ICS07.140

CCSC06

34

安徽省地方標準

DB34/T4340—2022

法醫(yī)物證鑒定線粒體DNA種屬鑒定技術(shù)

規(guī)范

ForensicbiologyidentificationSpecificationofmitochondrialDNAforspecies

identification

2022-12-29發(fā)布2023-01-29實施

安徽省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB34/T4340—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別這些專利的責任。

本文件由安徽省司法廳提出并歸口。

本文件起草單位：安徽新萊蒂克司法鑒定中心、安徽省司法鑒定協(xié)會、安徽仁吉康生物技術(shù)有限責

任公司。

本文件主要起草人：張黎黎、鮑加琪、趙莎莎、王曉閔、張林杰、徐龍、孔東輝、王陳成、余春曉、

王彪、許云斐、劉慧、彭苗苗。

I

DB34/T4340—2022

法醫(yī)物證鑒定線粒體DNA種屬鑒定技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了法醫(yī)物證鑒定線粒體DNA種屬鑒定的基本要求、檢驗程序和鑒定意見書。

本文件適用于安徽省法醫(yī)DNA實驗室通過線粒體DNA測序的方法對動物源生物檢材（包括但不限于

血液、肌肉、毛發(fā)、骨骼、牙齒）的種屬來源進行確認，確認范圍為人和高等脊椎動物。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GA/T383-2014法庭科學(xué)DNA實驗室檢驗規(guī)范

SF/ZJD0105008-2018法醫(yī)物證鑒定線粒體DNA檢驗規(guī)范

CNAS-CL08-A002:2018司法鑒定/法庭科學(xué)機構(gòu)能力認可準則在法醫(yī)物證DNA鑒定領(lǐng)域的應(yīng)用說

明

《司法鑒定文書規(guī)范》司發(fā)通〔2016〕112號

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

法醫(yī)物證鑒定forensicbiologyidentification

鑒定人運用法醫(yī)物證學(xué)的科學(xué)技術(shù)或者專門知識，對各類生物檢材進行鑒別和判斷并提供鑒定意

見的活動。

種屬鑒定speciesidentification

廣義上的種屬鑒定包括動植物的類屬確定，狹義的種屬鑒定指的是動物的生物檢材的種屬來源鑒

定，即確定檢材是否屬于人體所有，有時還要確定檢材屬于何種動物。

線粒體DNAmitochondrialDNA,mtDNA

位于線粒體中的DNA，呈雙鏈環(huán)狀結(jié)構(gòu)。

序列比對alignment

為確定兩個或多個序列之間的相似性和同源性，將它們按照一定的規(guī)律進行排列。

4縮略語

下列縮略語適用于本文件。

COI:細胞色素c氧化酶亞基Ⅰ（cytochromecoxidasesubunitI）

1

DB34/T4340—2022

DNA:脫氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）

PCR:聚合酶鏈式反應(yīng)（polymerasechainreaction）

12SrRNA:12S核糖體核糖核酸（12SribosomalRNA）

5基本要求

應(yīng)符合SF/ZJD0105008-2018中4.1～4.3的要求。

6檢驗程序

樣本采集

6.1.1含有DNA的生物檢材（包括但不限于血液、肌肉、毛發(fā)、骨骼、牙齒）均可采集。

6.1.2樣本應(yīng)分別包裝，注明編號、采樣日期、采樣地點等信息。

6.1.3樣本采集后應(yīng)及時進行實驗。

DNA提取和純化

按照GA/T383-2014中附錄A的方法執(zhí)行。

PCR擴增與產(chǎn)物測序

6.3.1PCR擴增

根據(jù)需要，宜選擇通用引物或自行設(shè)計引物進行PCR擴增。

本文件提供了兩個線粒體DNA片段通用引物示例供參考：

示例1：12SrRNA引物對

F：5′-AAACTGGGATTAGATACCCCACTAT-3′

R：5′-GAGGGTGACGGGCGGTGTGT-3′

示例2：COI引物對

F：5′-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3′

R：5′-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3′

6.3.2PCR擴增產(chǎn)物測序

宜采用純化試劑盒或其他同行公認的純化方法對PCR擴增產(chǎn)物進行純化；宜采用商品化測序試劑

盒進行測序PCR反應(yīng)及毛細管測序電泳，獲得DNA序列信息。

6.3.3質(zhì)量控制

從事DNA種屬鑒定的實驗室至少應(yīng)該包括以下質(zhì)量控制措施：

a)對照設(shè)置：每次實驗需嚴格設(shè)置陽性（已知的DNA樣品）和陰性（不加DNA的空白）對照；

b)重復(fù)檢驗：為避免潛在的異質(zhì)性影響和保證結(jié)果的可靠性，宜進行正、反鏈雙向測序或單向二

次測序；

c)污染防控：實驗室應(yīng)采取措施以防止污染，并符合CNAS-CL08-A002:2018中7.4.4要求。

序列比對鑒定

2

DB34/T4340—2022

將測序獲得的DNA序列在國際通用的基因數(shù)據(jù)庫中進行核苷酸序列比對，宜結(jié)合序列比對結(jié)果、物

種形態(tài)、地理分布、時間等綜合信息出具鑒定意見。

7鑒定意見書

鑒定人根據(jù)6.4結(jié)果撰寫鑒定意見書。

鑒定意見書的格式要求參照《司法鑒定文書規(guī)范》的規(guī)定執(zhí)行。

3

DB34/T4340—2022

參考文獻

[1]GA/T382-