生物醫(yī)藥凍干技術流程操作規(guī)范一、引言凍干技術（真空冷凍干燥）是生物醫(yī)藥領域制備高活性、高穩(wěn)定性制劑的核心工藝，廣泛應用于蛋白藥物、疫苗、微生物制劑等產(chǎn)品的生產(chǎn)。規(guī)范的凍干操作不僅能保障產(chǎn)品活性與質(zhì)量，還能降低工藝偏差風險，滿足GMP（藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范）及相關法規(guī)要求。本文結合行業(yè)實踐與技術標準，梳理凍干技術全流程操作要點，為生物醫(yī)藥企業(yè)提供實用參考。二、設備與材料準備（一）核心設備要求凍干機是凍干工藝的核心設備，需根據(jù)產(chǎn)品特性選擇原位凍干機（適用于西林瓶、預充針等劑型）或分體式凍干機（適用于散裝物料或特殊容器）。設備關鍵系統(tǒng)需滿足以下要求：凍干腔：內(nèi)壁光滑、無死角，便于清潔滅菌，材質(zhì)需耐腐蝕（如316L不銹鋼）；制冷系統(tǒng)：冷凝器最低溫度需≤-50℃（常規(guī)生物制品），溫度控制精度±1℃；真空系統(tǒng)：極限真空度≤10Pa（動態(tài)真空度需穩(wěn)定在10~30Pa，依產(chǎn)品調(diào)整）；加熱系統(tǒng)：板層溫度控制范圍-50℃~+60℃，均勻性≤±1.5℃（板層間）。（二）設備驗證與校準凍干機需定期開展性能驗證（如空載熱分布、負載熱穿透、真空泄漏率測試），關鍵儀表（溫度傳感器、真空計、壓力表）需每年校準，確保參數(shù)監(jiān)測準確。（三）耗材與物料管理包裝容器：西林瓶需經(jīng)清洗、滅菌（干熱或濕熱）、干燥處理，膠塞需硅化（若需）并滅菌；過濾材料：除菌濾芯（孔徑0.22μm）需驗證完整性，使用前檢查批號與有效期；輔助材料：凍干保護劑（如甘露醇、蔗糖）需純度≥99%，溶劑（注射用水）需符合藥典要求。三、操作流程規(guī)范（一）預處理階段1.物料配制與除菌按配方準確稱量原料（如蛋白、疫苗原液、保護劑），在C級潔凈區(qū)（局部A級）配制，經(jīng)0.22μm除菌過濾后，轉入無菌分裝系統(tǒng)。2.分裝與裝盤分裝體積需結合凍干收縮率（通常預留20%~30%空間），西林瓶分裝后需快速裝盤（避免液體掛壁），裝盤密度需均勻（板層負載偏差≤5%）。（二）凍干機啟動與預操作1.腔體清潔與滅菌凍干腔使用純化水沖洗后，采用過氧化氫低溫等離子體滅菌（或濕熱滅菌，依設備設計），滅菌后需通風置換，確保殘留過氧化氫≤0.5ppm。2.系統(tǒng)預冷與真空建立啟動制冷系統(tǒng)，將冷凝器預冷至-45℃以下；啟動真空泵，待凍干腔真空度≤10Pa后，保持真空狀態(tài)備用。（三）凍干工藝執(zhí)行1.預凍階段根據(jù)物料共晶點（DSC或電阻法測定）設定預凍參數(shù)：預凍溫度：低于共晶點5~10℃（如共晶點-35℃，預凍溫度設為-40~-45℃）；預凍時間：確保物料完全凍結（通常為2~4小時，依裝量調(diào)整）；降溫速率：敏感物料（如病毒疫苗）采用慢凍（0.5~1℃/min），常規(guī)物料可采用速凍（5~10℃/min）。2.升華干燥（一次干燥）預凍完成后，以0.5~2℃/h的速率升溫板層（需低于共熔點5℃以上），同時維持真空度10~30Pa。此階段需監(jiān)控：物料溫度：避免超過共熔點（否則出現(xiàn)融化、噴瓶）；冷凝器溫度：≤-40℃（確保升華水蒸氣有效捕獲）；真空度：若突然上升，需檢查是否存在泄漏或物料融化。3.解析干燥（二次干燥）升華干燥結束后（物料溫度接近板層溫度，冷凝器捕水量穩(wěn)定），提高板層溫度至30~50℃（依產(chǎn)品耐受溫度），維持真空度≤10Pa，持續(xù)2~6小時（或至殘余水分≤3%）。（四）后處理階段1.充氣與壓塞凍干結束后，向凍干腔充入氮氣（或無菌空氣，依產(chǎn)品要求）至常壓，在惰性氣體保護下完成膠塞壓塞（板層壓塞或機械壓塞）。2.出箱與軋蓋取出凍干品，在A級潔凈區(qū)完成軋蓋（鋁塑蓋需滅菌），軋蓋后檢查密封性（負壓法或染色法）。四、質(zhì)量控制要點（一）過程參數(shù)監(jiān)控預凍、升華、解析階段的溫度-時間曲線需實時記錄，偏差需≤±2℃；真空度波動范圍≤±5Pa，冷凝器溫度需≤-40℃（升華階段）。（二）產(chǎn)品質(zhì)量檢測外觀：無萎縮、塌陷、噴瓶，凍干餅疏松均勻；殘余水分：≤3%（疫苗、蛋白類產(chǎn)品通常≤2%）；活性/效價：采用ELISA、細胞活性法等檢測，需符合注冊標準；無菌與內(nèi)毒素：每批次需進行無菌檢查（薄膜過濾法）、內(nèi)毒素檢測（鱟試劑法）。五、操作注意事項（一）人員操作規(guī)范操作人員需經(jīng)凍干工藝與GMP培訓，穿戴無菌服、手套、口罩，避免裸手接觸物料；分裝、壓塞等關鍵操作需在A級層流下進行，定期監(jiān)測人員潔凈度（如手套表面微生物）。（二）設備維護要求真空泵每運行200小時需更換真空泵油，每年檢查密封件（O型圈、波紋管）；制冷系統(tǒng)每月檢查制冷劑壓力，冷凝器需定期除霜（升華階段結束后）。（三）物料與環(huán)境管理原料需在規(guī)定溫度（如2~8℃）下儲存，過期或性狀異常物料禁止使用；凍干間溫濕度需控制在溫度20~25℃，濕度40%~60%，潔凈度符合C級要求。六、應急處理措施（一）真空度異常若真空度突然上升（＞30Pa），立即停止升溫，檢查凍干腔門密封、管道閥門，必要時補加真空泵油或更換濾芯。（二）制冷系統(tǒng)故障冷凝器溫度高于-40℃時，啟動備用制冷機組，若無法恢復，需緊急終止凍干（充氮后出箱，物料轉移至低溫保存）。（三）突然停電啟動UPS電源維持凍干機控制系統(tǒng)運行，同時手動開啟備用發(fā)電機，若停電超30分鐘，需按規(guī)程終止凍干（充氮、出箱并評估物料質(zhì)量）。七、文件記錄管理（一）工藝記錄凍干過程記錄表：記錄預凍、升華、解析的溫度、時間、真空度、冷凝器溫度；物料批次記錄：分裝量、除菌過濾時間、濾芯編號、裝盤數(shù)量。（二）設備與質(zhì)量記錄設備維護日志：真空泵油更換、傳感器校準、滅菌記錄；質(zhì)量檢測報告：殘余水分、活性、無菌檢測結果，偏差處理記