮源，所以③中應(yīng)添加除賴氨酸以外的其他氮源，C錯(cuò)誤；結(jié)合題圖示可知，甲在基本培養(yǎng)基中無(wú)法生長(zhǎng)，在完全培養(yǎng)基中可生長(zhǎng)，說(shuō)明甲是氨基酸缺陷型菌落，故經(jīng)C過(guò)程影印及培養(yǎng)后，可從④培養(yǎng)基中挑取甲菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)即可獲得所需突變菌株，D正確。7．(2024·江西師大附中三模)雙層平板法是對(duì)噬菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)的常用方法。具體做法是：在無(wú)菌培養(yǎng)皿中倒入瓊脂含量為2%的培養(yǎng)基凝固成底層平板后，將瓊脂含量為1%的培養(yǎng)基熔化并冷卻至45～48℃，然后加入敏感指示菌和待測(cè)噬菌體稀釋懸液的混合液，充分混勻后立即倒入底層平板上形成雙層平板(見下圖)。培養(yǎng)一段時(shí)間后，在雙層培養(yǎng)基的上層會(huì)出現(xiàn)透亮無(wú)菌圓形空斑——噬菌斑，根據(jù)噬菌斑的數(shù)目可計(jì)算原液中噬菌體的數(shù)量。判斷下列正確的是(A．配置好的培養(yǎng)基滅菌后還需要添加緩沖液調(diào)節(jié)pHB．利用雙層平板法對(duì)T2噬菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)，選用的敏感指示菌為酵母菌C．倒上層平板時(shí)需將培養(yǎng)基冷卻到45～48℃D．與底層平板相比，上層培養(yǎng)基中瓊脂濃度較低的好處是形成的噬菌斑較大，有利于計(jì)數(shù)答案：D解析：配置好的培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)先添加緩沖液調(diào)節(jié)pH再滅菌，A錯(cuò)誤；T2噬菌體是專門寄生在大腸桿菌中的病毒，故T2噬菌體的宿主細(xì)菌是大腸桿菌，不能用其他微生物代替，B錯(cuò)誤；高溫會(huì)破壞蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，故將培養(yǎng)基冷卻至45～48℃最主要的原因是避免高溫殺死細(xì)菌和噬菌體，C錯(cuò)誤；與底層平板相比，上層培養(yǎng)基中瓊脂濃度較低的好處是形成的噬菌斑較大，有利于計(jì)數(shù)，D正確。二、非選擇題8．(2024·沈陽(yáng)二中三模)動(dòng)物的羽毛中蛋白質(zhì)含量豐富，是一種新型優(yōu)質(zhì)的蛋白源。但是羽毛蛋白是一種高度交聯(lián)的二硫鍵構(gòu)成的角蛋白，不容易被胃蛋白酶等一般蛋白酶降解。科研人員從長(zhǎng)期堆積腐爛羽毛的土壤中篩選分離出高效降解羽毛角蛋白的嗜熱型菌株?；卮鹨韵聠?wèn)題：(1)科研人員從長(zhǎng)期堆積腐爛羽毛的土壤中取5g土壤樣品分散于50mL的無(wú)菌水中，涂布于初篩培養(yǎng)基培養(yǎng)24h。初篩培養(yǎng)基除了含有微生物生長(zhǎng)所需要的水、各種無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)，還必須滿足的一個(gè)條件是________________________。為了篩選出符合條件的菌株，其取樣點(diǎn)應(yīng)是圖中的________點(diǎn)，理由是_________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)用5mL無(wú)菌水沖洗初篩培養(yǎng)基中長(zhǎng)出的菌落，接入富集培養(yǎng)基進(jìn)行富集培養(yǎng)48h。涂布分離，挑取單個(gè)菌