—3—《茶葉和花椒中草銨膦、草甘膦及其代謝物殘留量的非衍生化測(cè)定分散固相萃取結(jié)合液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法》（征求意見(jiàn)稿）編制說(shuō)明一、標(biāo)準(zhǔn)制定的目的和意義草銨膦和草甘膦均為非選擇性、廣譜、高極性除草劑，在茶園和花椒園管理中均被廣泛使用。草銨膦（GLU）的代謝產(chǎn)物主要為N-乙酰草銨膦（NAG）和3-甲基膦基丙酸（MPPA），草甘膦（GLY）的代謝產(chǎn)物主要為氨甲基磷酸（AMPA）。草銨膦會(huì)導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)毒性，進(jìn)入人體后除母體外，其代謝物NAG、MPPA同樣有檢出。研究表明，MPPA會(huì)擾亂作物的新陳代謝，導(dǎo)致葉片萎黃，葉綠素含量下降，從而影響其光合作用，進(jìn)而導(dǎo)致茶葉品質(zhì)下降和減產(chǎn)。草甘膦半衰期較長(zhǎng)，且在抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物中的殘留量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于非轉(zhuǎn)基因作物。研究表明，草甘膦具有潛在致癌性，其主要代謝產(chǎn)物AMPA在介導(dǎo)毒性作用和誘導(dǎo)氧化應(yīng)激方面與草甘膦相似，對(duì)動(dòng)物、人類健康、環(huán)境安全都構(gòu)成重大威脅。因此，對(duì)草銨膦、草甘膦及其代謝物的檢測(cè)十分必要。由于草銨膦、草甘膦及其代謝物具有較強(qiáng)的水溶性，在提取過(guò)程中，其他水溶性基質(zhì)成分也會(huì)被一起提取出來(lái)，干擾測(cè)定準(zhǔn)確性，因此分析難度較大。近年來(lái)，分散固相萃取（d-SPE）法—4—由于其靈活性，在多功能性食品、環(huán)境和生物分析樣品前處理中應(yīng)用廣泛，但其內(nèi)含物多含有無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉等除水鹽類，去除提取液中的水相，不適用于高極性、水溶性農(nóng)藥（如草甘膦等）的分析。與此同時(shí)，該類農(nóng)藥還是強(qiáng)極性小分子化合物，同時(shí)具備酸性基團(tuán)和堿性基團(tuán)，缺乏有色基團(tuán)和熒光基團(tuán)，難以氣化和被直接分析檢測(cè)，故需要采用衍生化法提高其檢測(cè)靈敏度，再通過(guò)反相色譜柱或陰離子交換柱分離后測(cè)定。目前，草銨膦、草甘膦及其代謝物常用的檢測(cè)方法有液相色譜電感耦合等離子色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、離其中，離子色譜法、氣相色譜法和液相色譜法存在定性困難、假陽(yáng)性率高等缺點(diǎn)。質(zhì)譜法大多前處理較復(fù)雜，或者測(cè)定基質(zhì)相對(duì)較簡(jiǎn)單，不利于茶葉、花椒這類復(fù)雜基質(zhì)的測(cè)定，且在傳統(tǒng)檢測(cè)中常常需要進(jìn)行衍生化，而衍生化試劑會(huì)污染離子源，毒性大，易與水反應(yīng)生成副產(chǎn)物，且衍生化前處理時(shí)間長(zhǎng)，檢測(cè)難度大。近年來(lái)，雖已有研究采用非衍生化檢測(cè)方法來(lái)分析大豆、玉米、飲用水等樣本中的草銨膦和草甘膦殘留，但這些研究所涉及的基質(zhì)相對(duì)較為簡(jiǎn)單，且僅限于針對(duì)草銨膦和草甘膦母體的檢測(cè)，不能滿足GB2763-2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中同時(shí)檢測(cè)草銨膦及其代謝物NAG和MPPA、草甘膦及—5—基酸等，花椒中含有大量的油脂、麻味物質(zhì)、生物堿等，這些物質(zhì)的存在會(huì)對(duì)草銨膦、草甘膦及其代謝物的測(cè)定造成很大干擾。因此，為簡(jiǎn)化前處理過(guò)程，實(shí)現(xiàn)對(duì)茶葉和花椒等復(fù)雜基質(zhì)中草銨膦、草甘膦及其代謝物的同時(shí)測(cè)定，本次團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制定所涉及的檢測(cè)方法，構(gòu)建了一種無(wú)需衍生化、采用分散固相萃?。╠-SPE）結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）的方法，用于檢測(cè)茶葉和花椒中草銨膦及其代謝物NAG和MPPA、草甘膦及其代謝物AMPA的殘留量，樣品經(jīng)10mL水+10mL1%甲酸-甲醇提取后，利用復(fù)合型多壁碳納米管（C-MWCNTs）分散固相萃取凈化，陰離子極性色譜柱分離，LC-MS/MS負(fù)離子模式檢測(cè)，方法前處理簡(jiǎn)單，無(wú)需衍生化，對(duì)檢測(cè)人員和環(huán)境友好，可作為大批量檢測(cè)茶葉和花椒中草銨膦和草甘膦及其代謝物殘留的方法，完全滿足GB2763-2021中對(duì)草銨膦GLU及其代謝物NAG和MPPA、草甘膦GLY及其代謝物AMPA的殘留量檢測(cè)要求。同時(shí)，因各國(guó)或地區(qū)茶葉中草銨膦的最大殘留限量（MRL值）相較于草甘膦更為嚴(yán)格，更應(yīng)引起重視；而花椒中關(guān)于草銨膦、草甘膦的最大殘留限量（MRL值）還存在較大空白，我國(guó)也并未對(duì)花椒或辛香料中草銨膦、草甘膦及其代謝物進(jìn)行限量要求，可見(jiàn)，本次方法的建立也為花椒等辛香料中最大殘留限量（MRL值）的制定提供一定參考。通過(guò)驗(yàn)證，該方法得到了很好驗(yàn)證效果，包括正確度、精密度、檢測(cè)限、定量限、線性范圍和基質(zhì)效應(yīng)在內(nèi)的方法性能均得—6—到了滿意的驗(yàn)證，5種化合物在該儀器條件下峰形尖銳，分離良好，在0.01μg/mL～2中的決定系數(shù)（R2）分別為R2＞0.9987和R2＞0.9992，定量限（LOQ）分別在0.03mg/kg～0.10mg/kg之間和0.03mg/kg～0.16mg/kg之間，在0.25mg/kg、0.50mg/kg、1.0mg/kg3個(gè)添加水平下，草銨膦、草甘膦及3種代謝物在茶葉中的平均回收率為61%~105%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.22%～13%；在花椒中的平均該檢測(cè)方法經(jīng)過(guò)2-3年的實(shí)際樣本檢測(cè)，現(xiàn)已在雅安、內(nèi)江、自貢、宜賓、甘孜等地實(shí)現(xiàn)了不同區(qū)域同類樣本試驗(yàn)的覆蓋和推廣綜上，本次團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制定所涉檢測(cè)方法經(jīng)過(guò)了不同地區(qū)多輪若干次的重復(fù)性、再現(xiàn)性、準(zhǔn)確性、靈敏度/檢查限等方法性能的驗(yàn)證試驗(yàn)和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，具備方法標(biāo)準(zhǔn)制定的必要性、可行性，對(duì)現(xiàn)實(shí)的草銨膦、草甘膦及其代謝物測(cè)定工作具有很好的指導(dǎo)意義。二、任務(wù)來(lái)源為配合上級(jí)相關(guān)農(nóng)產(chǎn)品部分農(nóng)藥殘留量日常抽檢中使用的常規(guī)測(cè)定方法較為復(fù)雜且時(shí)間長(zhǎng)等現(xiàn)實(shí)困難的協(xié)調(diào)解決，通過(guò)專項(xiàng)研究分析取得了對(duì)應(yīng)的快速方法，擬將該快速方法確立為常規(guī)方法的并行驗(yàn)證方法，成為輔助性的補(bǔ)充方法，2025年4-5月，雅安市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心牽頭相關(guān)單位向四川省品牌建設(shè)促進(jìn)會(huì)提出團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《茶葉和花椒中草銨膦、草甘膦及其代謝—7—物殘留量的非衍生化測(cè)定分散固相萃取結(jié)合液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法》制定項(xiàng)目立項(xiàng)計(jì)劃申請(qǐng)。同期，按照《四川省品牌建設(shè)促進(jìn)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理辦法（試行）》要求，經(jīng)論證，四川省品牌建設(shè)促進(jìn)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)化工作委員會(huì)同意批準(zhǔn)該團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)。三、工作簡(jiǎn)況（一）成立標(biāo)準(zhǔn)起草組2025年5月，由雅安市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心、內(nèi)江市動(dòng)植物疫病防控和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心、自貢市鄉(xiāng)村振興發(fā)展服務(wù)中心、四川省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心、四川碩耘達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司分別派員共同組成了標(biāo)準(zhǔn)起草組（以下簡(jiǎn)稱“起草組”）。（二）組織調(diào)研和編制草案2025年6-8月，起草組根據(jù)雅安市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心前期專題研究課題項(xiàng)目中分析取得的相關(guān)測(cè)定方法的成果，在對(duì)應(yīng)檢測(cè)方法論文《非衍生化分散固相萃取結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定茶葉和花椒中草銨膦、草甘膦及其代謝物殘留》對(duì)測(cè)定全過(guò)程進(jìn)行總結(jié)的基礎(chǔ)上，形成了標(biāo)準(zhǔn)草案。（三）擬定征求意見(jiàn)稿2025年9-11月，起草組廣泛收集與茶葉和花椒中草銨膦、草甘膦及其代謝物殘留量的非衍生化測(cè)定方法相關(guān)法律法規(guī)、政草甘膦及其代謝物殘留量的非衍生化測(cè)定工作的實(shí)際情況，確定了標(biāo)準(zhǔn)基本框架和結(jié)構(gòu)。隨后，起草組內(nèi)部組織討論，進(jìn)行了多—8—次討論和修改。同時(shí)，征求了獸藥殘留檢驗(yàn)檢測(cè)及標(biāo)準(zhǔn)化相關(guān)領(lǐng)域?qū)＜业囊庖?jiàn)，并根據(jù)一致的意見(jiàn)建議對(duì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修改完善，形成了征求意見(jiàn)稿。四、編制原則和依據(jù)（一）標(biāo)準(zhǔn)編制原則標(biāo)準(zhǔn)編制遵循“落實(shí)法律政策要求、遵循檢驗(yàn)方法原理、吸納工作實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)、確保內(nèi)容科學(xué)先進(jìn)”的原則，著力增強(qiáng)茶葉和花椒中草銨膦、草甘膦及其代謝物殘留量的非衍生化測(cè)定方法的科學(xué)性、先進(jìn)性、規(guī)范性和可操作性。草甘膦及其代謝物殘留量的非衍生化測(cè)定工作的特色，在保持與現(xiàn)行法律法規(guī)和相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致的前提下，遵循以提高方法的選擇性、定量限、準(zhǔn)確度和分析效率為總原則。2.先進(jìn)性。在本標(biāo)準(zhǔn)制定過(guò)程中，廣泛收集國(guó)家、省、市相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)以及茶葉和花椒中草銨膦、草甘膦及其代謝物殘留量的非衍生化測(cè)定工作的經(jīng)驗(yàn)，借鑒、吸收并采納先進(jìn)方法和理念，提高標(biāo)準(zhǔn)的先進(jìn)性。3.規(guī)范性。標(biāo)準(zhǔn)的編寫(xiě)應(yīng)按照國(guó)家、省市以及促進(jìn)會(huì)對(duì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理的相關(guān)規(guī)定，規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)格式。4.可操作性。充分考慮茶葉和花椒中草銨膦、草甘膦及其代謝物殘留量的非衍生化測(cè)定的實(shí)際情況，突出創(chuàng)新發(fā)展、固化經(jīng)驗(yàn)，細(xì)化標(biāo)準(zhǔn)要求，提高標(biāo)準(zhǔn)普適性，增強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)可操作性?！?—（二）標(biāo)準(zhǔn)編制依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)的編制主要依據(jù)和參考了以下法律法規(guī)和文件：GB23200.108-2018食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中草銨膦殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法GB/T23750-2009植物性產(chǎn)品中草甘膦殘留量的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜法NY/T1096-2006食品中草甘膦殘留量測(cè)定SN/T1923-2007進(jìn)出口食品中草甘膦殘留量的檢測(cè)方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法SN/T4655-2016出口食品中草甘膦及其代謝物殘留量測(cè)定方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法SN/T4850-2017出口食品中草銨膦及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法安徽省地方高標(biāo)準(zhǔn)DB34/T3301-2018茶鮮葉中草銨膦殘留量的測(cè)定液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法湖北省地方標(biāo)準(zhǔn)DB42/T2036.1-2023農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的測(cè)定第1部分：草銨膦、草甘膦和氨甲基膦酸的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法福建省質(zhì)量檢驗(yàn)協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/FQIA018-2024茶鮮葉中草銨膦、草甘膦殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法—10—五、標(biāo)準(zhǔn)框架和內(nèi)容說(shuō)明（一）標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)本標(biāo)準(zhǔn)按照GB1.1《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》、GB/T20001.4-2015《標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則第4部分：試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)》、GB/T27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》和《農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制指南》（農(nóng)業(yè)部公告2386號(hào)）等相關(guān)文件的要求和規(guī)定，依據(jù)茶葉和花椒中草銨膦、草甘膦及其代謝物殘留量的非衍生化測(cè)定的實(shí)際情況及需求，從范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語(yǔ)和定義、原理、試劑和材料、儀器、試樣制備、分析步驟、結(jié)果計(jì)算、精密度和其他等11個(gè)方面，為保障茶葉和花椒中草銨膦、草甘膦及其代謝物殘留量的非衍生化測(cè)定方法的實(shí)施提出了明確的要求，充分體現(xiàn)了本標(biāo)準(zhǔn)的前瞻性和引導(dǎo)性。本標(biāo)準(zhǔn)框架結(jié)構(gòu)和主要技術(shù)內(nèi)容見(jiàn)下表。1））用于茶葉和花椒中草銨膦、草甘膦及其代謝物殘留量的測(cè)234—11—離子極性色譜柱分離后用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)56789（二）標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容1.標(biāo)準(zhǔn)的范圍本文件適用于茶葉和花椒中草銨膦、草甘膦及其代謝物殘留量的測(cè)定。2.規(guī)范性引用文件明確本標(biāo)準(zhǔn)所引用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和文件。3.術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有術(shù)語(yǔ)和定義。4.原理—12—提出了方法原理為試樣中的草銨膦、草甘膦及其代謝物用10mL水+10mL1%甲酸-甲醇提取，經(jīng)過(guò)濾和離心后，上清液通過(guò)復(fù)合型多壁碳納米管（C-MWCNTs）分散固相萃取凈化，凈化液經(jīng)陰離子極性色譜柱分離后用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法的負(fù)離子模式檢測(cè)，外標(biāo)法定量分析。5.試劑和材料列出檢測(cè)方法所需的試劑、溶液配制、標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)溶液配（1）試劑：提出了監(jiān)測(cè)方法所需試劑甲醇、甲酸、乙腈及其具體要求。3-甲基磷酸亞基丙酸（MPPA），草甘膦及其代謝物氨甲基膦酸（AMPA）的標(biāo)準(zhǔn)品及其具體要求，并要求純度≥98%。（4）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：提出了標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1mg/mL）、中間溶液及其具體要求。（5）材料：提出了棕色容量瓶、棕色儲(chǔ)液瓶、具塞離心管、QuEChERS專用凈化管、微孔濾頭（水相）、進(jìn)樣瓶及其具體要6.儀器—13—列出檢測(cè)方法所需的儀器要求，包括了液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、分析天平、高速研磨儀、高速分散勻漿機(jī)、高速離心機(jī)、漩渦混合器、振蕩器、超純水機(jī)及其具體參數(shù)。7.試樣制備列出檢測(cè)方法中試樣制備的試樣制備、試樣貯存要求。（1）試樣制備：提出了樣品測(cè)定部位、取樣量以及干花椒果皮或干茶葉分別放入高速研磨儀、高速分散勻漿機(jī)中粉碎后充分混勻的制備方法。（2）試樣貯存：提出了測(cè)試樣和備用樣分開(kāi)存放的要求，給出了保存溫度。8.分析步驟從前處理（提取、凈化、配制機(jī)制匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液）、測(cè)定（液相色譜參考條件、質(zhì)譜參考條件）、繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線、定性及定量、試樣溶液的測(cè)定、平行試驗(yàn)、空白試驗(yàn)等方面提出具體檢測(cè)方法及步驟要求。9.結(jié)果計(jì)算列出草銨膦GLU及其代謝物NAG和MPPA、草甘膦GLY及其代謝物AMPA的殘留量（以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)）的計(jì)算公式。10.精密度提出重復(fù)性限（r）和再現(xiàn)性限（R）的資料性要求。11.其他列出檢測(cè)方法對(duì)茶葉和花椒中5中化合物的定量限?！?4—六、重大意見(jiàn)分歧的處理本標(biāo)準(zhǔn)的編寫(xiě)過(guò)程無(wú)重大分歧意見(jiàn)產(chǎn)生。七、采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)情況未采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。八、與現(xiàn)行法律法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系目前雖有與本標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，但是，這些檢測(cè)方法有的存在定性困難、假陽(yáng)性率高等缺點(diǎn)，有的前處理較復(fù)雜，或者測(cè)定基質(zhì)相對(duì)較簡(jiǎn)單，不利于茶葉、花椒這類復(fù)雜基質(zhì)的測(cè)定，且在傳統(tǒng)檢測(cè)中常常需要進(jìn)行衍生化，而衍生化試劑會(huì)污染離子源，毒性大，易與水反應(yīng)生成副產(chǎn)物，且衍生化前處理時(shí)間長(zhǎng)，檢測(cè)難度大。近年來(lái)，雖已有研究采用非衍生化檢測(cè)方法來(lái)分析大豆、玉米、飲用水等樣本中的草銨膦和草甘膦殘留，但這些研究所涉及的基質(zhì)相對(duì)較為簡(jiǎn)單，且僅限于針對(duì)草銨膦和草甘膦母體的檢測(cè)，不能滿足GB2763-2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中同時(shí)檢測(cè)草銨膦及其代謝